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Practica 5 cultivo flora microbiana normal

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    Practica 5 cultivo flora microbiana normal Practica 5 cultivo flora microbiana normal Document Transcript

    • UNIVERSIDAD FRANZ TAMAYOCARRERA DE MEDICINA Y ODONTOLOGÍALABORATORIO AGENTES BIOLÓGICOS I, PRÁCTICA 5 CULTIVO Y ANTIBIOGRAMA DE FLORA MICROBIANA NORMALCULTIVO FOSAS NASALES (DETECCIÓN DE PORTADORES DE Staphylococcusaureus.PROCEDIMIENTO 1. Insertar una torunda flexible, humedecida con solución salina estéril dentro de la fosa nasal, en dirección paralela al piso de la fosa nasal. 2. Rotar la tórula en la zona interna del vestíbulo de la fosa nasal (tabique y cara interna de las aletas nasales). 3. Sembrar con una asa de platino sobre el medio de cultivo Agar Sangre y Saboureaud . 4. Incubar a 37° C por 24 horas. 5. Observar crecimiento de las colonias. 6. Realizar tinción de Gram para identificación de Cocos Gram positivos. 7. Realizar prueba de la catalasa para diferenciación de Staphylococcus de Streptococcus. 8. Realizar la prueba de la coagulasa para confirmación de S. aureus 9. Proceder a realizar el antibiograma según el test de sensibilidad por difusión de disco.TEST DE SENSIBILIDAD POR DIFUCIÓN DE DISCO.-Etapa 1: Preparación del inóculo: Escala de McFarland. Turbidez padrón. • Cuando la turbidez del inóculo del test esté similar a la turbidez padrón de la escala #0,5, significa que contiene aproximadamente 1,5 x10 8 UFC/mL.
    • • Use el método de crecimiento o método de suspensión directa de la colonia en el caso de suspensión directa, las colonias no deben tener más de 18 a 24 horas de repique.-Etapa 2: Padronización del inóculo: • Homogeneizar el tubo de la Escala =0,5 McFarland y el tubo test (inóculo) y mantenga los tubos lado a lado sobre un cartón blanco con líneas negras horizontales. (Las líneas tienen que poder visualizarse con la misma definición en los tubos, el inóculo está satisfactorio.)-Etapa 3: Inoculación en la placa del medio de cultivo. • Para este test de organismos no fastidiosos(E. Coli, Staphylococcus) usar medio de cultivo no suplementado. • Sumerja el coto hisopo en el tubo del inóculo, levante el hisopo encima del líquido y gire en las paredes del tubo para la remoción del líquido excedente. • Aplique el inóculo en la placa, cubriendo toda la superficie, gire 60° y aplique nuevamente en la superficie completa, gire 60° y aplique nuevamente.Etapa 4 Aplicación de los discos de sensibilidad • Placa de 150mm: colocar máximo 12 discos • Placa de 100mm: colocar máximo 5 discosPenicilina S= o mayor a 29 I= -- R= o menor a 28Ampicilina S= o mayor a 29 I= -- R= o menor a 28Amoxicilina + Ac. Clav. S= o mayor a 20 I= -- R= o menor a 19Cephalotin S= o mayor a 18 I= 15-17 R= o menor a 14Cefotaxime S= o mayor a 23 I= 15-22 R= o menor a 14Oxacilina S= o mayor a 13 I= 11-12 R= o menor a 10
    • Azitromicina o Eritrom. S= o mayor a 18 I= 14-17 R= o menor a 13Gentamicina S= o mayor a 15 I= 13-14 R= o menor a 12Sulfatrimetroprim S= o mayor a 16 I= 11-15 R= o menor a 10Chloranfenicol S= o mayor a 18 I= 13-17 R= o menor a 12Ciprofloxacin S= o mayor a 21 I= 16-20 R= o menor a 15Vancomicina S= o mayor a 15 I= -- R= --Linesolid S= o mayor a 22 I= -- R= --Etapa 5: Incubación del test • Invertir la placa (lado del agar para arriba) e incubar a 35°c • Para la mayoría de los tests, incubar de 16 a 18 horas.Etapa 6: Lectura de Zona de inhibición • Después de 16,18,24 horas incubación, verifique si el crecimiento sobreel Agar está uniforme. • Asegure la placa (lado del agar para arriba) sobre una superficie negra, usando una luz directa por encima. • Medir el diámetro de zona de inhibición en milímetros.Etapa 7: Interpretación de resultados: • Usar las zonas de diámetros de la tabla, (verifique que las tablas son actuales) • Categorías para interpretación: -Sensible: la infección puede ser tratada con el agente antimicrobiano en la dosis recomendada. -Resistente: el organismo probablemente no será inhibido por el agente antimicrobiano en dosis usuales.
    • -Intermedio: tratamiento evaluado en diferentes posibilidades y puede reflejar problemas técnicos.PILARES DIAGNÓSTICOS.La flora comensal de las fosas nasales consiste principalmente en corinebacterias,estafilococos (S. aureus y S. epidermidis en portadores sanos). En el cultivo esrecomendado realizar una estría profunda en la zona de inoculación de la muestraen agar sangre, esto para favorecer la observación de la hemólisis de posiblespatógenos como S. aureus. En la interpretación del cultivo debe considerarse laimportancia del desarrollo de una especie pura o el predominio notorio de una sobrelas demás, también es de importancia en informe de la presencia de S. aureus, confines epidemiológicos y así tratar de evitar la diseminación de la infección por elcontacto con portadores.