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Enterobacterias
 

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    Enterobacterias  Enterobacterias Presentation Transcript

    • Universidad Autónoma de Guerrero Unidad Académica de Ciencias Químico Biológicas Bacteriología Medica“Enterobacterias: E. coli, Shigella, Salmonella y Klebsiella” Arizandy Marcelo Marcelo Isaías Reyes Zavaleta María Lucia Monje Basurto Regina Rosalía Pérez Galindo Víctor Magallon Tapia Chilpancingo de Los Bravo a 20 de Enero del 2012
    • ENTEROBACTERIAS Los bacilos gram – pertenecientes a Enterobactericiae son las bacterias que se recuperan con mayor frecuencia en las muestras clínicas, para la identificación de estas se requiere una seria de pruebas bioquímicas. Con pocas excepciones, todos los miembros de las enterobacterias demuestran las siguientes características:
    • El nitrato es reducido a nitrito La citrocromo oxidasa es negativa Fermentan la glucosa
    • TAXONOMÍA DE ENTEROBACTERIACEAE•Tribu ESCHERICHIAE•Losdos géneros dentro de esta tribu son Escherichia yShigella.
    •  los miembros de esta tribu se distinguen por lo siguiente: VP – Citrato - Indol + RM + Sulfuro de Hidrogeno - Urea - PAD -
    • Género Escherichia E. coli es la especie de bacteria mas recuperada en muestras que llegan al laboratorio. Es un bacilo que reacciona negativamente a la tinción de Gram (gramnegativo), es anaerobio facultativo, móvil por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo), no forma esporas, es capaz de fermentar la glucosa y la lactosa. Es uno de los m. o mas frecuentemente involucrados en la sepsis por Gram – y en el shock inducido por endotoxinas. Infecciones habituales: vias urinarias, heridas, neumonia, meningitis.
    • Pruebas bioquímicas: + - VP – KIA: A/A + G Citrato - Indol + Movilidad + RM + PAD - Lis + Urea - H2S - ARG & ORN+/- (variable) ONPG +
    •  E. coli se serotipifica sobre la base de sus antígenos de superficie: O, H y K. En la actualidad se conocen mas de 170 serogrupos de antígenos O. La combinación de antígenos O y H define un serotipo de un aislado (E. coli O157:H7). E. Coli que producen gastroenteritis Ciertas cepas de E. coli pueden producir gastroenteritis o enteritis por seis mecanismos distintos, que conducen a seis síndromes clínicos diferentes:
    •  Escherichia coli: enteropatogéna (EPEC), enterotoxigénica (ETEC), enteroinvasiva (EIEC), enterohemorrágica (EHEC), enteroagregante (EAEC) y difusamente adherente (DAEC). Si bien existen ensayos para identificar todas las categorías de E. coli que producen gastroenteritis en la mayoría de los casos no es necesario. Con excepción de los ensayos para la detección de EHEC no se realizan en forma habitual ensayos fenotípicos ni serotipificacion de E. coli para el diagnostico de cepas diarreicogénicas.
    •  Escherichia coli enteropatogénica (ECEP):Esta cepa causa diarrea en humanos, conejos, perros y caballos. Carece de fimbrias pero utilizan la proteína intimina, una adhesina, para adherirse a las células intestinales. Este serotipo posee una serie de factores de virulencia que son similares a los que se encuentran en Shigella, como la toxina shiga. La adherencia a la mucosa intestinal causa una reordenación de la actina en la célula hospedante, que induce una deformación significativa. Estas bacterias son moderadamente invasivas: penetran en las células hospedadoras provocando una respuesta inflamatoria. La causa principal de diarrea en los afectados por esta cepa son seguramente los cambios provocados en la ultraestructura de las células intestinales. Escherichia coli enterotoxigénica (ECET):Se parece mucho a Vibrio cholerae, se adhiere a la mucosa del intestino delgado, no la invade, y elabora toxinas que producen diarrea. No hay cambios histológicos en las células de la mucosa y muy poca inflamación. Produce diarrea no sanguinolenta en niños y adultos.
    • Escherichia coli enteroagregativa (ECEA):Sólo encontrada en humanos. Son llamadas enteroagregativas porque tienen fimbrias con las que aglutinan células en los cultivos de tejidos. Se unen a la mucosa intestinal causando diarrea acuosa sin fiebre. No son invasivas. Producen hemolisina y una enterotoxina similar a la de las enterotoxigénicas. Escherichia coli de adherencia difusa (ECAD)Se adhiere a la totalidad de la superficie de las células epiteliales y habitualmente causa enfermedad en niños inmunológicamente no desarrollados o malnutridos. No se ha demostrado que pueda causar diarrea en niños mayores de un año de edad, ni en adultos y ancianos.
    •  Escherichia coli enteroinvasiva (ECEI):Invade el epitelio intestinal causando diarrea sanguinolenta en niños y adultos. Libera el calcio en grandes cantidades impidiendo la solidificación ósea, produciendo artritis y en algunos casos arterioesclerosis. Es una de las E. coli que causa más daño debido a la invasión que produce en el epitelio intestinal.
    • ESCHERICHIA COLI ENTEROHEMORRÁGICA (EHEC) No se conoció su importancia clínica hasta 1982 cuando se le asocio con la colitis hemorrágica y el síndrome urémico hemolítico. E. coli O157:H7 produce toxinas shiga (verocitotoxinas), algunas cepas solo producen Stx 1, otras Stx 2, y otras ambas. Los genes para estas toxinas son codificados por bacteriofagos. Otros factores de virulencia identificados en E. coli O157:H7 incluyen el plásmido de virulencia de 60 MDa (pO157) y el locus de borramiento del enterocito (LEE).
    •  Producen verocitotoxinas que actúan en el colon. Sus síntomas son: primero colitis hemorrágica, luego síndrome urémico hemolítico (lo anterior más afección del riñón, posible entrada en coma y muerte), y por último, púrpura trombocitopénica trombótica (lo de antes más afección del sistema nervioso central). Esta cepa no fermenta el sorbitol. No posee una fimbria formadora de mechones, en vez de esto posee una fimbria polar larga que usa para adherencia. No se recomienda el uso de antibióticos como fluoroquinolonas, trimetrotoprima-sulfametoxazol y furazolidona, porque producen la inducción de bacteriófagos y pueden aumentar la expresión de toxinas shiga.
    • Manifestaciones clínicas Infecciónpor E. coli O157:H7 van desde la portación asintomática hasta diarrea no sanguiolenta, colitis hemorrágica, síndrome urémico hemolítico y muerte. El periodo de incubación varia de 1 a 8 días con un intervalo promedio de 3 días antes de la exposición y la enfermedad. Detección de EHEC El aislamiento de E. coli O157:H7 solo es posible durante la fase agua de la enfermedad y los m.o pueden no detectarse 5-7 días después del inicio.
    • Los métodos para la identificación se basan en: La detección de cepas productoras de toxinas shiga. Detección del serotipo O157:H7.1. Siembra en agar MacConkey y sorbitol (SMAC), cefixima- SMAC, SMAC complementado con cefixima y telurito (CT-SMAC) o medios que contienen5-bromo-5-cloro-3-indoxil-β-D-glucoronida o 4- metilumbeliferil-β-D-glucoronida. El Agar SMAC contiene D-sorbitol al 1% en lugar de lactosa para diferenciar las cepas de E.coli sorbitol negativas. Luego los aislamientos sospechosos son confirmados con antisueros con antisueros O157:H7 específicos. Otros medios de detección son medios cromogénicos y métodos de ELISA.2. Separación inmunomagnetica utilizando esferas revestidas con Ac específicos de O157 seguido de cultivo bacteriológico.3. Ensayos para la detección del serotipo O157:H7 o toxinas shiga directamente de las heces.
    • Es una especie recién descrita de enterobacterias indol negativas, D-sorbitol negativas y lactosa negativas aisladas en heces diarreicas deniños.E. Albertii se asemeja principalmente a E. coli inactiva, aunque no seasemeja al grupo Alkalescens-Dispar debido a su capacidad para producirgas a partir de D- glucosa.
    • Indol (-) Rojo de metilo Voges – proskauer (-) (+)Citrato (-) Lisina descarboxilasa (+) Arginina dehidrolasa (-) Ornitina descarboxilasas (+) ONPG (+)
    • Lactosa (-) Manitol (+) Adonitol (-) Pigmento amarillo (-)Celobiosa(-) Sorbitol (-)
    • Se encuentra en sangre, vesícula biliar, orina y heces; sin embargo no seha establecido aun su importancia clínica.Se diferencia de E. coli por las pruebas de sorbitol negativa y lactosanegativa , pero andonitol positiva y celobiosa positiva.
    • Indol (+) Rojo de metilo Voges – proskauer (-) (+)Citrato (V) Lisina descarboxilasa (+) Arginina dehidrolasa (-) Ornitina descarboxilasas (+) ONPG (v)
    • Lactosa (-) Manitol (+) Adonitol (+) Pigmento amarillo (-)Celobiosa(+) Sorbitol (-)
    • Se encontró principalmente en heridas, esputo y heces de humanos.Esta bacteria puede producir una infección denominada cefalohematoma.Las cepas de E. hermanii tienen pigmento amarillo y son indol positivas ysorbitol negativas. Como E. hermanii son sorbitol negativas, parecenbioquímicamente similares a E. coli.
    • Indol (+) Rojo de metilo Voges – proskauer (-) (+) Manitol (+)Citrato (-) Arginina dehidrolasa (-) ONPG (+) Ornitina descarboxilasas (+)
    • Lactosa (V) Adonitol (-) Lisina descarboxilasa (-) Pigmento amarillo (+)Celobiosa(+) Sorbitol (-)
    • Tiene alta propensión a producir infecciones en las heridashumanas, sobre todo en los brazos y las piernas que pueden conducir aosteomielitis.Mas del 50 % de las cepas tienen pigmento amarillo y son tanto indolnegativas como sorbitol negativas.
    • Indol (-) Rojo de metilo Voges – proskauer (-) (+) Manitol (+) Citrato (-) Arginina dehidrolasa (V)Ornitina descarboxilasas (-) ONPG (+)
    • Lactosa (V) Adonitol (-) Lisina descarboxilasa (V) Pigmento amarillo (V)Celobiosa(+) Sorbitol (-)
    • Género: Salmonella
    • El genero salmonella recibe sunombre el honor al microbiólogoamericano Daniel Elmer Salmon(1850-1914), quien descubrió losgérmenes designados comosalmonellas, en 1885,aislándolos de cerdos concólera.
    • Clasificación CientíficaReino: BacteriaFilo: ProteobacteriaClase: GammaproteobacteriaOrden: EnterobacterialesFamilia: EnterobacteriaceaeGenero: Salmonella Especies• Salmonella enterica• Subesopecie I. S. enterica subsp. enterica• Subespecie II. S enterica subsp. salamae• Subespecie III. S. enterica subsp. arizonae.• Subespecie IV. S enterica subsp. diarizonae• Subesopecie V. S. enterica subsp. houtenae• Subesopecie VI. S. enterica subsp. Indica• Salmonella bongori : No constituye un patógeno para los humanos.
    • Patógenos del Salmonella Aparato DigestivoPotencialmente Parásitos patógenas intercelulares (Macrófagos) - Fiebre entéricaVía Linfática y - Septicemia Sanguínea. - Gastroenteritis
    • Es de suma importancia aclara que aunque existan solo dos especies de salmonellas segúnsu hibridación de DNA, tanto las especies como las subespecies mencionadas seencuentran constituidas por mas de 2400 variedades serológicas.La estructura antigénica de Salmonella sp. Es similar a la de otrasenterobacterias, contando con la presencia de dos clases de antígenos principales:• Antígeno O (somáticos): de lipopolisacarido en la pared celular, termoestable y es la base de la clasificación en subgrupos.• Antígenos H (flagelares): de la proteína flagelina termolábil, es la base de la clasificación de especies.En algunas cepas se encuentra un tercer tipo de Antígeno se superficie, análogo funcional alos antígenos K (capsulares) de otros géneros. Al estar este antígeno relacionado con lavirulencia de las cepas se le denomina• Antígeno Vi: (Virulencia): termolábil, responsable de la virulencia de varias especies patogénicas.
    • Factores que afectan su crecimiento, muerte y/o sobrevivencia.Esta tabla muestra las condiciones óptimas detemperatura, pH y aw (actividad del agua) quefavorecen el desarrollo de Salmonella.
    • Caracterización Morfológica y Bioquímica• Son bacilos Gram- negativos• Con un tamaño de 0.7 – 1.5 x 2.0 - 5µm• No fermentadores de lactosa• Anaerobios facultativos• No esporulados• Generalmente móviles por flagelos peritricos con la excepción de Salmonella gallinarum y Salmonella pollorum.• Poseen metabolismo fermentativo y oxidativo
    • Agares de SelecciónLa diferenciación de Salmonella de otros microorganismos es usualmente determinadopor los cambios de color del indicador que se detecta por cambio de pH y quecorresponde a la fermentación de lactosa o sacarosa; asimismo la producción de H2So la descarboxilación de lisina y de la ornitina.
    • Agar SS Agar Mac Conkey
    • Pruebas Bioquímicas• Fermentación de Glucosa con producción de acido y gas (excepto S. typhi)• Oxidasa Negativo• Catalasa Positivo• Indol y Voges – Proskauer (VP) Negativo• Rojo de Metilo y Citrato de Simmons Positivo• Producen H2S• Urea Negativo• Lisina, Ornitina y Descarboxilasa positivo• Reducción de Nitratos a Nitritos• No desaminan la fenilalanina
    • Fermentación de Glucosa con producción de acido y gas
    • Citrato de Simmons y Rojo de Metilo Positivo
    • Oxidasa Negativo Catalasa Positivo
    • Indol y Voges Proskauer Negativo
    • No desaminan la fenilalanina
    • Reducción de Nitratos a Nitritos
    • Lisina, Ornitina yDescarboxilasa positivo Caldo Urea
    • GENERO: Shigella Existen 4 subgrupos mayores y 43 serotipos. Shigella S. S. Flexneri S. BoydiiDysenteriae S.sonnei (grupo b) (grupo c) (gurpo a) Similitudes bioquimicas
    • GENERO: Shigella•Las especies de shigella pueden sospecharse en cultivos (nofermentadores de lactosa y bioquímicamente inertes).•No producen gas a partir de hidratos de carbono (excepción de S.flexneri que son aerogenos).
    • MORFOLOGIA EN MEDIOS. MEDIO INTERACCIONESSalmonella-Shigella (SS) Muestra inhibicion variable y colonias incoloras sin ennegrecimiento.Agar enterico de Hektoen (HE) Aparece mas verde que Salmonella y el color se borra hacia la periferia de la coloniaAgar xilosa lisina desoxicolato (XLD) No utilizan ninguno de los hidratos de carbono y producen colonias traslucidas.Agar de MacConkey Producen colnias incoloras y transparentes.Agar eosina azul de metileno (EMB) Producen colonias transparentes.
    • PERFIL BIOQUÍMICO•ALC/A (M.O fermenta glucosa y no •RM POSITIVO.lactosa)•NO PRESENCIA DE GAS. (fermenta glucosa, por la•SULFURO DE HIDROGENO (H2S) vía mixta. ConNEGATIVO. producción de(No reacciona con citrato de hierro ni metabolitos).amonio) MEDIO RM. AGAR KLIGER
    • •VP NEGATIVO. •INDOL POSITIVOEs la busqueda de diacetil /NEGATIVO.= producto final del acetil- Presencia de triptofanasametil-carbinol (+/-) MEDIO VP. MEDIO SIM.
    • •CITRATO •FENIL ALANINANEGATIVO. NEGATIVO.(no utiliza sales (capacidad de la bacteriaamonio como para desaminarfuente de nitrgeno) aminoácido fenilalamina)AGAR CITRATO DE CALDO FENIL ALANINA- SIMONS. MALONATO .
    • • UREASA NEGATIVA • MOTILIDAD: • LISINA NEGATIVA(no poseen enzima POSITIVA/ (lisina no se ureasa) NEGATIVA descarboxila) CALDO UREA MEDIO SIM MEDIO LIA
    • Tribu: Klebsiellacomprende cuatro géneros (Klebsiella, Enterobacter, Hafnia y Serratia). Genero : Klebsiella Recibió ese nombre en honor a Edwin Klebs, microbiólogo alemán de fines del siglo XIX. Klebsiella esta compuesta por especies que forman tres grupos fileticos:
    • • K. pneumoniae subespecies pneumoniae, Grupo I rhinoscleromatis y ozaenae. • K.granulomatis • K. ornithinolytica • K. planticola • K. trevisanii Grupo II • K. terrígena. • (este grupo es transferido al nuevo genero Raoultella en honor al bacteriólogo frances Didier Raoult). Grupo III • K. oxytocaLas especies de Klebsiella y Raoultella están ampliamente distribuidasen la naturaleza y en el tubo digestivo.
    • Cuando se recuperan coloniasgrandes con una consistenciamucoide en las placas deaislamiento se debe desospechar que es una especiede Klebsiella.En agar MacConkey, lascolonias se presentangrandes, mucoides y rojas, yel pigmento rojo sueledifundirse en el agar lo queindica fermentación delactosa.
    •  Las especies de aislamiento clínico frecuente son Klebsiella pneumoniae subespecie pneumoniae y K. oxytoca.Klebsiella pneumoniae subespecie pneumoniae Gram negativo Anaerobio facultativo Encapsulado Inmóvil Fermentación de lactosa Se encuentra en la flora normal de la boca, la piel y los intestinos.
    •  Puede causar la neumonía enfermedad que causa cambios destructivos a la inflamación y la hemorragia pulmonar humano con la muerte celular (necrosis) que a veces produce, esputo con sangre, mucosa (esputo jalea de grosella).
    •  Al igual que con muchas bacterias, el tratamiento recomendado ha cambiado ya que el organismo ha desarrollado resistencias. A menudo son resistentes a múltiples antibióticos. La evidencia actual implica un plásmido como la fuente de los genes de resistencia. Resistente a ampicilina, carbenicilina y ticarcilina. Debido ala producción de enzimas beta-lactamasas hacen que sean resistentes a los agentes beta-lactamicos, incluidas las cefalosporinas de tercera generación. Sensible a amoxicilina-clavulánico y fluorquinolona
    •  PRUEBAS BIOQUIMICAS EN Klebsiella pneumoniae Indol (-) Lisina (+) Voges-Proskauer (+) Arginina (-) Ureasa (+) Ornitina (-) fermenta: lactosa sacarosa, sorbitol adonitol y arabinosa. Citrato (+)
    • Klebsiella OxytocaKlebsiella oxytoca es una especieGram-negativa, estrechamenterelacionadas con K. pneumoniae dela que se distingue por ser indolpositiva.Casi el 50% de aislamiento ha sidoen heces y la siguiente fuente enfrecuencia es la sangre.
    • PRUEBAS BIOQUIMICAS Indol: (+) RM: (V) VP : (+) Ureasa: (+) Lisina: (+) Ornitina: (-) Malonato: (+) Motilidad: (-)
    • Diferenciación de especies en los géneros Klebsiella y Raoultella