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  • 1. Bioq. Hor acio Lucer oJefe del Labor ator iode Biología Molecular IMR-UNNE
  • 2. CITOGENETICA MOLECULAR1977 INICIO DE LA ERA DE LA CITOGENETICA MOLECULARCON ESTE TIPO DE ESTUDIOS SE PUEDE LOGRAR IDENTIFICAR DEFECTOSSUBMICROSCOPICOS DEL ADN .LA TECNOLOGIA DE “HIBRIDACION IN SITU FLUORESCENTE COMBINA LASTECNICAS DE CITOGENETICA CONVENCIONALES CON TECNICAS MOLECULARES YESTA BASADA EN LA DETECCION DE SECUENCIAS ESPECIFICAS DE ACIDOSNUCLEICOS TANTO EN CROMOSOMAS COMO EN NUCLEOS INTERFASICOSFISH:I-METODO DIRECTO:UTILIZANDO NUCLEOTIDOS MARCADOS CON SUBTANCIASFLUORESCENTES PUEDE OBSERVARSE LA SEÑAL INMEDIATAMENTE DESPUES DELFISH AL MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIAII-METODOS INDIRECTOS:SE UTILIZAN SONDAS UNIDAS A MOLECULAS COMOLA BIOTINA O DIGOXIGENINA MARCADAS CON SONDAS FLUORESCENTES QUEPERMITEN SU OBSERVACION AL MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIAHAY UNA AMPLIA VARIEDAD DE SONDAS COMERCIALES Y TAMBIEN PUEDENFABRICARSE CON LA TECNICA “NICK TRANSLATION”
  • 3. TIPOS DE SONDAS DE FISH• SECUENCIAS EN EL GENOMA :• I-SONDAS DE SECUENCIA UNICA:para la deteccion deregiones especificas Pj regiones subtelomericas microdelecciones• II-SONDAS CENTROMERICAS:son sondas alfa satelite quepermiten la deteccion de secuencias altamente repetitivas de lasregiones pericentromericas• III-SONDAS PARA REGIONES ESPECIFICAS:detectasecuencias altamente repetitivas localizadas en determinadasregiones de los cromosomas P j. Yq12• IV SONDAS PARA EL PINTADO DE CROMOSOMASCOMPLETOS (WCP):detectan secuencias de eucromatina endeterminados brazos o cromosomas completos
  • 4. ESTUDIOS FISH• SOSPECHA DE SINDROME DE MICRODELECION• RETRASO MENTAL• PAREJAS CON ABORTOS DE REPETICION• CROMOSOMAS MARCADORES• CARACTERIZACION DE REESTRUCTURACIONESCROMOSOMICAS• DIAGNOSTICO PRENATAL DE LAS ANEUPLOIDIASMAS FRECUENTES• DIAGNOSTICO DE DIFERENTES ANEUPOLIDIAS ENABORTOS ESPONTANEOS
  • 5. t(9;22)(q34;q11)
  • 6. LSI BCR/ABL ES DualColor Translocation Probehybridized to a nucleusshowing one green (nativeBCR), one large orange(native ABL), one smallerorange (ES) and one fusedorange/green (20IGIF)signal pattern.
  • 7. Tecnología de citogenética molecular que permite elestudio y visualización de los 23 pares de cromosomas enforma simultánea. Sondas marcadas fluorescentementeson hechas para cada cromosoma al marcar DNAespecífico de cada cromosoma con diferentes fluoróforos.Debido a que hay un limitado número de fluoróforosespectralmente distintos, un método de etiquetadocombinatorio es usado para generar muchos coloresdiferentes. La diferencias espectrales generadas por eletiquetado combinatorio son capturadas y analizadasusando un interferómetro agregado a un microscopio defluorescencia. El programa de procesamiento deimágenes entonces asigna un pseudocolor a cadacombinación espectralmente diferente, permitiendo lavisualización de cromosomas coloreados.Se usa cuando el bandeo con Giemsa u otras técnicas noson lo suficientemente precisas. no son suficientementeseguras
  • 8. CUANDO SE PRODUCE UNA DELECIONSUBMICROSCOPICA Y SOLO PUDEDETECTARSE CON TECNICAS DECITOGENETICA MOLECULAR( FISH) Y/O CON TECNICAS DE GENETICA MOLECULAR
  • 9. CARACTERÍSTICAS CLÍNICAS DELSÍNDROME DE MICRODELECIÓN 22q11• Cardiopatía congénita 75%• anomalías del paladar 69%• Dismorfia facial (>80%): hendiduras palpebralesestrechas, nariz alargada con raíz ancha y puntabulbosa, hipoplasia de alas nasales, filtrum largo,boca pequeña, orejas displásicas y de implantaciónbaja• Déficit inmunológico 77%• Hipocalcemia neonatal 50%
  • 10. DIAGNÓSTICO GENÉTICOPREIMPLANTACIONAL (DGP)Hibridación de sondas específicas para los cromosomas13, 15, 16, 17, 18, 21,22, X e Y. Este embrión corresponde a un varón normal.