Propuesta de desarrollo de método bioanalítico mediante HPLC para el análisis de ibuprofeno, ketorolaco y sildenafilo en orina

1. Vázquez Olvera José Ignacio. 2801 Desarrollo Analítico. 2014-2
Propuesta de desarrollo de método bioanalítico mediante C.L.A.R. para la cuantificación de Ketorolaco, Sildenafilo e
Ibuprofeno en orina
Procedimiento Justificación
Preparación de referencia
Preparar 200 mL de una solución amortiguadora de
fosfato dibásico de potasio pH6 mezclada 70:30 con
metanol. Etiquetar como solución 1
Con base en las solubilidades de los tres fármacos ésta
solución se establece como disolvente general, además
es similar a la fase móvil. El ajuste de pH promueve la
mínia interferencia contra la columna.
Preparar 25 mL de soluciones stock de Ketorolaco y de
Sildenafilo a concentración de 100g/mL usando como
disolvente la solución 1.
Volumen y concentración adecuados para las diluciones
subsecuentes.
Tomar por triplicado en matraces volumétricos de 10 mL
las siguientes alícuotas:
0.10, 0.25, 0.50, 1.0 y 1.5 mL
Llevar cada alícuota volumen de 10 mL con la Solución 1
Para la construcción de la curva estándar, considerando
en el intervalo las concentraciones plasmáticas máximas.
6 niveles de concentración, 3 repeticiones para la
evaluación de linealidad.
Preparar 50 mL de solución stock de Ibuprofeno a
concentración de 100g/mL usando como disolvente la
solución 1.
Volumen y concentración adecuados para las diluciones
subsecuentes.
Tomar por triplicado en matraces volumétrico de 10 mL
las siguientes alícuotas:
1.0, 3.0, 4.5, 6.0, 7.5 y 9.0 mL
Llevar cada alícuota volumen de 10 mL con la Solución 1
Para la construcción de la curva estándar, considerando
en el intervalo la concentración plasmática máxima.
6 niveles de concentración, 3 repeticiones para la
evaluación de linealidad.
Obtención de la muestra.
Recolectar una muestra en vaso plástico estéril con cierre
hermético de tapa rosca.
Correcta toma y manipulación de la muestra.
La muestra deberá ser recolectada a las 2 y 5 h de haber
sido administrado los fármacos.
Selección de tiempos con base en los tiempos de
concentraciones plasmáticas máximas.
Preparación de la muestra
Serie1: Sembrar 1.0, 0.1 y 6 mL de las soluciones stock de
referencia de ketorolaco, sildenafilo e ibuprofeno
respectivamente en 10 mL de orina libre de tratamiento.
Filtrar.
Permite la evaluación del método mediante estándar
externo. La adición de las cantidades se basa en las
concentraciones esperadas en cada caso.
Serie2: Filtrar la orina proveniente del paciente con la
administración de los tres fármacos.
Limpieza de la muestra.
Preparación de la fase móvil.
Solución amortiguadora fosfato dibásico de potasio
pH6/20mM de octilsulfonato de sodio/20mM de bromuro
de tetraetilamonio: metanol. 70:30
La adición de octilsulfonato de sodio cumple la función
de par iónico para con sildenafilo, mientras que el
bromuro de tetraetilamonio cumple la misma función
para con ibuprofeno y ketorolaco. Las proporciones son
iniciales para el desarrollo del método, con base en ellas
se ajustan los parámetros referentes a la fase móvil.
Sistema de elución por gradiente
Tiempo min 0 10
Acuosa % 70 80
Metanol % 30 20
A razón de 1 mL/min
Preliminar justificado con la posible irresolución en el
cromatograma entre ketorolaco y sildenafilo al inicio del
mismo. Premisa con base en los valores de coeficiente de
partición
Condiciones del equipo.
Detector de luz UV; longitud de onda 254 nm; columna de
4 mm x 30 cm empacada con L1; flujo 1.0 mL/min.
Especificación farmacopeica. Se recomienda, tamaño de
partícula menor a 5 m.
Procedimiento
Programar en el equipo el número de muestras y el gradiente de fase móvil.
Construir las curvas de referencia.
Inyectar por sextuplicado 20 L de la muestra.
Calcular la concentración de los fármacos mediante extrapolación de las áreas bajo el pico obtenido en el
cromatograma de la muestra en las curvas de referencia