Laboratorio de microbiología de alimentos n°1

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS N°1 TÉCNICA DE ECOMÉTRICA LINA DURANGO YEINA GONZÁLEZ KATY GUERRA IRINA HERAZO MARCELA MIZGER Ing: MÓNICA SIMANCA UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA FACULTAD CIENCIAS AGRÍCOLAS PROGRAMA INGENIERÍA DE ALIMENTOS BERASTEGUI 2004

INTRODUCCIÓN Como estudiante de V semestre de ingeniería de alimentos, es necesario que en el curso de microbiología de alimentos se realice una practica de laboratorio encaminada a la evaluación de los medios de cultivo; ya que en estos laboratorios se emplean gran variedad de medios y reactivos para la detección y enumeración de varios tipos de microorganismos; y la calidad y control de ellos incide directamente en los resultados. Como se sabe cada microorganismo crece en un medio especifico, par evaluar estos medios de cultivo selectivos se utiliza la técnica ecometrica que evalúa la susceptibilidad a la colonización de microorganismos deseados, así como la resistencia al crecimiento de cepas Interferentes. A continuación se presenta el informe correspondiente a la practica del laboratorio donde se utiliza la técnica ecometrica para evaluar medios de cultivos selectivos.

OBJETIVOS  OBJETIVO GENERAL: Evaluar la selectividad de medios de cultivos mediante la técnica ecomotrica.  OBJETIVOS ESPECÍFICOS : Aplicar la técnica ecometrica al medio de cultivo Hektoen .

MATERIALES  6 cajas de agar Hektoen  Asas bacteriológicas .  3 suspensiones de cepas que deben crecer.  3 suspensiones de cepas que no deben crecer.  Mechero.  Cinta de enmascarar.  Incubadora .

FLUJOGRAMA DEL PROCEDIMIENTO. Tomar 6 cajas de Hektoen Tomando el Dividir la caja en 4 asa caliente cuadrantes Marcar las cajas con el no mbre del micro Tener en cuenta organismo si crece o no 5 estrías en cada Sembrar los micro cuadrante y una organismos central Incubar a 37° C de 24 a 48 horas Observar resultados

TEORÍA RELACIONADA  EVALUACIÓN SISTEMÁTICA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO. El funcionamiento de los medios de cultivo no selectivo varia ampliamente según su composición, modo de preparación , etc. Y mucho mas naturalmente el de los selectivos. Consiguientemente es necesaria la evaluación sistemática de los medios preparados en el propio laboratorio y aun delos comerciales. A este fin se han desarrollados técnicas sencillas y confiables, cuyo fundamento es el de comprobar el crecimiento efectivo en los medios utilizados de los microorganismos buscados y la supresión y división de la flora general del alimento . Una de esta s técnicas implica la siembra en estría con ayuda de una asa desechable de 1 µ l (microlitro), de inoculos estandarizados sobre la superficie del medio que va evaluarse de tal modo que se obtenga unidades formadoras de colonias en un numero siempre decreciente como sucede en el método espiral de siembra en placa. Todos los microorganismos que se supone deben crecer en un medio han de desarrollarse hasta formar colonias visibles aun apartir de células

individuales. Por ello, han de crecer bien incluso en la última estría de siembra. Por el contrario, los microorganismos de prueba que se espera sean inhibidas en el medio ensayado no deben formar colonias mas allá del primera o a lo suma del 2 sector. Como esta técnica evalúa la susceptibilidad de los medios de cultivo a la colonización por los microorganismos de dados así como su resistencia a la colonización por las cepas interferentes, se ha denominado técnica ecométrica. Funcionamiento de un determinado medio evalúa inoculando por ejemplo 6 placas , tres de ellas se siembran en estría diferentes cepas de prueba que se esperan crezcan y forme colonias, y las colonias otras tres con microorganismos que deberían ser inhibidas. Los resultados obtenidos, después una adecuada incubación de los placas, se expresan con un numero de 6 cifras. Las tres primeras indican los sectores positivos de crecimiento las cepas de prueba, cuyo desarrollo es esperable, y las tres ultimas los sectores también positivos de crecimiento por parte de las cepas cuyo desarrollo, idealmente, no debería producirse. Así un medio selectivo perfecto, daría los resultados 555000, pero en la practica ha de aceptarse a menudo la formula 554001 o aun otra algo mas desfavorable.  MEDIOS DE CULTIVOS HEKTOEN. Agar selectivo para la desmoliacion y aislamiento de bacterias intestinales patógenas , inclusive Shigella a partir de los mas diversos materiales tales como heces , alimentos etc. El agar Hecktoen aun cuando parece suficiente efecto represor de la flora acompañante ejerce escasa ihibicion de la flora acompañante ejerce escasa

inhibición de Salmonellas Y Shigella, por lo tanto, permite la obtención de altos rendimientos en estos gérmenes. En términos generales el Agar Hektoen se usa para el aislamiento de Shigella y otras entero bacterias patógenas . El crecimiento de Shigella en el agar Hektoen se puede observar mediante la formación de colonias verdes húmedas planas y transparentes, y el crecimiento de Salmonellas y Proteus se puede observar por la formación de colonias verdes azuladas con o sin centro negro.  Staphylococus aureus Son cocos Gram positivos, no esporulados, inmóviles producen numerosas enzimas: proteasas, Lipasa, coagulosa, etc. Producen también un pigmento, un caratenoide que confiere los colonias una coloración amarilla o naranja, de intensidad muy variable según el tipo de capa la utilización de manitol en anaerobiosis es un carácter distintivo. Staphylococus aureus se multiplica mas fácilmente en aerobiosis que en anaerobiosis, es mesofilo, la presencia de una flora competitiva constante inhibe su crecimiento. La presencia y persistencia de S. Aureus en múltiples ambientes es posible gracias a su versatilidad metabólica que lo capacitan para permanecer y/o reproducirse en circunstancias muy disímiles. Crece en un rango amplio de temperatura, pH, facultativo, con resistencia relativa a antisépticos y desinfectantes.

El medio de aislamiento mas empleado es el Baird Paker en este las colonias son negras, brillantes y rodeadas de un halo de aclaración, sin embargo este es poco selectivo y se deben realizar pruebas de identificación complementarias.  Salmonellas: son bacilos gran negativos , aereo – anaerobios facultativos pertenecientes a la familia Enterabacteraceae . su tamaño oscila de 0,3 – 1 µm, normalmente son movibles aun que existen algunas excepciones. Las Salmonella se multiplican bien en medios ordinarios. Las colonias son al cabo de 18 – 24 horas de 2 a 3 mm de diámetro. la temperatura optima de crecimiento se encuentra entre 35 y 37 0C; presentan una cierta sensibilidad al calor. Soportan un rango de PH entre 4 .5 y 9 con un optimo de 6,5 a 7,5. Las Salmonellas no se encuentran en general mas que en pequeño numero de alimentos. Para poner en evidencia esta contaminación Paucimicrobiana es indispensable utilizar técnicas especificas. Esta bacteria crece en medio de cultivos selectivos apartir de caldos de enriquecimiento selectivo. Estos medios esencialmente contienen agentes selectivos (por Ej. sales biliares y colorantes); azucares (principalmente lactosa), sales (que permitan tener en evidencia la producción de SH 2) e indicadores de pH. Los principales medios que se pueden utilizar son Agar verde brillante, agar Hektoen, agar, DCLS, agar XLD, pueden también utilizarse el McConkey, agar SS y agar sulfito de bismuto.

 Proteus Bacilos sumamente móviles (flagelos peritricos) y pleomórficos. Se encuentran aislados y emparejados o formando cadenas cortas . Algunas especies de Proteus tienden a extenderse en el Agar , proliferación que es mas evidente a 20°C que a 37 °K la movilidad puede ser débil o ausente, también varios productos químicos (sales viliares), ácido tanico, ácido sodico, ect). Suprimen o inhiben la proliferación. Los miembros del genero Proteus presentan fuertes actividades de ureas y producen ácidos sulhidrico. La importancia de Proteus en el alimento se debe a su peligrosidad para la salud por corrupción de los alimentos.  Shigella Son bacilos anaerobios facultativos pertenecientes a la familia enterobactereaceae. La detención fiable de Shigella en los alimentos es un a tanto difícil todavía no existe una técnica eficaz de enriquecimiento selectivo para todas las Shigella. Los medios de aislamiento apropiados incluyen agar Xilosa Lisina Desoxicolato y el agar entonico de Hektoen, los aislamientos típicos se examinan en cuanto a la ausencia de movilidad la formación de ácido pero no de gas a partir de la glucosa y al no producción de Indol, ni SH2.

 Bacillus subtilis. Es un bacilo gran positivo, aunque en cultivos mas viejos puedan aparecer gran negativos son móviles producen catalosa , pero no gas , apartir de la glucosas descomponen pectinas y los polisacáridos de los tejidos vegetales causando daños en daños productos vegetales frescos la célula de este genero varían de aerobios estrictos aenerobios facultativos. los requerimientos nutritivos pueden ser simples. La temperatura mínima varia entre – 5 y 45 °C.

ANÁLISIS DE RESULTADOS . Partiendo del hecho que los resultados obtenidos no fueron los mejores se puede decir que se presentaron algunos errores al momento de realizar la practica “técnica econométrica” . Entre los mas significativos se da el hecho de utilizar medios de cultivo vencidos, los cuales van a incidir a gran escala en los resultados obtenidos en del desarrollo de la presencia de la practica. Según datos bibliográficos y teniendo en conocimiento del fundamento de la practica se tiene que los microorganismos que deben crecer en medio selectivo Hektoen son: Salmonellas, Proteus , Shigella , entre otros. Al evaluar la selectividad de los medios de cultivo, Hektoen específicamente , nos damos cuenta que este medio no arrojo los resultados esperados. Estos resultados pueden ser causados por lo dicho anteriormente sobre los medios vencidos o por la mala preparación de los mismos. Existen otros errores como materiales contaminado sobrecalentamiento o fallas en el control de esterilidad. Todo estos errores trajeron como consecuencia malos resultados, uno de los mas notados fue el crecimiento exuberante de microorganismos que no deberían crecer en este medio (Hektoen), esto se debió tal vez al sobrecalentamiento que se hizo en la preparación del medio de cultivo, el cual destruyo a los inhibidores permitiendo así el crecimiento de estos microorganismos no buscados. (S. aereus , Licherichia coli , B. subtilis).

CONCLUSION Luego de haber evaluado la técnica ecometrica , podemos decir que :  En el laboratorio de microbiología es de gran importancia el control que se le aplica a los medios de cultivos selectivo, ya que de estos depende una mejor precisión de los resultados.  para mayor exactitud de los resultados es indispensable que en la preparación en los medios de cultivo se empleen las buenas practicas de manufactura (BPM) lo cual es primordial al evaluar la susceptibilidad entre el crecimiento y aislamiento de s ciertos microorganismos y la resistencia de la flora bacteriana competitiva .

BIBLIOGRAFÍA  CM BOUR GEOIS, J.F. MESULE, I. ZUCCA. Microbiología alimentaria; Aspectos microbiológicos de la seguridad y calidad alimentaria. Ed. Acrivia. España.  MUSEL, A. A, Y MORENO, B. Microbilogía de los alimentos. ed. Acrivia. España.  MERCK Manual de medios de cultivo. Darmstadt, Alemania 1994.

Laboratorio de microbiología de alimentos n°1

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