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      • Tema 3.- Diagnóstico de laboratorio de las Enteroparasitosis
          • Características generales de las Enteroparasitosis
          • Principales protozoosis y helmintiasis intestinales
          • Ciclos biológicos tipo: a) Entamoeba histolytica
          • b) Taenia saginata
          • c) Enterobius vermicularis
          • d) Anquilostómidos
          • Principios y utilidad de las técnicas de estudio
          • parasitológico de heces. El examen coproparasitario
          • Elementos no parasitarios de las heces
          • El método de Graham
        • Tracto digest humano  Numerosos parásitos:
              • Protozoos COMENSALES
              • Helmintos PATOGENOS
        • Infestación
              • Vía digestiva (mayoría de casos)
              • Vía cutánea
        • Formas infestantes
              • QUISTES / OOQUISTES  Protozoos
              • HUEVOS  Helmintos
              • LARVAS  Tenias, Triquina
      ENTEROPARASITOSIS. Características generales
        • Mecanismos transmisión
              • Infestación por FECALISMO
              • Infestación por CARNIVORISMO
              • Infestación s/ ciclo ANO-MANO-BOCA
              • Infestación CUTANEA
      ENTEROPARASITOSIS. Características generales Mecanismos transmisión  Relación con ciclo biológico
      • Característico de parásitos de ciclo biológico MONOXENO
      INFESTACION POR FECALISMO
      • HELMINTOS
        • Asacaris lumbricoides
        • Trichuris trichiura
        • Hymenolepis nana
      • PROTOZOOS
      • a) PARASITOS
        • Entamoeba histolytica
        • Giardia lamblia
        • Isospora belli
        • Cryptosporidium spp.
        • Balantidium coli
      • b) COMENSALES
        • Entamoeba coli
        • Endolimax nana
        • Iodamoeba butschlii
        • Chilomastix mesnili
        • Blsatocystis hominis
        • Entamoeba polecki
        • Enterocytozoon spp.
    • INFESTACION POR FECALISMO Hosp Infestado Medio Externo Hosp Susceptible Formas infestantes (=) Contam suelo Ingestión Quistes Ooquistes Huevos Larvas
    • www./dpd.cdc.gov/dpdx
        • En parásitos con ciclos biológicos complejos, con uno o
        • varios Hosp. Intermediarios ( Ciclos HETEROXENOS)
        • Entre los hospedadores existe una relación PREDADOR -
        • PRESA
        • El PREDADOR soporta al parásito en su intest, donde se
        • realiza la f sexuada (Se comporta como Hosp DEFINITIVO)
        • La Presa se infesta por fecalismo, a partir de las formas
        • que elimina el H D con las heces (hosp intermediario)
        • En el caso del hombre la infestación se adquiere por
        • ingestión de carnes y pescados crudos, o insuficientemente
        • cocinados
      INFESTACION POR CARNIVORISMO
        • Algunas especies de helmintos intestinales
        • (s/t nematodos)
        • Eliminación de:
              • larvas
              • huevos muy desarrollados
        • Se transforman en LARVAS INFESTANTES
        • (larvas filariformes)
      INFESTACION por la piel Contacto con H. Definitivo Penetración piel Migr viscerales Local definitiva en intestino
      • Ancylostoma duodenale
      • Necator americanus
      • Strongyloides stercoralis
      • Diagnóstico de laboratorio de las Enteroparasitosis
        • Consideraciones generales:
          • Numerosas técnicas de examen coproparasitario
          • Finalidad diferente
          • Aplicación
            • General
            •  Selectiva o específica
          • Utilidad en función de su capacidad para:
            • Concentrar elementos parasitarios
            • Cuantificar la carga parasitaria
            • Evidenciar difs estadíos evolutivos
            • Preparar extensiones permanentes
      • Diagnóstico de laboratorio de las Enteroparasitosis (2)
        • IMPORTANTE:
          • 1) Selección técnica(s) s/ casos
              • Grupo o especies de parásitos
              • Fase evolutiva
          • 2) Examen de varias muestras (3) por paciente
    • ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES
      • Evidenciación de parásitos que:
            • Viven en el tracto digestivo
            • Realizan su tránsito al m ext a través del mismo
        • I) No todas las técnicas son adecuadas para todos los parásitos:
            • Importante conocer ciertos datos:
              • Procedencia geográfica del enfermo
              • Resumen HC
              • Resultados otras pruebas/análisis
              • Información relativa a trattos recientes
        • II) Un ex aislado con result negativo no tiene ningún valor
        • eliminatorio
        • III) La muestra debe ser examinada rápidamente
    • ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES
      • Para descartar una parasitosis intestinal:
          • Realizar al menos 3 exámenes coproparasitarios seriados
          • (a dias alternos)
          • Tras una adecuada preparación del paciente
          • Remitiendo las muestras lo mas rápidamente posible al lab
    • ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES
      • El examen PARASITOLOGICO DE HECES forma parte del
      • ESTUDIO COPROLOGICO, mas general, que informa sobre:
          • Aspecto macroscópico de las heces
              • Consistencia / agua / Veloc tránsito.....
              • Color (calidad/cantidad flujo biliar)
              • Presencia de sangre, mucus ......
          • Aspecto microscópico restos alimenticios
          • Presencia mucus, hematíes, leucos, céls epiteliales ......
          • Presencia de parásitos (trofoz, quistes, huevos, larvas....)
          • Elementos micóticos, su relación o proporción con bacterias
    • ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES
      • El examen COPROPARASITARIO no resulta de utilidad cuando:
          • La eliminación de los parásitos no se realiza por el intestino
          • La puesta de huevos no se lleva a cabo en el intestino
          • Los parásitos son inmaduros o estériles, y no dan lugar a
          • formas de diseminación
              • Parasitismo por un único individuo (esp dioicas)
              • Parasitismo reciente (fase adulta no desarrollada)
    • ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES. Preparación paciente
      • Régimen alimenticio estricto desde 72 h antes a la recogida de la
      • muestra ( UTOPIA ??)
      • Condiciones mínimas:
          • Evitar medicamentos opacos no absorbibles
              • Carbón vegetal
              • Contrastes radiológicos (papilla baritada)
              • Sustancias grasas (s/t supositorios)
          • Evitar alimentos con muchos residuos
              • Legumbres
              • Frutas de cutícula resistente
              • Vegetales con céls duras
              • Frutos con semillas duras y pequeñas (p ej higos)
    • ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES. Muestras
      • Considerar adecuadamente las condiciones de :
          • Toma de muestra
              • Asepsia?
              • Momento? / lugar?
              • Recipiente ?
          • Envío de muestra
              • En hospital
              • Por correo
          • Conservación de las muestras
              • Provisional por frio (att trofozoítos amebas)
              • Definitiva (soluciones fijadoras)
    • TECNICAS DEL EXAMEN COPROPARASITARIO
        • 1) Examen directo de una pequeña porción de heces frescas
        • 2) Examen después de aplicar un método de concentración
        • 3) Examen de extensiones o preparaciones permanentes
        • Examen directo
        • Observación microscópica minuciosa de toda la preparación
          • Objetivo seco débil (10 x)
          • Objetivo seco fuerte (25-40 x)
          • Habitualmente no se emplea obj de inmersión
          • Importante: No diluir demasiado las muestras
    • TECNICAS DEL EXAMEN COPROPARASITARIO
        • Examen directo
      Tinción Vacuolas Núcleos SF Lugol Movilidad (Trofozoítos)
    • TECNICAS DEL EXAMEN COPROPARASITARIO
        • 2) Examen post-concentración
        • Reunión en un pequeño vol los elementos parasitarios
        • inicialmente dispersos en una gran masa de heces
        • Numerosos métodos
        • Ninguno evidencia todos los tipos de parásitos, (cada uno tiene
        • sus indicaciones precisas)
      • Métodos físicos
        • Por sedimentación
        • Por flotación
      • Métodos difásicos
        • Empleo de 2 fases no miscibles
        • Agua // Eter o Acetato etilo
    • METODOS DE CONCENTRACION
      • Métodos físicos
        • Dilución minuciosa heces en líquido o solución de densidad:
          • Inferior a la de los parásitos (Técnicas de sedimentación)
          • Superior (Técnicas de flotación)
        • Ventajas:
            • Realización muy simple
            • Precisan poco material
        • Inconvenientes:
            • Procesos largos
            • Exigen mucha manipulación
            • No aplicables a series grandes de muestras
      • En ciertos casos se puede acelerar x centrifugación suave
    • TECNICAS DE CONCENTRACION. Mét de sedimentación simple
        • Triturar las heces (10-20 g) en agua
        • de grifo
        • Poner la dil en una probeta de 250-500 cc
        • y rellenar (agua grifo)
        • Dejar reposar aprox 1 h
        • Deshechar sobrenadante
        • Resuspender en agua de grifo
        • Dejar sedimentar 45 min
        • Deshechar sobrenadante
        • Repetir esta op varias veces, hasta que
        • el sobrenadante quede transparente
        • Recoger y examinar el mat sedimentado.
        • Hacer tres tomas:
            • Superficie
            • Media altura
            • Fondo
    • TECNICAS DE CONCENTRACION. Mét de flotación
        • Características a considerar:
        • Densidad sol empleada > Dens parásitos
        •  Concentración en superficie
        • Importante:
          • Manipular rápidamente
          • Impreg huevos operculados  Sediment
          • Alteración morfol huevos (Identificación)
      Sedimento Sulfato de cinz Película superficial
    • METODOS DE CONCENTRACION
      • Métodos físicos . Ejemplos
        • Técnicas de sedimentación
            • Método de sedimentación simple
            • Método de Faust e Ingalls
            • Sedimentación en columna alta
        • Técnicas de flotación
            • Método de Fulleborn
            • Método de Willis (flotación en salmuera)
            • Método de Faust (flotación en sulfato de zinc)
    • METODOS DE CONCENTRACION
      • Métodos difásicos
        • Derivados todos del mét de Telemann (1.908)
        • Empleo de dos fases no-miscibles
              • Fase acuosa (sol. formaldehido)
              • Fase éter o disolv de lípidos (Acetato de etilo)
        • Los elementos fecales y los parásitos se localizan en la fase
        • acuosa o en la interfase agua-éter, en función de una
        • característica, el balance hidrófilo-lipófilo
    • METODOS DE CONCENTRACION
      • Métodos difásicos
        • Realización :
            • Dilución de las heces en agua
            • (o el la fase acuosa)
            • Adición y emulsión con el éter
            • ( o acet de etilo)
            • Centrifugación suave
        • Algunos ejemplos:
            • Método de Telemann
            • Método de Rivas
            • Método de Ritchie
            • Método de Blagg, Schloegel,
            • Mansoer y Khalaf
      Eter Restos Líp disueltos Formalina Sedimento Parásitos
    • Restos fecales y grasa Acetato de etilo Formalina Sedimento (Parásitos) 12
    • Incremento de la detección de Entamoeba histolytica en relación al número de muestras fecales examinadas y a las técnicas empleadas Examen directo Examen directo y conc por flotación Número de exámenes % d etectado Examen directo, conc por flotación y tinción de hematoxilina-férrica
    • OTROS EXAMENES DIRECTOS PARA DIAGNOSTICO DE ENTEROPARASITOSIS
      • Técnicas del Examen Coproparasitario. Resumen
        • 1.- Observación macroscópica
        • 2.- Observación microscópica
          • 2.1.- Observación microscópica de preparaciones “en fresco”
          • (entre porta y cubre)
              • Muestras de heces directamente en SF o Lugol
              • Muestras de técnicas de concentración
          • 2.2.- Observación microscópica de preparaciones teñidas,
        • permanentes o no, que permiten la conservación y la
        • observación cuidadosa y detallada de los parásitos
    • OTROS EXAMENES DIRECTOS PARA DIAGNOSTICO DE ENTEROPARASITOSIS
      • TINCIONES ACIDO-ALCOHOL RESISTENTES
        • Utilidad: Demostración de ooquistes de Cryptosporidium spp.
              • Evidenciación de Cyclospora spp.
        • Aplicables a frotis de heces (tb ciertos concentrados)
        • Técnicas: Las mas empleadas son la de KINYOUN y una
        • modificación de la ZIEHL-NEELSEN
      • TINCION DE HEMATOXILINA-FERRICA
        • Utilidad: Observación detallada de quistes, pero s/t de
        • trofozoítos de protozoos.
        • Si se realiza montaje, buena colección permanente
        • Exige una realización cuidadosa,
      • COLORACIÓN DE KINYOUN ( Cryptosporidium // Cyclospora )
        • Fijación frotis: Metanol 30 seg
        • Tinción : 5 min (frio) con sol de Fuscina básica
            • Fusc básica 4 g
            • Fenol 8 g
            • Etanol (95%) 90 ml
            • A dest 100 ml
        • Lavado
            • a) Etanol 50%: 3-5 min
            • b) Agua corriente
        • Decoloración: Acido sulfúrico 1%: 2 min
        • Contracoloración: Azul metileno Loeffler : 1-2 min
            • Azul de metileno 0,3 g
            • Alcohol 95% 30 ml
            • KOH 0,01% 100 ml
    • ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES.
      • Elementos no parasitarios de las heces
          • Restos alimenticios semi-digeridos
          • Células epiteliales (mucosa intestinal)
          • Células sanguíneas
              • Leucocitos (úlceras intestinales)
              • Macrófagos  amebas patógenas
              • Hematíes
          • Bacterias
          • Hongos
    • Elementos no parasitarios de las heces (2)
      • RESTOS ALIMENTICIOS
          • Tejido conjuntivo
          • Fibras musculares estríadas (carne) Att tamaño / ángulos
          • Grasas neutras  Glóbulos refringentes tamaño variable
          • Acidos grasos  Agujas finas
          • Almidón
              • Crudo: Granos en capas concéntricas
              • Céls reserva amilácea (s/ procedencia)
          • Celulosa
              • Digerible: Masas celulósicas (céls reserva)
              • No digerible: Traqueídas, pelos vegetales, polen etc
      • CRISTALES
              • Origen alimentario (oxalato de calcio)
              • Endógeno (Ox calcio, fosfato amónico-magnésico,
              • Charcott-Leyden)
              • Medicamentos
    • OTROS EXAMENES DIRECTOS PARA DIAGNOSTICO DE ENTEROPARASITOSIS
      • 1.- Examen directo de líquido duodenal
        • Se obtiene por sondaje duodenal o con càpsula entérica o test
        • del cordón"“Enterotest”
        • Observación
            • Fresco (directo o tras centrifugación)
            • Extensiones (frotis) coloreados (tinc AAR)
        • Utilidad / Rendimiento
            • Trofozoítos de Giardia lamblia
            • Ooquistes de Isospora y Cryptosporidium
            • Huevos de Fasciola hepatica
            • Larvas de Strongyliodes stercoralis
      • 2.- Técnica de Graham (Mét de la cinta adhesiva o espátula adhesiva)
        • Método mas empleado para el diagnóstico de la oxiuriasis
        • o enterobiasis ( Enterobius vermicularis )
        • Observación microscópica del material recogido de la zona
        • perianal, por aplicación de una sup adhesiva (celofán o similar)
        • La cinta se dispone sobre un soporte rígido (depresor lengua),
        • con la sup adhesiva hacia el exterior
        • Se aplica varias veces sobre la piel, en los márgenes anales
        • Se envia al laboratorio y se observa a microscopio (10X)
      • IMPORTANTE
          • Realizar al menos 3-5 tomas antes de informar un resultado
          • negativo
          • Realizar la toma de muestra a 1ª hora por la mañana, antes
          • de salir de la cama