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Fijacion Histotecnologia tiempos, tipos de fijacion, fijadores ideales,

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  • 1. Fijación
    Histotecnología II
  • 2. FIJACIÓN
    CONCEPTO:Se entiende por fijación toda manipulación sobre un ser vivo, o bien sobre parte de él, que tiene por objeto mantener toda su arquitectura tanto estructural como química lo más inalterada posible, de tal forma que sus componentes celulares mantengan las mismas características que cuando dicho ser o tejido estaban vivos.
    La fijación termina cualquier reacción bioquímica en curso, y puede también aumentar la fuerza o la estabilidad mecánica de los tejidos finos tratados.
  • 3. FIJACIÓN
    • Interrumpir los procesos de degradación que aparecen tras la muerte celular
    • 4. Tratando de conservar la arquitectura y composición tisular
    • 5. Lo más próxima posible a como se encontraba en el organismo vivo.
  • FIJACIÓN
    Muerte: es el nivel metabólico a partir del cual las células que componen esos organismos, no son capaces de recuperar las funciones vitales que le son propias
    Autólisis: autodigestión enzimática celular, debido a la salida del contenido lisosómico al citoplasma
    Putrefacción: efecto ejercido por toxinas y enzimas bacterianas sobre los tejidos (microorganismos de tipo saprófitos)
    AUTÓLISIS
    BACTERIAS
  • 6. FACTORES DE LA AUTÓLISIS
    Y PUTREFACCIÓN
    • Localización y naturaleza del tejido
    • 7. Temperatura del ambiente
    PANCREAS
    TERMÓMETRO
    INTESTINO GRUESO
  • 8. FIJACIÓN
    Objetivo de la técnica histológica es conseguir la mayor similitud posible entre la imagen real y la imagen equivalente
    IMAGEN HISTOLÓGICA REAL: es la que tiene el tejido cuando aun se encuentra vivo
    IMAGEN HISTOLÓGICA EQUIVALENTE: es la obtenida después de la manipulación histológica que comprende la fijación, inclusión, corte y coloración.
    Trompa de Falopio
  • 9. CONDICIONES DE LA IMAGEN EQUIVALENTE
    CONSTANCIA: ha de observarse en todos los tejidos idénticos obtenidos de distintos individuos de una misma especie animal
    REPRODUCTIBILIDAD: en todas las preparaciones histológicas obtenidas a partir de dichos tejidos, independientemente del proceso de fijación empleado
    • Las imágenes que no cumplen con los requisitos de constancia y reproductibilidad deben considerarse artefactos inducidos a lo largo de procesamiento histológico y cambian de una preparación a otra.
  • ARTEFACTOS DE LA FIJACIÓN
    • DESGARROS
    • 10. RETRACCIONES
    • 11. Diferencia entre la presión osmótica del fijador y la de los tejidos
    In vivo el espacio de Bowman es más estrecho de lo que se ve en los cortes procesados de manera convencional. (H&E, X300).
  • 12. PROPÓSITO DE LA FIJACIÓN
    • Evitar la autolisis debida a las propias enzimas.
    • 13. Proteger el corte o la pieza del ataque bacteriano.
    • 14. Insolubilizar los componentes celulares que se desean estudiar.
    • 15. Preparar a las distintas estructuras para posteriores tratamientos.
    • 16. Evitar la disolución de determinados compuestos en el fijador.
    • 17. Conservar o provocar determinadas reacciones químicas.
    • 18. Mantener las propiedades físicas.
  • PRINCIPIOS GENERALES DE LA FIJACIÓN
    • No existe un método universal de fijación
    • 19. No todos los fijadores conservan indefinidamente los tejidos
    • 20. Un defecto de la fijación jamás puede ser corregido
    • 21. Es imposible realizar un estudio histológico sobre un material con defectos de fijación
  • CUALIDADES DE UN FIJADOR
    • Capacidad de bloquear la autólisis inmediatamente
    • 22. Poseer un efecto microbicida.
    • 23. Impedir la generación de estructuras artificiales (artificios y artefactos)
    • 24. No generar retracción excesiva de los tejidos ni volverlos friables o quebradizos
    • 25. Permitir o favorecer la aplicación de técnicas histológicas ,histoquímicas o inmuno-histoquímicas específicas.  
    • 26. Ser económico, estable, con baja toxicidad y de fácil manejo
    • 27. Que posea una gran velocidad de penetración
  • TIPOS DE FIJACIÓN
    FIJACION HISTOLÓGICA O CITOLÓGICA: conservación de la arquitectura y estructura de los tejidos y células
    FIJACIÓN HISTOQUÍMICA: conservación de la composición molecular y bioquímica de los tejidos
    FIJACIÓN PRIMARIA: la que se realiza de forma inmediata sobre el tejido fresco
    FIJACIÓN SECUNDARIA O REFIJACIÓN: consiste en colocar el tejido ya fijado en un segundo fijador para demostrar algún componente tisular específico o simplemente para intensificar la fijación inicial
  • 28. Principios de la fijación
    La fijación consiste en conservar un tejido lo más parecido posible a sus condiciones normales para ello es necesario:
    • Protegerlo del ataque bacteriano
    • 29. Evitar su autólisis
    • 30. Insolubilizar los constituyentes celulares
    • 31. Evitar las distorsiones y retracciones
    • 32. Preparar las estructuras para posteriores tratamientos
  • REGLAS GENERALES A CONSIDERAR
    EN EL EMPLEO DE FIJADORES
    • Rapidez al colocar el líquido fijador
    • 33. El tejido debe estar seccionado en láminas de 5mm
    • 34. La relación del fijador es de 1/20
    • 35. La presión osmótica del fijador y de la pieza deben ser lo más parecidas al suero fisiológico
    • 36. El pH debe ser igual al suero fisiológico
    • 37. El tiempo específico de cada fijador
  • CARACTERÍSTICAS DE LOS FIJADORES
    • Velocidad de penetración
    • 38. Velocidad de fijación
    • 39. Coeficiente de endurecimiento
    • 40. Efecto de retracción
    • 41. Osmosis y pH
    • 42. Efecto mordiente
    • 43. Artefactos
  • MÉTODOS DE FIJACIÓN
    • Criodesecación
    • 44. Criosustitución
    FÍSICOS:
    • El tipo de muestra lo requiere
    • 45. Los fijadores químicos alteran las estructuras que queremos observar
    • 46. Necesitamos una fijación rápida
    • 47. CONGELACION
    • 48. CALOR
    FIJACIÓN POR INMERSIÓN
    QUÍMICOS:
    utilizan soluciones acuosas compuestas por moléculas fijadoras que establecen puentes entre las moléculas celulares, manteniéndolas en sus lugares originales e impidiendo su degradación
    • INMERSIÓN
    • 49. PERFUSIÓN
    FIJACIÓN POR PERFUSIÓN