Notasproteinas2
Upcoming SlideShare
Loading in...5
×
 

Notasproteinas2

on

  • 4,378 views

importante para una dieta balanceada de niños y adultos

importante para una dieta balanceada de niños y adultos

Statistics

Views

Total Views
4,378
Views on SlideShare
4,355
Embed Views
23

Actions

Likes
0
Downloads
43
Comments
0

2 Embeds 23

http://www.slideshare.net 18
http://armindaavances.blogspot.com 5

Accessibility

Categories

Upload Details

Uploaded via as Microsoft PowerPoint

Usage Rights

© All Rights Reserved

Report content

Flagged as inappropriate Flag as inappropriate
Flag as inappropriate

Select your reason for flagging this presentation as inappropriate.

Cancel
  • Full Name Full Name Comment goes here.
    Are you sure you want to
    Your message goes here
    Processing…
Post Comment
Edit your comment

Notasproteinas2 Notasproteinas2 Presentation Transcript

  • ANÁLISIS DE LAS PROTEÍNAS CONSIDERACIONES GENERALES
  • PROTEÍNAS
    • SON COMPONENTES ABUNDANTES EN TODAS LAS CÉLULAS.
    • CASI TODAS (EXCEPTO LAS DE ALMACENAMIENTO) SON IMPORTANTES PARA LAS FUNCIONES BIOLÓGICAS Y/O LA ESTRUCTURA CELULAR.
    • LAS PROTEÍNAS DE LOS ALIMENTOS SON MUY COMPLEJAS.
  • COMPOSICIÓN DE LAS PROTEÍNAS
    • ESTÁN CONSTITUÍDAS POR: HIDRÓGENO, CARBONO, NITRÓGENO, OXÍGENO Y AZÚFRE.
    • LOS “BLOQUES DE CONSTRUCCIÓN” DE LAS PROTEÍNAS SON 20
    • ∞ -AMINOÁCIDOS.
    • LAS UNIONES ENTRE RESIDUOS DE AMINOÁCIDOS EN UNA PROTEÍNA SON ENLACES PEPTÍDICOS.
  • COMPOSICIÓN DE LAS PROTEÍNAS
    • EL NITRÓGENO ES EL ELEMENTO MÁS DISTINTIVO PRESENTE EN LAS PROTEÍNAS.
    • GENERALMENTE LAS PROTEÍNAS RICAS EN AMINOÁCIDOS BÁSICOS CONTIENEN MÁS NITRÓGENO.
    • SIN EMBARGO, EL CONTENIDO DE NITRÓGENO EN VARIAS PROTEÍNAS ALIMENTICIAS VARÍA DE 13.4 19.1% DEBIDO A LA VARIACIÓN EN LA COMPOSICIÓN DE AMINOÁCIDOS ESPECÍFICA DE LAS PROTEÍNAS.
  • CLASIFICACIÓN DE LAS PROTEÍNAS
    • COMPOSICIÓN
    • ESTRUCTURA
    • FUNCIÓN BIOLÓGICA
    • PROPIEDADES DE SOLUBILIDAD
  • COMPLICACIONES EN EL ANÁLISIS DE PROTEÍNAS CARACTERÍSTICAS FÍSICO QUÍMICAS DE LOS ALIMENTOS SIMILARES A LOS DE LAS PROTEÍNAS
  • FUENTES DE NITRÓGENO NO PROTÉICO
    • AMINOÁCIDOS LIBRES
    • PEQUEÑOS PÉPTIDOS
    • ÁCIDOS NUCLÉICOS
    • FOSFOLÍPIDOS
    • AZÚCARES AMINAS
    • PORFIRINA
    • ALGUNAS VITAMINAS
  • FUENTES DE NITRÓGENO NO PROTÉICO
    • ALCALOIDES
    • ÁCIDO ÚRICO
    • UREA
    • IONES DE AMONIO
  • OTROS MACROCOMPONENTES DE LOS ALIMENTOS QUE PUEDEN INTERFERIR CON EL ANÁLISIS DE PROTEÍNAS
    • LÍPIDOS
    • CARBOHIDRATOS
  • MÉTODOS DESARROLLADOS PARA MEDIR EL CONTENIDO PROTÉICO
    • FUNDAMENTOS:
    • DETERMINACIONES DE NITRÓGENO
    • ENLACES PEPTÍDICOS
    • ÁCIDOS AROMÁTICOS
    • ABSORTIVIDAD UV DE LAS PROTEÍNAS
    • GRUPOS AMINO LIBRES
    • PROPIEDADES DE DISPERSIÓN DE LA LUZ
    • CAPACIDAD DE ADHESIÓN DE COLORANTES
  • IMPORTANCIA DEL ANÁLISIS DE PROTEÍNAS
    • DETERMINACIÓN DE ACTIVIDAD BIOLÓGICA. EJEMPLO: PECTINASAS DURANTE LA MADURACIÓN DE FRUTOS.
    • INVESTIGACIÓN SOBRE PROPIEDADES FUNCIONALES. EJMPLO: GLIADINA Y GLUTENINAS PARA LA ELABORACIÓN DEL PAN.
    • ETIQUETAMIENTO NUTRICIONAL
  • NECDESIDAD DEL ANÁLISIS DE PROTEÍNAS
    • CONTENIDO PROTÉICO TOTAL
    • COMPOSICIÓN DE AMINOÁCIDOS
    • CONTENIDO DE ALGUNA PROTEÍNA PARTICULAR EN UNA MEZCLA
    • CONTENIDO PORTEÍCO DURANTE EL AISLAMIENTO Y PURIFICACIÓN DE UNA PROTEÍNA
    • NITRÓGENO NO PROTÉICO
    • VALOR NUTRITIVO DE UNA (DIGESTIBILIDAD, BALANCE PROTÉICO)
  • CONTENIDO PROTÉICO EN LOS ALIMENTOS
    • PRODUCTOS LÁCTEOS
    • LECHE ENTERA 3.5%
    • LECHE DESHIDRATADA DESGRASADA 35.9%
    • QUESO CHEDDAR 25%
    • HUEVOS 12.9%
  • CONTENIDO PROTÉICO EN LOS ALIMENTOS
    • CARNES
    • RES, BISTEAK, MAGRO CON GRASA 28.6%
    • PUERCO, MAGRO CON GRASA, DESHUESADO 17.1%
    • PECHUGA DE POLLO 27.3%
    • PESCADO
    • BACALAO COCINADO 28.5%
    • ATÚN EN ACEITE ENLATADO 24.2%
  • CONTENIDO PROTÉICO EN LOS ALIMENTOS
    • CEREALES
    • ARROZ, INTEGRAL, CRUDO 7.5%
    • ARROZ REFINADO, CRUDO 6.7%
    • HARINA DE TRIGO INTEGRAL 13.3%
    • HARINA DE MAÍZ 7.8%
    • SPAGHETTI, SECO 12.5%
    • ALMIDÓN DE MAÍZ 0.3%
  • CONTENIDO PROTÉICO EN LOS ALIMENTOS
    • FRUTAS Y VEGETALES
    • PAPA ENTERA, CRUDA 1.6%
    • ESPÁRRAGOS VERDES 2.5%
    • TAPIOCA 0.6%
    • FRIJOLES, SECOS, TODAS LAS VARIEDADES
    • 22.3%
    • SOYA SECA 34.1%
  • CONTENIDO PROTÉICO EN LOS ALIMENTOS
    • FRUTAS Y SEMILLAS
    • MANZANA ENTERA, CRUDA 0.2%
    • ALMENDRAS ENTERAS 18.6%
  • MÉTODOS DE DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS
    • MÉTODO DE KJELDAHL
    • MÉTODO DE BIURET
    • MÉTODO DE LOWRY
    • MÉTODO DEL ÁCIDO BICINCONÍNICO (BCA)
    • MÉTODO DE ABSORCIÓN UV A 280nm
    • MÉTODO DE ADHESIÓN DE COLORANTE
    • MÉTODO DE BRADFORD
    • MÉTODO DE LA NINHIDRINA
    • MÉTODO TURBIDIMÉTRICO
  • MÉTODO DE KJELDAHL (JOHANN KJELDAHL, 1883)
    • DIGESTIÓN CON H 2 SO 4 CON LA ADICIÓN DE PERMANGANATO DE POTASIO PARA COMPLETAR LA OXIDACIÓN Y CONVERSIÓN DEL NITRÓGENO A SULFATO DE AMONIO.
    • NEUTRANLIZACIÓN DE LA DIGESTA DILUIDA, SEGUIDA DE UNA DESTILACIÓN EN UN VOLUMEN CONOCIDO DE ÁCIDO ESTÁNDAR CON UN CONTENIDO DE IODURO DE POTASIO E YODATO.
    • TITULACIÓN DEL YODO LIBERADO CON TIOSULFATO DE SODIO ESTÁNDAR
  • MODIFICACIONES PARA EL MEJORAMIENTO DEL MÉTODO DE KJELDAHL
    • SE HAN AÑADIDO CATALIZADORES COMO: Hg, Cu, Se, Ti AL H 2 SO 4 PARA LOGRAR UNA DIGESTIÓN COMPLETA.
    • EL DIÓXIDO DE SELENIO Y EL SULFATO DE COBRE EN PROPORCIÓN 3:1 SON MUY EFECTIVOS EN LA DIGESTIÓN.
  • MODIFICACIONES PARA EL MEJORAMIENTO DEL MÉTODO DE KJELDAHL
    • EL SULFATO DE POTASIO SE UTILIZA PARA AUMENTAR EL PUNTO DE EBULLICIÓN DEL ÁCIDO SULFÚRICO PARA ACELERAR LA DIGESTIÓN.
    • EL SULFURO O TIOSULFATO DE SODIO SE AÑADEN A LA DIGESTA DILUIDA PARA AYUDAR A LIBERAR EL NITRÓGENO DEL Hg EL CUAL TIENDE A ADHERIR AMONIO.
  • MODIFICACIONES PARA EL MEJORAMIENTO DEL MÉTODO DE KJELDAHL
    • EL AMONIACO SE DESTILA DIRECTAMENTE EN UNA SOLUCIÓN DE ÁCIDO BÓRICO Y ES SEGUIDO DE UNA TITULACIÓN CON UN ÁCIDO ESTÁNDAR.
    • SE UTILIZAN LA COLORIMETRÍA Y LA CROMATOGRAFÍA IÓNICA PARA DETERMINAR EL CONTENIDO DE NITRÓGENO POSTERIOR A LA DIGESTIÓN.
  • PROCEDIMIENTO GENERAL Y REACCIONES
    • DIGESTIÓN
    • EL SULFATO DE AMONIO NO VOLÁTIL SE FORMA DE LA REACCIÓN DEL NITRÓGENO Y EL ÁCIDO SULFÚRICO.
    • DURANTE LA DIGESTIÓN SE LIBERA EL NITRÓGENO PROTÉICO PARA FORMAR IONES DE AMONIO.
    • EL ÁCIDO SULFÚRICO OXIDA LA MATERIA ORGÁNICA Y SE COMBINA CON EL AMONIO FORMADO.
  • DIGESTIÓN
    • LOS ELEMENTOS CARBONO E HIDRÓGENO SE CONVIERTEN EN DIÓXIDO DE CARBONO Y AGUA
    PROTEÍNA Ácido Sulfúrico Calor, catalizador (NH 4 ) 2 SO 4
  • NEUTRALIZACIÓN Y DESTILACIÓN
    • LA MUESTRA DIGERIDA SE DILUYE CON AGUA.
    • SE AÑADE EL ÁLCALI QUE CONTIENE TIOSULFATO DE SODIO PARA NEUTRALIZAR AL ÁCIDO SULFÚRICO.
    • EL AMONÍACO FORMADO SE DESTILA EN UNA SOLUCIÓN DE ÁCIDO BÓRICO QUE CONTIENE LOS INDICADORES AZÚL DE METILENO Y ROJO DE METILO.
  • REACCIONES DE LA NEUTRALIZACIÓN Y LA DESTILACIÓN
    • (NH) 2 SO 4 + 2NaOH -> 2NH 3 +Na 2 SO 4 +2H 2 O
    • NH 3 + H 3 BO 3 -> NH 4 + H 2 BO 3 -
    • (ácido bórico) (ión borato)
  • REACCIONES DE LA TITULACIÓN
    • EL ANIÓN BORATO (PROPORCIONAL A LA CANTIDAD DE NITRÓGENO) SE TITULA CON HCl ESTANDARIZADO:
    • H 2 BO 3 - + H + -> H 3 BO 3
  • CÁLCULOS
    • MOLES DE HCl = MOLES DE NH 3 = MOLES DE NITRÓGENO EN LA MUESTRA
  • FUNCIÓN DEL BLANCO EN LA DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS
    • SE DEBE UTILIZAR UN BLANCO CON REACTIVOS PARA SUSTRAER EL NITRÓGENO REACTIVO DEL NITRÓGENO DE LA MUESTRA.
    • N HCl = NORMALIDAD DEL HCl EN MOLES /1000 mL
    • VOL. ÁCIDO CORREGIDO = mL DE ÁCIDO ESTÁNDAR PARA LA MUESTRA) – (mL DE ÁCIDO ESTÁNDAR PARA EL BLANCO)
    • 14 = PESO ATÓMICO DEL NITRÓGENO
    %N = N HCl X VOLUMEN DE ÁCIDCORR. g. DE MUESTRA X 14g N 2 X 100 MOL
  • FACTOR
    • SE UTILIZA UN FACTOR DE CONVERSIÓN DE % DE N 2 A % DE PROTEÍNA CRUDA.
    • LA MAYORÍA DE LAS PROTEÍNAS CONTIENEN 16% DE N 2
    • EL FACTOR DE CONVERSIÓN ES:
    • 6.25 (100/16 = 6.25)
    • %N 2 X 6.25 = %PROTEÍNA Ó
    • %N 2 = %PROTEÍNA
    • 0.16
  • FACTORES DE CONVERSIÓN PARA ALGUNOS ALIMENTOS
    • ALIMENTO %N 2 PROTEÍNA FACTOR
    • HUEVO O 16 6.25
    • CARNE, MAÍZ
    • LECHE 15.7 6.38
    • TRIGO 18 5.7
    • SOYA 17.51 5.71
    • AVENA 17.15 5.83
  • PROCEDIMIENTOS ALTERNATIVOS DE DESTILACIÓN Y TITULACIÓN
    • NESSLERIZACIÓN
    • NH 4 OH + 2HGI 2 + 2KI + 3KOH -> NH 4 Hg 2 I +
    • 7KI + 4H 2 O ( rojo-naranja, 440nm)
    • RÁPIDO Y FÁCIL PERO EL IODURO DIMERCÚRICO DE AMONIO ES COLOIDE Y EL COLOR ES INESTABLE
  • PROCEDIMIENTOS ALTERNATIVOS DE DESTILACIÓN Y TITULACIÓN
    • MEDICIÓN DEL pH POSTERIOR A LA DESTILACIÓN EN UN VOLUMEN CONOCIDO DE ÁCIDO BÓRICO
    • MEDICIÓN DIRECTA DEL AMONÍACO, MEDIANTE EL MÉTODO DE CROMATOGRAFÍA IÓNICA
  • VENTAJAS DEL MÉTODO DE KJELDAHL
    • APLICABLE A TODO TIPO DE ALIMENTOS
    • RELATIVAMENTE SIMPLE
    • BARATO
    • PRECISO
    • ES EL MÉTODO OFICIAL PARA MEDIR EL CONTENIDO DE PROTEÍNA CRUDA
  • DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE KJELDAHL
    • MIDE EL NITRÓGENO ORGÁNICO TOTAL, NO SÓLO EL NITRÓGENO PROTÉICO
    • CONSUME MUCHO TIEMPO (AL MENOS 2 HORAS PARA COMPLETARSE)
    • PRECISIÓN MÁS POBRE QUE EL MÉTODO DE BIURET
    • USA REACTIVOS CORROSIVOS
  • DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS POR EL MÉTODO DE BIURET
    • FUNDAMENTO
    • AL FORMAR COMPLEJOS LOS IONES CÚPRICOS CON LOS ENLACES PEPTÍDICOS DE LAS PROTEÍNAS SE PRODUCE UN COLOR VIOLETA-MORADO BAJO CONDICIONES ALCALINAS.
    • LA ABSORBANCIA DEL COLOR PRODUCIDO ES LEÍDO A 540nm.
    • LA INTENSIDAD DEL COLOR (ABSORBANCIA) ES PROPORCIONAL AL CONTENIDO PROTÉICO DE LA MUESTRA.
  • PROCEDIMIENTO PARA EL MÉTODO DE BIURET
    • 5 mL DE REACTIVO DE BIURET SE MEZCLA CON 1mL DE SOLUCIÓN PROTÉICA (1-10 mg DE PROTEÍNA/mL).
    • EL REACTIVO INCLUYE SULFATO DE COBRE, NaOH, Y TARTRATO DE SODIO Y POTASIO EL CUAL SE UTILIZA PARA ESTABILIZAR EL IÓN COBRE EN LA SOLUCIÓN ALCALINA
  • PROCEDIMIENTO PARA EL MÉTODO DE BIURET
    • DESPUÉS DE REPOSO A TEMPERATURA AMBIENTE DURANTE 15 A 30 MINUTOS, SE LEE LA ABSORBANCIA A 540nm CONTRA UN BLANCO CON SÓLO REACTIVO.
    • SI LA REACCIÓN NO ES CLARA DEBE CENTRIFUGARSE LA MUESTRA PREVIO A LA LECTURA DE LA ABSORBANCIA
  • PROCEDIMIENTO PARA EL MÉTODO DE BIURET
    • SE DEBE ELABORAR UNA CURVA ESTÁNDAR DE CONCENTRACIÓN VS ABSORBANCIA UTILIZANDO ALBÚMINA DE SUERO DE BOVINO (BSA) PARA COMPARACIÓN CON LA MUESTRA BAJO ESTUDIO
  • VENTAJAS DEL MÉTODO DE BIURET
    • MENOS CARO QUE EL MÉTODO DE KJELDAHL
    • RÁPIDO (SE PUEDE COMPLETAR EN MENOS DE 30 MINUTOS)
    • ES EL MÉTODO MÁS SIMPLE DE ANÁLISIS DE PROTEÍNAS
    • NO ES FRECUENTE ENCONTRAR DERIVACIONES DE COLOR
    • POCAS SUBSTANCIAS NO PROTÉICAS INTERFIEREN CON LA REACCIÓN DE BIURET
    • NO DETECTA N 2 DE FUENTES NO PROTÉICAS O NO PEPTÍDICAS
  • DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE BIURET
    • NO ES MUY SENSIBLE COMPARADO CON EL MÉTODO DE LOWRY
    • REQUIERE DE AL MENOS 2 A 4 mg DE PROTEÍNA POR PRUEBA
    • LAS CONCENTRACIONES ALTAS DE SALES DE AMONIO INTERFIEREN CON LA REACCIÓN
    • PUEDE OCURRIR OPALESCENCIA EN LA SOLUCIÓN FINAL SI ESTÁN PRESENTES ALTAS CONCENTRACIONES DE LÍPIDOS O CARBOHIDRATOS
    • DEBE ESTANDARIZARSE EL COLOR MEDIANTE CANTIDADES DE PROTEÍNA CONOCIDAS
  • MÉTODO DE LOWRY
    • FUNDAMENTO
    • COMBINA LA REACCIÓN DE BIURET CON LA REDUCCIÓN DEL REACTIVO DE FENOL FOLIN-CIOCALTEAU (ÁCIDO FOSFOMOLÍBDICO-FOSFOTÚNGSTICO) POR LOS RESIDUOS DE TIROSINA Y TRIPTOFANO DE LAS PROTEÍNAS. EL COLOR AZULOSO DESARROLLADO ES LEÍDO A 750nm (ALTA SENSIBILIDAD PARA UNA CONCENTRACIÓN PROTÉICA BAJA) O A 500nm (ALTA SENSIBILIDAD PARA UNA CONCENTRACIÓN PROTÉICA ALTA)
  • VENTAJAS DEL MÉTODO DE LOWRY
    • MUY SENSIBLE
    • MENOS AFECTADO POR LA TURBIDEZ DE LA MUESTRA
    • MÁS ESPECÍFICO QUE LA MAYORÍA DE LOS OTROS MÉTODOS
    • RELATIVAMENTE SIMPLE
    • SE PUEDE COMPLETAR EN 1 A 1.5 HORAS
  • DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE LOWRY
    • EL COLOR VARÍA CON DIFERENTES PROTEÍNAS (MÁS QUE EL MÉTODO DE BIURET)
    • EL COLOR NO ES ESTRICTAMENTE PROPORCIONAL A LA CONCENTRACIÓN DE PROTEÍNAS
    • LA SACAROSA, LÍPIDOS, BUFFERS FOSFATO, MONOSACÁRIDOS Y HEXOAMINAS INTERFIEREN CON LA REACCIÓN
    • LAS ALTAS CONCENTRACIONES DE AZÚCARES REDUCTORES, SULFATO DE AMONIO Y COMPUESTOS CON SULFHIDRILO INTERFIEREN CON LA REACCIÓN
  • MÉTODO DEL ÁCIDO BICINCONÍNICO (BCA)
    • FUNDAMENTO
    • SE BASA EN EL PRINCIPIO DE QUE LAS PROTEÍNAS REDUCEN LOS IONES CÚPRICOS A IONES CUPROSOS BAJO CONDICIONES ALCALINAS. LOS IONES CUPROSOS REACCIONAN CON EL BCA (VERDOSO) PARA FORMAR UN COLOR MORADO. EL COLOR FORMADO ES PROPORCIONAL AL CONTENIDO PROTÉICO DE LA MUESTRA
  • VENTAJAS DEL MÉTODO DEL ÁCIDO BICINCONÍNICO (BCA)
    • SENSIBILIDAD COMPARABLE A LA DEL MÉTODO DE LOWRY (0.5mg a 10mg)
    • LA MEZCLA EN UN PASO ES MÁS FÁCIL QUE EN EL MÉTODO DE LOWRY
    • EL REACTIVO ES MÁS ESTABLE QUE EL REACTIVO DE LOWRY
    • LAS SALES DE BUFFER Y DETERGENTE NO IÓNICO NO INTERFIEREN CON LA REACCIÓN
    • LAS CONCENTRACIONES DEL MEDIO DE REACTIVOS DESNATURALIZANTES NO INTERFIEREN (GUANIDINA 4M-HCl O UREA 3M)
  • DESVENTAJAS DEL MÉTODO DEL ÁCIDO BICINCONÍNICO (BCA)
    • EL COLOR NO ES ESTABLE CON EL TIEMPO. SE NECESITA CONTROLAR CUIDADOSAMENTE EL TIEMPO ENTRE EL ANÁLISIS Y LA LECTURA EN ABSORBANCIA.
    • LOS AZÚCARES REDUCTORES INTERFIEREN CON LA REACCIÓN.
    • ALTAS CONCENTRACIONES DE SULFATO DE AMONIO INTERFIEREN CON LA REACCIÓN.
    • LA RESPUESTA EN LA ABSORBANCIA NO ES LINEAL
  • MÉTODO DE ABSORCIÓN EN ULTRAVIOLETA A 280nm
    • FUNDAMENTO
    • LAS PROTEÍNAS MUESTRAN UN FUERTE GRADO DE ABSORCIÓN A 280nm EN UV, PRINCIPALMENTE DEBIDO PRINCIPALMENTE A LOS RESIDUOS DE TRIPTOFANO Y LA TIROSINA DE LAS PROTEÍNAS. YA QUE LAS CONCENTRACIONES DE ESTOS AMINOÁCIDOS EN LAS PROTEÍNAS ES FRANCAMENTE CONSTANTE SE PUEDE UTILIZAR LA ABSORBANCIA A 280nm PARA ESTIMAR LA CONCENTRACIÓN DE PROTEÍNAS USANDO LA LEY DE BEER
  • MÉTODO DE ABSORCIÓN EN ULTRAVIOLETA A 280nm
    • FUNDAMENTO
    • DADO QUE CADA PROTEÍNA TIENE UNA COMPOASICIÓN ÚNICA DE AMINOÁCIDOS AROMÁTICOS, EL COEFICIENTE DE EXTINCIÓN (E 280 ) O SU ABSORTIVIDAD MOLAR (E m ) DEBEN SER DETERMINADOS PARA PROTEÍNAS INDIVIDUALES PARA LA ESTIMACIÓN DEL CONTENIDO PROTÉICO
  • VENTAJAS DEL MÉTODO DE ABSORCIÓN EN UV (280nm)
    • MÉTODO RÁPIDO Y RELATIVAMENTE SENSIBLE (VARIAS VECES MÁS SENSIBLE QUE EL MÉTODO DE BIURET)
    • NO EXISTE INTERFERENCIA DEL SULFATO DE AMONIO Y OTRAS SALES BUFFER
    • MÉTODO NO DESTRUCTIVO
    • UTILIZADO EN DETECCIÓN POST-COLUMNA DE LAS PROTEÍNAS
  • DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE ABSORCIÓN EN EL UV (280nm)
    • LOS ÁCIDOS NUCLÉICOS TAMBIÉN ABSORBEN EN LA REGIÓN DE 280nm
    • EL CONTENIDO DE AMINOÁCIDOS AROMÁTICOS DIFIERE CONSIDERABLEMENTE EN VARIAS PROTEÍNAS.
    • LA SOLUCIÓN DEBE SER CLARA E INCOLORA. LA TURBIDEZ PUEDE PRODUCIR RESULTADOS ERRÁTICOS
    • SE REQUIERE UN SISTEMA RELATIVAMENTE PURO PARA UTILIZAR ESTE MÉTODO
  • MÉTODOS DE DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS POR ADHESIÓN DE UN COLORANTE
    • ADHESIÓN DE COLORANTE ANIÓNICO
    • MÉTODO DE BRADFORD
  • ADHESIÓN DE COLORANTE ANIÓNICO
    • FUNDAMENTO
    • LA MUESTRA PROTÉICA SE MEZCLA CON UNA CANTIDAD EXCESIVA CONOCIDA DE UN COLORANTE ANIÓNICO EN UNA SOLUCIÓN BUFFER.
    • LAS PROTEÍNAS SE UNEN AL COLORANTE PARA FORMAR UN COMPLEJO INSOLUBLE.
  • ADHESIÓN DE COLORANTE ANIÓNICO
    • FUNDAMENTO
    • SE MIDE EL COLORANTE NO ADHERIDO, SOLUBLE POSTERIOR A LA EQUILIBRACIÓN DE LA REACCIÓN Y LA REMOCIÓN DEL COMPLEJO INSOLUBLE POR CENTRIFUGACIÓN Y FILTRACIÓN.
    • EL COLORANTE NO ADHERIDO ESTÁ INVERSAMENTE RELACIONADO AL CONTENIDO PROTÉICO DE LA MUESTRA
  • ADHESIÓN DE COLORANTE ANIÓNICO
    • FUNDAMENTO
    • PROTEÍNA + EXCESO DE COLORANTE ->
    • COMPLEJO PROTEÍNA-COLORANTE INSOLUBLE + COLORANTE NO ADHERIDO SOLUBLE
  • COLORANTES UTILIZADOS EN ESTE MÉTODO
    • ÁCIDO SULFÓNICO ANIÓNICO
    • NARANJA ÁCIDO 12
    • NARANJA G
    • NEGRO AMIDO 10B
    • UNEN GRUPOS CATIÓNICOS DE LOS RESIDUOS BÁSICOS DE AMINOÁCIDOS (IMIDASOL DE LA HISTIDINA, GUANIDINA DE LA ARGININA Y EL GRUPO ε -AMINO DE LA LISINA) Y EL GRUPO LIBRE TERMINAL AMINO DE LAS PROTEÍNAS.
  • VENTAJAS DEL MÉTODO DE ADHESIÓN DE COLORANTE ANIÓNICO
    • MÉTODO RÁPIDO (15 MINUTOS O MENOS)
    • BARATO
    • RELATIVAMENTE EXACTO PARA EL ANÁLISIS DE PROTEÍNAS EN ALIMENTOS
    • PUEDE UTILIZARSE PARA ESTIMAR LOS CAMBIOS EN EL CONTENIDO DE LISINA DISPONIBLE DE LOS CEREALES DURANTE SU PROCESAMIENTO.
  • VENTAJAS DEL MÉTODO DE ADHESIÓN DE COLORANTE ANIÓNICO
    • NO UTILIZA REACTIVOS CORROSIVOS
    • NO MIDE NITRÓGENO NO PROTÉICO
    • MÁS PRECISO QUE EL MÉTODO KJELDAHL
  • DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE LA ADHESIÓN DEL COLORANTE ANIÓNICO
    • LAS PROTEÍNAS DIFIEREN EN SU CONTENIDO DE AMINOÁCIDOS BÁSICOS DIFIEREN EN SU CAPACIDAD DE ADHESIÓN DEL COLORANTE
    • SE NECESITA ELABORAR CURVA DE CALIBRACIÓN
    • MUCHOS COMPONENTES NO PROTÉICOS TAMBIÉN SE PUEDEN ADHERIR AL COLORANTE (ALMIDÒN), METALES (Ca O P) Y CAUSAR ERRORES EN LOS RESULTADOS
  • MÉTODO DE BRADFORD
    • FUNDAMENTO
    • EL AZÚL BRILLANTE G-250 COOMASSIE SE ADHIERE A LA PROTEÍNA, EL COLORANTE SE TORNA DE ROJIZO A AZULADO YE L MÁXIMO DE ABSORCIÓN DEL COLORANTE CAMBIA DE 465 A 595nm. EL CAMBIO EN LA ABSORBANCIA A 595nm ES PROPORCIONAL A LA CONCENTRACIÓN DE PROTEÍNA EN LA MUESTRA.
  • VENTAJAS DEL MÉTODO DE BRADFORD
    • MÉTODO RÁPIDO (LA REACCIÓN SE PUEDE COMPLETAR EN 2 MINUTOS)
    • REPRODUCIBLE
    • SENSIBLE (MUCHO MÁS QUE EL MÉTODO DE LOWRY)
    • NO EXISTE INTERFERENCIA DE CATIONES COMO K + , Na + , Y Mg +
  • VENTAJAS DEL MÉTODO DE BRADFORD
    • NO EXISTE INTERFERENCIA DEL SULFATO DE AMONIO
    • NO EXISTE INTERFERENCIA DE LOS POLIFENOLES NI CARBOHIDRATOS COMO LA SACAROSA
    • MIDE PROTEÍNA O PÉPTIDOS CON UNA MASA MOLECULAR APROXIMADAMENTE IGUAL O MAYOR DE 4 000 DALTONS
  • DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE BRADFORD
    • EL COMPLEJO PROTEÍNA-COLORANTE FORMADO PUEDE UNIRSE A LAS CELDAS DE CUARZO
    • EL COLOR VARÍA CON DIFERENTES TIPOS DE PROTEÍNAS.
    • LA PROTEÍNA ESTÁNDAR DEBE SELECCIONARSE CON MUCHO CUIDADO
    • INTERFERENCIA CON DETERGENTES.
  • MÉTODO DE LA NINHIDRINA
    • FUNDAMENTO
    • AL SER HERVIDOS EN UN BUFFER A UN pH DE 5.5 EN PRESENCIA DE NINHIDRINA E HIDRINDANTINA, LOS AMINOÁCIDOS, AMONÍACO, Y LOS GRUPOS AMINO PRIMARIOS, ORIGINAN UN COLOR MORADO RUHEMANN
  • VENTAJA DEL MÉTODO DE LA NINHIDRINA
    • MÉTODO RELATIVAMENTE RÁPIDO SI SE COMPARA CON EL MÉTODO DE KJELDAHL
  • DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE LA NINHIDRINA
    • LA PRESENCIA DE PEQUEÑAS CANTIDADES DE AMINOÁCIDOS, PÉPTIDOS, AMINAS PRIMARIAS, Y AMONÍACO OCASIONA UNA SOBREESTIMACIÓN DEL CONTENIDO PROTÉICO
    • BAJA PRECISIÓN
    • EL COLOR VARÍA CON LA DIFERENTE COMPOSICIÓN DE AMINOÁCIDOS
    • SE NECESITA ELABORAR UNA CURVA ESTÁNDAR EN CADA ANÁLISIS
  •