Your SlideShare is downloading. ×
3S_PCR_ resumo
Upcoming SlideShare
Loading in...5
×

Thanks for flagging this SlideShare!

Oops! An error has occurred.

×
Saving this for later? Get the SlideShare app to save on your phone or tablet. Read anywhere, anytime – even offline.
Text the download link to your phone
Standard text messaging rates apply

3S_PCR_ resumo

571

Published on

0 Comments
0 Likes
Statistics
Notes
  • Be the first to comment

  • Be the first to like this

No Downloads
Views
Total Views
571
On Slideshare
0
From Embeds
0
Number of Embeds
0
Actions
Shares
0
Downloads
11
Comments
0
Likes
0
Embeds 0
No embeds

Report content
Flagged as inappropriate Flag as inappropriate
Flag as inappropriate

Select your reason for flagging this presentation as inappropriate.

Cancel
No notes for slide

Transcript

  • 1. Resumo: PCR (Polymerase Chain Reaction)História A PCR (Polymerase Chain Reaction – Reação em Cadeia de Polimerase). foi desenvolvida por um Kary Mullis,bioquímico da Cetus Corporation, em 1985, seu Fred Faloona seu principal assistente. A PCR é amplifica o DNA, criando diversascópias a partir de um material genético inicial pelo qual se tem interesse. A primeira divulgação da PCR ocorreu na Science,revista científica dos EUA, a respeito detecção de mutaçõesno DNA humano, no caso, células com anemia falciforme. Em 1993,Kary Mullis foi condecorado com o prêmio Nobel de Química pelo processo da PCR.A Técnica PCR:O objetivo é criar, artificialmente, milhares de cópiasde um único pedaço de DNA. É necessário apenas um pedaço do DNAdesejado, primers(DNAs iniciadores), nucleotídeos (adenina, guanina, citosina e timina) e a enzima DNA polimerase (enzimaque faz replicação do DNA). Os materiais são colocados em tubos de ensaio e inseridos em uma máquina de PCR, que irá,através de mudanças na temperatura, agilizar o processo de desnaturação e replicação.Dideoxinucleotídeos Os didexinucleotídeos (ddATP, ddCTP, ddGTP, ddTTP), durante o processo, substituem as bases nitrogenadas A, T, C,G, para finalizar o fragmento de DNA sendo sintetizado no momento. O que ocorre é que as bases nitrogenadas comuns tem umOH que permite a ligação entre elas.Identificação dos produtos das reações - Eletroforese Define que uma fite de DNA é negativa. Quando colocados em uma solução eletrolítica com certa voltagem, osfragmentos de DNA se deslocarão para próximo do catodo (positivo). Para separar os fragmentos por tamanho, estes são “peneirados” por peneiras moleculares. Dependendo dos tamanhosdos furos delas, alguns são nelas retidos, outros liberados. Quanto menor o fragmento, mais ele se desloca, então, para separ á-los por tamanho seus deslocamentos são comparados com os de outros fragmentos de tamanho conhecido.Sequenciamento de DNA e suas técnicas Sequenciamento de DNA é uma técnica usada para determinar qual a sequência de nucleotídeos que compõe um DNA.As primeiras técnicas de sequenciamento surgiram nos anos 70. Pode ser usada em ambos os ácidos nucleicos (DNA e RNA),independente do formato em que estejam.Sequenciamento Químico (Maxam-Gilbert) O DNA sequenciado precisa ser marcado para servir de prova após a degradação química, por meio de um compostoquímico chamado fósforo 32P, adicionado no final da cadeia. Tem como base a decomposição da molécula de DNA em pontosespecíficos, causando clivagem em C, G, G+A e T+C.Sequenciamento Enzimático (Sanger-Coulson) Separada em duas reações: LabellingReaction e Chain TerminatingReaction. LABELLING REACTION: DNA a ser sequenciado é marcado em sua extremidade final com o grupo radioativo 32P,semelhante ao sequenciamento químico, produzinho uma amostra de prova. CHAIN TERMINATING REACTION: ocorre a separação em quarto tubos com os diferentes didexinucleotídeos.Sequenciamento Automático Serviu para solucionar as limitações do método de Sanger-Coulson. Usa o princípio básico do sequenciamentoenzimático, mas a marcação dos trifosfatos especiais agora ocorre por fluorescência, Utiliza-se de lasers, que ao excitarem otrifosfato especial, fazem com que eles produzam fluorescência de diferentes comprimentos de onda Pode ser de 3 tipos: 1- Sequenciador automático de gel polimerizado de acrilamida 2- Sequenciador por eletroforese capilar: ou microcapilar 3- Sequenciamento shotgun (fragmentos aleatórios)Usos Medicina Forense, identificação de doenças hereditárias, construção de árvores filogenéticas, clonagem de genes, testesde paternidade, detecção de organismos causadores de infecções, concepção de organismos transgênicos,amplificação de DNApara processos de mutagênese, detecção de mutações, preparação de fragmentos de DNA para a clonagem, detecção deagentes patológicos (vírus, bactérias, etc.), identificação de microorganismos, sequenciamento genético de animais extintos.

×