Aumenta la resolución Acentúa las características morfológicas Conserva la muestra Tinción de la muestra

Aumenta la resolución

Acentúa las características morfológicas

Conserva la muestra

Colorantes Hacen más visibles las estructuras internas y externas aumentando el contraste con el fondo 2 características fundamentales : Grupos cromóforos Con dobles enlaces conjugados Dan al colorante su color Afinidad por los componentes celulares Por enlaces iónicos (más comunes) , covalentes o hidrófobos

Hacen más visibles las estructuras internas y externas aumentando el contraste con el fondo

2 características fundamentales :

Grupos cromóforos

Con dobles enlaces conjugados

Dan al colorante su color

Afinidad por los componentes celulares

Por enlaces iónicos (más comunes) , covalentes o hidrófobos

Colorantes Ácidos: afinidad por las estructuras alcalina  hemoglobina Eosina. Básicos: afinidad por las estructuras ácidas  ácidos nucleicos. Azul de metileno.

Ácidos:

afinidad por las estructuras alcalina  hemoglobina

Eosina.

Básicos:

afinidad por las estructuras ácidas  ácidos nucleicos.

Azul de metileno.

Colorantes Neutros: Sales de un ácido y de una base coloreados. Tiñen el núcleo de un color y el citoplasma de otro. Eosinato de azul de metileno. Indiferentes: Insolubles en el agua y tiñen a aquellas sustancias que tienen un poder de disolución superior al del líquido empleado para preparar la solución colorante. Sudán III  para teñir las grasas.

Neutros:

Sales de un ácido y de una base coloreados.

Tiñen el núcleo de un color y el citoplasma de otro.

Eosinato de azul de metileno.

Indiferentes:

Insolubles en el agua y tiñen a aquellas sustancias que tienen un poder de disolución superior al del líquido empleado para preparar la solución colorante.

Sudán III  para teñir las grasas.

Fijación Por calor Preserva la morfología general pero no las estructuras internas Química Protege la subestructura fina y la morfología de los microorganismos delicados de mayor tamaño

Por calor

Preserva la morfología general pero no las estructuras internas

Química

Protege la subestructura fina y la morfología de los microorganismos delicados de mayor tamaño

Fijación química Aldehídicos Ácido ósmico Tetróxido de osmio Compuestos mercúricos y crómicos, Alcoholes, la acetona, el dietil-pirocarbonato.

Aldehídicos

Ácido ósmico

Tetróxido de osmio

Compuestos mercúricos y crómicos,

Alcoholes, la acetona, el dietil-pirocarbonato.

Tipos de tinción Tinción simple Un solo colorante. Colorantes básicos Mas usados Tienen cargas positivas Ej.: Cristal violeta, fucsina básica, safranina, verde malaquita Colorantes ácidos Menos usados Tienen cargas negativas Ej.: Eosina, Fucsina ácida Safranina

Tinción simple

Un solo colorante.

Colorantes básicos

Mas usados

Tienen cargas positivas

Ej.: Cristal violeta, fucsina básica, safranina, verde malaquita

Colorantes ácidos

Menos usados

Tienen cargas negativas

Ej.: Eosina, Fucsina ácida

Tipos de tinción Tinción diferencial 2 ó más colorantes Divide a las bacterias en grupos diferentes según sus propiedades de tinción: Tinción de Gram Tinción ácido alcohol resistente

Tinción diferencial

2 ó más colorantes

Divide a las bacterias en grupos diferentes según sus propiedades de tinción:

Tinción de Gram

Tinción ácido alcohol resistente

Tinción de Gram

Tinción de Gram

Procedimiento Técnico

Gram positiva Gram negativa

Tinción Ácido-alcohol resistente Elevado contenido en lípidos de las paredes de estas células Se tiñen calentando una mezcla de fucsina básica y fenol Mycobacterium leprae Colorante de contraste: azul de metileno

Tinción Ácido-alcohol resistente

Elevado contenido en lípidos de las paredes de estas células

Se tiñen calentando una mezcla de fucsina básica y fenol

Método de Ziehl-Neelsen Frotis  fijación x calor  teñir con fucsina fenicada  Calentar suavemente con el mechero hasta la emisión de vapores. El colorante no debe secarse ni hervir, añadir más si es necesario. Mantener la emisión de vapores durante 5 minutos. Lavar con agua  decolorar con alcohol ácido  Lavar con agua  teñir con azul de metileno un minuto. Lavar con agua  escurrir  dejar secar al aire  microscopio *Rojo  Positivo *Azul  Negativo

Frotis  fijación x calor  teñir con fucsina fenicada  Calentar suavemente con el mechero hasta la emisión de vapores.

El colorante no debe secarse ni hervir, añadir más si es necesario.

Mantener la emisión de vapores durante 5 minutos.

Lavar con agua  decolorar con alcohol ácido  Lavar con agua  teñir con azul de metileno

un minuto.

Lavar con agua  escurrir  dejar secar al aire  microscopio

*Rojo  Positivo *Azul  Negativo

TINCIÓN DE KINYOUN Ziehl-Neelsen modificado  Método frío Extensión  Desecación  Fijación  Dejar enfriar  Coloración Fucsina de Kinyoun 5-7 minutos-min., sin calentar. Lavar con agua/escurrir el colorante  Decolorar con alcohol-HCl  Lavar con agua  Coloración de contraste Azul de metileno 2-3 min. Lavar  secar  microscopio.

Ziehl-Neelsen modificado  Método frío

Extensión  Desecación  Fijación  Dejar enfriar  Coloración

Fucsina de Kinyoun

5-7 minutos-min., sin calentar.

Lavar con agua/escurrir el colorante  Decolorar con alcohol-HCl  Lavar con agua  Coloración de contraste

Azul de metileno

2-3 min.

Lavar  secar  microscopio.

Tinción de estructuras específicas Tinción negativa Para capsulas Se mezclan las bacterias con tinta china o colorante de nigrosina y se extienden sobre un porta Las capsulas se observan sin color sobre un fondo oscuro Cryptococcus neoformans – tinción negativa con tinta china

Tinción negativa

Para capsulas

Se mezclan las bacterias con tinta china o colorante de nigrosina y se extienden sobre un porta

Las capsulas se observan sin color sobre un fondo oscuro

Doble tinción Las esporas se tiñen primero calentando las bacterias con verde malaquita Se contratiñe con safranina quedando las células vegetativas y las endosporas con colores diferentes Tinción de esporas (Método de Schaeffer-Fulton) Bacillus cereus

Doble tinción

Las esporas se tiñen primero calentando las bacterias con verde malaquita

Se contratiñe con safranina quedando las células vegetativas y las endosporas con colores diferentes

Tinción de flagelos Los flagelos deben ser recubiertos con suficiente colorante como para ser observados Se aplica mordiente (como ácido tánico y alumbre de potasio) para aumentar el grosor de los flagelos y se tiñen con pararosanilina (Método de Leifson) o fucsina básica (Método de Gray) Vibrio cholerae O1

Los flagelos deben ser recubiertos con suficiente colorante como para ser observados

Se aplica mordiente (como ácido tánico y alumbre de potasio) para aumentar el grosor de los flagelos y se tiñen con pararosanilina (Método de Leifson) o fucsina básica (Método de Gray)

Tinciones policrómicas Tipo Romanowsky un colorante ácido (eosina) Colorantes básicos (tiacinas). Azul de metileno y sus derivados (colorantes tipo azur). Diagnóstico hematológico Wright Giemsa sola o en combinación con la de May-Grünwald

Tipo Romanowsky

un colorante ácido (eosina)

Colorantes básicos (tiacinas).

Azul de metileno y sus derivados (colorantes tipo azur).

Diagnóstico hematológico

Wright

Giemsa

sola o en combinación con la de May-Grünwald

TINCIÓN GIEMSA Frotis sanguíneo Fijación con metanol x 3 minutos  Escurrir  secar al aire Diluir en un tubo de ensayo 0,2 ml de azur-eosina-azul de metileno según Giemsa con 2 ml de solución tampón pH 7,2. Cubrir el frotis con la dilución de colorante dejándolo actuar durante 25 minutos. Escurrir  lavar con agua del grifo. Lavar con tampón pH 7,2 hasta eliminar los restos del colorante. Escurrir y secar en posición vertical

Frotis sanguíneo

Fijación con metanol x 3 minutos  Escurrir  secar al aire

Diluir en un tubo de ensayo 0,2 ml de azur-eosina-azul de metileno según Giemsa con 2 ml de solución tampón pH 7,2.

Cubrir el frotis con la dilución de colorante

dejándolo actuar durante 25 minutos.

Escurrir  lavar con agua del grifo.

Lavar con tampón pH 7,2 hasta eliminar los restos del colorante.

Escurrir y secar en posición vertical

TINCIÓN GIEMSA Eritrocitos  color rosa asalmonado Plaquetas  color violeta. Neutrófilos  núcleo de color azul violeta, el citoplasma rosa y la granulación de un color violeta rojizo

Eritrocitos  color rosa asalmonado

Plaquetas  color violeta.

Neutrófilos  núcleo de color azul violeta, el citoplasma rosa y la granulación de un color violeta rojizo

TINCIÓN DE WRIGHT Frotis sanguíneo muy fino  secar al aire. Verter 1 ml de eosina-azul de metileno por un minuto Lavar con solución tampón pH 7,2  escurrir y secar en posición horizontal Diluir 0,5 ml. de eosina-azul de metileno con 0,5 ml de solución tampón pH 7,2.  Mezclar bien y cubrir la extensión. durante 3-5 minutos Lavar con agua del grifo  con solución tampón pH 7,2  escurrir y secar en posición vertical.

Frotis sanguíneo muy fino  secar al aire.

Verter 1 ml de eosina-azul de metileno

por un minuto

Lavar con solución tampón pH 7,2  escurrir y secar en posición horizontal

Diluir 0,5 ml. de eosina-azul de metileno con 0,5 ml de solución tampón pH 7,2.  Mezclar bien y cubrir la extensión.

durante 3-5 minutos

Lavar con agua del grifo  con solución tampón pH 7,2  escurrir y secar en posición vertical.

Tinción de estructuras específicas Sistemas de marcaje inmunocitoquímico Métodos directos primer anticuerpo o anticuerpo primario se encuentra unido a algún tipo de marcador fluorocromo

Sistemas de marcaje inmunocitoquímico

Métodos directos

primer anticuerpo o anticuerpo primario se encuentra unido a algún tipo de marcador fluorocromo

Tinción de estructuras específicas Métodos indirectos El anticuerpo primario aplicado sobre las células es reconocido por un segundo anticuerpo, secundario, unido a un marcador El anticuerpo secundario se aplica a una concentración en exceso. Mas sensible

Métodos indirectos

El anticuerpo primario aplicado sobre las células es reconocido por un segundo anticuerpo, secundario, unido a un marcador

El anticuerpo secundario se aplica a una concentración en exceso.

Mas sensible

Tinción de estructuras específicas Métodos del anticuerpo no marcado o de puente anticuerpo primario  anti-anticuerpo, secundario  anticuerpo anti-peroxidasa  peroxidasa.

Métodos del anticuerpo no marcado o de puente

anticuerpo primario  anti-anticuerpo, secundario  anticuerpo anti-peroxidasa  peroxidasa.

Otras tinciones Para protozoos Para Trichomonas vaginalis Para amibas de vida libre Para helmintos

Para protozoos

Para Trichomonas vaginalis

Para amibas de vida libre

Para helmintos

Conclusión Materiales Técnica Observacion

Materiales

Técnica

Observacion