Acetogeninas de Anonáceas
contra el Cáncer avanzado Botánica, Química y Biología:

una visión general
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Resumen de investigaciones publicadas
• La familia de plantas anonáceas se encuentran fundamentalmente
en el trópico. Exis...
Cómo verificar las conclusiones
Base de Datos
Elsevier
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Springerlink
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Página Web
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Anonácea – Localización Mundial

Esta familia de plantas ha sido objeto de estudio de los botánicos
desde el año 1700. Nin...
Este es el fruto de la
Annona cherimolia,
comúnmente conocida
como chirimoya.
Es cultivada en Perú,
Ecuador, Chile, Taiwán...
Esta es la fruta de la
Annona senegalensis
(de Senegal). Crece
salvaje en África. La
fruta es apreciada, pero
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Compuesto a Cuantificar - C37H66O7

• específico, clave analítica para la cuantificación (PM = 622,9) &
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Acetogeninas en Annona Squamosa
ref.: Univ. París (Châtenay-Malabry)

Acetogenins from the Seeds of the Custard Apple (Ann...
Intentos de Síntesis
Durante años, muchos investigadores
han tratado de sintetizar las moléculas
de acetogenina. Con múlti...
1987 Bayer US Patenta C37H66O7
Bayer AG patentó la
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biopesticida. La patente
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Extracción – Solvente No Tóxico
La extracción a alta presión (CO2 comprimido) ha sido utilizada durante treinta años para
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Encapsulación →Producto Acabado

Lista de materiales (formulación):
Cápsula (o gel suave)
Extracto de aceite (cuantificado...
Reglas del juego –
Requisitos Jurídicos Aplicables
BPAR (Buenas Prácticas de Agricultura y Recolección ) –
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C37H66O7 – BioAssays re: PubChem

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Planificación de ensayos In Vitro
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In Vitro – Propuesta Protocolo de Proyecto
Objetivo: verificar la citotoxicidad selectiva, inducción a apoptosis, inhibici...
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Objetivo: testar la toxicidad y eficacia, especialmente calcular la DL50 (dosis ...
Sugerencia: Prueba Clínica Propuesta
Objetivo: medir la dosis máxima tolerada (DMT) y la eficacia (cualquier % de reducció...
Riesgos de la Neurotoxicidad Crónica
Este riesgo fue descrito por primera vez en clínicas de Guam y Guadalupe
(Antillas Fr...
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  1. 1. Acetogeninas de Anonáceas contra el Cáncer avanzado Botánica, Química y Biología: una visión general Ben Rockefeller, Pierre Dardenne (CRA-W), Jean-Michel Romnee (CRA-W), Dioni Franco (ES), Johan Van Driessche, Usted - ? © BWR 2011 1
  2. 2. Resumen de investigaciones publicadas • La familia de plantas anonáceas se encuentran fundamentalmente en el trópico. Existen más de 2.500 especies, la mayoría de ella con un fruto dulce, abundantes semillas, alcaloides y acetogeninas. • Las Acetogeninas poseen largas cadenas de carbono (C35 – C39) con 0-3 anillos tetrahidrafuránicos (THF), así como una anillo lactónico en uno de sus extremos (C=O). • Se han identificado más de 450 moléculas específicas. Las más activas son la esquamocina, asimicina, trilobacina, y la bullatacina (isorolliniastatina-2), todas isómeros de C37H66O7. • Estas moléculas son capaces de matar células malignas de manera selectiva. Actúan sobre el complejo I mitocondrial, reduciendo los niveles de ATP y stimulando la apoptosis. 2
  3. 3. Cómo verificar las conclusiones Base de Datos Elsevier PubMed Springerlink Wiley Página Web www.sciencedirect.com www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/ www.springerlink.com www.interscience.wiley.com Palabras Clave: Acetogeninas Anonáceas, in vitro, in vivo, mecanismo de acción, asimicin, squamocin, bullatacin, complex I, ATP, apoptosis, mitochondria. N.B. Las moléculas acetogeninas se han encontrado en numerosas partes (raíces, corteza, semillas, hojas, etc.) de diversas especies. 3
  4. 4. Anonácea – Localización Mundial Esta familia de plantas ha sido objeto de estudio de los botánicos desde el año 1700. Ninguna de sus partes es venenosa, pero nunca se comen las semillas. Su fruto se ha consumido desde siempre. 4
  5. 5. Este es el fruto de la Annona cherimolia, comúnmente conocida como chirimoya. Es cultivada en Perú, Ecuador, Chile, Taiwán, China y en el sur de España. Esta fruta es un producto perecedero, sensible a sufrir daños durante su transporte, y continúa madurando después de su recolección, lo que dificulta su venta, salvo a nivel local. 5
  6. 6. Esta es la fruta de la Annona senegalensis (de Senegal). Crece salvaje en África. La fruta es apreciada, pero la planta tiene también otros usos tradicionales. En Benín, Togo, Mali, Costa de Marfil y Kenia, las raíces en polvo se utilizan para tratar el veneno de la mordedura de serpiente. En la República Demócrática del Congo (RDC), es usado para tratar la anemia. Las hojas secas se encuentran en los mercados de Kinshasa. La base de datos Preludio del Museo de África, Tervuren, Bélgica, enumera los múltiples usos tradicionales de esta planta – metrafo.be/prelude. 6
  7. 7. Compuesto a Cuantificar - C37H66O7 • específico, clave analítica para la cuantificación (PM = 622,9) & aprobación reglamentaria (y control de calidad de un producto), • probablemente, el pico base (mayor % - porcentaje del área en los extractos de papaya, la chirimoya, y otros) de un cromatograma ("huella digital"), • cuenta con ocho núcleos quirales y muchos isómeros naturales • muy complicado de sintetizar debido a los múltiples núcleos quirales. • isómeros específicos identificados utilizando 1H y 13C RMN (resonancia magnética nuclear), como anonacina I (patentado por Bayer como biopesticida en 1987) y también conocido como esquamocina), asimicina, bullatacin (rolliniastatina-2), trilobacin, senegalina, xylomaticina (anogalene) y molvizarina, • cera blanca resinosa con bajo punto de fusión en estado aislado. 7
  8. 8. Acetogeninas en Annona Squamosa ref.: Univ. París (Châtenay-Malabry) Acetogenins from the Seeds of the Custard Apple (Annona squamosa L.) and their Health Outcomes, Nuts and Seeds in Health and Disease Prevention, chapter 51, Pierre Champy, Uni. Paris-Sud, Elsevier, 2011 ; N.B. Riesgo de toxicidad crónica. (ACG-008) 8
  9. 9. Intentos de Síntesis Durante años, muchos investigadores han tratado de sintetizar las moléculas de acetogenina. Con múltiples núcleos quirales, esta síntesis es tan compleja que prácticamente no es posible automatizar y ampliar. En 2004, un consorcio de GSK, Novartis & Pfizer recibió una subvención de Fondos Europeos para contratar al Profesor Steven Ley de la Univ. de Cambridge (R.U.) para sintetizar la asimicina. Síntesis podría conllevar también complejos talidomina-como riesgos. (ACG-221) 9
  10. 10. 1987 Bayer US Patenta C37H66O7 Bayer AG patentó la annonina I (esquamocina) como un biopesticida. La patente caducada es una molécula ID, incluyendo la vibración del infrarrojo extendida a cm-1: ~3450(OH), ~2950(CH2), y ~1750(OC=O) (ACG-200). 10
  11. 11. Extracción – Solvente No Tóxico La extracción a alta presión (CO2 comprimido) ha sido utilizada durante treinta años para descafeinar el café y el té y también para fabricar los extractos vegetales de lúpulo. Esta técnica es también usada para fabricar los extractos del ajo, jengibre, menta, manteca de cacao, y muchos otros. Este proceso relativamente sencillo no tiene solventes tóxicos y se puede incrementar el rendimiento, comparándolo con el m/etanol u otros solventes orgánicos. El proceso tiene cinco parámetros clave – el tamaño de la partícula (molida ej.: 8 mm), presión (250 bar.... máximo), proporción solvente/alimentación (40), temperatura (35ºC) y tiempo de extracción (1h). Su factibilidad se ha documentado. Un fraccionamiento del los extractos del aceite es también possible. 11
  12. 12. Encapsulación →Producto Acabado Lista de materiales (formulación): Cápsula (o gel suave) Extracto de aceite (cuantificado por ACG-622) Excipiente (aditivo, aceite de oliva) a diluir Materiales de embalaje La FAMHP (AGEMED-equivalente belga) y la EMEA/HMPC aceptan el concepto de cuantificación del producto acabado (de un extracto de hierbas) de una específica molécula, como 50 ug (cincuenta microgramos) de esquamocina por cápsula. En otras palabras, la sustancia farmacológica es una mezcla (extracto), mientras que el medicamento contiene una determinada cantidad de una molécula específica. Por cada lote finalizado, dependiendo del volumen de carga teórica, la concentración de esquamocina en el aceite extraído, y la densidad, llenaríamos un volumen determinado de aceite extraído, para añadir después otro aceite, 12 como aceite de oliva, para diluir la cápsula.
  13. 13. Reglas del juego – Requisitos Jurídicos Aplicables BPAR (Buenas Prácticas de Agricultura y Recolección ) – trabajar solamente cuando tiene salud, lavar las manos antes de la recolección, analizar y trazar el origen de la biomasa.. BPM (Buenas Prácticas de Manufacturación)– método claro para limpiar los recipientes de extracción y tubos, certificación de fábrica, personal cualificado, lote registro/expediente, etiquetado del lote clínico. BPL (Buenas Prácticas de Laboratorio)– laboratorio acreditado, método validado, +/- 5% desviación estándar, aprobación comité ético para experimentos en vivo, pruebas de seguridad alimentaria. BPC (Buenas Prácticas Clínicas)– protocolo, formulario de consentimiento, seguro, informe de pruebas adversas, informe finalización de ensayo, E6, responsabilidad 13 contingente para suministro continuo.
  14. 14. C37H66O7 – BioAssays re: PubChem Se puede verificar estos datos consultando PubChem (pubchem.ncbi.nlm.nih.gov), buscando información del compuesto ID 441612 (C37H66O7), haciendo click en Bio.. 14
  15. 15. Planificación de ensayos In Vitro Equipos (y proveedores) se encuentran para probar y verificar: Citotoxicidad (Abcam, Sigma, Promega,…), Detección de apoptosis (Abcam, Sigma, Becton Dickinson,…), Actividad Complejo I (Abcam/Mitosciences). 15
  16. 16. In Vitro – Propuesta Protocolo de Proyecto Objetivo: verificar la citotoxicidad selectiva, inducción a apoptosis, inhibición de la captación de FDG, y reducción de la actividad del complejo I, usando un extracto cuantificado, concentraciones de 0, 0.1, 1, 10, 20, 100 µg/ml de esquamocina, las líneas celulares y equipos de medición CI50 e inducción de apoptosis. Doxorrubicina y cisplatino (citotoxicidad y apoptosis) y rotenona (actividad del complejo I) se usarán para el control positivo. Prueba Técnica Puntos finales Citotoxicidad Selectividad MTT colorimétrico/ XTT + células sanas comparadas CI50 CI50 Detección Apoptosis Anexina V/PI y citometría de flujo, V -/PI-…V+/PI+ FDG Captación Actividad del Complejo I Con/sin esquamocina, contador gamma TEP uso – S/N Sistema OXPHOS (NADH- > NAD+) % de Actividad El procedimiento incluye líneas celulares de carcinoma MCF-7/ Adr (pecho), HT-29 (colom), A-549 (pulmón), GBM8401(cerebro), Huh-7 (hígado), A2780 (ovarios) y HeLa (cuello del útero); cultivos definidos; concentraciones de 0,0.1, 1, 10, 20, 100 µg/ml (ref.: McLaughlin, Zeng); ? - ó 0, 15, 30, 60 µM (Wu, 2011); después de 2, 8, 24, 48, 72 h. 16
  17. 17. In Vivo – Propuesta Protocolo de Proyecto Objetivo: testar la toxicidad y eficacia, especialmente calcular la DL50 (dosis letal media), de una sola dosis (aguda) (con aceite de oliva como medida de control), dosis efectivas durante 23 semanas, y dosis tóxicas & NOEL (Nivel sin efecto adverso observable) repetidas durante 13 semanas en ratones, con aceite de oliva y cisplatino para el control (curvas dosis – reacción), con tumores metastásicos para ser evaluados en función de los primeros ensayos in vitro. Prueba Agudo tox Números de Ratones/dosis 5M/5H, 2 únicas dosis + 2 dosis control = 40 200,2000 mg/kg, 1 día Eficacia 5M/5H, 3+2 ctrl. dosis diarias, 2–3 semanas = 50 DE50, SUVmax, 10, 1, 0.1 mg/kg (dosis ref.: Ahammadsahib, Wu) Volumen de la lesión (TAC) Diámetro de la lesión. Crónico tox 5M/5H, 3+2 ctrl. dosis diarias, 13 semanas = 50 100, 10, 1 mg/kg Oral bioutilidad 5M/5H, 10 mg/kg, después +/-, 13 semanas = 30 Puntos finales DL50– dosis oral, plasma %, necropsia DL50– dosis oral, plasma %, necropsia NOEL (P/sangre) Los tumores son inducidos, y luego medido su tamaño (por calibradores), a continuación son registrados por micro TEP/TAC (SUVmáx). Posteriormente se suministra la esquamocina por sonda durante 2-3 semanas, luego la micro TEP/TAC, pues durante 13 semanas. El uso de TEP depende 17 de los resultados de la prueba in vitro FDG.
  18. 18. Sugerencia: Prueba Clínica Propuesta Objetivo: medir la dosis máxima tolerada (DMT) y la eficacia (cualquier % de reducción en el tamaño de los tumores), con la hipótesis de que el tamaño de los tumores puede reducirse, pero la dosis es individual. La duración de la prueba puede ser 1 a 3 meses. Elegibilidad Régimen Incluye 20 pacientes (n=20) Dosis diaria, Con metástasis en el pecho, registro semanal de pulmón, colom, cerebro, reacción, y o leucemia, todos pacientes tomografía TEP/TAC & externos y ambulatorios; análisis de sangre al pacientes Excluye la quimioterapia previa inicio y al final de (aplicar otra a 30 días lavado), la prueba; dosis inicial CoQ10, baja presión arterial, a ser 0,1 x DL50 dosis en ratas algunos otros tratamientos (mg/kg) (“polifarmacia”), embarazo, o intención de quedarse embarazada. Puntos finales SUVmax, volumen de la lesión, diámetro de la lesión resultados de dolor comunicados por movilidad, energía; (o elección de continuar tratamiento después de 1 mes (S/N) N.B. Λ página 40-50 protocolo que requiere de aprobación por el comité ético. El proveedor tiene la obligación contingente de suministro continuo. Esta es la Fase I. 18
  19. 19. Riesgos de la Neurotoxicidad Crónica Este riesgo fue descrito por primera vez en clínicas de Guam y Guadalupe (Antillas Francesas) en los últimos diez años. Entre los pacientes que habían comido al menos una pieza de fruta de anona al día durante treinta a cincuenta años, la clínica notificaron un mayor índice de temblores, también llamado “Parkinson atípico”. La causa-efecto de las acetogeninas en la “patología tau” (neurotoxicidad, probablemente debido a priones) fue después confirmada in vitro y reflejada en un informe por investigadores de Francia y Alemania (cerca de la industria). La neurotoxicidad puede o no puede ser reversible, si la persona deja de comer esta fruta. El efecto secundario es coherente con el mecanismo de acción, dado que, al igual que un tumor maligno, el cerebro (y el corazón) tiene un metabolismo de la glucosa superior a la media. Otro efecto secundario, de acuerdo con el Dr. McLaughlin, es la reducción de la presión arterial. En Sumatra e Indonesia se usa tradicionalmente la anona para la reducción de la presión arterial. La neurotoxicidad es un riesgo crónico. No parece ser un bonita prueba pendiente. Ha existido un mayor uso tradicional de estas plantas en medicina, como el polvo de raíz contra las mordeduras venenosas de serpientes (en Benín, …). 19
  20. 20. Hipócrates (c. 460 – c. 370 AC) La escuela hipocrática en la antigua Grecia separaba la medicina de la superstición y el pensamiento filosófico, situándolo en un plano estrictamente científico, basado en la observación objetiva y razonamiento crítico. “Que tu alimento sea tu medicina.” - Hipócrates     20

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