ANÁLISIS DE LAS PROTEÍNAS CONSIDERACIONES GENERALES
PROTEÍNAS <ul><li>SON COMPONENTES ABUNDANTES EN TODAS LAS CÉLULAS. </li></ul><ul><li>CASI TODAS (EXCEPTO LAS DE ALMACENAMI...
COMPOSICIÓN DE LAS PROTEÍNAS <ul><li>ESTÁN CONSTITUÍDAS POR: HIDRÓGENO, CARBONO, NITRÓGENO, OXÍGENO Y AZÚFRE. </li></ul><u...
COMPOSICIÓN DE LAS PROTEÍNAS <ul><li>EL NITRÓGENO ES EL ELEMENTO MÁS DISTINTIVO PRESENTE EN LAS PROTEÍNAS. </li></ul><ul><...
CLASIFICACIÓN DE LAS PROTEÍNAS <ul><li>COMPOSICIÓN </li></ul><ul><li>ESTRUCTURA </li></ul><ul><li>FUNCIÓN BIOLÓGICA </li><...
COMPLICACIONES EN EL ANÁLISIS DE PROTEÍNAS CARACTERÍSTICAS FÍSICO QUÍMICAS DE LOS ALIMENTOS SIMILARES A LOS DE LAS PROTEÍNAS
FUENTES DE NITRÓGENO NO PROTÉICO <ul><li>AMINOÁCIDOS LIBRES </li></ul><ul><li>PEQUEÑOS PÉPTIDOS </li></ul><ul><li>ÁCIDOS N...
FUENTES DE NITRÓGENO NO PROTÉICO <ul><li>ALCALOIDES </li></ul><ul><li>ÁCIDO ÚRICO </li></ul><ul><li>UREA </li></ul><ul><li...
OTROS MACROCOMPONENTES  DE LOS ALIMENTOS QUE PUEDEN INTERFERIR CON EL ANÁLISIS DE PROTEÍNAS <ul><li>LÍPIDOS </li></ul><ul>...
MÉTODOS DESARROLLADOS PARA MEDIR EL CONTENIDO PROTÉICO <ul><li>FUNDAMENTOS: </li></ul><ul><li>DETERMINACIONES DE NITRÓGENO...
IMPORTANCIA DEL ANÁLISIS DE PROTEÍNAS <ul><li>DETERMINACIÓN DE ACTIVIDAD BIOLÓGICA. EJEMPLO: PECTINASAS DURANTE LA MADURAC...
NECDESIDAD DEL ANÁLISIS DE PROTEÍNAS <ul><li>CONTENIDO PROTÉICO TOTAL </li></ul><ul><li>COMPOSICIÓN DE AMINOÁCIDOS </li></...
CONTENIDO PROTÉICO EN LOS ALIMENTOS <ul><li>PRODUCTOS LÁCTEOS </li></ul><ul><li>LECHE ENTERA  3.5% </li></ul><ul><li>LECHE...
CONTENIDO PROTÉICO EN LOS  ALIMENTOS <ul><li>CARNES </li></ul><ul><li>RES, BISTEAK, MAGRO CON GRASA  28.6% </li></ul><ul><...
CONTENIDO PROTÉICO EN  LOS ALIMENTOS <ul><li>CEREALES </li></ul><ul><li>ARROZ, INTEGRAL, CRUDO  7.5% </li></ul><ul><li>ARR...
CONTENIDO PROTÉICO EN LOS ALIMENTOS <ul><li>FRUTAS Y VEGETALES </li></ul><ul><li>PAPA ENTERA, CRUDA  1.6% </li></ul><ul><l...
CONTENIDO PROTÉICO EN LOS ALIMENTOS <ul><li>FRUTAS Y SEMILLAS </li></ul><ul><li>MANZANA ENTERA, CRUDA  0.2% </li></ul><ul>...
MÉTODOS DE DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS <ul><li>MÉTODO DE KJELDAHL </li></ul><ul><li>MÉTODO DE BIURET </li></ul><ul><li>MÉTO...
MÉTODO DE KJELDAHL (JOHANN KJELDAHL, 1883) <ul><li>DIGESTIÓN  CON H 2 SO 4  CON LA ADICIÓN DE PERMANGANATO DE POTASIO PARA...
MODIFICACIONES PARA EL MEJORAMIENTO DEL MÉTODO DE KJELDAHL <ul><li>SE HAN AÑADIDO CATALIZADORES COMO: Hg, Cu, Se, Ti AL H ...
MODIFICACIONES PARA EL MEJORAMIENTO DEL MÉTODO DE KJELDAHL <ul><li>EL SULFATO DE POTASIO SE UTILIZA PARA AUMENTAR EL PUNTO...
MODIFICACIONES PARA EL MEJORAMIENTO DEL MÉTODO DE KJELDAHL <ul><li>EL AMONIACO SE DESTILA DIRECTAMENTE EN UNA SOLUCIÓN DE ...
PROCEDIMIENTO GENERAL Y REACCIONES <ul><li>DIGESTIÓN </li></ul><ul><li>EL SULFATO DE AMONIO NO VOLÁTIL SE FORMA DE LA REAC...
DIGESTIÓN <ul><li>LOS ELEMENTOS CARBONO E HIDRÓGENO SE CONVIERTEN EN DIÓXIDO DE CARBONO Y AGUA </li></ul>PROTEÍNA Ácido Su...
NEUTRALIZACIÓN Y  DESTILACIÓN <ul><li>LA MUESTRA DIGERIDA SE DILUYE CON AGUA. </li></ul><ul><li>SE AÑADE EL ÁLCALI QUE CON...
REACCIONES DE LA NEUTRALIZACIÓN Y LA DESTILACIÓN <ul><li>(NH) 2 SO 4 + 2NaOH  -> 2NH 3 +Na 2 SO 4 +2H 2 O </li></ul><ul><l...
REACCIONES DE LA TITULACIÓN <ul><li>EL ANIÓN BORATO (PROPORCIONAL A LA CANTIDAD DE NITRÓGENO) SE TITULA CON HCl ESTANDARIZ...
CÁLCULOS <ul><li>MOLES DE HCl = MOLES DE NH 3  = MOLES DE NITRÓGENO EN LA MUESTRA </li></ul>
FUNCIÓN DEL BLANCO EN LA DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS <ul><li>SE DEBE UTILIZAR UN BLANCO CON REACTIVOS PARA SUSTRAER EL NITR...
<ul><li>N HCl = NORMALIDAD DEL HCl  EN MOLES /1000 mL </li></ul><ul><li>VOL. ÁCIDO CORREGIDO = mL DE ÁCIDO ESTÁNDAR PARA L...
FACTOR <ul><li>SE UTILIZA UN FACTOR DE CONVERSIÓN DE % DE N 2  A % DE PROTEÍNA CRUDA. </li></ul><ul><li>LA MAYORÍA DE LAS ...
FACTORES DE CONVERSIÓN PARA ALGUNOS ALIMENTOS <ul><li>ALIMENTO  %N 2 PROTEÍNA  FACTOR </li></ul><ul><li>HUEVO O  16  6.25 ...
PROCEDIMIENTOS ALTERNATIVOS DE DESTILACIÓN Y TITULACIÓN <ul><li>NESSLERIZACIÓN </li></ul><ul><li>NH 4 OH + 2HGI 2 + 2KI + ...
PROCEDIMIENTOS ALTERNATIVOS DE DESTILACIÓN Y TITULACIÓN <ul><li>MEDICIÓN DEL pH POSTERIOR A LA DESTILACIÓN EN UN VOLUMEN C...
VENTAJAS DEL MÉTODO DE  KJELDAHL <ul><li>APLICABLE A TODO TIPO DE ALIMENTOS </li></ul><ul><li>RELATIVAMENTE SIMPLE </li></...
DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE KJELDAHL <ul><li>MIDE EL NITRÓGENO ORGÁNICO TOTAL, NO SÓLO EL NITRÓGENO PROTÉICO </li></ul><ul><...
DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS  POR EL MÉTODO DE BIURET <ul><li>FUNDAMENTO </li></ul><ul><li>AL FORMAR COMPLEJOS LOS IONES CÚP...
PROCEDIMIENTO PARA EL MÉTODO DE BIURET <ul><li>5 mL DE REACTIVO DE BIURET SE MEZCLA CON 1mL DE SOLUCIÓN PROTÉICA  (1-10 mg...
PROCEDIMIENTO PARA EL MÉTODO DE BIURET <ul><li>DESPUÉS DE REPOSO A TEMPERATURA AMBIENTE DURANTE 15 A 30 MINUTOS, SE LEE LA...
PROCEDIMIENTO PARA EL MÉTODO DE BIURET <ul><li>SE DEBE ELABORAR UNA CURVA ESTÁNDAR DE CONCENTRACIÓN VS ABSORBANCIA  UTILIZ...
VENTAJAS DEL MÉTODO DE  BIURET <ul><li>MENOS CARO QUE EL MÉTODO DE KJELDAHL </li></ul><ul><li>RÁPIDO (SE PUEDE COMPLETAR E...
DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE BIURET <ul><li>NO ES MUY SENSIBLE COMPARADO CON EL MÉTODO DE LOWRY </li></ul><ul><li>REQUIERE DE...
MÉTODO DE LOWRY <ul><li>FUNDAMENTO </li></ul><ul><li>COMBINA LA REACCIÓN DE BIURET CON LA REDUCCIÓN DEL REACTIVO DE FENOL ...
VENTAJAS DEL MÉTODO DE  LOWRY <ul><li>MUY SENSIBLE </li></ul><ul><li>MENOS AFECTADO POR LA TURBIDEZ DE LA MUESTRA  </li></...
DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE LOWRY <ul><li>EL COLOR VARÍA CON DIFERENTES PROTEÍNAS (MÁS QUE EL MÉTODO DE BIURET) </li></ul><u...
MÉTODO DEL ÁCIDO  BICINCONÍNICO (BCA) <ul><li>FUNDAMENTO </li></ul><ul><li>SE BASA EN EL PRINCIPIO DE QUE LAS PROTEÍNAS RE...
VENTAJAS DEL MÉTODO DEL  ÁCIDO BICINCONÍNICO (BCA) <ul><li>SENSIBILIDAD COMPARABLE A LA DEL MÉTODO DE LOWRY (0.5mg a 10mg)...
DESVENTAJAS DEL MÉTODO DEL ÁCIDO BICINCONÍNICO (BCA) <ul><li>EL COLOR NO ES ESTABLE CON EL TIEMPO. SE NECESITA CONTROLAR C...
MÉTODO DE ABSORCIÓN EN ULTRAVIOLETA  A 280nm <ul><li>FUNDAMENTO </li></ul><ul><li>LAS PROTEÍNAS MUESTRAN UN FUERTE GRADO D...
MÉTODO DE ABSORCIÓN EN ULTRAVIOLETA  A 280nm <ul><li>FUNDAMENTO </li></ul><ul><li>DADO QUE CADA PROTEÍNA TIENE UNA COMPOAS...
VENTAJAS DEL MÉTODO DE ABSORCIÓN EN UV (280nm) <ul><li>MÉTODO RÁPIDO Y RELATIVAMENTE SENSIBLE (VARIAS VECES MÁS SENSIBLE Q...
DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE ABSORCIÓN EN EL UV (280nm) <ul><li>LOS ÁCIDOS NUCLÉICOS TAMBIÉN ABSORBEN EN LA REGIÓN DE 280nm  ...
MÉTODOS DE DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS POR ADHESIÓN DE UN COLORANTE <ul><li>ADHESIÓN DE COLORANTE ANIÓNICO </li></ul><ul><l...
ADHESIÓN DE COLORANTE ANIÓNICO <ul><li>FUNDAMENTO </li></ul><ul><li>LA MUESTRA PROTÉICA SE MEZCLA CON UNA CANTIDAD EXCESIV...
ADHESIÓN DE COLORANTE ANIÓNICO <ul><li>FUNDAMENTO </li></ul><ul><li>SE MIDE EL COLORANTE NO ADHERIDO, SOLUBLE POSTERIOR A ...
ADHESIÓN DE COLORANTE ANIÓNICO <ul><li>FUNDAMENTO </li></ul><ul><li>PROTEÍNA + EXCESO DE COLORANTE  -> </li></ul><ul><li>C...
COLORANTES UTILIZADOS EN ESTE MÉTODO <ul><li>ÁCIDO SULFÓNICO ANIÓNICO </li></ul><ul><li>NARANJA ÁCIDO 12 </li></ul><ul><li...
VENTAJAS DEL MÉTODO DE ADHESIÓN DE COLORANTE ANIÓNICO <ul><li>MÉTODO RÁPIDO (15 MINUTOS O MENOS) </li></ul><ul><li>BARATO ...
VENTAJAS DEL MÉTODO DE ADHESIÓN DE COLORANTE ANIÓNICO <ul><li>NO UTILIZA REACTIVOS CORROSIVOS </li></ul><ul><li>NO MIDE NI...
DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE LA ADHESIÓN DEL COLORANTE ANIÓNICO <ul><li>LAS PROTEÍNAS DIFIEREN EN SU CONTENIDO DE AMINOÁCIDOS...
MÉTODO DE BRADFORD <ul><li>FUNDAMENTO </li></ul><ul><li>EL AZÚL BRILLANTE G-250 COOMASSIE SE ADHIERE A LA PROTEÍNA, EL COL...
VENTAJAS DEL MÉTODO DE BRADFORD <ul><li>MÉTODO RÁPIDO (LA REACCIÓN SE PUEDE COMPLETAR EN 2 MINUTOS) </li></ul><ul><li>REPR...
VENTAJAS DEL MÉTODO DE BRADFORD <ul><li>NO EXISTE INTERFERENCIA DEL SULFATO DE AMONIO </li></ul><ul><li>NO EXISTE INTERFER...
DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE BRADFORD <ul><li>EL COMPLEJO PROTEÍNA-COLORANTE FORMADO PUEDE UNIRSE A LAS CELDAS DE CUARZO </li...
MÉTODO DE LA NINHIDRINA <ul><li>FUNDAMENTO </li></ul><ul><li>AL SER HERVIDOS EN UN BUFFER A UN pH DE 5.5 EN PRESENCIA DE N...
VENTAJA DEL MÉTODO DE LA NINHIDRINA <ul><li>MÉTODO RELATIVAMENTE RÁPIDO SI SE COMPARA CON EL MÉTODO DE KJELDAHL </li></ul>
DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE LA NINHIDRINA <ul><li>LA PRESENCIA DE PEQUEÑAS CANTIDADES DE AMINOÁCIDOS, PÉPTIDOS, AMINAS PRIMA...
 
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  1. 1. ANÁLISIS DE LAS PROTEÍNAS CONSIDERACIONES GENERALES
  2. 2. PROTEÍNAS <ul><li>SON COMPONENTES ABUNDANTES EN TODAS LAS CÉLULAS. </li></ul><ul><li>CASI TODAS (EXCEPTO LAS DE ALMACENAMIENTO) SON IMPORTANTES PARA LAS FUNCIONES BIOLÓGICAS Y/O LA ESTRUCTURA CELULAR. </li></ul><ul><li>LAS PROTEÍNAS DE LOS ALIMENTOS SON MUY COMPLEJAS. </li></ul>
  3. 3. COMPOSICIÓN DE LAS PROTEÍNAS <ul><li>ESTÁN CONSTITUÍDAS POR: HIDRÓGENO, CARBONO, NITRÓGENO, OXÍGENO Y AZÚFRE. </li></ul><ul><li>LOS “BLOQUES DE CONSTRUCCIÓN” DE LAS PROTEÍNAS SON 20 </li></ul><ul><li>∞ -AMINOÁCIDOS. </li></ul><ul><li>LAS UNIONES ENTRE RESIDUOS DE AMINOÁCIDOS EN UNA PROTEÍNA SON ENLACES PEPTÍDICOS. </li></ul>
  4. 4. COMPOSICIÓN DE LAS PROTEÍNAS <ul><li>EL NITRÓGENO ES EL ELEMENTO MÁS DISTINTIVO PRESENTE EN LAS PROTEÍNAS. </li></ul><ul><li>GENERALMENTE LAS PROTEÍNAS RICAS EN AMINOÁCIDOS BÁSICOS CONTIENEN MÁS NITRÓGENO. </li></ul><ul><li>SIN EMBARGO, EL CONTENIDO DE NITRÓGENO EN VARIAS PROTEÍNAS ALIMENTICIAS VARÍA DE 13.4 19.1% DEBIDO A LA VARIACIÓN EN LA COMPOSICIÓN DE AMINOÁCIDOS ESPECÍFICA DE LAS PROTEÍNAS. </li></ul>
  5. 5. CLASIFICACIÓN DE LAS PROTEÍNAS <ul><li>COMPOSICIÓN </li></ul><ul><li>ESTRUCTURA </li></ul><ul><li>FUNCIÓN BIOLÓGICA </li></ul><ul><li>PROPIEDADES DE SOLUBILIDAD </li></ul>
  6. 6. COMPLICACIONES EN EL ANÁLISIS DE PROTEÍNAS CARACTERÍSTICAS FÍSICO QUÍMICAS DE LOS ALIMENTOS SIMILARES A LOS DE LAS PROTEÍNAS
  7. 7. FUENTES DE NITRÓGENO NO PROTÉICO <ul><li>AMINOÁCIDOS LIBRES </li></ul><ul><li>PEQUEÑOS PÉPTIDOS </li></ul><ul><li>ÁCIDOS NUCLÉICOS </li></ul><ul><li>FOSFOLÍPIDOS </li></ul><ul><li>AZÚCARES AMINAS </li></ul><ul><li>PORFIRINA </li></ul><ul><li>ALGUNAS VITAMINAS </li></ul>
  8. 8. FUENTES DE NITRÓGENO NO PROTÉICO <ul><li>ALCALOIDES </li></ul><ul><li>ÁCIDO ÚRICO </li></ul><ul><li>UREA </li></ul><ul><li>IONES DE AMONIO </li></ul>
  9. 9. OTROS MACROCOMPONENTES DE LOS ALIMENTOS QUE PUEDEN INTERFERIR CON EL ANÁLISIS DE PROTEÍNAS <ul><li>LÍPIDOS </li></ul><ul><li>CARBOHIDRATOS </li></ul>
  10. 10. MÉTODOS DESARROLLADOS PARA MEDIR EL CONTENIDO PROTÉICO <ul><li>FUNDAMENTOS: </li></ul><ul><li>DETERMINACIONES DE NITRÓGENO </li></ul><ul><li>ENLACES PEPTÍDICOS </li></ul><ul><li>ÁCIDOS AROMÁTICOS </li></ul><ul><li>ABSORTIVIDAD UV DE LAS PROTEÍNAS </li></ul><ul><li>GRUPOS AMINO LIBRES </li></ul><ul><li>PROPIEDADES DE DISPERSIÓN DE LA LUZ </li></ul><ul><li>CAPACIDAD DE ADHESIÓN DE COLORANTES </li></ul>
  11. 11. IMPORTANCIA DEL ANÁLISIS DE PROTEÍNAS <ul><li>DETERMINACIÓN DE ACTIVIDAD BIOLÓGICA. EJEMPLO: PECTINASAS DURANTE LA MADURACIÓN DE FRUTOS. </li></ul><ul><li>INVESTIGACIÓN SOBRE PROPIEDADES FUNCIONALES. EJMPLO: GLIADINA Y GLUTENINAS PARA LA ELABORACIÓN DEL PAN. </li></ul><ul><li>ETIQUETAMIENTO NUTRICIONAL </li></ul>
  12. 12. NECDESIDAD DEL ANÁLISIS DE PROTEÍNAS <ul><li>CONTENIDO PROTÉICO TOTAL </li></ul><ul><li>COMPOSICIÓN DE AMINOÁCIDOS </li></ul><ul><li>CONTENIDO DE ALGUNA PROTEÍNA PARTICULAR EN UNA MEZCLA </li></ul><ul><li>CONTENIDO PORTEÍCO DURANTE EL AISLAMIENTO Y PURIFICACIÓN DE UNA PROTEÍNA </li></ul><ul><li>NITRÓGENO NO PROTÉICO </li></ul><ul><li>VALOR NUTRITIVO DE UNA (DIGESTIBILIDAD, BALANCE PROTÉICO) </li></ul>
  13. 13. CONTENIDO PROTÉICO EN LOS ALIMENTOS <ul><li>PRODUCTOS LÁCTEOS </li></ul><ul><li>LECHE ENTERA 3.5% </li></ul><ul><li>LECHE DESHIDRATADA DESGRASADA 35.9% </li></ul><ul><li>QUESO CHEDDAR 25% </li></ul><ul><li>HUEVOS 12.9% </li></ul>
  14. 14. CONTENIDO PROTÉICO EN LOS ALIMENTOS <ul><li>CARNES </li></ul><ul><li>RES, BISTEAK, MAGRO CON GRASA 28.6% </li></ul><ul><li>PUERCO, MAGRO CON GRASA, DESHUESADO 17.1% </li></ul><ul><li>PECHUGA DE POLLO 27.3% </li></ul><ul><li>PESCADO </li></ul><ul><li>BACALAO COCINADO 28.5% </li></ul><ul><li>ATÚN EN ACEITE ENLATADO 24.2% </li></ul>
  15. 15. CONTENIDO PROTÉICO EN LOS ALIMENTOS <ul><li>CEREALES </li></ul><ul><li>ARROZ, INTEGRAL, CRUDO 7.5% </li></ul><ul><li>ARROZ REFINADO, CRUDO 6.7% </li></ul><ul><li>HARINA DE TRIGO INTEGRAL 13.3% </li></ul><ul><li>HARINA DE MAÍZ 7.8% </li></ul><ul><li>SPAGHETTI, SECO 12.5% </li></ul><ul><li>ALMIDÓN DE MAÍZ 0.3% </li></ul>
  16. 16. CONTENIDO PROTÉICO EN LOS ALIMENTOS <ul><li>FRUTAS Y VEGETALES </li></ul><ul><li>PAPA ENTERA, CRUDA 1.6% </li></ul><ul><li>ESPÁRRAGOS VERDES 2.5% </li></ul><ul><li>TAPIOCA 0.6% </li></ul><ul><li>FRIJOLES, SECOS, TODAS LAS VARIEDADES </li></ul><ul><li>22.3% </li></ul><ul><li>SOYA SECA 34.1% </li></ul>
  17. 17. CONTENIDO PROTÉICO EN LOS ALIMENTOS <ul><li>FRUTAS Y SEMILLAS </li></ul><ul><li>MANZANA ENTERA, CRUDA 0.2% </li></ul><ul><li>ALMENDRAS ENTERAS 18.6% </li></ul>
  18. 18. MÉTODOS DE DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS <ul><li>MÉTODO DE KJELDAHL </li></ul><ul><li>MÉTODO DE BIURET </li></ul><ul><li>MÉTODO DE LOWRY </li></ul><ul><li>MÉTODO DEL ÁCIDO BICINCONÍNICO (BCA) </li></ul><ul><li>MÉTODO DE ABSORCIÓN UV A 280nm </li></ul><ul><li>MÉTODO DE ADHESIÓN DE COLORANTE </li></ul><ul><li>MÉTODO DE BRADFORD </li></ul><ul><li>MÉTODO DE LA NINHIDRINA </li></ul><ul><li>MÉTODO TURBIDIMÉTRICO </li></ul>
  19. 19. MÉTODO DE KJELDAHL (JOHANN KJELDAHL, 1883) <ul><li>DIGESTIÓN CON H 2 SO 4 CON LA ADICIÓN DE PERMANGANATO DE POTASIO PARA COMPLETAR LA OXIDACIÓN Y CONVERSIÓN DEL NITRÓGENO A SULFATO DE AMONIO. </li></ul><ul><li>NEUTRANLIZACIÓN DE LA DIGESTA DILUIDA, SEGUIDA DE UNA DESTILACIÓN EN UN VOLUMEN CONOCIDO DE ÁCIDO ESTÁNDAR CON UN CONTENIDO DE IODURO DE POTASIO E YODATO. </li></ul><ul><li>TITULACIÓN DEL YODO LIBERADO CON TIOSULFATO DE SODIO ESTÁNDAR </li></ul>
  20. 20. MODIFICACIONES PARA EL MEJORAMIENTO DEL MÉTODO DE KJELDAHL <ul><li>SE HAN AÑADIDO CATALIZADORES COMO: Hg, Cu, Se, Ti AL H 2 SO 4 PARA LOGRAR UNA DIGESTIÓN COMPLETA. </li></ul><ul><li>EL DIÓXIDO DE SELENIO Y EL SULFATO DE COBRE EN PROPORCIÓN 3:1 SON MUY EFECTIVOS EN LA DIGESTIÓN. </li></ul>
  21. 21. MODIFICACIONES PARA EL MEJORAMIENTO DEL MÉTODO DE KJELDAHL <ul><li>EL SULFATO DE POTASIO SE UTILIZA PARA AUMENTAR EL PUNTO DE EBULLICIÓN DEL ÁCIDO SULFÚRICO PARA ACELERAR LA DIGESTIÓN. </li></ul><ul><li>EL SULFURO O TIOSULFATO DE SODIO SE AÑADEN A LA DIGESTA DILUIDA PARA AYUDAR A LIBERAR EL NITRÓGENO DEL Hg EL CUAL TIENDE A ADHERIR AMONIO. </li></ul>
  22. 22. MODIFICACIONES PARA EL MEJORAMIENTO DEL MÉTODO DE KJELDAHL <ul><li>EL AMONIACO SE DESTILA DIRECTAMENTE EN UNA SOLUCIÓN DE ÁCIDO BÓRICO Y ES SEGUIDO DE UNA TITULACIÓN CON UN ÁCIDO ESTÁNDAR. </li></ul><ul><li>SE UTILIZAN LA COLORIMETRÍA Y LA CROMATOGRAFÍA IÓNICA PARA DETERMINAR EL CONTENIDO DE NITRÓGENO POSTERIOR A LA DIGESTIÓN. </li></ul>
  23. 23. PROCEDIMIENTO GENERAL Y REACCIONES <ul><li>DIGESTIÓN </li></ul><ul><li>EL SULFATO DE AMONIO NO VOLÁTIL SE FORMA DE LA REACCIÓN DEL NITRÓGENO Y EL ÁCIDO SULFÚRICO. </li></ul><ul><li>DURANTE LA DIGESTIÓN SE LIBERA EL NITRÓGENO PROTÉICO PARA FORMAR IONES DE AMONIO. </li></ul><ul><li>EL ÁCIDO SULFÚRICO OXIDA LA MATERIA ORGÁNICA Y SE COMBINA CON EL AMONIO FORMADO. </li></ul>
  24. 24. DIGESTIÓN <ul><li>LOS ELEMENTOS CARBONO E HIDRÓGENO SE CONVIERTEN EN DIÓXIDO DE CARBONO Y AGUA </li></ul>PROTEÍNA Ácido Sulfúrico Calor, catalizador (NH 4 ) 2 SO 4
  25. 25. NEUTRALIZACIÓN Y DESTILACIÓN <ul><li>LA MUESTRA DIGERIDA SE DILUYE CON AGUA. </li></ul><ul><li>SE AÑADE EL ÁLCALI QUE CONTIENE TIOSULFATO DE SODIO PARA NEUTRALIZAR AL ÁCIDO SULFÚRICO. </li></ul><ul><li>EL AMONÍACO FORMADO SE DESTILA EN UNA SOLUCIÓN DE ÁCIDO BÓRICO QUE CONTIENE LOS INDICADORES AZÚL DE METILENO Y ROJO DE METILO. </li></ul>
  26. 26. REACCIONES DE LA NEUTRALIZACIÓN Y LA DESTILACIÓN <ul><li>(NH) 2 SO 4 + 2NaOH -> 2NH 3 +Na 2 SO 4 +2H 2 O </li></ul><ul><li>NH 3 + H 3 BO 3 -> NH 4 + H 2 BO 3 - </li></ul><ul><li>(ácido bórico) (ión borato) </li></ul>
  27. 27. REACCIONES DE LA TITULACIÓN <ul><li>EL ANIÓN BORATO (PROPORCIONAL A LA CANTIDAD DE NITRÓGENO) SE TITULA CON HCl ESTANDARIZADO: </li></ul><ul><li>H 2 BO 3 - + H + -> H 3 BO 3 </li></ul>
  28. 28. CÁLCULOS <ul><li>MOLES DE HCl = MOLES DE NH 3 = MOLES DE NITRÓGENO EN LA MUESTRA </li></ul>
  29. 29. FUNCIÓN DEL BLANCO EN LA DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS <ul><li>SE DEBE UTILIZAR UN BLANCO CON REACTIVOS PARA SUSTRAER EL NITRÓGENO REACTIVO DEL NITRÓGENO DE LA MUESTRA. </li></ul>
  30. 30. <ul><li>N HCl = NORMALIDAD DEL HCl EN MOLES /1000 mL </li></ul><ul><li>VOL. ÁCIDO CORREGIDO = mL DE ÁCIDO ESTÁNDAR PARA LA MUESTRA) – (mL DE ÁCIDO ESTÁNDAR PARA EL BLANCO) </li></ul><ul><li>14 = PESO ATÓMICO DEL NITRÓGENO </li></ul>%N = N HCl X VOLUMEN DE ÁCIDCORR. g. DE MUESTRA X 14g N 2 X 100 MOL
  31. 31. FACTOR <ul><li>SE UTILIZA UN FACTOR DE CONVERSIÓN DE % DE N 2 A % DE PROTEÍNA CRUDA. </li></ul><ul><li>LA MAYORÍA DE LAS PROTEÍNAS CONTIENEN 16% DE N 2 </li></ul><ul><li>EL FACTOR DE CONVERSIÓN ES: </li></ul><ul><li>6.25 (100/16 = 6.25) </li></ul><ul><li>%N 2 X 6.25 = %PROTEÍNA Ó </li></ul><ul><li>%N 2 = %PROTEÍNA </li></ul><ul><li>0.16 </li></ul>
  32. 32. FACTORES DE CONVERSIÓN PARA ALGUNOS ALIMENTOS <ul><li>ALIMENTO %N 2 PROTEÍNA FACTOR </li></ul><ul><li>HUEVO O 16 6.25 </li></ul><ul><li>CARNE, MAÍZ </li></ul><ul><li>LECHE 15.7 6.38 </li></ul><ul><li>TRIGO 18 5.7 </li></ul><ul><li>SOYA 17.51 5.71 </li></ul><ul><li>AVENA 17.15 5.83 </li></ul>
  33. 33. PROCEDIMIENTOS ALTERNATIVOS DE DESTILACIÓN Y TITULACIÓN <ul><li>NESSLERIZACIÓN </li></ul><ul><li>NH 4 OH + 2HGI 2 + 2KI + 3KOH -> NH 4 Hg 2 I + </li></ul><ul><li>7KI + 4H 2 O ( rojo-naranja, 440nm) </li></ul><ul><li>RÁPIDO Y FÁCIL PERO EL IODURO DIMERCÚRICO DE AMONIO ES COLOIDE Y EL COLOR ES INESTABLE </li></ul>
  34. 34. PROCEDIMIENTOS ALTERNATIVOS DE DESTILACIÓN Y TITULACIÓN <ul><li>MEDICIÓN DEL pH POSTERIOR A LA DESTILACIÓN EN UN VOLUMEN CONOCIDO DE ÁCIDO BÓRICO </li></ul><ul><li>MEDICIÓN DIRECTA DEL AMONÍACO, MEDIANTE EL MÉTODO DE CROMATOGRAFÍA IÓNICA </li></ul>
  35. 35. VENTAJAS DEL MÉTODO DE KJELDAHL <ul><li>APLICABLE A TODO TIPO DE ALIMENTOS </li></ul><ul><li>RELATIVAMENTE SIMPLE </li></ul><ul><li>BARATO </li></ul><ul><li>PRECISO </li></ul><ul><li>ES EL MÉTODO OFICIAL PARA MEDIR EL CONTENIDO DE PROTEÍNA CRUDA </li></ul>
  36. 36. DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE KJELDAHL <ul><li>MIDE EL NITRÓGENO ORGÁNICO TOTAL, NO SÓLO EL NITRÓGENO PROTÉICO </li></ul><ul><li>CONSUME MUCHO TIEMPO (AL MENOS 2 HORAS PARA COMPLETARSE) </li></ul><ul><li>PRECISIÓN MÁS POBRE QUE EL MÉTODO DE BIURET </li></ul><ul><li>USA REACTIVOS CORROSIVOS </li></ul>
  37. 37. DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS POR EL MÉTODO DE BIURET <ul><li>FUNDAMENTO </li></ul><ul><li>AL FORMAR COMPLEJOS LOS IONES CÚPRICOS CON LOS ENLACES PEPTÍDICOS DE LAS PROTEÍNAS SE PRODUCE UN COLOR VIOLETA-MORADO BAJO CONDICIONES ALCALINAS. </li></ul><ul><li>LA ABSORBANCIA DEL COLOR PRODUCIDO ES LEÍDO A 540nm. </li></ul><ul><li>LA INTENSIDAD DEL COLOR (ABSORBANCIA) ES PROPORCIONAL AL CONTENIDO PROTÉICO DE LA MUESTRA. </li></ul>
  38. 38. PROCEDIMIENTO PARA EL MÉTODO DE BIURET <ul><li>5 mL DE REACTIVO DE BIURET SE MEZCLA CON 1mL DE SOLUCIÓN PROTÉICA (1-10 mg DE PROTEÍNA/mL). </li></ul><ul><li>EL REACTIVO INCLUYE SULFATO DE COBRE, NaOH, Y TARTRATO DE SODIO Y POTASIO EL CUAL SE UTILIZA PARA ESTABILIZAR EL IÓN COBRE EN LA SOLUCIÓN ALCALINA </li></ul>
  39. 39. PROCEDIMIENTO PARA EL MÉTODO DE BIURET <ul><li>DESPUÉS DE REPOSO A TEMPERATURA AMBIENTE DURANTE 15 A 30 MINUTOS, SE LEE LA ABSORBANCIA A 540nm CONTRA UN BLANCO CON SÓLO REACTIVO. </li></ul><ul><li>SI LA REACCIÓN NO ES CLARA DEBE CENTRIFUGARSE LA MUESTRA PREVIO A LA LECTURA DE LA ABSORBANCIA </li></ul>
  40. 40. PROCEDIMIENTO PARA EL MÉTODO DE BIURET <ul><li>SE DEBE ELABORAR UNA CURVA ESTÁNDAR DE CONCENTRACIÓN VS ABSORBANCIA UTILIZANDO ALBÚMINA DE SUERO DE BOVINO (BSA) PARA COMPARACIÓN CON LA MUESTRA BAJO ESTUDIO </li></ul>
  41. 41. VENTAJAS DEL MÉTODO DE BIURET <ul><li>MENOS CARO QUE EL MÉTODO DE KJELDAHL </li></ul><ul><li>RÁPIDO (SE PUEDE COMPLETAR EN MENOS DE 30 MINUTOS) </li></ul><ul><li>ES EL MÉTODO MÁS SIMPLE DE ANÁLISIS DE PROTEÍNAS </li></ul><ul><li>NO ES FRECUENTE ENCONTRAR DERIVACIONES DE COLOR </li></ul><ul><li>POCAS SUBSTANCIAS NO PROTÉICAS INTERFIEREN CON LA REACCIÓN DE BIURET </li></ul><ul><li>NO DETECTA N 2 DE FUENTES NO PROTÉICAS O NO PEPTÍDICAS </li></ul>
  42. 42. DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE BIURET <ul><li>NO ES MUY SENSIBLE COMPARADO CON EL MÉTODO DE LOWRY </li></ul><ul><li>REQUIERE DE AL MENOS 2 A 4 mg DE PROTEÍNA POR PRUEBA </li></ul><ul><li>LAS CONCENTRACIONES ALTAS DE SALES DE AMONIO INTERFIEREN CON LA REACCIÓN </li></ul><ul><li>PUEDE OCURRIR OPALESCENCIA EN LA SOLUCIÓN FINAL SI ESTÁN PRESENTES ALTAS CONCENTRACIONES DE LÍPIDOS O CARBOHIDRATOS </li></ul><ul><li>DEBE ESTANDARIZARSE EL COLOR MEDIANTE CANTIDADES DE PROTEÍNA CONOCIDAS </li></ul>
  43. 43. MÉTODO DE LOWRY <ul><li>FUNDAMENTO </li></ul><ul><li>COMBINA LA REACCIÓN DE BIURET CON LA REDUCCIÓN DEL REACTIVO DE FENOL FOLIN-CIOCALTEAU (ÁCIDO FOSFOMOLÍBDICO-FOSFOTÚNGSTICO) POR LOS RESIDUOS DE TIROSINA Y TRIPTOFANO DE LAS PROTEÍNAS. EL COLOR AZULOSO DESARROLLADO ES LEÍDO A 750nm (ALTA SENSIBILIDAD PARA UNA CONCENTRACIÓN PROTÉICA BAJA) O A 500nm (ALTA SENSIBILIDAD PARA UNA CONCENTRACIÓN PROTÉICA ALTA) </li></ul>
  44. 44. VENTAJAS DEL MÉTODO DE LOWRY <ul><li>MUY SENSIBLE </li></ul><ul><li>MENOS AFECTADO POR LA TURBIDEZ DE LA MUESTRA </li></ul><ul><li>MÁS ESPECÍFICO QUE LA MAYORÍA DE LOS OTROS MÉTODOS </li></ul><ul><li>RELATIVAMENTE SIMPLE </li></ul><ul><li>SE PUEDE COMPLETAR EN 1 A 1.5 HORAS </li></ul>
  45. 45. DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE LOWRY <ul><li>EL COLOR VARÍA CON DIFERENTES PROTEÍNAS (MÁS QUE EL MÉTODO DE BIURET) </li></ul><ul><li>EL COLOR NO ES ESTRICTAMENTE PROPORCIONAL A LA CONCENTRACIÓN DE PROTEÍNAS </li></ul><ul><li>LA SACAROSA, LÍPIDOS, BUFFERS FOSFATO, MONOSACÁRIDOS Y HEXOAMINAS INTERFIEREN CON LA REACCIÓN </li></ul><ul><li>LAS ALTAS CONCENTRACIONES DE AZÚCARES REDUCTORES, SULFATO DE AMONIO Y COMPUESTOS CON SULFHIDRILO INTERFIEREN CON LA REACCIÓN </li></ul>
  46. 46. MÉTODO DEL ÁCIDO BICINCONÍNICO (BCA) <ul><li>FUNDAMENTO </li></ul><ul><li>SE BASA EN EL PRINCIPIO DE QUE LAS PROTEÍNAS REDUCEN LOS IONES CÚPRICOS A IONES CUPROSOS BAJO CONDICIONES ALCALINAS. LOS IONES CUPROSOS REACCIONAN CON EL BCA (VERDOSO) PARA FORMAR UN COLOR MORADO. EL COLOR FORMADO ES PROPORCIONAL AL CONTENIDO PROTÉICO DE LA MUESTRA </li></ul>
  47. 47. VENTAJAS DEL MÉTODO DEL ÁCIDO BICINCONÍNICO (BCA) <ul><li>SENSIBILIDAD COMPARABLE A LA DEL MÉTODO DE LOWRY (0.5mg a 10mg) </li></ul><ul><li>LA MEZCLA EN UN PASO ES MÁS FÁCIL QUE EN EL MÉTODO DE LOWRY </li></ul><ul><li>EL REACTIVO ES MÁS ESTABLE QUE EL REACTIVO DE LOWRY </li></ul><ul><li>LAS SALES DE BUFFER Y DETERGENTE NO IÓNICO NO INTERFIEREN CON LA REACCIÓN </li></ul><ul><li>LAS CONCENTRACIONES DEL MEDIO DE REACTIVOS DESNATURALIZANTES NO INTERFIEREN (GUANIDINA 4M-HCl O UREA 3M) </li></ul>
  48. 48. DESVENTAJAS DEL MÉTODO DEL ÁCIDO BICINCONÍNICO (BCA) <ul><li>EL COLOR NO ES ESTABLE CON EL TIEMPO. SE NECESITA CONTROLAR CUIDADOSAMENTE EL TIEMPO ENTRE EL ANÁLISIS Y LA LECTURA EN ABSORBANCIA. </li></ul><ul><li>LOS AZÚCARES REDUCTORES INTERFIEREN CON LA REACCIÓN. </li></ul><ul><li>ALTAS CONCENTRACIONES DE SULFATO DE AMONIO INTERFIEREN CON LA REACCIÓN. </li></ul><ul><li>LA RESPUESTA EN LA ABSORBANCIA NO ES LINEAL </li></ul>
  49. 49. MÉTODO DE ABSORCIÓN EN ULTRAVIOLETA A 280nm <ul><li>FUNDAMENTO </li></ul><ul><li>LAS PROTEÍNAS MUESTRAN UN FUERTE GRADO DE ABSORCIÓN A 280nm EN UV, PRINCIPALMENTE DEBIDO PRINCIPALMENTE A LOS RESIDUOS DE TRIPTOFANO Y LA TIROSINA DE LAS PROTEÍNAS. YA QUE LAS CONCENTRACIONES DE ESTOS AMINOÁCIDOS EN LAS PROTEÍNAS ES FRANCAMENTE CONSTANTE SE PUEDE UTILIZAR LA ABSORBANCIA A 280nm PARA ESTIMAR LA CONCENTRACIÓN DE PROTEÍNAS USANDO LA LEY DE BEER </li></ul>
  50. 50. MÉTODO DE ABSORCIÓN EN ULTRAVIOLETA A 280nm <ul><li>FUNDAMENTO </li></ul><ul><li>DADO QUE CADA PROTEÍNA TIENE UNA COMPOASICIÓN ÚNICA DE AMINOÁCIDOS AROMÁTICOS, EL COEFICIENTE DE EXTINCIÓN (E 280 ) O SU ABSORTIVIDAD MOLAR (E m ) DEBEN SER DETERMINADOS PARA PROTEÍNAS INDIVIDUALES PARA LA ESTIMACIÓN DEL CONTENIDO PROTÉICO </li></ul>
  51. 51. VENTAJAS DEL MÉTODO DE ABSORCIÓN EN UV (280nm) <ul><li>MÉTODO RÁPIDO Y RELATIVAMENTE SENSIBLE (VARIAS VECES MÁS SENSIBLE QUE EL MÉTODO DE BIURET) </li></ul><ul><li>NO EXISTE INTERFERENCIA DEL SULFATO DE AMONIO Y OTRAS SALES BUFFER </li></ul><ul><li>MÉTODO NO DESTRUCTIVO </li></ul><ul><li>UTILIZADO EN DETECCIÓN POST-COLUMNA DE LAS PROTEÍNAS </li></ul>
  52. 52. DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE ABSORCIÓN EN EL UV (280nm) <ul><li>LOS ÁCIDOS NUCLÉICOS TAMBIÉN ABSORBEN EN LA REGIÓN DE 280nm </li></ul><ul><li>EL CONTENIDO DE AMINOÁCIDOS AROMÁTICOS DIFIERE CONSIDERABLEMENTE EN VARIAS PROTEÍNAS. </li></ul><ul><li>LA SOLUCIÓN DEBE SER CLARA E INCOLORA. LA TURBIDEZ PUEDE PRODUCIR RESULTADOS ERRÁTICOS </li></ul><ul><li>SE REQUIERE UN SISTEMA RELATIVAMENTE PURO PARA UTILIZAR ESTE MÉTODO </li></ul>
  53. 53. MÉTODOS DE DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS POR ADHESIÓN DE UN COLORANTE <ul><li>ADHESIÓN DE COLORANTE ANIÓNICO </li></ul><ul><li>MÉTODO DE BRADFORD </li></ul>
  54. 54. ADHESIÓN DE COLORANTE ANIÓNICO <ul><li>FUNDAMENTO </li></ul><ul><li>LA MUESTRA PROTÉICA SE MEZCLA CON UNA CANTIDAD EXCESIVA CONOCIDA DE UN COLORANTE ANIÓNICO EN UNA SOLUCIÓN BUFFER. </li></ul><ul><li>LAS PROTEÍNAS SE UNEN AL COLORANTE PARA FORMAR UN COMPLEJO INSOLUBLE. </li></ul>
  55. 55. ADHESIÓN DE COLORANTE ANIÓNICO <ul><li>FUNDAMENTO </li></ul><ul><li>SE MIDE EL COLORANTE NO ADHERIDO, SOLUBLE POSTERIOR A LA EQUILIBRACIÓN DE LA REACCIÓN Y LA REMOCIÓN DEL COMPLEJO INSOLUBLE POR CENTRIFUGACIÓN Y FILTRACIÓN. </li></ul><ul><li>EL COLORANTE NO ADHERIDO ESTÁ INVERSAMENTE RELACIONADO AL CONTENIDO PROTÉICO DE LA MUESTRA </li></ul>
  56. 56. ADHESIÓN DE COLORANTE ANIÓNICO <ul><li>FUNDAMENTO </li></ul><ul><li>PROTEÍNA + EXCESO DE COLORANTE -> </li></ul><ul><li>COMPLEJO PROTEÍNA-COLORANTE INSOLUBLE + COLORANTE NO ADHERIDO SOLUBLE </li></ul>
  57. 57. COLORANTES UTILIZADOS EN ESTE MÉTODO <ul><li>ÁCIDO SULFÓNICO ANIÓNICO </li></ul><ul><li>NARANJA ÁCIDO 12 </li></ul><ul><li>NARANJA G </li></ul><ul><li>NEGRO AMIDO 10B </li></ul><ul><li>UNEN GRUPOS CATIÓNICOS DE LOS RESIDUOS BÁSICOS DE AMINOÁCIDOS (IMIDASOL DE LA HISTIDINA, GUANIDINA DE LA ARGININA Y EL GRUPO ε -AMINO DE LA LISINA) Y EL GRUPO LIBRE TERMINAL AMINO DE LAS PROTEÍNAS. </li></ul>
  58. 58. VENTAJAS DEL MÉTODO DE ADHESIÓN DE COLORANTE ANIÓNICO <ul><li>MÉTODO RÁPIDO (15 MINUTOS O MENOS) </li></ul><ul><li>BARATO </li></ul><ul><li>RELATIVAMENTE EXACTO PARA EL ANÁLISIS DE PROTEÍNAS EN ALIMENTOS </li></ul><ul><li>PUEDE UTILIZARSE PARA ESTIMAR LOS CAMBIOS EN EL CONTENIDO DE LISINA DISPONIBLE DE LOS CEREALES DURANTE SU PROCESAMIENTO. </li></ul>
  59. 59. VENTAJAS DEL MÉTODO DE ADHESIÓN DE COLORANTE ANIÓNICO <ul><li>NO UTILIZA REACTIVOS CORROSIVOS </li></ul><ul><li>NO MIDE NITRÓGENO NO PROTÉICO </li></ul><ul><li>MÁS PRECISO QUE EL MÉTODO KJELDAHL </li></ul>
  60. 60. DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE LA ADHESIÓN DEL COLORANTE ANIÓNICO <ul><li>LAS PROTEÍNAS DIFIEREN EN SU CONTENIDO DE AMINOÁCIDOS BÁSICOS DIFIEREN EN SU CAPACIDAD DE ADHESIÓN DEL COLORANTE </li></ul><ul><li>SE NECESITA ELABORAR CURVA DE CALIBRACIÓN </li></ul><ul><li>MUCHOS COMPONENTES NO PROTÉICOS TAMBIÉN SE PUEDEN ADHERIR AL COLORANTE (ALMIDÒN), METALES (Ca O P) Y CAUSAR ERRORES EN LOS RESULTADOS </li></ul>
  61. 61. MÉTODO DE BRADFORD <ul><li>FUNDAMENTO </li></ul><ul><li>EL AZÚL BRILLANTE G-250 COOMASSIE SE ADHIERE A LA PROTEÍNA, EL COLORANTE SE TORNA DE ROJIZO A AZULADO YE L MÁXIMO DE ABSORCIÓN DEL COLORANTE CAMBIA DE 465 A 595nm. EL CAMBIO EN LA ABSORBANCIA A 595nm ES PROPORCIONAL A LA CONCENTRACIÓN DE PROTEÍNA EN LA MUESTRA. </li></ul>
  62. 62. VENTAJAS DEL MÉTODO DE BRADFORD <ul><li>MÉTODO RÁPIDO (LA REACCIÓN SE PUEDE COMPLETAR EN 2 MINUTOS) </li></ul><ul><li>REPRODUCIBLE </li></ul><ul><li>SENSIBLE (MUCHO MÁS QUE EL MÉTODO DE LOWRY) </li></ul><ul><li>NO EXISTE INTERFERENCIA DE CATIONES COMO K + , Na + , Y Mg + </li></ul>
  63. 63. VENTAJAS DEL MÉTODO DE BRADFORD <ul><li>NO EXISTE INTERFERENCIA DEL SULFATO DE AMONIO </li></ul><ul><li>NO EXISTE INTERFERENCIA DE LOS POLIFENOLES NI CARBOHIDRATOS COMO LA SACAROSA </li></ul><ul><li>MIDE PROTEÍNA O PÉPTIDOS CON UNA MASA MOLECULAR APROXIMADAMENTE IGUAL O MAYOR DE 4 000 DALTONS </li></ul>
  64. 64. DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE BRADFORD <ul><li>EL COMPLEJO PROTEÍNA-COLORANTE FORMADO PUEDE UNIRSE A LAS CELDAS DE CUARZO </li></ul><ul><li>EL COLOR VARÍA CON DIFERENTES TIPOS DE PROTEÍNAS. </li></ul><ul><li>LA PROTEÍNA ESTÁNDAR DEBE SELECCIONARSE CON MUCHO CUIDADO </li></ul><ul><li>INTERFERENCIA CON DETERGENTES. </li></ul>
  65. 65. MÉTODO DE LA NINHIDRINA <ul><li>FUNDAMENTO </li></ul><ul><li>AL SER HERVIDOS EN UN BUFFER A UN pH DE 5.5 EN PRESENCIA DE NINHIDRINA E HIDRINDANTINA, LOS AMINOÁCIDOS, AMONÍACO, Y LOS GRUPOS AMINO PRIMARIOS, ORIGINAN UN COLOR MORADO RUHEMANN </li></ul>
  66. 66. VENTAJA DEL MÉTODO DE LA NINHIDRINA <ul><li>MÉTODO RELATIVAMENTE RÁPIDO SI SE COMPARA CON EL MÉTODO DE KJELDAHL </li></ul>
  67. 67. DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE LA NINHIDRINA <ul><li>LA PRESENCIA DE PEQUEÑAS CANTIDADES DE AMINOÁCIDOS, PÉPTIDOS, AMINAS PRIMARIAS, Y AMONÍACO OCASIONA UNA SOBREESTIMACIÓN DEL CONTENIDO PROTÉICO </li></ul><ul><li>BAJA PRECISIÓN </li></ul><ul><li>EL COLOR VARÍA CON LA DIFERENTE COMPOSICIÓN DE AMINOÁCIDOS </li></ul><ul><li>SE NECESITA ELABORAR UNA CURVA ESTÁNDAR EN CADA ANÁLISIS </li></ul>
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