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Tecnica  de uso de la parafina
 

Tecnica de uso de la parafina

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    Tecnica  de uso de la parafina Tecnica de uso de la parafina Presentation Transcript

    • PASOS DE LA TÉCNICA HISTOLÓGICA  OBTENCIÓN DE MUESTRAS  FIJACIÓN  DESHIDRATACIÓN Y ACLARAMIENTO  INCLUSIÓN  CORTE  TINCIÓN DE LOS CORTES  MONTAJE OBSERVACIÓN
    •  OBTENCIÓN DE MUESTRAS Todas las muestras de tejido, ya sea obtenidas de materiales quirúrgicos, necropsias, biopsias deben ser procesadas adecuadamente para obtener buenos cortes histológicos.
    •  OBTENCIÓN DE MUESTRAS Se debe obtener toda la información posible material a procesar. del
    •  OBTENCIÓN DE MUESTRAS En caso de ser necesario se debe realizar un examen y descripción preliminar de los materiales y su adecuación correcto procesamiento. para un
    •  OBTENCIÓN DE MUESTRAS
    •  FIJACIÓN Tratamiento del tejido con sustancias químicas que no solo retardan las alteraciones hísticas posteriores a la muerte, sino que conservan la configuración normal del tejido.
    •  FIJACIÓN Fijador: Sustancia que detiene en forma rápida los procesos de autólisis y que, al mismo tiempo, conserva los tejidos, en lo posible, en el estado en que se encontraban en la vida.
    •  FIJACIÓN TIPOS DE FIJADORES Físicos:  Desecación: Extendidos, líquidos de punciones.  Calor seco: Bacteriología.  Calor húmedo: Microquímica, Zoología.  Frío: No es una verdadera fijación. Detiene los procesos de autólisis y necrosis, pero cuando deja de actuar los mismos se reanudan.
    •  FIJACIÓN TIPOS DE FIJADORES Químicos:  Aldehídos (no precipitan proteínas y no contrae estructuras) .  Mercuriales (precipitan proteínas y tóxico por sus vapores).  Alcoholes (precipitan proteínas).  Agentes oxidantes (precipitan proteínas y tóxico por sus vapores).  Picratos (precipitan proteínas).
    •  FIJACIÓN TIPOS DE FIJADORES Químicos:  Aldehídos (formaldehido/glutaraldehido): Son los más utilizados. Los tejidos son fijados por uniones cruzadas en las proteínas, al reaccionar con los grupos amino. La Formalina (formaldehido al 40%), se utiliza normalmente al 10%, en una solución bufferada.
    •  FIJACIÓN
    •  FIJACIÓN No debe olvidarse que: Un defecto de fijación no puede ser subsanado. Es inútil hacer un estudio histológico de un material mal fijado.
    •  DESHIDRATACIÓN Se obtiene por medio de un reactivo anhidro pero ávido de agua: Alcohol Etílico. Alcohol Isopropílico. Alcohol Butílico. Acetona
    •  ACLARADO Se debe embeber la pieza con una sustancia miscible con el alcohol y la parafina: Xileno. Tolueno. Benceno.
    •  INCLUSIÓN La parafina penetra en los vasos, en los espacios intercelulares y también en el interior de las células embebiendo el tejido y haciendo más fácil la obtención de cortes con el micrótomo.
    • Procesador Automático
    • Procesador Automático
    • CONFECCIÓN DEL TACO Obtención del bloque de parafina de forma regular, para ser cortado con el micrótomo.
    •  CONFECCIÓN DEL TACO
    •  CORTE Micrótomo Rotativo. Micrótomo de Deslizamiento. Micrótomo de Congelación. Crióstato.
    • Micrótomo Rotativo.
    • Micrótomo Rotativo.
    • Micrótomo Rotativo.
    • Crióstato
    • Crióstato
    •  EXTENSIÓN  Utilizar portaobjetos limpios y preparados con el adhesivo adecuado.  Se realiza en agua tibia (38oC).  Precaución: el preparado debe quedar bien extendido y sin pliegues.  Rotular.
    •  EXTENSIÓN  Luego de escurrir el exceso de agua llevar a estufa (60 °C) no más de dos horas.
    •  TINCIÓN DE LOS CORTES Los colorantes pueden agruparse en tres clases principales:  Colorantes que diferencian los componentes básicos y ácidos de la célula (hematoxilina y eosina).  Colorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz extracelular.  Sales metálicas que se precipitan en los tejidos y forman depósitos de metales en ellos.
    • Colorantes empleados con mayor frecuencia en histología: HEMATOXILINA Actúa como un colorante BÁSICO que se asocia y tiñe componentes ÁCIDOS de la célula como estructuras aniónicas (que posean fosfatos, sulfatos y/o carboxilos ionizados) - Heterocromatina y nucléolos - ARN ribosomal, - Matriz extracelular (por los sulfatos de los GAGs). Color: azul o violeta EOSINA Colorante ÁCIDO (predomina densidad de carga negativa), que se asocia y colorea estructuras catiónicas (componentes BASICOS) del citoplasma y matriz extracelular - Filamentos citoplasmáticos. - Componentes membranosos intracelulares. - Fibras extracelulares (por sus aminoácidos básicos ionizados). Color: rosado
    •  TINCIÓN DE LOS CORTES La reacción de los grupos aniónicos con un colorante básico se denomina BASOFILIA (que tiene afinidad por lo básico) La reacción de los grupos catiónicos con un colorante ácido se denomina EOSINOFILIA (que tiene afinidad por lo ácido)
    • OBSERVACIÓN Coloración con Hematoxilina Coloración con Eosina Coloración Hematoxilina-Eosina
    • Basófilo (azul) Acidófilo (rosado)