Estudio de dislipidemias por electroforesis
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Estudio de dislipidemias por electroforesis

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Estudios de Laboratorio para el diagnostico de dislipidemias, clasificacion de dislipidemias, electroforesis de lipoproteinas en dislipidemias,

Estudios de Laboratorio para el diagnostico de dislipidemias, clasificacion de dislipidemias, electroforesis de lipoproteinas en dislipidemias,

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  • 1. ELECTROFORESISELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS:DE LIPOPROTEINAS: ASPECTOS TECNICOSASPECTOS TECNICOS Y APLICACIONESY APLICACIONES CLINICASCLINICAS Servi-Med BIOL. CARLOS BEJAR LOZANO Jefe del Departamento de Inmunología Servi-Med Laboratorios Clínicos Laboratorios Clínicos
  • 2. EVOLUCIONEVOLUCION BIOLOGICABIOLOGICA YY EVOLUCIONEVOLUCION CULTURALCULTURAL Diabetes Dislipidemia Hipertensión Sedentarismo Servi-MedServi-MedLaboratoriosLaboratoriosClínicosClínicos
  • 3. OBESIDAD:OBESIDAD: Cuestión cultural ?Cuestión cultural ? Cuestión de países desarrollados ?Cuestión de países desarrollados ? Cuestión genética ? … o TODO..?Cuestión genética ? … o TODO..? MéxicoMéxico disputa el Primer Lugar 2013Primer Lugar 2013 en Obesidad en el Mundo. Servi-MedServi-MedLaboratoriosLaboratoriosClínicosClínicos Importante un Sistema de ClasificaciónClasificación MediciónMedición y seguimientoseguimiento en dislipidemias.
  • 4. CLASIFICACIONCLASIFICACION SOBREPESO / OBESIDADSOBREPESO / OBESIDAD I.M.C. = Kg peso ÷ (Altura m)2 I.M.C. = Kg peso ÷ (Altura m)2 Servi-MedServi-MedLaboratoriosLaboratoriosClínicosClínicos Si Lincoln hubiera tenido pc Si David hubiera viajado a EEUU Mi IMC: 84.0 kg ÷ (1.80)2 84.0 ÷ 3.24 = 25.9
  • 5. FACTORES DE RIESGOFACTORES DE RIESGO VIEJOS Y EMERGENTESVIEJOS Y EMERGENTES Síndrome Metabólico / Síndrome de Resistencia a la Insulina Dislipidemia – Hipertensión – Diabetes SíndromeSíndrome metabólicometabólico
  • 6. - Desfibrilador (60´s) - Unidad Coronaria (80´s) - Betabloqueadores LOSLOS AVANCESAVANCES DE LADE LA CARDIOLOGIA MODERNACARDIOLOGIA MODERNA Era de Reperfusión (´80´s) Trombolisis + Stents Disminución de MortalidadDisminución de Mortalidad IntrahospitalariaIntrahospitalaria NO PREVIENEN… TRATAN DE CORREGIR EL DEFECTO.:!NO PREVIENEN… TRATAN DE CORREGIR EL DEFECTO.:!
  • 7. MORBILIDAD Y MORTALIDADMORBILIDAD Y MORTALIDAD ASOCIADA A DISLIPIDEMIASASOCIADA A DISLIPIDEMIAS  Cada hora mueren 7 personas en México por infarto, de los que el 70 % está relacionado con dislipidemias e hipertensión. http://www.invdes.com.mx/anteriores/Abril2001/htm/infarto.html  Es la tercer causa de muerte en México, después de diabetes y cáncer. http://sinais.salud.gob.mx/mortalidad/tabs/m_009.xls  Se estima que al menos un tercio de la población mexicana tiene algún grado de obesidad y dislipidemia, muchos de ellos asociados a diabetes.  Como medida de control de factores de riesgo, se debe controlar el nivel denivel de lípidoslípidos, así como otros factores de riesgo asociados (hipertensión, tabaquismo y sedentarismo y hábitos alimenticios).
  • 8. Mortalidad Mundial 22.3 19.3 12.6 9.7 9 6.3 0 5 10 15 20 25 30 AterosclerosisAterosclerosis Enfermedad infecciosa Cáncer Accidentes Enfermedad pulmonar SIDA Causas de mortalidad (%) The World Health Report 2001. Geneva. WHO. 2001.
  • 9. El papel del Laboratorio Clínico: Proporcionar elementos medibles para el control de este padecimiento Tendencias a buscar en la medicina..  LA MEJOR MEDICINA ES LA QUE CONTROLA Y PREVIENE LOS FACTORES DE RIESGO Y LAS COMPLICACIONES ASOCIADOS A: - SINDROME DE RESISTRENCIA A LA INSULINA - DIABETES / DISLIPIDEMIASDISLIPIDEMIAS, - HTA / TROMBOSIS LA MEJOR MEDICINA SERALA MEJOR MEDICINA SERA LA PREVENTIVALA PREVENTIVA……  LA MEJOR MEDICINA ES LA QUE CONTROLA Y PREVIENE LOS FACTORES DE RIESGO Y LAS COMPLICACIONES ASOCIADOS A: - SINDROME DE RESISTRENCIA A LA INSULINA - DIABETES / DISLIPIDEMIASDISLIPIDEMIAS, - HTA / TROMBOSIS LA MEJOR MEDICINA SERALA MEJOR MEDICINA SERA LA PREVENTIVALA PREVENTIVA……
  • 10. Origen de las Dislipidemias: Dislipidemias primarias CausasCausas genéticasgenéticas (primarias)(primarias) de Dislipidemias:de Dislipidemias:  Genética FamiliarGenética Familiar  - Hipercolesterolemia FamiliarHipercolesterolemia Familiar - Dislipidemia Familiar CombinadaDislipidemia Familiar Combinada - Hipercolesterolemia PoligénicaHipercolesterolemia Poligénica - Hiperquilomicronemia familiarHiperquilomicronemia familiar - Hipertrigliceridemia familiarHipertrigliceridemia familiar - Déficit congénito de HDLDéficit congénito de HDL CausasCausas genéticasgenéticas (primarias)(primarias) de Dislipidemias:de Dislipidemias:  Genética FamiliarGenética Familiar  - Hipercolesterolemia FamiliarHipercolesterolemia Familiar - Dislipidemia Familiar CombinadaDislipidemia Familiar Combinada - Hipercolesterolemia PoligénicaHipercolesterolemia Poligénica - Hiperquilomicronemia familiarHiperquilomicronemia familiar - Hipertrigliceridemia familiarHipertrigliceridemia familiar - Déficit congénito de HDLDéficit congénito de HDL
  • 11. Enfermedades mas comunes asociadas a desnutrición: • Gen Ob en cr7 que codifica para Leptina. • Se expresa (produce) en adipocitos, y bajo condiciones normales, será en proporción directa a la masa de tejido adiposo. Leptina ↑↑ Aumento de tejido adiposo Péptidos anoréxicos - Ghrelina - Serotonina - Colecistoquinina - Neuropéptido Y Lipogénesis ↓ Lipólisis ↑ Apetito ↓↓
  • 12. Origen de las Dislipidemias: Dislipidemias Secundarias - DiabetesDiabetes:: Valores elevados de insulina, defectos en el catabolismo de quilomicrones y VLDL - ObesidadObesidad:: Mayor cantidad de lípidos en circulación y valores elevados de insulina (resistencia a la insulina) - HipotiroidismoHipotiroidismo:: Disminución del receptor de LDL y depuración lenta de las LDL - NefropatíasNefropatías:: Insuficiencia renal crónica y depuración lenta de VLDL con aumento de producción de LDL. Retención de colesterol para compensación oncótica. - ColestasisColestasis:: Bloqueo de vía excretoria de la bilis con aumento del paso colesterol y fosfolípidos al plasma - AlcoholismoAlcoholismo:: Estimula la secreción de VLDL por parte del hígado y síntesis hepática de triglicéridos - Terapia sustitutiva de EstrógenosEstrógenos:: Mayor síntesis de VLDL y HDL - DiabetesDiabetes:: Valores elevados de insulina, defectos en el catabolismo de quilomicrones y VLDL - ObesidadObesidad:: Mayor cantidad de lípidos en circulación y valores elevados de insulina (resistencia a la insulina) - HipotiroidismoHipotiroidismo:: Disminución del receptor de LDL y depuración lenta de las LDL - NefropatíasNefropatías:: Insuficiencia renal crónica y depuración lenta de VLDL con aumento de producción de LDL. Retención de colesterol para compensación oncótica. - ColestasisColestasis:: Bloqueo de vía excretoria de la bilis con aumento del paso colesterol y fosfolípidos al plasma - AlcoholismoAlcoholismo:: Estimula la secreción de VLDL por parte del hígado y síntesis hepática de triglicéridos - Terapia sustitutiva de EstrógenosEstrógenos:: Mayor síntesis de VLDL y HDL
  • 13. Objetivo del estudio de Lípidos: 1.1. Proporcionar unaProporcionar una medidamedida que valore el riesgoque valore el riesgo de Enfermedad Coronaria (aterosclerosis)de Enfermedad Coronaria (aterosclerosis) asociada a dislipidemias, mediante elasociada a dislipidemias, mediante el  Indice de Riesgo = CTIndice de Riesgo = CT ÷ cHDL÷ cHDL 2. Valorar dislipidemia y complicaciones asociadas a2. Valorar dislipidemia y complicaciones asociadas a hiperlipidemia (hiperlipidemia (cifrascifras absolutas de CT y TG) deabsolutas de CT y TG) de acuerdo a riesgos de: colelitiasis, pancreatitis,acuerdo a riesgos de: colelitiasis, pancreatitis, hígado graso, etc.hígado graso, etc. 1.1. Proporcionar unaProporcionar una medidamedida que valore el riesgoque valore el riesgo de Enfermedad Coronaria (aterosclerosis)de Enfermedad Coronaria (aterosclerosis) asociada a dislipidemias, mediante elasociada a dislipidemias, mediante el  Indice de Riesgo = CTIndice de Riesgo = CT ÷ cHDL÷ cHDL 2. Valorar dislipidemia y complicaciones asociadas a2. Valorar dislipidemia y complicaciones asociadas a hiperlipidemia (hiperlipidemia (cifrascifras absolutas de CT y TG) deabsolutas de CT y TG) de acuerdo a riesgos de: colelitiasis, pancreatitis,acuerdo a riesgos de: colelitiasis, pancreatitis, hígado graso, etc.hígado graso, etc. “Solo se puede conocer lo que se puede medir”
  • 14. Valoración de las Dislipidemias por LaboratorioValoración de las Dislipidemias por Laboratorio   Medición de Colesterol + Triglicéridos.   Medición del Perfil de Lípidos  Colesterol  cHDL + cLDL + cVLDL  “LIPIDOS TOTALES..??? “  Triglicéridos  Test de Quilomicrones: Se deja reposar el suero a 4ºC durante 24 hs; cuando existen quilomicrones, aparece un sobrenadante cremoso en la superficie. En sueros normales, esto nunca aparecerá.   Medición de Perfil de Lípidos + Electroforesis de Lipoproteínas - Colesterol - cHDL + cLDL + cVLDL - Triglicéridos - Indice de Riesgo Aterogénico  C.T. / cHDL - Alfa - Pre-Beta - Beta - Indices de Riesgo Aterogénico  Pre-Beta / Alfa  Beta / Alfa
  • 15. CALCULO DE cLDL y cVLDL A PARTIR DECALCULO DE cLDL y cVLDL A PARTIR DE COLESTEROL, TRIGLICERIDOS Y cHLDCOLESTEROL, TRIGLICERIDOS Y cHLD Fórmula de FriedewaldFórmula de Friedewald para calcular las distintas fracciones de colesterol: - Medición directa de Colesterol (CT), - Medición directa de Triglicéridos (TG) - Medición directa de cHDL - Calcular cLDLcLDL y cVLDLcVLDL mediante las fórmulas: * cLDL = CT – ((Tg / 5 ) + cHDL) * cVLDL = CT – (cLDL + cHDL)  No valora riesgo asociado a hipertrigliceridemiahipertrigliceridemia cVLDL = TG / 5
  • 16. METODOS PARA VALORACIONMETODOS PARA VALORACION DE RIESGO ATEROGÉNICODE RIESGO ATEROGÉNICO  Medición de Colesterol y Triglicéridos, incluyendo las fracciones cHDL, cLDL Y cVLDL, para obtener el riesgo aterogénico derivado de alteraciones del colesterol y las lipoproteínas de transporte.  No valora riesgo asociado a hipertrigliceridemiahipertrigliceridemia Normal (mg/dL) Ejemplo 1 Ejemplo 2 Ejemplo 3 Ejemplo 4 Colesterol Total 100 – 200 200 200 250 314 Triglicéridos 50 – 170 170 170 400 245 cHDL > 50 35 50 60 46 cLDL < 100 131 116 110 219 cVLDL < 21 34 34 80 49 Riesgo Aterogénico C T / cHDL < 4.5 5.7 4.0 4.1 6.8
  • 17. METODOS PARA VALORACIONMETODOS PARA VALORACION DE RIESGO ATEROGÉNICODE RIESGO ATEROGÉNICO  Medición de Colesterol y Triglicéridos, incluyendo las fracciones cHDL, cLDL Y cVLDL, para obtener el riesgo aterogénico derivado de alteraciones del colesterol y las lipoproteínas de transporte.  No valora riesgo asociado a hipertrigliceridemiahipertrigliceridemia Normal (mg/dL) Ejemplo 5 Ejemplo 6 Ejemplo 7 Ejemplo 8 Colesterol Total 100 – 200 185 180 205 344 Triglicéridos 50 – 170 400 679 754 3 018 cHDL > 50 37 42 56 65 cLDL < 100 68 2 - 1 - 324 cVLDL < 21 80 136 150 603 Riesgo Aterogénico C T / cHDL < 4.5 5.0 4.3 3.6 :-) 5.3
  • 18. VALORACION DE RIESGO DE ENFERMEDAD CORONARIA (EC) CONVALORACION DE RIESGO DE ENFERMEDAD CORONARIA (EC) CON CIFRAS DE COLESTEROL, TRIGLICERIDOS Y LOS cHDL, cLDL Y cVLDLCIFRAS DE COLESTEROL, TRIGLICERIDOS Y LOS cHDL, cLDL Y cVLDL  Datos de Riesgo y Terapéutica del Toronto Working Group, 1998Toronto Working Group, 1998 Factor de Riesgo Coronario Nivel de riesgo Riesgo EC a 10 años Tratamiento, si: LDL(mg) ó CT/HDL ≥ 4 Muy alto ≥ 40% 135 ó >5 ≤ 3 Alto 20 a 39% ≥ 174 ó >6 ≤ 2 Normal 10 a 19% ≥ 193 ó >7 ≤ 1 Bajo <10% ≥ 232 ó >8
  • 19. Las lipoproteínas están formadas por: - Fracción proteica o Apo (Apoproteína)  Función primordial en acoplamiento a receptores. - Colesterol total y esterificado - Triglicéridos. COMPOSICION DE LAS LIPOPROTEINASCOMPOSICION DE LAS LIPOPROTEINAS
  • 20. COMPOSICION DE LAS LIPOPROTEINASCOMPOSICION DE LAS LIPOPROTEINAS  PROPORCION DE LIPIDOS / APOPROTEINASPROPORCION DE LIPIDOS / APOPROTEINAS
  • 21. METABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINASMETABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINAS
  • 22. METABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINASMETABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINAS
  • 23. METABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINASMETABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINAS
  • 24.  METABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINASMETABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINAS
  • 25.  CAUSAS Y CLASIFICACIONCAUSAS Y CLASIFICACION DE LAS DISLIPIDEMIASDE LAS DISLIPIDEMIAS
  • 26.  PROCESO DE LAPROCESO DE LA ATEROSCLEROSISATEROSCLEROSIS 
  • 27. IMPORTANCIA DEL ESTUDIO DELIMPORTANCIA DEL ESTUDIO DEL PACIENTE CON DISLIPIDEMIAPACIENTE CON DISLIPIDEMIA Cual es su riesgo aterogénico..??Cual es su riesgo aterogénico..??   NO HAY REGLA: Hay “flacos” con hipercolesterolemia o hipertrigliceridemia, y flacos normolipémicos.   Hay “gordos” con hipercolesterolemia y/o hipertrigliceridemia y “gordos normolipémicos.  Se pueden clasificar las dislipidemias y medir el riesgo aterogénico… con solo medir colesterol y triglicéridos ? … Causas de obesidad ? … Causas de talla baja ?
  • 28. ESTUDIO DE DISLIPIDEMIASESTUDIO DE DISLIPIDEMIAS • La ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS ofrece un método sensible y accesible para valoración de riesgos aterogénicos, tanto asociados a hipercolesterolemia como hipertrigliceridemia.  Patológico: Aumento de LDL y VLDL con agravamiento por presencia de quilomicrones. Disminución de síntesis de HDL.  Tendencia óptima: Aumentar HDL y disminuir LDL, IDL y VLDL Clasificación de Dislipidemias Terapéutica específica Riesgo EC Respuesta A tratamiento Electroforesis de Lipoproteinas
  • 29. ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINASELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS  ELECTROFORESIS DE MICROZONAELECTROFORESIS DE MICROZONA
  • 30. Clasificacion de las DislipidemiasClasificacion de las Dislipidemias (OMS 1970 modificada de Fredickson y Levi de 1963)(OMS 1970 modificada de Fredickson y Levi de 1963) - Tipo I: Quilomicrones. - Tipo IIa: Betalipoproteínas (LDL) - Tipo IIb: LDL + VLDL (Beta y p-Beta) - Tipo III: IDL (Beta ancha) - Tipo IV: VLDL (pre-Betalipoproteínas) - Tipo V: VLDL + Quilomicrones  Método semi-semi- cuantitativocuantitativo  Debe interpretarse junto con los valores de colesterolcolesterol y triglicéridos.triglicéridos. Banda en el punto de aplicación corresponde a la presencia de quilomicrones, Banda ancha que abarca beta y prebeta sugiere un acúmulo anormal de IDL y/o de remanentes de quilomicrones. Banda Pre-Pre-αα (LipoalbúminaLipoalbúmina) aparece cuando hay ácidos grasos libres y lecitina unida a albúmina (no patológica).
  • 31. ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINASELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS  ELECTROFORESIS DE MICROZONA (acetato de celulosa)ELECTROFORESIS DE MICROZONA (acetato de celulosa) Punto de aplicación Lipoproteínas Beta (LDL) Lipoproteínas Pre-Beta (VLDL) Lipoproteínas Alfa (HDL) Sitio de aparición de los quilomicrónes Método electroforético que permite separar e identificar y medir las distintas fracciones lipoproteicas, mediante su tinción con Sudán Negro y su integración densitométrica en un lipidograma.
  • 32. ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINASELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS HDL VLDL LDL quilomicrones Integración densitométrica de la electroforésis
  • 33. MUESTRA A USAR…?MUESTRA A USAR…?  El SUEROSUERO contiene Lipoprotein LipasaLipoprotein Lipasa, que es activa y estará degradando lipoproteínas en la muestra.  La Lipoprotein Lipasa es activada por laactivada por la HEPARINAHEPARINA, por lo que no es una muestra útil para una electroforesis de lipoproteinas.  ElEl EDTAEDTA inhibe la actividad de la enzima Lipoprotein Lipasa, por loinhibe la actividad de la enzima Lipoprotein Lipasa, por lo que es la muestra ideal a utilizar, ya seaque es la muestra ideal a utilizar, ya sea EDTA -Na, -K, o -LiEDTA -Na, -K, o -Li..  NO HAY CAMBIOS SIGNIFICATIVOS SI SE EMPLEA UNA MUESTRA DE SUERO Y SE EFECTUA LA ELECTROFORESIS ANTES DE 48 HORAS EN SUERO REFRIGERADO.  Si no se procesará antes de 48 horas de obtenida la muestra, será mas conveniente una muestra de plasma y refrigerar para procesar.
  • 34. Datos del paciente ELECTROFORESIS DE PROTEINASELECTROFORESIS DE PROTEINAS  REPORTEREPORTE Corrimiento electroforético Datos de interpretación clínica Integración de electroforesis PROPORCIONAR AL MEDICO, TODA LA INFORMACION POSIBLE PARA EL CORRECTO APROBECHAMIENTO DEL ESTUDIO
  • 35. FENOTIPO DE DISLIPIDEMIASFENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS  PATRON NORMALPATRON NORMAL
  • 36. FENOTIPO DE DISLIPIDEMIASFENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS  FENOTIPO IIa: Hiper-BetalipoproteinemiaFENOTIPO IIa: Hiper-Betalipoproteinemia
  • 37. FENOTIPO DE DISLIPIDEMIASFENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS  FENOTIPO IIb: Hiperlipidemia MixtaFENOTIPO IIb: Hiperlipidemia Mixta
  • 38. FENOTIPO DE DISLIPIDEMIASFENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS  FENOTIPO III: Beta AnchaFENOTIPO III: Beta Ancha
  • 39. FENOTIPO DE DISLIPIDEMIASFENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS  FENOTIPO IV: Hiper-Betalipo (trigliceridemia)FENOTIPO IV: Hiper-Betalipo (trigliceridemia)
  • 40. FENOTIPO DE DISLIPIDEMIASFENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS  FENOTIPO IV: Hiper-Betalipo (trigliceridemia)FENOTIPO IV: Hiper-Betalipo (trigliceridemia)
  • 41. FENOTIPO DE DISLIPIDEMIASFENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS FENOTIPO V: Hipertrigliceridemia con quilomicronesFENOTIPO V: Hipertrigliceridemia con quilomicrones
  • 42. FENOTIPO DE DISLIPIDEMIASFENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS FENOTIPO V: Hipertrigliceridemia con quilomicronesFENOTIPO V: Hipertrigliceridemia con quilomicrones
  • 43. ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINASELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS Principales problemas y alternativas:Principales problemas y alternativas: Muy baja cantidad de lípidos (ppalm tg) Prescribir a pacientes dislipidémicos Uso de sueros envejecidos (> 2 días) Procesar al menos 3 veces por semana Usar plasma si se procesara después de 48 hs Uso de sueros/plasmas congelados No congelar. Ideal refrigerar a 4°C Uso de Buffer equivocado o deteriorado Recambio de buffer y uso de secantes Déficit Congénito de HDL ..? Usar un suero normal como Control Interno
  • 44. ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINASELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS  Principales problemasPrincipales problemas Principales problemas de corrimientos: 1. Deficiente preparación de acetatos por no recambio de filtros  Habrá aparición de artificios en el corrimiento 2. Envejecimiento de reactivos  Teñido deficiente 3. Uso de amortiguador impropio  Corrimiento anormal 4. Muestras envejecidas  Desaparición o atenuamiento de bandas 5. No coincide lo que veo en el corrimiento con lo que integra el integrador densitométrico  Limpieza y mantenimiento de los sensores o fotoceldas de cada canal de integración. Sugerencias: - En lo posible, meter suero “normal” para comparar patrones anormales. - Recambio de papel filtro de puentes y desecantes. - Procesamiento 3 veces por semana - Programación de mantenimiento preventivo  al menos una vez al año
  • 45. Corrimientos de lipoproteinas con muestras frescas (izquierda) y misma muestra con 5 dias de almacenamiento (imagen derecha).