Guia protocolos de investigacion

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Guia protocolos de investigacion

  1. 1. Edmundo Resenos DÍAZ Guía para la elaboración de protocolos de investigaciónInstituto Politécnico Nacional m é x i c o
  2. 2. INTRODUCCIÓNMI AÑO SABÁTICO 1993-1994 lo gocé como profesor visitante en el Departamento deContaduría y Finanzas de la Universidad de las Américas-Puebla. Una de las preocu-paciones del Departamento es iniciar las actividades de investigación. Tal vez, es difícilexplicar por qué no han iniciado esta actividad. Una de las explicaciones que encuentro es latradición. La escuela se constituyó para satisfacer la demanda de estos profesionales en lazona de influencia de la Universidad, al menos así lo infiero de diversas conversaciones conlos colegas. Desde luego, no era mi propósito averiguar estas razones, ni lo es ahora queinicio este tema. Considero que éstas no afectan la intención de elaborar esta guía, ni suposible uso. Pero sí explica el motivo de hacerla.Se pretende que esta guía sea útil para toda persona que desea hacer investigación formal. Elprotocolo consiste en un formulario que elabora una institución para sistematizar lapresentación de los proyectos de investigación que recibe para su estudio, análisis ydictamen. En general, el formulario se elabora para aquellos proyectos que concursan porapoyos financieros. El proyecto debe convencer a comités, comisiones o jurados, de que elalcance o el resultado de la investigación puede llegar a constituir una apor-ración a laciencia, a la tecnología, o a ambas. En su mayoría los proyectos de investigaciónproporcionan en su mismo 7
  3. 3. INTRODUCCIÓNinforme datos, entre otros, acerca de qué tipo de proyecto es, qué problema se aborda, lateoría en la que se sustenta, la metodología que se seguirá, los recursos que se requieren parasu realización, así como la mención de los casos donde se presente de los recursos con losque ya se cuenta.La experiencia ha mostrado que cada investigador proporciona esta información de maneradiferente. Algunas de éstas se hacen evidentes en la secuencia del informe; otras por laomisión de información y algunas por el exceso de ésta. Esto dificulta tanto la evaluación delos proyectos como los criterios para seleccionarlos y apoyarlos.Tal problemática llevó tanto a las instituciones como a los organismos encargados del apoyoa las actividades de investigación a diseñar formularios que les permitan sistematizar lainformación que se requiere, a fin de facilitar el seguimiento. Estos formularios se conocencomo "protocolos".La guía que se propone es de orientación general. Está enfocada a proyectos deinvestigación relativamente complejos y para personas que se inician en estas actividades.Lo que implica que se reconoce que los investigadores experimentados ya no requierenguías, pues ellos mismos son una guía para los iniciados; asimismo se reconoce que en lapráctica actual no existen guías para proyectos complejos o extremadamente complejos, yaque éstos son elaborados por los propios investigadores experimentados.En virtud de que la fecha de culminación de mi estancia académica está próxima, se tomó ladecisión de elaborar la guía con base en la experiencia personal, sin acudir a la
  4. 4. INTRODUCCIÓN 9bibliografía existente, que es muy amplia y numerosa. Por lo tanto, al usuario de ésta se lerecomienda consultarla y estudiarla, para las adecuaciones pertinentes a su caso particular.Se pretende que sea una guía práctica y de fácil utilización.
  5. 5. JUSTIFICACIÓN DE LA INVESTIGACIÓNLa actividad de +}´´investigación pone de manifiesto el uso de la inteligencia humana comouno de los elementos diferenciadores de otros seres vivos, y concretamente dentro del reinoanimal. El hombre ha sido capaz de transformar el medio ambiente, la faz de la tierra parasatisfacer sus necesidades. Hoy día quien decida hacer investigación deberá incrementar sus estudios sobre ciencia,tecnología y desarrollo, método de investigación, lógica, filosofía de la ciencia y estadística,entre otros, y en particular la ciencia y la actividad sobre la cual va a investigar. Además,pasar un periodo de entrenamiento al lado de un investigador con algún grado de experiencia. En términos sencillos, investigación es la actividad humana que se realiza para conocer larealidad (creación del conocimiento, lograr descubrimientos) y para usar ese conocimiento enel manejo de la realidad o en la creación de nuevas realidades (modificaciones a lo existente einvenciones) .No entraremos ahora en la cuestión de si es para bien o para mal. Simplemente lo hemoshecho, hemos sido capaces de. No estoy seguro de las fechas o épocas que estudiosos de lahistoria y evolución de la investigación dan como nacimiento de esta actividad humana, y loque a continuación voy a decir puede ser muy cuestionable. Sin embargo, 11
  6. 6. 12 JUSTIFICACIÓN DE LA INVESTIGACIÓNpuede ser sencillo, útil e ilustrativo para las pretensiones de esta guía. Además, tambiénpuede ayudar a desmitificar y clarificar algunas concepciones de la investigación: Tal vez, y guardando las debidas proporciones, la investigación nace cuando el hombreprimitivo logra sus primeros conocimientos. Por ejemplo, cuando observa y concluye quegolpea más fuerte con el puño cerrado que con la mano abierta (observación, prueba,comprobación, conclusión en un conocimiento). Más tarde descubre que con una piedra ensu mano golpea aún más fuerte. Pero no se queda ahí, es probable que la observación de launidad total: brazo, mano y piedra golpeando, lo haya conducido a amarrar una piedra a unpalo y crear así la primera extensión del hombre. No es posible asegurar que haya sido exac-tamente de esta manera, en esa secuencia y tan rápido, pues posiblemente fue un leñoprimero, y entre cada paso pasaron muchas cosas y muchos años, pero lo útil es que elproceso de adquirir el conocimiento y aplicarlo para satisfacer mejor nuestras necesidades ytener mayor capacidad de influencia en el medio ambiente, es algo que se reproducecontinuamente y ahora mucho más sofisticado, complejo y riguroso. Muchos conocimientoscientíficos ya son conocimiento común; muchos inventos son ya obras comunes. Todo ello,con los conocimientos científicos y los desarrollos tecnológicos actuales, constituyen elacervo, el "background", para la investigación que cada vez se inicia. Hoy día, toda investigación está basada en los conocimientos y tecnologías existentes,tanto de dominio común como del científico y tecnológico. Por lo mismo, toda in-
  7. 7. JUSTIFICACIÓN DE LA INVESTIGACIÓNvestigación expresará claramente y con la mayor precisión posible cuál es su contribución alconocimiento o a la tecnología, o a ambos a la vez. Esto es lo que justifica la investigación, sea científica, tecnológica o bien una combinaciónde ambas: la contribución la aportación que se desea lograr. Esta contribución o aportaciónno necesariamente ha de ser grandiosa o espectacular. Como explica Thomas Khun en sulibro en el que hace referencia a las revoluciones científicas; entre una ruptura delconocimiento y otra siempre ha existido una gran cantidad de investigación. Muchas de ellascon aportaciones significativas, otras con contribuciones modestas algunas de ellas casiimperceptibles y otras que fueron juzgadas como fracasos, pero todo este trabajo científicova conformando, desarrollando y cultivando el conocimiento hasta Ilegal al momento de laruptura, de la revolución. Lo mismo ha sucedido con los desarrollos tecnológicos. Porejemplo, imagínese cuánto trabajo de investigación científica se realizó antes de llegar aconocer la estructura del ADN; y cuánto desarrollo tecnológico gradual, muchas vecesimperceptible, año tras año, se llevó a cabo sobre el carburador de los automóviles, antes dellegar al "full injection". De manera paralela al desarrollo científico del conocimiento de la genética, también serealizarla el desarrollo tecnológico que permitiera y apoyara la investigación científica, porejemplo los microscopios e instrumentos más potentes y precisos para su observación ymanipulación. Asimismo, paralelo a los desarrollos tecnológicos de la in-
  8. 8. 14 JUSTIFICACIÓN DE LA INVESTIGACIÓN yección de gasolinas a los motores de autos que incrementaban los conocimientos de la combustión interna de los motores y del comportamiento de ciertos elementos de los combustibles en diferentes condiciones de trabajo, se estaban desarrollando maquinarias, instrumentos y procesos nuevos para fabricar estos nuevos motores. Estos ejemplos nos pueden ayudar a visualizar, cómo se entreteje la complicadísima red de la investigación y de sus resultados, y además lo importante que ésta es para la vida actual y futura del hombre. Lo anterior también nos permite percatarnos de que casi es imposible pensar que sobre talo cual tema no hay nada escrito y que se parte de cero. Pero también resulta difícil imaginarque en la actualidad se agotan los temas de investigación. A cada momento, los resultados decualquier investigación abren nuevas fuentes de investigación.
  9. 9. DEFINICIÓN DEL TEMA DE INVESTIGACIÓNCONSISTE EN DEFINIR lo que se va a investigar. Su enunciado se hace de la manera másconcreta que sea posible, sin apartarse del objetivo de transmitir con precisión la idea de loque se pretende aportar. De manera general, tratándose de investigación científica o básica se observan algunoslineamientos, sin que éstos constituyan una limitación a las posibilidades de la definición detemas, simplemente se anuncian como una orientación y pueden ser los siguientes:1. La existencia de un elemento en el fenómeno que se estudia.2. La relación o relaciones que tiene un elemento con otros elementos dentro de un fenómeno. Cuando existen varias relaciones, en la mayoría de los casos conviene iniciar su estudio una por una y después todas a la vez. O bien, realizar un estudio genérico de todas a la vez y después una por una.3. Determinar cuáles son los elementos que integran un fenómeno particular, las relaciones o funciones entre ellos, de qué tipo son cada una de ellas, criterios con los cuales se pueden jerarquizar o clasificar los elementos y las relaciones que establecen, las estructuras que conforman según su jerarquización y clasificación y, las relaciones que guardan. Una investigación de estas caractetís- 15
  10. 10. 16 DEFINICIÓN DEL TEMA DE INVESTIGACIÓN ticas es conveniente planearla en varias investigaciones sucesivas o complementarias.4. Descubrir criterios de clasificaciones, tipificaciones, caracterizaciones de fenómenos, elementos, componentes, relaciones, funciones.5. Descripción y explicación de estructuras.6. Proposición de parámetros de medición.Ejemplos:a) (Del 1 y 2) Taylor descubre y demuestra que la división del trabajo* (elemento de la administración) incrementa (relación casual) la productividad(elemento de la admi- nistración) .b) (Del 3) Fayol encontró que la administración está inte- ■ grada por cinco principales funciones (determinación de elementos): planeación, organización, dirección, coordinación y control.c) (Del 4 y 6) Las investigaciones de Likert aporran una clasificación del liderazgo y una escala para su evaluación y clasificación.d)(Del 5) Uno de los hallazgos de los estudios de-Hawthorne que dirigió Elton Mayo, fue el de la estructura de los grupos informales dentro de las empresas.Como se puede apreciar, no hay investigaciones totalmente puras de cada tipo; sin embargo,contar con un esque- * Las cursivas son del autor para fines explicativos.
  11. 11. DEFINICIÓN DEL TEMA DE INVESTIGACIÓN 17ma, el que sea, al menos de los más usuales, permite iniciar la búsqueda del tema que sedesea investigar y si ya se tiene experiencia en los más comunes se puede incursionar enesquemas más particulares. No se investiga lo obvio, lo que va se sabe, lo que ya es conocimiento común, a menos quese tenga una teoría suficientemente sustentada en investigaciones que plantean una dudarazonable acerca de lo considerado obvio, y que lo que todo mundo acepta como algoconocido, no es así; es decir, de que existe la duda fundamentada de que estamosequivocados. Tampoco se investiga la importancia, la "importancia" es un resultado naturalde la investigación, no un propósito de la investigación. Lo que es o no importante, o elgrado de importancia, generalmente se determina en las investigaciones sobre lasestructuras.
  12. 12. ESTADO DEL ARTEEL ESTADO DEL ARTE o marco teórico {background para los estadounidenses) es el acervo deconocimientos y experiencia que se tiene sobre el ámbito de estudio donde se ubica lainvestigación a realizar. Consiste en describir los antecedentes teóricos, el trabajo deinvestigación, los estudios o ensayos que se han realizado y que permiten fundamentar,justificar y buscar la investigación propuesta. Esto implica que se conoce el campo del conocimiento relativo a la investigación. Asimismoque se cuenta con una bibliografía que ha sido estudiada, lo que demuestra un cierto dominiosobre ese campo del conocimiento, y se hace evidente cuando se redacta. Es decir, el estadodel arte o marco teórico constituye una investigación bibliográfica. Entre los requisitos que debe cumplir toda investigación está el de que sea verificable yreplicable. Estos también son aplicables a la investigación bibliográfica. Verificable significaque pueda comprobarse lo que se afirma en forma oral o escrita. Por replicable se entiendeque otro investigador esté en posibilidad de realizar la misma investigación con las mismascondiciones.Para cumplir lo anterior, durante el discurso científico se debe hacer evidente el uso de labibliografía que se utilizó haciéndola figurar en las notas de pie de página. No sonconvenientes ni recomendables frases como: "muchos estudiosos dicen...", "se ha establecidoque ...", "algunos 19
  13. 13. 20 ESTADO DEL ARTEtratadistas han concluido ...", si nunca se indica quienes son los estudiosos, quién o quiéneshan establecido o quiénes son los tratadistas, y se pretende llenar este hueco en los discursosrelacionando la bibliografía al final del documento. Lo recomendable y la práctica másgeneralizada universal-mente es que se indique quién o quiénes dicen, establecen oconcluyen, mencionando su primer apellido y el año de la publicación, cuando menos.Algunos más rigurosos indican la página o páginas. Por ejemplo: "Apoyados en el modelo delequilibrio (Miller y Friesen, 1980; Tushman y Romanelli, 1985) han argumentado que lasorganizaciones ...", "en una investigación que realizaron Rosen, Templetony Kichiine (1981)encontraron que las mujeres gerentes ...". Sin embargo, es imprescindible citar la página o laspáginas cuando se hace una cita textual, p. e. "la relativa importancia de estos factores en unadecisión de promoción particular o a través de las decisiones, ha recibido poca atención"(Stumpf and London, 1981b: 543). Otro aspecto que es recomendable cuidar es el estilo de redacción. Las ideas deben serexpresadas de manera directa; con un uso conecto de las palabras que evite utilizarlas con lossignificados gráficos que tienen en el lenguaje popular; a menos que sea un hecho, dato oinformación que va a ser sujeto de análisis, entonces se cita entrecomillado y con el menornúmero de palabras posible sin perder la claridad, p. e.: "es importante tener en cuenta que cuando se está en el estudio de la reputación de las actuaciones, el enfoque estructu*-
  14. 14. 21 ESTADO DEL ARTE ral nos permite examinarlas de la manera en que se analiza la estructura de relaciones en una organización completa." (39 palabras). "el enfoque estructural sugiere examinar la reputación de las actuaciones en términos de la estructura de relaciones en una organización completa." (21 palabras).Obsérvese que se eliminan algunos adjetivos no necesarios y consideraciones queestán implícitas en la idea que se transmite y no se afecta la información ni lacomunicación. En el discurso científico la transmisión de las ideas se estructura de lamanera más directa y concisa que sea posible. Al final de este capítulo deberá relacionarse cuando menos la bibliografía utilizada.Sin embargo, es recomendable indicar con que bibliografía complementaria se cuenta.
  15. 15. PROBLEMA DE INVESTIGACIÓNEL PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN no es el tema de la investigación. El tema es la denominación del problema. El problema es el objeto de la investigación y está constituido por el conjunto de implicaciones, efectos, significados que tienen o provocan los fenómenos, los elementos, las relaciones que se pretenden estudiar. Es la descripción analítica del tema. El problema se infiere del análisis que se realiza en el estado del arte. Es común que se constituya con una descripción de las hipótesis. El planteamiento del problema permite enunciar las hipótesis que se pretende probar. Las hipótesis son enunciados concretos de los cuestionamientos que se plantean en el problema o proposiciones que se pretende probar, tratándose de una investigación básica, por ejemplo: "entre mayor sea el tamaño de una organización, mayor es el nivel de responsabilidad de los empleados": o las aseveraciones a priori en que se sustenta la investigación aplicada o el desarrollo tecnológico, por ejemplo: "las firmas que secuencialmente entran a los mercados extranjeros, se moverán de su línea de negocios hacia nuevas líneas de negocios".Puede observarse que en el primer caso se plantea una proposición que trata de probar unarelación causal entre el tamaño de las organizaciones y el nivel de responsabilidad de losempleados, lo que tal vez permita plantear una teoría en torno del tamaño de lasorganizaciones y la con- 23
  16. 16. 24 PROBLEMA DE INVESTIGACIÓNducta de los miembros. En el segundo caso se trata de una aseveración, proveniente de otrau otras investigaciones en la que se podrían sustentar ciertos planes o restructuracionesorganizacionales específicas u otros desarrollos tecnológicos administrativos. Se insistenuevamente en que deben revisarse las investigaciones publicadas en revistas especializadasextranjeras y nacionales a fin de familiarizarse con la diversidad de planteamientos deproblemas y de hipótesis que ha sido posible formular y que son sugestivas para expresarel problema y las hipótesis que se pretenden abordar en el protocolo que se estáelaborando.
  17. 17. JUSTIFICACIÓN LA JUSTIFICACIÓN ES LA EXPOSICIÓN de las implicaciones que puede llegar a tener el conocimiento que se espera lograr, explicando en qué consiste el avance y qué duda o sospecha pretende resolver. Desde luego, se debe referenciar con notas de pie de página hasta donde haya quedado el último avance, o de qué trabajos proviene la duda o qué trabajos científicos insinúan la existencia de escaso o nulo conocimiento. Tratándose de investigaciones aplicadas o de desarrollo tecnológico, la justificación consiste en explicar, de preferencia con referencias bibliográficas, el problema que se resuelve, su utilidad práctica y las ventajas que tiene. De ser posible, acompañarlo de comparaciones y evaluaciones (cuantitativas o cualitativas y de preferencia ambas), la posibilidad de aplicaciones y usos inmediatos y potenciales, ordenándolos, de preferencia, bajo algún criterio de jerarquización. BIBLIOGRAFÍALa presentación de la bibliografía debe hacerse observando los convencionalismos másgeneralizados, que son publicados en manuales o guías de redacción y en algunos libros demetodología, los cuales es recomendable consultar. Aquí se mencionarán las más usuales: lasde libros y revistas. 25
  18. 18. 26 JUSTIFICACIÓNLibrosChristensen, C.R., K.R. Andrews, J.L. Bower, R.G. Hamermesh y M.E. Porter, (1982), Busines Policy: Text and Cases (5th ed.) Homewood, II, Irwin.Rousseau, D., (1983), "Technology in Organizations: A Constructive Review and Analitical Framework", en S.E. Seashore, E.E. Lawler, III, y C. Cammann (comps.), Assessing Organizational Change, Nueva York, John Wiley, 229-253.RevistasWoodman, R.W., J.E. Sawyer y R.W. Griffin, (1993), "Toward a Theory of Organizarional Creativity", Academy of Management Review, 18: 293-321.ObservacionesEn ambos casos obsérvese que el uso de las letras mayúsculas se limita a lo estrictamentenecesario; se inicia con el apellido de los autores; en cuanto a los nombres, únicamente laletra inicial con mayúscula; a continuación el año de la publicación. Tratándose de libros, eltítulo de éste se destaca usando letra cursiva. Si no se cuenta con computadora y unprocesador de textos, subrayar o escribir entre comillas. A continuación la edición, sólo apartit de la segunda cuando es la primera no se acostumbra indicarlo, es decir si no se indicala edición, se sobreentiende que es la
  19. 19. 27 JUSTIFICACIÓNprimera. Después la ciudad donde se editó el libro y finalmente la casa editora,mencionándola por su nombre comercial, no por su denominación social, por ejemplo, noes usual "Prentice-Hall, Inc.", lo acostumbrado es: "Prentice-Hall". Cuando se trata de untrabajo publicado en un libro (véase el segundo ejemplo de libros), se inicia indicando elautor del trabajo y el título del trabajo, en seguida la indicación "en" y la cita del libro en laforma acostumbrada, destacándose el título de éste. Por lo que hace a revistas, después de indicar los autores y el año, el título del trabajo: elnombre de la revista, destacándolo con letra cursiva y negrita o en la forma ya indicada enlibros; el volumen de la revista, o en su defecto el número o la fecha; y finalmente laspáginas donde se encuentra el artículo de referencia, incluyendo desde la página del títulohasta la página de la bibliografía. La mayoría de las revistas tienen los siguientes datos:volumen, número y fecha.
  20. 20. OBJETIVOSLOS OBJETIVOS EXPRESAN LOS LOGROS que se pretende alcanzar con la investigación.Tratándose de una investigación básica, pueden consistir en lo siguiente (de maneraenunciativa, no limitativa):• un hallazgo,• una comprobación,• una demostración,• la aportación de una clasificación,• la descripción de una estructura,• una refutación,• la aportación de una teoría o una hipótesis. Tratándose de una investigación aplicada o de desarrollo tecnológico, de la misma maneraenunciativa, pueden ser los siguientes:• la invención de un producto nuevo,• la invención de un proceso nuevo,• la sustitución de materiales,• la invención de equipos e instrumentos de trabajo,• la mejora (innovación gradual) de productos, procesos, materiales, equipos o instrumentos,• la experimentación de un producto, proceso, material, equipo o instrumento nuevo o mejorado, 23
  21. 21. OBJETIVOS• el diseño de un producto, proceso, material, equipo o instrumento,• el diseño de modelos o sistemas operativos,• la construcción de plantas piloto. También son frecuentes los proyectos de desarrollo tecnológico complejos o altamentecomplejos que involucran varios propósitos o todos los anteriores y algunos otros más, enese caso estamos frente al desarrollo tecnológico de un sistema, aún cuando generalmenteno se indica así, y simplemente se le da un nombre que únicamente tiene significado paralos involucrados, por ejemplo: proyecto apolo, proyecto satélite solidaridad. En cualquiera de los casos, en el protocolo de investigación se debe indicar el objetivoprincipal y los secundarios en orden jerárquico. Para el enunciado de los objetivos en una investigación básica es de mucha ayuda elplanteamiento hipotético. Tratándose de una investigación aplicada o de desarrollo tec-nológico, es útil apoyarse en la problemática que pretende resolver y en las utilidades quese vislumbran, también bajo un criterio de jerarquización.
  22. 22. METASLAS METAS SON LAS ETAPAS o pasos que se planea realizar para llevar a cabo los objetivos delproyecto de investigación. Generalmente son expresados en forma muy concreta y dentrode un criterio secuencial, de manera que den una idea clara de lo que se va a realizar en cadaetapa de la investigación. Algunas de éstas ofrecen resultados parciales tangibles que debenmencionarse. De manera ilustrativa se ofrece un ejemplo sencillo (desde luego noconstituye ningún patrón a seguir, pues cada investigación tiene sus propias metas):1. Acopio de bibliografía.2. Análisis, crítica y discusión de la bibliografía.3. Elaboración de artículo o artículos.4. Participación con ponencia en foros académicos.Comentario: Es recomendable que el estudio de la bibliografía que se hizo no quedeúnicamente en la memoria del investigador. La forma en que la analiza, la interpreta, lacuestiona, la aplica, la utiliza para su problema, debe divulgarse para utilidad de lacomunidad científica a la que pertenece. Si recibe críticas o comentarios ¡enhorabuena!pues ha interesado a su comunidad y constituyen una retroalimentación a su proyecto.Algunos investigadores utilizan esta etapa para construir el o los primeros manuscritos delestado del arte. 31
  23. 23. 32 META5. Selección y elaboración de instrumentos de observación y medición.6. Elaboración de artículo o artículos.7. Participación con ponencia en foros académicos.Comentario: Los artículos y las ponencias se elaboran generalmente para dar a conocer losinstrumentos de observación o de medición que se han construido. En estos artículos seexpone la justificación teórica y problemática que sustentan su construcción, sus usosinmediatos y los potenciales, sus limitaciones y condiciones restrictivas bajo las que opera.8. Universo de estudio y selección de la muestra.9. Observaciones, experimentos, mediciones [...]10.Análisis y discusión de los resulrados obtenidos.11.Elaboración de artículo.12.Participación con ponencia en foros académicos.Comentario: La difusión de los resultados y conclusiones de una investigación en revistasespecializadas es ineludible. Este trabajo se simplifica cuando se han realizado pu-blicaciones y ponencias previas sobre diversas etapas o aspectos de la investigación.
  24. 24. PLAN DE TRABAJOEL PLAN DE TRABAJO es la descripción con cierto grado de detalle del proceso que sepretende seguir para realizar la investigación. Consiste en el enunciado concreto de cadauno de los procesos (conjunto de actividades que tienen un fin predeterminado) necesariosen que se ha subdividido el trabajo de investigación. Su enunciado se hace atendiendo a lasecuencia lógica de eslabonamiento y a la continuidad propia de cada uno de ellos. El usode técnicas de programación como la ruta crítica y las barras de Gantt son un buen apoyopara este proceso y ios siguientes. 33
  25. 25. CALENDARIO DE ACTIVIDADESEL CALENDARIO DE ACTIVIDADES es la programación cronológica de las actividades que se van a realizar para llevar a cabo el proyecto de investigación.Comentario: Para elaborar el plan de trabajo y el calendario de actividades es convenientetener en cuenta la metodología que se definió seguir (que deberá estar explícita en algúndocumento publicado o inédito) y las metas. La elaboración de la metodología, las metas,el plan y el calendario están impregnadas del grado de creatividad e innovación que escapaz de desarrollar el investigador, en función de la infraestructura y recursos con quecuenta y por lo mismo tienen un alto grado de originalidad. Fernando Ibarra, amigo ycolega, dijo en alguna ocasión que existen tantas metodologías como investigaciones hay.No lo he verificado, pero como consecuencia de las investigaciones que he conocido,encuentro mucho de verdad en su aseveración. 35
  26. 26. INFRAESTRUCTURA DISPONIBLEEN ESTE CAPÍTULO se relacionan las instalaciones, equipos, instrumentos y sistemas deapoyo, tanto físicos como humanos, con que se cuenta para tealizar la investigación.Incluye expertos, técnicos, edificaciones, laboratorios, equipamientos, instrumentos detrabajo, sistemas de cómputo y comunicación incluyendo tedes, bibliotecas. Es importante tener en cuenta este aspecto desde el momento en que se genera la idea;ya que si se desea genuina-mente realizar la investigación, ésta deberá planearse demanera que sea realizable con los recursos con que se cuenta o porque sea muy alta lacerteza de adquirir lo que falta. El grado de viabilidad de un proyecto de investigación, enbuena parte está en función del grado de dependencia de la adquisición de infraestructura. 37
  27. 27. FORMACIÓN DE INVESTIGADORESLA FORMACIÓN DE INVESTIGADORES o formación de recursos humanos (sin entrar en lapolémica sobre si el hombre es o no un recurso, prefiero la primera descripción) se refierea las acciones concretas que se llevan a cabo durante ia realización de las investigacionespara satisfacer la necesidad social de incrementar el número de investigadores en activo. Además de realizar los estudios formales convenientes para que las personas se capaciteny habiliten en la actividad de investigación, es indispensable que realicen trabajos coninvestigadores experimentados. La investigación se aprende trabajando en ella. Ahí se forja el investigador. Estudios ytrabajo son complementarios, no obstante ante la falta de uno de ellos, lograr la formaciónde los investigadores es mayor cuando se trabaja desarrollando la propia investigación. Enla actualidad existen grupos donde se puede aprender a investigar. La opción "echando aperder se aprende" debe tomarse en casos muy extremos. Las instituciones educativas queimparten estudios de postgrado sin programas de investigación, tienen la posibilidad deacudir a las que sí cuentan con ellos, y, de manera creativa, negociar estrategias y accionesque satisfacen sus necesidades de formación de investigadores, ya que todas lasinvestigaciones permiten y requieren la incorporación de personas en formación adiferentes niveles. 39
  28. 28. 40 FORMACIÓN DE INVESTIGADORES El supuesto más generalizado es que una investigación es realizada por un equipo de investigadores, constituido por: directores, asociados, asistentes, técnicos, tesistas, estudian- tes. El tamaño del equipo, su experiencia y madurez, incrementan la viabilidad del proyecto de investigación. En general, en el proyecto se integra un resumen de la curricula de cada uno de los participantes, misma que destaca la formación académica a partir de licenciatura: la(s) tesis que ha dirigido, membresías de asociaciones académicas y profesionales a las que pertenece, reconocimientos académicos que le han otorgado, actividades como consultor o experto y relación de publicaciones a la fecha.
  29. 29. RECURSOS NECESARIOS PARA EL PROYECTOESTE CAPÍTULO TRATA acerca del informe relativo a la cantidad, tipo de personas y recursosfísicos que son necesarios para la realización de la investigación que se propone. Por lo que respecta a personas, de manera general se refiere a asesores, investigadores,especialistas, técnicos, tesistas, alumnos. El director del proyecto determinará el perfil decapacidades y habilidades que debe cubrir cada persona. En cuanto a recursos físicos, generalmente son los relativos a construcciones, equipos,aparatos, instrumentos, herramientas, hardware, software, materiales, sustancias, etcétera.El director debe conocer ampliamente lo relativo a las especificaciones y características decada uno de estos recursos, así como el precio aproximado y posibles proveedores. Es conveniente que dutante la gestación de la idea el director inicie las negociaciones conautoridades y organismos de financiamiento que lo lleven a obtener cuando menos uncompromiso moral que le dé un alto grado de seguridad de que apoyaron el proyecto y lasadquisiciones necesarias. 41
  30. 30. PRESUPUESTOEL PRESUPUESTO CONSISTE en la evaluación monetaria, lo más aproximada posible, del costode las inversiones necesarias para la realización de la investigación. Los conceptos máscomunes son:• director(es) del proyecto,• investigadores,• personal,• expertos,• bibliografía (libros, revistas, compra de artículos y otros documentos),• consultas a bancos de información,• pasajes y viáticos (trabajos de campo, visitas a investigadores con los que se trabaja conjuntamente, asistencia a foros académicos, etc.),• terrenos y construcciones,• equipo de laboratorio,• sustancias y materiales,• maquinaria y equipo para talleres,• herramientas y accesorios,• equipo de computación y paquetes para procesamiento de datos. Es necesario indicar cuáles son las instituciones que participarán en el financiamiento delproyecto, determinando 43
  31. 31. 44 PRESUPUESTOmontos y porcentajes que aportarán cada una de ellas y las partidas que cubre cadaaportación. Éstos son los puntos más generales que requieren los protocolos de investigación. Lasdiferencias entre los protocolos de una institución a otra pueden consistir en informacionesespecíficas adicionales, entre ellas curriculum del director y/o responsable del proyecto y delos participantes; o bien, información sobre el centro de investigación donde trabajan tantoel director y/o el responsable del proyecto. Si se trata de un proyecto de investigaciónconjunta donde participan dos o más instituciones, generalmente se informa sobre lasaportaciones y responsabilidades de cada institución y el papel que asumen susrepresentantes. En fin, cada institución particular tiene elaborado su protocolo con suspropias especificaciones respecto de los tipos de apoyos que ofrece a la investigación. Cadaproyecto de investigación tiene sus propias características, por ejemplo, no es lo mismo unproyecto de investigación básica que un proyecto de investigación aplicada. Por lo tanto, elinvestigador que llena el protocolo deberá tener una concepción clara y completa delproyecto de investigación que se va a realizar, ya que el protocolo es únicamente unformulario o formato que se ha elaborado, con especificaciones propias de cada proyecto deinvestigación. Recuérdese al llenar el protocolo, éste puede ser un formulario en papel o estarincorporado en un disket, que es el único medio y tal vez la única vía que se tiene para de-mostrar y convencer a quien está dirigido, de la capacidad del investigador, de loimportante del proyecto y el porqué debe ser apoyado. De manera que el protocolo debe ymerece ser llenado con todo cuidado y rigor. ¡Buena suerte!
  32. 32. EJEMPLO I* EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN DE COLAGENASA EN CÉLULAS HEPÁTICAS EN CULTIVO* En este ejemplo se eliminan hojas de información detallada. Se conserva una página de cadatipo de información como muestra ilustrativa para el lector.
  33. 33. EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN CONSEJO NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA PROYECTO DE INVESTIGACIÓN DATOS GENERALES NO ESTÁ ASOCIADO A NINGÚN PROGRAMATítulo;Expresión y regulación del gen de colagenasa en células hepáticas en cultivoComité a evaluarlo: Ciencias de la saludDisciplina: Ciencias de la saludEspecialidad: Biología molecular en medicinaDuración del proyecto: 6 cuatrimestresMonto solicitado a Conacyt: 291,000 (nuevos pesos)Datos de la institución solicitante:Universidad de GuadalajaraDependencia: Centro Universitario de Ciencias de la Salud (C.U.C.S.)R.F.C.: UGU250907-MH5Domicilio: Juárez núm. 975 Sector Juárez C.P.:.Rector o responsable ante Conacyt:Dr. en C. Víctor Manuel González RomeroNombramiento: Rector General de la Universidad de GuadalajaraDirector de la dependenciaDr. Raúl Vargas LópezDatos del responsable del proyectoR.F.C.: AEBJ-570309Dr. Juan Socorro Armendáriz BorundaNombramiento: Profesor e Investigador titular, C, tiempo completoDomicilio laboral: Sierra Mojada s/n Independencia C.P. 44340Teléfono laboral: 913 617-4159 Extensión: 0 Fax: 915 617-4159Domicilio particular: López Cotilla 1542 Int. 7 Moderna, Sector Hidalgo C.P.:Teléfono particular: 915 616-9441Datos del administrador del proyectoMed. Esp. Víctor Manuel Lara VélezNombramiento: Secretario Administrativo del C.U.C.S. 47
  34. 34. 48 EJEMPLO I CONSEJO NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA SOLICITUD DE APOYO DESGLOSE FINANCIEROGasto corriente Honorarios por servicios profesionales20,000 Viáticos 0 Pasajes 0 Gastos de trabajo de campo 0 Ediciones e impresiones 6,000 Servicios externos y comerciales 0 Cuotas de inscripción 0 Profesores visitantes 0 Becas para proyectos de investigación 0 Artículos, materiales y útiles diversos163,000 Documentos y servicios de información5,000 Libros 5,900 Animales para rancho y granja 0 Total gasto corriente 199,900 Gasto de inversión Equipo de 236,5 laboratorio Equipo 00 de cómputo 54,60 Herramientas y 0 291,10 accesorios Total 0 0 gasto de inversión 491,00 Total solicitado 0
  35. 35. EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN 49 PROTOCOLO DEL PROYECTO ANTECEDENTES PATOFISIOLOGÍA DE LA CIRROSIS HEPÁTICALA CIRROSIS DEL HÍGADO es un padecimiento que lleva necesariamente a la muerte si elpaciente no recibe oportunamente un adecuado tratamiento de soporte. Datos de 1993 indi-can que la cirrosis hepática y otras enfermedades crónicas del hígado se situaron comotercera causa de mortalidad hospitalaria en México (SS, 1993). La cirrosis del hígado es "un proceso difuso caracterizado por fibrosis y una conversiónde la arquitectura en nódulos estructuralmente anormales" (Boyer, 1994). Con este procesose asocian cambios vasculares importantes que conllevan a una alteración en el suministrosanguíneo y por ende en la nutrición de la célula hepática. Una de las características principales de la fibrosis y cirrosis hepática es la deposición enexceso de varias proteínas de matriz extracelular (MEC) (particularmente colágena tipo I)(Aycock y Seyer, 1989) en diversos sitios del lóbulo hepático (periportal, perisinusoidal ypericentral), lo que ha su vez es un determinante principal de los efectos patológicos en lafunción hepática. La fibrosis periportal distorsiona la triada portal (ducto biliar, venaportal, y arteria hepática) restringiendo así el flujo biliar y sanguíneo. La fibrosisperisinusoidal, en la cual las proteínas de matriz se acumulan entre los hepatocitos y elendotelio sinusoidal, altera la función celular y puede alterar el flujo de los nutrientes a
  36. 36. 50 EJEMPLO Ilos hepatocitos. La fibrosis pericentral puede impedir el flujo sanguíneo sinusoidal eincrementar la presión portal en la cirrosis (Friedman y Bisell, 1990). Las nuevas perspectivas terapéuticas en el tratamiento de la cirrosis se basan en elconocimiento de la biología de la modulación de la MEC en la fibrosis hepática, compren-diendo las bases moleculares de la síntesis y degradación de las proteínas de matriz y de lascitocinas envueltas en la fibrogénesis hepática. MECANISMOS PATOMOLECULARES EN LA CIRROSIS HEPÁTICAEn el proceso fibrogénico están involucrados diversos tipos celulares presentes en elmicroambiente hepático. Se ha descrito ampliamente la participación de las células de Itocomo la principal fuente celular de síntesis de MEC durante la fibrogénesis hepática(Melani etal., 1989; Armendáriz-Borunda etai, 1994). La participación de las células de Itoen este proceso depende de su previa activación por diversos factores bioquímicos, entrelos que se cuentan: la propia MEC, mediadores solubles como los factores de crecimientotransformante beta (TGF-B, por sus siglas en inglés), de crecimiento derivado de plaquetas(PDGF), de necrosis tumor al alfa (TNF-a), derivado de las células de Kupffer, decrecimiento epidemial, corticosteroides y el acetaldehido (Friedman y Bisell, 1990;Armendáriz-Borunda et ai, 1992). Asimismo, las células de Kupffer
  37. 37. EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN 51presentes en el sinusoide desarrollan un papel fundamental en la activación de las célulasde Ito al secretar algunas de las atocinas descritas e incluso al contactar directamente conellas con la emisión de prolongaciones a través de las fenestraciones de las célulasendoteliales del sinusoide (Armendáriz-Borunda et al., 1989).Diversos cambios se presentan en el microambiente hepático ante el exceso de proteínascolagénicas en el espacio subendotelial; entre estos cambios se cuentan la pérdida devellosidades del hepatocito, la aparición de una membrana basal y, finalmente, la pérdidade fenestraciones de las células endoteliales, un proceso conocido también comocapilarización de sinusoides. Con el cierre de este espacio, se impide el libre intercambiode nutrientes entre la sangre sinusoidal y el hepatocito; de igual manera se ven impedidasla destoxificación de diversas sustancias por el hepatocito, así como también laincorporación de metabolitos producidos por el hígado al torrente sanguíneo. Estosfenómenos explican algunas de las características clínicas de la cirrosis hepática comoanalbuminemia, disminución en la sangre de algunos factores de coagulación y laencefalopatía hepática, entre otros. En el hígado, en condiciones normales existe un equilibrio entre las proteínas decolágena y la coiagenasa, enzima intersticial que degrada de manera específica lascolágenas tipo I, II o III y que es secretada por los hepatocitos, las células de Ito y losfibroblastos y neutrófilos circundantes (Hasty et ai, 1990); esta homeostasis se ve alteradapor el incremento de las primeras durante la cirrosis; es por ello
  38. 38. 52 EJEMPLO Ique una de las estrategias terapéuticas para la eliminación del exceso de colágena se hayaenfocado en la inducción de la síntesis y de la actividad de la enzima colagenasa por las célu-las hepáticas. Diversos tratamientos se han efectuado en este sentido con relativo éxito, sinembargo, no se ha logrado la reversión total del padecimiento, probablemente debido a queno se ha alcanzado la cantidad suficiente de la enzima en el espacio subendotelial, o bien suactividad es reducida. TRANSFECCION DE CÉLULAS EUCARIÓTICASUna de las formas para lograr cantidades suficientes de la enzima colagenasa en elmicroambiente hepático es a través del incremento en la transcripción del gen que la codi-fica en las células hepáticas, mediante la incorporación de un mayor número de copias dedicho gen en el ADN cromosómico de la célula. Para ello, y gracias al desarrollo de diversas herramientas de biología molecular, ahora esposible la modificación transitoria o estable del genotipo de casi cualquier tipo de célulamediante la introducción de ADN exógeno, de una manera tal que se pueden incrementar odisminuir funciones específicas e incluso desarrollar nuevas funciones en una célula quecontenga la maquinaria transcripcional requerida para la síntesis de la nueva pro teína(Martínez-Fong etal, 1994). Al proceso de introducción de ADN exógeno a una célula eucariótica se le conoce comotransfección y consiste en la incorporación de un gen deseado a una célula a través
  39. 39. EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN 53de un vector de expresión dado. Entre los vectores más utilizados para este fin seencuentran los plásmidos; los cuales son segmentos circulares extracromosomales de ADNque contienen regiones donde se inserta el gen de interés (sitios de clonación múltiple),regiones que promueven la expresión general o específica del gen insertado (promotores),regiones donde se localiza la capacidad de resistencia a antibióticos y regiones quecodifican a alguna enzima utilizada para la identificación de las células transfretadas.Figura 1. Regiones componentes de un plásmico tipo (pUC19). Amp: gen de resistencia aampicilina; O: origen de replicación del plásmido pBR322 P: secuencia codificante depoli-Adenosina; lac Z: gen estructural de E. coli de la enzima metabolizante del azúcargalactosa (B-galactosidasa). Dentro de la región de lac Z hay una secuencia que contienevarios sitios de reconocimiento único para enzimas de restricción, en la cual se inserta elgen de interés. El gen se presenta en forma de ADN complementario (cADN), producto dela transcripción inversa del ARN mensajero (mARN) que codifica para la proteína deinterés. Cuando los fragmentos de ADN se clonan en esta región, el gen de lac esinactivado, lo cual se utiliza para la identificación de las células transformadas con esteplásmido (ensayo colorido de actividad de B-galactosidasa sobre el sustrato X-gal). Unavez incorporado el plásmido al ADN de la célula eucariótica, ésta transcribe al genexógeno, lo que finalmente se traduce en la síntesis de la proteína deseada completamentefuncional.
  40. 40. 54 EJEMPLO ISe han utilizado diversos promotores con características particulares dentro de los vectores deexpresión, según sea la necesidad de controlar el grado de expresión de un gen determinadoo la de expresarlo en un tejido específico. Así por ejemplo, el promotor de albúmina (p alb)dirige la expresión del gen que le acompaña únicamente en las células que cuentan con losfactores transcripciones que interactúan específicamente con esta región (í.e., hepato-cítos). Además, diversos plásmidos tienen insertada la región promotora del gen defosfoenolpiruvato carboxicinasa (PEPCK, por sus siglas en inglés), enzima citosólica que par-ticipa en la gluconeogénesis hepática. Esta secuencia, además de interactuar específicamentecon los factores transcripciones del hepatocito, puede ser regulada positiva o negativamentepor ciertos elementos presentes en el entorno celular (e.g., insulina, glucocorticoides, AMPc),característica que la hace atractiva para el manejo experimental del nivel de expresión de ungen deseado controlado bajo el mencionado promotor (Tilghman et al. 1974; McGrane etal., 1988). Por ejemplo, en roedores en los que se les ha transfectado un gen dado con elpromotor de PEPCK, se puede lograr a voluntad la expresión de dicho gen, variando elcontenido de azúcares o proteínas en la dieta, ya que se conoce plenamente que antedecrementos en el nivel de azúcar (glucosa) en el organismo o incrementos en el nivel deproteínas, el gen de PEPCK del hepatocito se activa y por ende se induce la expresión del genasociado a dicho promotor (Martínez-Fong etal, 1994; Perales etai, 1994).
  41. 41. 56 EJEMPLO Ilizar pruebas en modelos in vitro en condiciones experimentales controladas. Se han utilizado para este fin líneas celulares en cultivo, las cuales retienen aún algunascaracterísticas propias del tipo celular de la que derivan y facilitan el control de variablescon respecto al origen de las células que provienen. La línea celular HepG2, proveniente decélulas hepáticas humanas, contiene la maquinaria transcripcional específica del hepatocitorequerida para la síntesis de nuevas moléculas proteicas. Con ello, y utilizando plásmidoscon regiones promotoras específicas para hepatocitos, (e.g., promotor de albúmina) sepuede dirigir la transcripción del gen de interés insertado en el mismo vector de expresión.Además, con la finalidad de regular experimentalmente la expresión del mismo, en nuestrocaso la expresión de la colagenasa, el gen de la enzima puede estar bajo el control de laregión promotora de PEPCK, de tal forma que mediante la adición de diversos compuestoscomo insulina, AMPc y glucocorticoides, seamos capaces de modular el grado de expresiónde la enzima. BIBLIOGRAFÍAArmendáriz-Borunda, J., P. GreenwelyM. Rojkind (1989), Matrix, 9:150-158. Armendáriz-Borunda, J., K. KatagawayJ.M. Seyer (1992), /. Biol. Crem, 267:14316-14321. Armendáriz-Borunda, J., C.P. Simkevich, N. Roy, A.H. KangyJ.M. Seyer (1994), Biochem. ].,
  42. 42. EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN 57Aycock, R.S. yJ.M. Seyer (1989), Connective Tissue Res., 23:19-31. Boyer, T.D. (1994), en: Cecil, Tratado de medicina interna. J.B. Wyngaarden, L.H. Smith, J.C Bennet, (Eds). W.B. Saunders Co., Pennsylvania, EUA, 19 Ed. pp 913-924. Chang,A.G.yG.Y.Wu(1994),Gastroenterology, 106:1076- 1084. Friedman, S. y M. Bisell (1990), Hosp. Practice, mayo, 15: 43-50. Hasty, K.A., T.R Pourmotabbed, G.I. Goldberg, J.P. Thompson, D.G. Spinella, R.M. Stevens y C.L. Mai- nardi (1990),/ Biol. Chem., 265:11421-11424. Milani, S., (1989). Martínez-Fong, D., J.E. Mullersman, A.F. Purchio, J. Armendáriz-BorundayA. Martínez-Hernández (1994), Hepatology, 20:1602-1608. McGrane, M.M. J. deVente, J. Yun, J. Bloom, E. Park, A. Wynshaw-Boris, T. Wagner, F.M. Rottman y R.W. Hanson (1988),/. Biol Chem., 263:11443-11451. Perales, J.C. T. Ferkol, H. Beegen,O.D. Ratnoffy R.W. Hanson (1994), Proc. Nati. Acad. Sci., EUA, 91:4086- 4090. Tilghman, S.M., R.W. Hanson, O. Meyuhas, L. Reshef y FJ. Ballard (1974), Proc. Nati Acad. Sci. EUA, 71:1304- 1308. Secretaría de Salud (SS) (1993).
  43. 43. 58 EJEMPLO I OBJETIVOSLOS OBJETIVOS A ALCANZAR en este proyecto de investigación son los siguientes:1. Dirigir específicamente la expresión del gen reportero cloranfenicol acetil transferasa (Cat) a células hepáticas en cultivo mediante el empleo de un promotor exclusivo de cé lulas hepáticas (promotor de albúmina) en el vector de ex presión p9.12 alb CATAdemás de conocer la eficiencia de la transfección transitoria de ADN a diversas líneascelulares en nuestras condiciones experimentales, es necesario corroborar que la líneacelular HepG2, tipo celular en donde se enfocará principalmente nuestro estudio, aúnretiene algunas de las características propias de las células de las que derivaron (Le.,células del parénquima hepático); puesto que deben contener aún los factorestranscripcionales específicos requeridos para la expresión de albúmina, proteína que esproducida fundamentalmente por las células hepáticas.2. Evaluar la eficiencia de transfección del gen exógeno de colagenasa y del gen reportero CAT a células en cultivo.Por la transfección con el plásmico pUCl 9/colagenasa se determinará el grado deexpresión de la enzima colagenasa
  44. 44. EXPRESIÓN Y 59 REGULACIÓN DEL GENy se relacionará con ia actividad de CKT producto de CAT. cotransfección con elplásmido pSV2CAT en la misma célula. Con este ensayo se evaluará la eficiencia dela trans-fección de ADN exógeno así como la capacidad de producción de la enzimacolagenasa por la célula hepática a partir de la integración del gen exógeno en sugenoma.3. Regular la expresión in vitro del gen exógeno de colagenasa en células hepáticas en cultivo mediante el control de sustratos que interactúan con la región promotora del gen transfectado.Es importante poder controlar a voluntad la expresión, o no, del gen de colagenasa,dependiendo de la respuesta presentada por la célula transfectada; debido a ello es quese plantea la necesidad de regular este gen exógeno bajo el promotor de PEPCK. Elpromotor de PEPCK controlaría al gen de la colagenasa, expresándola cuandoestuviese en presencia de factores tales como AMPc y glucocorticoides, y nohaciéndolo cuando hubiere insulina. De esta forma, si se requiriese un aumento o disminución de la enzima en elmicroambiente celular, bastaría con adicionar al medio de cultivo algunos de loscompuestos mencionados.
  45. 45. 60 EJEMPLO I METASDENTRO DE LAS METAS a alcanzar por este proyecto se contemplan:1. Establecer y optimizar la metodología de introducción de ADN exógeno a células eucarióticas en cultivo (proceso de transfección).2. Conocer los mecanismos de expresión del gen de cola-genasa controlado bajo una región promotora regulable y específica para las células hepáticas en cultivo, para posteriormente intentar in vivo la incorporación y regulación de dicho gen en un modelo experimental de cirrosis hepática.3. Apoyar la formación de recursos humanos con los conocimientos y la capacidad de análisis en diversos tópicos del área de biología molecular, capacitados en el manejo de las técnicas de frontera de la biología molecular. Cómo parte de ello se involucrará a diversos estudiantes del doctorado en Biología Molecular en Medicina, recayendo particularmente en el M. en C. Fernando Siller una participación fundamental en el desarrollo de este proyecto, del cual se pretenderá la producción de su tesis doctoral.4. Crear un polo de desarrollo regional en el país, dedicado a la investigación básica y clínica de la biología molecular en los problemas de salud que son de importancia rele- vante para México.
  46. 46. EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN 6l5. Divulgar los resultados obtenidos por este trabajo en publicaciones de circulación nacional e internacional, así como en los principales foros de comunicación del área.6. Establecer relaciones de apoyo e intercambio a niveles nacional e internacional, con los expertos en el área del trabajo que se pretende desarrollar. OBJETIVO PRINCIPALTransfectar el gen exógeno de colagenasay regular su expresión en células hepáticas en cultivo.
  47. 47. 62 EJEMPLO I METODOLOGÍA CULTIVO DE LÍNEAS CELULARESSE PROPAGARÁN LAS DIVERSAS LÍNEAS celulares en las condiciones óptimas de cultivo,con el objetivo de proveer de una población adecuada de ellas a cada uno de los diferentesensayos de transfección. Para este fin, se incubarán células HepG2, provenientes de una línea celular dehepatoma humano (células parenquimatosas), a 37°C en aire 95% y C025%, mantenidas a80% de confluencia en medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) con 10% desuero bovino fetal. Bajo condiciones similares se mantendrán células de Ito, provenientes del mesénquimahepático y células COS-7, línea celular descendiente de riñón de mono, utilizadas comocontrol en los ensayos de transfección. TRANSFECCIÓN DE CÉLULASUno de los métodos que más se utilizan para la introducción de genes a célulaseucariónticas es la transfección de ADN con fosfato de calcio, en la cual el ADN exógenose deposita como un precipitado fino sobre la superficie de la célula en suspensión, paraposteriormente ser incorporado por la célula e integrado transitoriamente en el ADNcromosomal. Para ello, se crecerán las células HepG2, de Ito y COS-& en monocapa aaproximadamente un 70% de confluen-
  48. 48. EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN 63cia y serán transfectadas, según corresponda, individual o conjuntamente, con losplásmidos p9.12albCAT, (promotor de albúmina y gen reportero CAT —específico para laexpresión en células hepáticas—), pSVoCAT (plásmido sin promotor—controlnegativo—), pSV2CAT (plásmido con el promotor fuerte del virus de SV40 —controlpositivo—), pSV2CAT (plásmido con el promotor fuerte del virus de SV40 —controlpositivo—) pUC19/colagenasa (plásmido con el promotor de SV4 y el gen de colagenasa)y PEPck/ colágena (plásmido con el promotor d PEPck y el gen de colagenasa). Latransfección se hará, por el método de precipitación de fosfato de calcio (Chen y Okayama,1988; Armendariz-Borunda et ai, 1994). En breve: A las células en cultivo se adiciona elprecipitado recién formado de la solución de CaC12 con el ADN a ser transfectado y unasolución salina de HEPES. Se incuban de 4 a 16 h bajo condiciones estándar decrecimiento para permitir que el precipitado se adhiera a la superficie de las células y elADN se integre a los cromosomas de las células huésped, posteriormente se lavan ysiembran con medio completo. Se recolectan las células a las 2-48 h posteriores a latransfección, para determinar la expresión del gen incorporado. ENSAYOS DE EXPRESIÓN TRANSITORIA USANDO EL SISTEMA REPORTERO DE CLORANFENICOL ACETILTRANSFERASA (CAT)Este sistema determina la actividad de la enzima CAT como una medida del nivel deexpresión del gen de interés
  49. 49. 64 EJEMPLO Itransfectado conjuntamente con el gen que codifica para dicha enzima. La CAT es unaenzima bacteriana que cataliza la transferencia del grupo acetil proveniente de la acetil CoAal cloranfenicol. Las células transfectadas son recolectadas y Usadas en varios pasos decongelación/descongelación. Se adicionan a los Usados celulares acetil CoA ycloranfenicol marcado radiactivamente y los productos modificados del antibiótico sonseparados del material original por cromatografía de capa fina. Finalmente se expone laplaca cromatográfica a una película autorradiográfica y los productos acetilados sonanalizados cualitativamente y cuantitativamente por análisis de las bandas de la placacromatográfica correspondiente a las de la impresión autorradiográfica medianteespectroscopia de líquidos de centelleo (Gorman et al., 1982). REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN DEL GEN DE COLAGENASALa región promotora del gen de fosfoenolpiruvato carboxicinasa (PEPCK) controla laexpresión del cADN un gen dado cuando ambos se encuentran en el mismo vector deexpresión. La secuencia de PEPCK tiene la característica de incrementar o disminuir laexpresión del gen cuando están presentes ciertos compuestos que interactúandirectamente con ella; la ventaja de ello radica en la posibilidad de regularexperimentalmente el grado de expresión
  50. 50. EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN 65mediante la adición de insulina, AMPc o glucocorticoldes a las células transfectadas.La regulación de la expresión del gen de colagenasa se realizará en las células HepG2transfectadas con el plásmido PEPCK/colagenasa (Valera y Bosch, 1994). Se adicionaránde manera individual los compuestos insulina, glucocorticoldes y AMPc a las célulashepáticas y después de un tiempo de incubación se recolectarán las células para determinaren ellas el nivel de expresión de la colagenasa por análisis de Northern blot así como poranálisis de su actividad enzimática. PURIFICACIÓN Y ANÁLISIS DE ARN DE COLAGENASASe extraerá el contenido total de ARN de las células en cultivo utilizando el sistema deaislamiento de ARNzol (Biotecx, 1992) para realizar el análisis del ARN específico decolagenasa con la técnica de Northern blot (Thomas, 1980). En un gen desnaturalizante deagarosa se coloca una alícuota de ARN total, se somete el gen a electroforesis yposteriormente se transfiere el ARN a filtros de nitrocelu-losa. Se hibridiza el filtro con unasonda radiactiva de ADN de colagenasa, de manera que complemente específicamente conel ARN de mismo gen. Los filtros se lavan y secan y posteriormente son expuestos a unapelícula autorradiográ-fica para observar la banda de ARN específica de colagenasa.Finalmente, se efectúa el análisis densitométrico de las ban-
  51. 51. 66 EJEMPLO Idas en las placas autorradiográficas para cuantificar el contenido de ARN de cadamuestra (Armendáriz-Borunda et aL, 1993; Shapiro et al, 1993) ENSAYO DE ACTIVIDAD DE COLAGENASA El análisis de la actividad enzimática de la colagenasa es necesario para determinar la funcionalidad de la enzima producida, ya que esta proteína pudiera encontrarse enzimáticamente inactiva, lo que no se podría conocer a través de la determinación única del ARN que la codifica. Después de 24 h de mantener a las células en cultivo en un medio libre de suero, el medio de cultivo se recolecta y se determina en éste la actividad de colagenasa secretada por las células, siguiendo el método descrito por Hasty y cois. (1986). En breve: se incuba el medio con fibrillas solubles de colágena radiactiva (marcada con 14C), se adiciona acetato 4-aminofenilmercúrico para activar la colagenasa latente y se somete a centrifugación para precipitar la colágena no degradada. Del sobrenadante se toma una alícuota para determinar por espectrometría de líquido de centelleo la radiactividad residual. BIBLIOGRAFÍA Armendáriz-Borunda, J., C.P. Simkevich, N. Roy, R. Raghow, H. Kang y]. Seyer (1994), "Activation of ItoCfíG
  52. 52. EXPRESIÓN Y 67 REGULACIÓN DEL GENCells Involves Regulation of AP-1 Binding Proteins and Induction of Type ICollagen Gene Expression", Biochem. /., 304:817-824.Armendáriz-Borunda, J., C. Michael, J.M. Seyer, A.H. Kang, R. Raghow (1993), "Transforming Growth Factor B Gene Expression isTransiently Enhaced at a Critical Stage During Liver Regeneration After CC14 Treatment", Lab. Invest., 69:283-294.Biotecx (1992), "Ultraspec ARN Isolation System. A New and Improved Method for the Isolation of Total ARN from Tissues/Cells/Bacteria/Plant/Yeast and Biological Fluids", Biotecx Bulletin, 27.Chen, C. y H. Okayama (1988), "Calcium-Phosphate Mediated Gene Transfer: A Highly Efficient System for Stably Transforming Cells with Plasmid ADN, BioTechniques, 6:632-638.Gorman, C.M., L.E Moffat y B.H. Howard (1982), "Recombinant Genome which Express Chloramphenicol Acetyltransferase in Mammalian Cells", Mol, Cell. Biol 2:1044-1501.Hasty, K.A., M.S. Hibbs, A.H. Kang y C.L. Mainardi (1986), "Secreted Forms of Human Neutrophil Collagenase",/. Biol. Chem., 261-5645-5650.Valera, A. y F. Bosch (1994), "Glucokinase Expression in Rat Hepatoma Cells Induces Glucose Uptake and is Rate Limiting in Glucose Utilization", Eur. J. Biochem., 222:533-539.Shapiro, S.D., D.K. Kobayashi, A.P. Pentland y H.G. Welgus (1993), "Induction of Macrophage Metallopro-
  53. 53. 68 EJEMPLO Iteinases by Extracellular Matrix. Evidence for Enzyme-and Substrate-Specific ResponsesInvolving Rostaglan-din-DependentMechanisms"./. Biol. Chem., 268-8170-8175. Thomas,P.S. (1980), "Hybridization of Denatured ARN and Small ADN Fragments Transferred toNitrocellu-lose". Proc. Nati. Acad. Sel, EUA, 77:5201-5205.
  54. 54. EXPRESIÓN Y .REGULACIÓN DEL GEN 69 INFRAESTRUCTURA Y APOYO TÉCNICO DISPONIBLEEL INSTITUTO DE BIOLOGÍA MOLECULAR (IBM) del C.U.C.S., cuenta con las áreas de trabajo y el equipo de laboratorio que a continuación se describen:Área de cultivo de células— Campana de flujo laminar. Labconco mod. Purifier Class II.— Microscopio óptico. Zeiss.— Microscopio invertido. Zeiss mod. Axiovert 135.— Incubadora de C02. Labline.Área de análisis— Espectrofotómetro UV-VIS. Beckman mod. DU650.— Contador de líquido de centelleo Beckman mod. LS6500.Área de extracción y análisis de ARNy ADN— Transiluminador ultravioleta. UVP.— 1 Cámara de electrofóresis.Área común— Congelador REVCO. VWR Scientific.— Refrigerador. Roper.— Centrífuga Beckman mod. J2-MI.— Ultracentrííuga Beckman mod. XL-90.— Centrífuga Hermle mod. ZK 364.
  55. 55. 70 EJEMPLO IEl grupo de investigación del Instituto de Biología Molecular está conformado porespecialistas de varias disciplinas, gracias a lo cual se puede abordar un mismo problemadesde diversas perspectivas. Dentro de este grupo se cuentan médicos, farmacólogos,toxicólocos, bioquímicos, inmunólogos, biólogos celulares y biólogos moleculares.
  56. 56. EXPRESIÓN Y 7 REGULACIÓN DEL GEN CALENDARIO DE ACTIVIDADES CUATRIMESTRE 1Durante el primer cuatrimestre se emprenderán las actividades que a continuación sedescriben:• Adquisición del equipo y material de laboratorio faltante.En tanto se consiguen, se efectuará el resto de las actividades programadas, en lascuales no se involucra la necesidad de los mismos.• Estandarización de las técnicas bioquímicas y moleculares a utilizar.Para identificar las variables que pudieran estar involucradas en cada tipo de ensayo yasí lograr una total confiabilidad de los resultados a obtener, se requiere laestandarización de los mismos bajo las condiciones experimentales de nuestro la-boratorio.• Cultivo de líneas celulares.La base principal de los ensayos a realizar son los cultivos celulares y de aquí laimportancia de estandarizar las condiciones óptimas para el crecimiento de las líneascelulares a utilizarse. Una vez obtenida la confluencia de las células en las cajas decultivo, una alícuota de las mismas se guardará en congelación (-70°C) para mantenerun stock constante de células destinadas a los ensayos subsecuentes.
  57. 57. 72 EJEMPLO I CALENDARIO DE ACTIVIDADES CUATRIMESTRE 2• Efectuar la amplificación de los plásmidos pSV2CAT, pSVoCAT, p9.12albCAT y pUC19/colagenasa en bacterias en cultivo.Es necesario contar con la suficiente cantidad de plásmidos para realizar cada uno de losensayos de transfección. Para ello se requiere efectuar su amplificación en bacterias encultivo (e.g.j E. coli), en las cuales, después de un tratamiento de choque para lograr laentrada del plásmido a las células, se multiplican por la adición de un antibiótico dado yposteriormente se recuperen en el centrifugado del lisado de la célula bacteriana.• Desarrollo de los ensayos preliminares de transfección de plásmidos a las líneas celulares.Periodo donde se evaluará la integridad y funcionalidad de cada uno de los elementosparticipantes en las reacciones de transfección. Esta etapa es crítica, ya que permite corro-borar tempranamente la factibilidad y viabilidad de la hipótesis del trabajo postulado.• Análisis estadístico de resultados.
  58. 58. EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN 73 CALENDARIO DE ACTIVIDADES CUATRIMESTRE 3Una vez establecidas las condiciones experimentales óptimas, se iniciarán los ensayosbioquímicos y moleculares propuestos para la resolución del problema al que nos hemosenfocado, los que a continuación se mencionan:• Transfección del gen reportero cloranfenicol acetiltrans-ferasa (CAT a las líneas celulares en cultivo).• Ensayos de actividad de CAT.• Análisis estadístico de resultados. CALENDARIO DE ACTIVIDADES CUATRIMESTRE 4• Transfección del gen de colagenasa a células en cultivo.• Determinación del contenido de ARNm y la actividad de la enzima colagenasa.• Ensayo de actividades de CAT• Análisis estadístico de resultados. CALENDARIO DE ACTIVIDADES CUATRIMESTRE 5• Transfección del plásmido PEPCK/colagenasa a células HepG2.
  59. 59. 74 EJEMPLO I• Regulación de la expresión del gen de colagenasa.• Análisis del contenido de ARNm y la actividad de la enzima colagenasa.• Análisis estadístico de resultados. CALENDARIO DE ACTIVIDADES CUATRIMESTRE 6• Conclusión de experimentos y en su caso comprobación de resultados con amplias desviaciones estándar.• Análisis estadístico de resultados.• Publicación y divulgación de resultados en foros y revistas nacionales e internacionales.
  60. 60.
  61. 61. 76 EJEMPLO I CONSEJO NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA RESPONSABLE CONCENTRADO DE DATOS CURRICULARESR.F.C.: AEBJ-570309-Nobilis: Dr. en C. Nombre: Juan SocorroA. Paterno: ArmendárizA. Materno: BorundaNombramiento: Profesor e investigador titular C. Tiempo completoNivel del SNI: 1Relación de grados obtenidos GRADO INSTITUCIÓN AÑO L Universidad Autónoma de Chihuahua 79 M CINVESTAV-IPN 84 D CINVESTAV-IPN 87 D POST-DOC, University of Tennessee 91 D Research Associate, U. of Tennessee 93Total de tesis dirigidasLicenciatura: 0 Maestría: 0 Doctorado: 0Otros datos académicos relevantes:Becario Conacyt para maestría y doctorado, becario NIH (National Institutes of Health,USA) para postdoctorado, receptor de donativos del NIH; SNI nivel I, revisor de lasrevistas internacionales: Hepatology, Gastroenterology y Life Sciences.
  62. 62. EXPRESIÓN Y 77 REGULACIÓN DEL GEN CONSEJO NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA DR. EN C. JUAN SOCORRO ARMENDÁRIZ BORUNDA RESPONSABLE RELACIÓN DE PUBLICACIONES5 últimas publicacionesArtículoAutores: J. Armendáriz-Borunda, C.P. Simkevich, N. Roy, A.H. Kang y J.M. Seyer Título del artículo: "Activation of Ito Cells Involves Regulation of AP-1Binding Proteins and Induction of Type I Co..."Nombre de revista: Biochemistry JournalPáginas: 817-824 Año: 1994 Volumen: 304 Número:Artículo;Autores: D. Martínez, J.E, Mullersman, A.F. Purchio, J. Armendáriz y A. Martínez Título del artículo: "Nonenzymatic Glycosylation of Poly-L-Lysine:A New Tool for Targeted Gene Gelivery"Nombre de revista: HepatologyPáginas: 1602-1608 " Año: 1994 Volumen: 20 Número: 6ArtículoAutores: J. Armendáriz-Borunda, H. Katay, C. Michael, J.M. Seyer, A.H. Kang y R. Raghow Título del artículo: "Transforming Growth Factor B GeneExpression is Transiently Enhanced at a Critical Stage During..."Nombre de tevista: Laboratory InvestigationPáginas: 283-294 Año: 1993 Volumen: 69 Número 3ArtículoAutores: K. Katayama, J. Armendáriz-Borunda, R. Raghow y J.M. SeyerTítulo del artículo: "A Pentapeptide From Type I Procollagen Promotes Extracelluíar Matrix Production"Nombre de revista: Journal ofBiologkal ChemistryPáginas: 9941-9944 Año: 1993 Volumen:-268 Número:ArtículoAutores: J. Armendáriz-Borunda, K. Katayama y J.M. SeyerTítulo del artículo: "Transcriptional Mechanism of Type I Collagen Expression are Diferentially Regulated by Interle..."Nombre de revista: Journal ofBiologkal ChemistryPáginas: 14316-14321 Año: 1992 Volumen: 267 Número: 20
  63. 63. 78 EJEMPLO I CONSEJO NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA SOLICITUD DE APOYO DESGLOSE AÑO: FINANCIERO 1 Cuatrimestre Cuatrimestre Cuatrimestre Total 1 2 3 Gasto corriente Honorarios por servicios 10,00 C 0 10,0 profesionales 0 0 0 0 Viáticos 0 00 0 0 0 0 Pasajes c 0 0 0 Gastos de trabajo de 0 0 6,00 6,00 campo 0 0 0 0 0 Ediciones e impresiones 0 0 0 0 Servicios externos y 0 0 0 0 comerciales 0 0 0 0 Cuotas de inscripción 40,75 40,750 0 81,5 Profesores visitantes 5,000 0 0 0 5,00 00 Becas para proyectos de 5,900 0 0 5,90 0 investigación 0 0 0 0 Artículos, materiales y 61,65 40,750 6,00 108, útiles diversos 0 0 400 Documentos y servicios de información Libros Animales para rancho y granja Total gasto corriente Gasto de inversión 59,12 59,125 0 Equipo de 54,60 3 0 laboratorio 5 118,250 0 0 0 0 54,600 Equipo de 0 cómputo Herramientas y accesorios 59,125 Total gasto de 113,725 inversión: Total 0 172,850 solicitado año: 1 281,250 (Nuevos Pesos)
  64. 64. EXPRESIÓN Y 79 REGULACIÓN DEL GEN CONSEJO NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA SOLICITUD DE APOYO JUSTIFICACIÓN DE REQUERIMIENTOS FINANCIEROSHonorarios por servicios profesionales Importe solicitado:20,000El apoyo a este rubro con el monto de N$ 20,000.00 se dedicará al pago de serviciosprofesionales de dibujante y fotógrafo, así como para el pago de personal de apoyoespecializado de limpieza y mantenimiento de equipo de laboratorio y de oficina.Ediciones e impresiones Importe solicitado: 6,000El apoyo solicitado en este rubro es para solventar los gastos de publicación deartículos de investigación y divulgación en revistas internacionales.Artículos, materiales y útiles diversos Importe solicitado:163,000El monto solicitado se requiere principalmente para la compra de los reactivos delaboratorio de calidad en biología molecular o de la mayor pureza disponible, asícomo de los compuestos radiactivos, entre los que se cuentan:
  65. 65. 80 EJEMPLO I— vectores (plásmidos) comerciales: pUCl9, PEPCK/ bHG, p9.12albCAT, etcétera,— enzimas de restricción (EcoRI, Sma I, Hind III, etcétera),— medios de cultivo para crecer bacterias,— medios de cultivo para crecer células eucariónticas,— suero fetal de ternera para cultivo de células,— antibióticos para medios de cultivo,— tanques de C02 y aire ultrapuro,— cloranfenicol marcado con 14C,— colágena tipo I marcada con 14C,— acetil CoA,— reactivos para la extracción de ARN (ARNzol),— membranas de nitrocelulosa para análisis de Northern blots,— solventes y reactivos para la cromatografía de capa fina,— película y emulsión fotográfica para la revelación de radiactividad,— coctel para líquidos de centelleo,— reactivos para la preparación de soluciones amortiguadoras, etcétera.Documentos y servicios de información Importe solicitado: 5,000Se requiere el monto de N$ 5,000 para el pago de consultas a bases de datosespecializadas como SECOBI, así como para la compra de software de discos compactoscon información específica en el área de biología molecular.
  66. 66. EXPRESIÓN Y 81 REGULACIÓN DEL GENLibrosImporte solicitado: 5,900En este rubro se solicitan 5,900 nuevos pesos para la compra de materialbibliográfico de consulta básica de ediciones actualizadas en el área de biologíamolecular y terapia génica, para apoyo didáctico del programa de doctorado debiología molecular en medicina. Algunos de los libros que se pretende adquirir son:— The Liver. Biology and Pathobiology, 3a. ed, T.W. Arias, H. Popper, W.B. Jakoby, D. Schachter, D. Shafrit, (comps.), Raven Press, Nueva York.— Gene Expression, Cell and Tissue Specificity M. Karin Ed.,— Molecular cell biology, 2nd Ed. J. Darnell Jr., H. Lodish, Molecular Cloning: A laboratory Manual, 2nd Ed. Vols l,2y3 J. Sambrook, E.E Fritsch y T. Maniatis; Cold Spring Harbor Laboratory, Nueva York, 1989.— Genes V B. Lewin, Ed Oxford University Press, Oxford, Inglaterra, 1994.— Human Pharmacoiogy: Molecular to Clinical. T. Brody, M. Llarner, M. Kenneth. 2nd Ed.—Methods in pharmacoiogy: Molecular and cellular biology of pharmacological targets. Glossmann H, StriessningJ (Eds).
  67. 67. 82 EJEMPLO IEquipo de laboratorio Importe solicitado: 236,500Se solicitan $ 236,500.00 en este rubro para adquirir diversos equipos de laboratorio que serequieren directa o indirectamente para la realización de gran parte de los ensayosexperimentales. El tanque de almacenamiento de nitrógeno líquido ($ 9,164) se requiere para lacongelación instantánea y la conservación de diversas muestras biológicas por nitrógenolíquido. En este recipiente se puede almacenar por periodos prolongados el nitrógenolíquido, en el cual se sumergerán las muestras. Desionizador de agua ($ 22,750), equipo indispensable para la obtención de agua de altacalidad, utilizada para la preparación de soluciones. La máquina de hielo frappé también es un equipo de amplio uso dentro de unlaboratorio; necesaria para la producción continua de hielo, la cual se emplea durante eldesarrollo de experimentos en los que se requiere mantener a temperaturas bajas lasmuestras biplógicas. El pH metro ($ 14,761) es un equipo de medición básico necesario en la preparación desoluciones amortiguadoras y de medios de cultivo entre otros, en los cuales recaeimportantemente la buena funcionalidad de las líneas celulares con las que se pretendetrabajar. Las cámaras de electroforesis ($ 3,887 c/u) junto con sus fuentes de poder respectivas ($3,700 c/u) son indispensables para la separación y resolución de las muestras de ARNsometidas a análisis de Northern lot.
  68. 68. 84 EJEMPLO IUna de las formas de comunicación que cada día va siendo más utilizada por las ventajas quepresenta, es la comunicación electrónica a través de redes computacionales de ámbito local einternacional, donde la obtención de datos diversos y el establecimiento de comunicacionespersonales interactivas, por decir algunas de las funciones posibles, se ha vuelto una de lastareas enormemente facilitadas por el uso de este medio. El Centro de Documentación y de Sistemas de Información (CEDOSI) del CentroUniversitario de Ciencias de la Salud de la U. de G., forma parte de la red de cómputo de laUniversidad de Guadalajara y cuenta con el acceso a la red de cómputo internacional y conla capacidad para brindar conección a gran número de redes locales dentro de la mismaUniversidad. La formación de una red electrónica local dentro del Instituto de Biología Molecularconectada al CEDOSI y configurada para satisfacer los requerimientos específicos denuestra área de Investigación permitirá el acceso directo a las fuentes de generación deconocimientos del área, obteniendo, finalmente, un auxilio rápido y efectivo en la in-vestigación desarrollada por nuestro grupo.
  69. 69. EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN CONSEJO NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGÍAEquipos de laboratorio Importe solicitado:236.50 ValorValorDescripción Cantidad Unidadunitario totalTanque de nitrógeno theo20,21 Lt. dimensiones 62.7% 36 1.00 1 9,1649,164País de origen: EstadosUnidos Valor Unitario en 1,409.90 USmoneda extranjera: Valor Dolartotal en moneda 1,409.90 USextranjera: Proveedor: DolarBioselec, S. RDehionizador Barnstead con 4 cartuchos 1.00 122,750 22,750País de origen: EstadosUnidos Valor unitario en 3,500.00 USmoneda extranjera: Valor Dolar 3,500.00total en moneda US Dolarextranjera: Proveedor:Casa RocasMáquina para hielo 1.00 1 49,208Frappe. Marca 49,208Cole-ParkerPaís de origen: EstadosUnidos Valor unitario en 7,570.00 USmoneda extranjera: Valor Dolartotal en moneda 7,570.00 USextranjera: Proveedor: Dolar 1.00 1 17,222 17,222País de origen: EstadosUnidos Valor unitario enmoneda extranjera: Valor 2,650.00 UStotal en moneda Dolar 2,650.00extranjera: Proveedor: Bio US DolarS.A. de R.L.
  70. 70. 86 EJEMPLO I CONSEJO NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGÍAEquipo de cómputo Importe solicitado: 54.6ÍKDescripción Cantidad UnidadValor Valor unitario totalDrive 1.2 KB 5 1/4 1.00 1 472472Proveedor: Capacitación y soluciones en computación y redes (Comlex)Impresora HP LaserJet II 1.00 1 4,0004.00CProveedor: MHS, S.A. de C.VModem Fax 14,400 BPS, Hayes Int 1.00 1 780780Proveedor: Hersymac SistemasScanner Genius GS-CI05+color 1.00 1 2,0502,050Ptoveedon Hersymac SistemasCD Rom Interno Mitsumi doble velocidad 1.00 1 1,5901,590Proveedor: ComlexServidor Hewlett-Packard 486 DX2/66Mhz, 20 MB ram, 720 MB 1.00 1 17,68017,680Proveedor: Hersymac Sistemas
  71. 71. EJEMPLO II MODELO DE CONTROL PARA ORGANISMOS DE INVESTIGACIÓNAPLICADA Y DE DESARROLLO TECNOLÓGICO
  72. 72. 1 Antecedentes y Justificación Especificar las razones por las que se desea llevar a cabo este proyecto y los beneficios científicos que se espera se deriven del mismo. Señalar los antecedentes que existen en la literatura al respecto relacionando en el texto la bibliografía pertinente. (Anexar hojas).2 Objetivos y Metas Señalar los objetivos, tanto generales como particulares, así como las metas que se deriven de ellos. (Anexar hojas).3 Propuesta del plan de trabajo, incluyendo metodología y procedimientos.(Anexar hojas).4 Calendario de actividades Llenar la forma I adjunta. UNA POR AÑO.5 Resumen del proyecto Llenar la forma II adjunta.6 En caso de proyectos de riesgo compartido, suministrar la información sobre el oferente y el usuario, así como de la industrialización y comercialización. (Anexar hojas).7 Cooperación internacional Únicamente para proyectos de este tipo, especifique las acciones en las que se prevé la participación internacional, indicando en su caso las gestiones realizadas y su grado de avance. (Anexar hojas). Incluir cartas de intención de las instituciones con las que se desee colaborar.8. Incluya en anexos toda la información que considere relevante para la evaluación de su proyecto, además de la aquí solicitada. IV. VINCULACIÓN CON EL SECTOR PRODUCTIVO DE BIENES O SERVICIOS (En caso de proyectos de desarrollo tecnológicos)1 INSTITUCIONES, EMPRESAS O PERSONAS QUE ESTÁN INTERESADAS EN EL APROVECHAMIENTO DE LOS RESULTADOS DEL PROYECTO (anexar documentos oficiales
  73. 73. MODELO DE CONTROL PARA ORGANISMOS DE INVESTIGACIÓN 932 ENTIDADES QUE ESTÁN DESARROLLANDO ACTIVIDADES SIMILARES O RELACIONADAS CON EL PROYECTO PROPUESTO:3 EN CASO DE QUE ESTE PROYECTO ORIGINE DESARROLLO(S) O INNOVACIÓN(ES) INDUSTRIAL(ES), SEÑALE SI EXISTEN (anexar documentación comprobatoria): PERFIL DE FACTIBILIDAD SI ESTUDIO DE MERCADO SI DISPONIBILIDAD DE MATERIA PRIMA SI ESTUDIOS DE PREINVERSIÓN SI V. FORMACIÓN DE RECURSOS HUMANOS1 Indicar las áreas de especialización, niveles académicos y el número de los recursos humanos que se forman a través del proyecto. (Anexar hojas). VI. RECURSOS Y PRESUPUESTOS1 Infraestructura con que cuenta la institución para desarrollar el presente proyecto, tal Como instalaciones, equipo, materiales, información bibliográfica, etc. (Anexar hojas).2 Personal académico y de apoyo con el que cuenta la institución para la realización de este proyecto. (Anexar hojas),3 Llenar con cifras expresadas en MILES DE PESOS, las formas III y IV anexas de PRESUPUESTO TOTAL DEL PROYECTO Y DEGLOSE DEL PRESUPUESTO REQUERIDO. Tomar en cuenta que del presupuesto total otorgado por CONACyT se retendrá el 10%, que se entregará después de la recepción de los informes finales técnicos y financiero.4 justifica! la necesidad, para la realización del proyecto, de los conceptos incluidos como participación del CONACyT en las formas de PRESUPUESTO TOTAL DEL PROYECTO Y DESGLOSE DEL PRESUPUESTO REQUERIDO. (Anexar hojas).
  74. 74. EJEMPLO II III. PROTOCOLO ANTECEDENTESUna de las características de nuestra sociedad moderna es el predominio que han tomadolas organizaciones en su estructura; y tan es así, que se reconoce que nuestra sociedad esuna sociedad de organizaciones (Etzioni, 1972; Resenos, 1976). Esto se debe, en buenamedida, a que, a través de las organizaciones, el hombre ha encontrado la forma de realizarlas grandes empresas que demandan las necesidades modernas; casi para atender cualquierade ellas se requiere de una organización, incluso para realizar investigación científica ytecnológica requerimos de organizaciones. Una característica común a las organizaciones es que todas ellas son administrables(Resenos, 1976). Por ello la actividad de administración ha cobrado tanta importancia ennuestros días. Dentro de este proceso administrativo está el proceso del control de gestión. Si bien todas las organizaciones son administrables, lo cierto es que no todas seadministran en la misma forma. No es lo mismo administrar fábricas de calzado, de autos,de televisores, que administrar empresas cinematográficas, de publicidad, firmas deingeniería u organismos de investigación científica y tecnológica (Mintzberg, 1982;Perrow, 1967). La característica común de las primeras es que son
  75. 75. MODELO DE CONTROL PARA ORGANISMOS DE INVESTIGACIÓN 95organizaciones de producción masiva, en serie, donde el proceso de control pone énfasisen el cumplimiento de las rutinas preestablecidas, en el logro de las cuotas de producción yventas convenidas, en general, está todo calculado y predeterminado para realizarse conuna tecnología que estandariza las actividades y que el control cuida de que así suceda. En cambio, la característica común de las segundas es que producen artículos únicosdonde se ha puesto en juego la creatividad, la innovación, la originalidad, y no hay unatecnología conocida, ésta se va adaptando o creando, a la vez que se produce el artículo,por lo tanto, el control descansa en la adaptación mutua de los expertos que trabajan enforma independiente para perfeccionar sus habilidades, de tal manera que propicie elempleo de los medios de enlace. La autoridad no se ejerce en la forma tradicional de lasempresas de producción masiva, sino más bien, se trata de que los expertos ocupen el lugarque les corresponde dentro de otros equipos y la potestad, o el control están basados en laexperiencia, no en la autoridad lineal administrativa. En esencia, las operaciones seautodirigen y se autocontrolan, la administración apoya el cambio, la innovación, lacreatividad, la cooperación, por lo cual generalmente se controla el dilema de la eficacia através de la ineficiencia y en atención a las necesidades de los expertos y los costososmedios de enlace. Parece que nada puede realizarse si antes no se ponen todos de acuerdo,es decir, se controla, lo que ocurre sólo una vez. Estas organizaciones, que llamaremoscreativas, son a las que los investigadores
  76. 76. 96 EJEMP LO IIhan tenido menos oportunidad de estudiar. (Mintzberg, 1982:13). En la teoría de control se han desarrollado estructuras teóricas útiles, como son los lazosde retroalimentación hipotétizados en la cibernética (Wiener, 1948), que en su formaconsta de cuatro elementos: normas o metas de referencia, sensor o función de entrada,comparador, y ejecutor o función de salida (Powers, 1973). Para ilustrar este modelo,frecuentemente se toma como referencia el ejemplo del termostato que controla latemperatura de una habitación. Este es un modelo mecánico simplista. En los sistemas decontrol humano, la retroalimentación involucra algo más que un sensor mecánico delambiente, ya que las metas y normas humanas no son tan inflexibles y tan predeterminadasy casi siempre hay alternativas para reducir las discrepancias (Lord y Hanges, 1987). En la teoría del comportamiento, la teoría de control tiene dos elementos primarios: elcognoscitivo y el afectivo. El componente cognoscitivo consiste en metas internalizadas, elprocesamiento de la información relativa al propio estado en curso y a la comparación deese estado con las metas. El componente afectivo emerge de las discrepancias percibidasentre los propios deseos y los estados en curso, y la conducta es iniciada desde el propiodeseo de resolver aquellas discrepancias (Carver y Scheier, 1982. En Klein, 1989). Lasconductas complejas se intenta explicarlas a partir de la jerarquía de los lazos deretroalimentación, donde dada una cadena de metas, submetas y normas, las discrepanciasde la retroalimentación de orden elevado pa-
  77. 77. MODELO DE CONTROL PARA ORGANISMOS DE INVESTIGACIÓN 97san a ser las normas de orden bajo. Por ejemplo un plan jerárquico para aumentar lasventas a través de incrementar los contactos (Klein, 1989). Varios autores han reconocido el poder explicativo de la teoría del control y la hanusado para examinar la conducta en las organizaciones (por ejemplo, Campion y Lord,1982; HollenbeckyWilliam, 1987; Tayloro, Fisher eligen, 1984). No obstante que algunode estos autores ha trabajado para elaborar un modelo de la teoría de control de la motiva-ción del trabajo, un examen de estos modelos revelará algunas inconsistencias. Elproblema no es que los modelos sean incongruentes con los principios de la teoría de con-trol o con los hallazgos empíricos, sino que las diferentes perspectivas los limitan paraproporcionar un modelo comprensivo. Además, la inconsistencia de las suposiciones ytratamientos, no permiten aterrizar en un modelo coherente a través de la simple menciónde la literatura disponible (Klein, 1989). La teoría del conjunto de metas que ha adoptado la teoría del control, proporcionaexplicaciones importantes de aspectos, tales como: el origen de las metas personales, laimportancia de las metas comprometidas, las formas de caracterizarlas, incluyendo laexistencia de la interdependencia y las acciones recíprocas de submetas, la competencia demetas múltiples, la jerarquización de las metas, las tareas estratégicas y la modificación demetas sobre la marcha (Campion y Lord, 1982). La teoría del aprendizaje social aborda, más que una teoría del control, fundamentalmente la autorregulación. Sin

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