Fraccionamiento celular

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Fraccionamiento celular

  1. 1. INGENIERIA BIOQUÍMICA BIOLOGIA I FRACCIONAMIENTO CELULAR
  2. 2. FRACCIONAMIENTO CELULAR. <ul><li>Consiste en la rotura de las células mediante un proceso osmótico, ultrasonidos, lisis enzimático ó de manera mecánica, y posteriormente una centrifugación. </li></ul><ul><li>El objetivo principal es aislar los cloroplastos, núcleo y mitocondria del tejido de plantas. </li></ul><ul><li>También se le denomina a esto DIVISION CELULAR. </li></ul><ul><li>La división celular es el proceso por el cual el material celular se divide entre dos nuevas células hijas. </li></ul><ul><li>El ciclo celular comprende cuatro períodos denominados G1, S, G2 y mitosis. </li></ul>
  3. 3. <ul><li>El período G1, llamado primera fase de crecimiento, durante la cual las moléculas y estructuras citoplasmáticas aumentan. </li></ul><ul><li>El período S, o de síntesis, durante la cual los cromosomas se duplican. </li></ul><ul><li>El período G2, o segunda fase de crecimiento, durante la cual comienza la condensación de los cromosomas y el ensamblaje de las estructuras especiales requeridas para la mitosis. </li></ul><ul><li>La mitosis, durante la cual los cromosomas duplicados son distribuidos entre dos núcleos hijos. </li></ul><ul><li>Las tres primeras fases del ciclo celular se conocen, colectivamente como interfase. </li></ul>
  4. 5. Introducción al fraccionamiento subcelular. <ul><li>Todo proceso de fraccionamiento subcelular tiene dos etapas: </li></ul><ul><li>Rotura de las células o tejidos </li></ul><ul><li>Separación de la fracción deseada </li></ul><ul><li>Técnicas de rotura de células y tejidos. </li></ul>
  5. 6. LOS PROCEDIMIENTOS DE HOMOGENIZACIÓN MÁS COMUNES SON: <ul><li>Sonicación. </li></ul><ul><li>Uso de detergentes. </li></ul><ul><li>Pasar las células a través de orificios de diámetros reducidos que provocan la rotura de las membranas celulares. </li></ul><ul><li>Homogenizadores. </li></ul>
  6. 7. CENTRIFUGACIÓN <ul><li>Una vez obtenido el lisado o homogenado celular se ha de proceder a su fraccionamiento. Una de las técnicas mas empleadas es la centrifugación. </li></ul>
  7. 8. CENTRIFUGA <ul><li>son instrumentos que permite someter a las muestras a intensas fuerzas. En una centrifuga elemento determinante es el rotor. Existe varios tipos. </li></ul><ul><li>Rotor basculante. </li></ul><ul><li>Rotor de ángulo fijo. </li></ul>
  8. 9. LOS PARÁMETROS A TENER PRESENTES EN CUALQUIER CENTRIFUGACIÓN, QUE DETERMINARÁN LAS CONDICIONES SON: <ul><li>Volumen de solución a centrifugar. </li></ul><ul><li>Naturaleza química de la solución. </li></ul><ul><li>Diferencial de densidad entre la partícula a sedimentar y la densidad del medio en el que se encuentra. </li></ul>
  9. 10. CENTRIFUGACIÓN DIFERENCIAL. <ul><li>Se basa en la existencia de diferentes partículas en la suspensión que difieren en su densidad de la del medio. </li></ul>
  10. 11. VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN <ul><li>Alternativamente es posible aprovechar esa diferencia </li></ul><ul><li>En la velocidad necesaria para sedimentar las partículas para realizar una centrifugación en un medio en el que exista una gradiente de densidad, siendo el menor en la parte superior y mayor en la inferior. </li></ul>
  11. 12. EQUILIBRIO DE SEDIMENTACIÓN <ul><li>Es un sistema que suele realizar empleando la centrifuga. Consiste en la separación de las partículas en función de su densidad de flotación. </li></ul><ul><li>Se emplean diferentes sustancias para conseguir los gradientes de densidad, como son sacarosas, percol, cloruro de cesio los gradientes pueden ser autogenerados como es el caso de los basados de cloruro de cesio en el que se forma en el propio proceso de centrifugación o preformados como es le caso de la sacarosa o del percol. </li></ul>

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