Your SlideShare is downloading. ×
DETEKSI MIKOBAKTERIUM MENGGUNAKAN MANUAL MGIT DAN BACTECTM MGITTM 960 SYSTEM <br />DIDIK AGUS SANTOSO,dr<br />Dr. JUSAK NU...
 Manual MGIT <br />Micobacterium Growth Indikator Tube<br />2<br />
BBL™ MGIT™ Tubes  (4mL ; 7 mL)<br />Modified Middlebrook 7H9 Broth Base<br />Fluorescent indicator untukdeteksioxygen<br /...
MGIT™ Growth Supplement<br />Sebagaisuplemenpertumbuhanmikobakterium<br />Oleic Acid – pentinguntukmetabolismemikobakteriu...
BBL™ MGIT™ PANTA ™<br />Antimicrobial mixture:<br />Polymyxin B<br />Amphotericin B<br />Naladixic Acid<br />Trimethoprim<...
O2<br />O2<br />O2<br />Bagianatas<br />O2<br />CO2<br />O2<br />O2<br />O2<br />O2<br />O2<br />O2<br />CO2<br />Broth<br...
7<br />BAHAN & ALAT<br />Bahan yang disediakandalamsatu Kit MGIT: <br /><ul><li>BBL MGITMycobacteria Growth Indicator Tube...
BBL MGIT OADC, 6 vial, 15 mL, untuk 150 tes
Campuranantibiotik BBL MGIT PANTA, 6 vial liophilized, untuk 150 tes.</li></li></ul><li>BAHAN & ALAT<br />Bahan yang tidak...
 4% NaOH, 2,9% Na-Sitrat, bubuk NALC, buferfosfat pH 6,8 steril; ataucukup BBL Mycoprep 75mL atau 150 mL .
vortex mixer,
inkubator 37oC,
pipetsteril Falcon 1mL
pipet transfer steril Falcon
lampu UV 365 nm,
0,4% larutan Na-sulfituntukkontrolpositif,
mikroskopuntuk AFB Staining danbahan-bahanuntukpewarnaanslide,
pipet 100 L dan 500  L,
desinfektantuberkulosidal.</li></ul>8<br />
9<br />Pencernaan, DekontaminasidanPemekatanSpesimen<br />SPUTUM : <br /><ul><li>Spesimendiprosesmemakaimetode NALC-NaOHse...
Ataumemakai BBL MycoPrep kit.</li></ul>GASTRIC ASPIRATES: <br /><ul><li>Spesimendidekontaminasiseperti sputum.
Jika volume spesimenlebihdari 10 mL, makapekatkandengansentrifugasi. Resuspensispesimenkesekitar 5 mL air sterildankemudia...
Jika volume spesimenlebihdari 10 mL, pekatkandengansentrifugasipada 3.000 x g selama 15 menit. Buangsupernatancairan.
Inokulasitabung MGIT denganendapannya.
Spesimen yang diperkirakanmengandungbakteri lain harusdidekontaminasi.</li></ul>JARINGAN: <br /><ul><li>Spesimenjaringanhe...
Lanjutkansebagaimana sputum.</li></li></ul><li>ProsedurPencernaan/Dekontaminasi Sputum dengan NALC/NaOH<br />10<br />Siapk...
Prosedur Pencernaan/Dekontaminasi Sputumdengan MYCOPREP<br />LANGKAH 1<br />11<br />SiapkansatuBotol MYCOPREP (NALC/NaOH)...
ProsedurPenyiapanTabung MGIT<br />LANGKAH 1<br />12<br />Label tabungMGITdengannomorspesimen.<br />BukatutuptabungMGIT, da...
13<br />TabungKontrolPositif<br />Kosongkan broth daritabungMGIT baru.<br />Label tabung“KontrolPositif”,dandicatattanggal...
14<br />MembacaTabung MGIT:<br /><ul><li>Ambiltabungdariinkubator
Letakkanpadalampu UV bersebelahandenganKontrolPositifdanNegatif.
Dianjurkanuntukmembacaantara 4 - 10 tabungsekaligus.
Sebaiknyamenggunakankacamatapelindung UV padasaatmengamatifluoresensi.
Gunakancahaya normal ruangan. Hindarimembacadibawahmataharilangsungataudiruang yang gelap.
TandaitabungMGIT yang berfluoresensiterang,
BandingkandenganKontrolPositifdanNegatif.
JikatabungMGITlebihmiripKontrolPositif, makatabungtersebutpositif. JikalebihmiripKontrolNegatif, makatabungtersebutnegatif.
Pertumbuhanjugabisadiamatidenganadanyakekeruhan yang tidakhomogen, butiran-butiranataulempengankecildalam medium kultur.
Dari tabung MGIT Positiflakukanpewarnaan acid-fast bacilli.
Tabung yang Smear-nyanegatifdiperiksaadanyakontaminasibakteridenganmenanamnyake blood agar.
LakukansubkulturuntukidentifikasidantesresistensiobatdenganmamakaicairandaritabungBBL MGITpositif.
TabungMGIT negatifdibacaterussetiapharisampaidelapanmingguatausesuaidenganpengalamanlaboratoriumdimasa yang lalu. Tidakdib...
Larutkan vial liophilizedBBL MGITIsoniaziddengan 4 mLaquademin/aquadessteriluntukmendapatkankonsentrasi 5 g/mL.
Larutkan vial liophilizedBBL MGITRifampindengan 4 mLaquademin/aquadessteriluntukmendapatkankonsentrasi  50 g/mL.
Larutkan vial liophilizedBBL MGITEthambutoldengan 4 mLaquademin/aquadessteriluntukmendapatkankonsentrasi  175 g/mL.</li><...
17<br />PENYIAPAN INOKULUM DARI MEDIA PADAT <br />1.  Tambahkan 4 mL BBL Middlebrook 7H9 Broth kedalamtabungsteril 16,5 x ...
18<br />PROSEDUR 1<br />ProsedurInokulasiuntukTesSensitivitasMGIT: <br />1.  Ambil 5 tabung MGIT, label tabungpertamaMGIT ...
100 L darilarutan 5 g/mLMGITIsoniazidketabungMGIT INH.
100 L darilarutan 50 g/mLMGITRifampinketabungMGITRIF.
100 L darilarutan 175 L MGITEthambutolketabungMGITEMB.
TidakadaantibiotikditambahkanketabungMGITGC.</li></ul>4.  Inokulasikan 0,5 mLinokulumkedalamtiaptabung. Saputabungdengande...
19<br />PROSEDUR 2<br />MembacaTabungMGIT: <br />1.  Ambiltabung MGIT dariinkubatorpadahariketigasetelahinokulasidanbacade...
Jikatabung MGIT GC tidakberfluoresensidanlebihmiripKontrolNegatif, reinkubasitabungdanlanjutkanmembacasetiapharisampaihari...
Jikatabung MGIT GC negatifsampaiharike 12, makates-nyatidak valid.</li></ul>InterpretasiHasil<br />Interpretasikanhasil MG...
BACTEC™ MGIT™ 960 System<br />MerupakanalatgenerasiterbarudalamdeteksiMikobakterium<br />BACTEC™ MGIT™ 960 :<br />Sederhan...
Instrumen BACTECTM MGITTM 960 SystemDi Lab. Mikrobiologidi RSUD dr. Soetomo<br />21<br />
SistemDeteksi BACTECTM MGITTM 960<br />22<br />
SistemDeteksi BACTECTM MGITTM 960<br />Detektoradadisetiapbagianbawahrak:<br />Data dikumpulkandarisetiaptabung, setiap ja...
BACTEC™ MGIT™ 960 System<br />Di desainuntukmemenuhikebutuhanpemeriksaanberjumlahbanyak. Space-saving 960 tube capacity.<b...
BACTEC™ MGIT™ 960 System<br />Optional Data Management:  EpiCenter<br />Langkahpengerjaan yang mudahdenganscanning barcode...
Instrumensecaraotomatismengarahkanpenempatansetiap tube kedalaminstrumen.
Instrumenmengindikasipositifsecara VISUAL dansuara SIGNAL padasaatterjadipertumbuhan
4 Langkah SIMPEL prosedurpenggunaanalat</li></ul>25<br />
Step 1:Select workflow.<br />BACTEC™ MGIT™ 960 System<br />26<br />
Step 2:Scan tube.<br />BACTEC™ MGIT™ 960 System<br />27<br />
Step 3:Load where indicated by solid green LCD<br />BACTEC™ MGIT™ 960 System<br />28<br />
Step 4:Remove positives and completed negatives as they occur.<br />BACTEC™ MGIT™ 960 System<br />29<br />
+<br />–<br />!<br />Notification of Positives<br />Indicator lamp on drawer illuminates.<br />Audible alert sounds.<br />
Upcoming SlideShare
Loading in...5
×

Tpibaru5

747

Published on

Published in: Business, Technology
0 Comments
0 Likes
Statistics
Notes
  • Be the first to comment

  • Be the first to like this

No Downloads
Views
Total Views
747
On Slideshare
0
From Embeds
0
Number of Embeds
0
Actions
Shares
0
Downloads
0
Comments
0
Likes
0
Embeds 0
No embeds

No notes for slide

Transcript of "Tpibaru5"

  1. 1. DETEKSI MIKOBAKTERIUM MENGGUNAKAN MANUAL MGIT DAN BACTECTM MGITTM 960 SYSTEM <br />DIDIK AGUS SANTOSO,dr<br />Dr. JUSAK NUGRAHA,dr,MS,SpPK(K)<br />1<br />
  2. 2. Manual MGIT <br />Micobacterium Growth Indikator Tube<br />2<br />
  3. 3. BBL™ MGIT™ Tubes (4mL ; 7 mL)<br />Modified Middlebrook 7H9 Broth Base<br />Fluorescent indicator untukdeteksioxygen<br />Fluorochrom, tris4,7-difenil-1,<br />10-phenonthroline ruteniumpentahydrateklorida yang ditanamdalamsilikonpadabagianbawahtabung<br />Di produksidengan 10% CO2atmosfer.<br />
  4. 4. MGIT™ Growth Supplement<br />Sebagaisuplemenpertumbuhanmikobakterium<br />Oleic Acid – pentinguntukmetabolismemikobakterium<br />Albumin (bovine) – mengikatfree fatty acids yang dapatmeracunimikobakterium<br />Dextrose – sumberenergiuntukmikobakterium<br />Catalase– menghancurkanperoksida<br />Polyoxyethylenestearate (POES) -- meningkatkanpertumbuhan of M. tuberculosisdanmembantuuniforminokulasi<br />4<br />
  5. 5. BBL™ MGIT™ PANTA ™<br />Antimicrobial mixture:<br />Polymyxin B<br />Amphotericin B<br />Naladixic Acid<br />Trimethoprim<br />Azlocillin<br />MENEKAN pertumbuhannon-mikobakterium<br />5<br />
  6. 6. O2<br />O2<br />O2<br />Bagianatas<br />O2<br />CO2<br />O2<br />O2<br />O2<br />O2<br />O2<br />O2<br />CO2<br />Broth<br />O2<br />CO2<br />O2<br />O2<br />CO2<br />O2<br />FO2<br />FO2<br />F<br />F<br />FO2<br />F<br />F<br />FO2<br />FO2<br />F<br />F<br />F<br />Sensor<br />F<br />FO2<br />FO2<br />F<br />F<br />F<br />FO2<br />FO2<br />Fluoresensikuat<br />SedikitatauTidakadaFluoresensi<br />SistemDeteksi MGIT<br />KulturNegatif<br />KulturPositif<br />6<br />
  7. 7. 7<br />BAHAN & ALAT<br />Bahan yang disediakandalamsatu Kit MGIT: <br /><ul><li>BBL MGITMycobacteria Growth Indicator Tube, 4 ml, 1 box/ 25 tabung;
  8. 8. BBL MGIT OADC, 6 vial, 15 mL, untuk 150 tes
  9. 9. Campuranantibiotik BBL MGIT PANTA, 6 vial liophilized, untuk 150 tes.</li></li></ul><li>BAHAN & ALAT<br />Bahan yang tidakTersediadalam Kit: <br /><ul><li>Tabung FALCON 50 mL ,
  10. 10. 4% NaOH, 2,9% Na-Sitrat, bubuk NALC, buferfosfat pH 6,8 steril; ataucukup BBL Mycoprep 75mL atau 150 mL .
  11. 11. vortex mixer,
  12. 12. inkubator 37oC,
  13. 13. pipetsteril Falcon 1mL
  14. 14. pipet transfer steril Falcon
  15. 15. lampu UV 365 nm,
  16. 16. 0,4% larutan Na-sulfituntukkontrolpositif,
  17. 17. mikroskopuntuk AFB Staining danbahan-bahanuntukpewarnaanslide,
  18. 18. pipet 100 L dan 500  L,
  19. 19. desinfektantuberkulosidal.</li></ul>8<br />
  20. 20. 9<br />Pencernaan, DekontaminasidanPemekatanSpesimen<br />SPUTUM : <br /><ul><li>Spesimendiprosesmemakaimetode NALC-NaOHsebagaimanaanjuran CDC Public health Mycobacteriology: A Guide for the Level III Laboratory.6
  21. 21. Ataumemakai BBL MycoPrep kit.</li></ul>GASTRIC ASPIRATES: <br /><ul><li>Spesimendidekontaminasiseperti sputum.
  22. 22. Jika volume spesimenlebihdari 10 mL, makapekatkandengansentrifugasi. Resuspensispesimenkesekitar 5 mL air sterildankemudiandidekontaminasi. </li></ul>CAIRAN TUBUH (CSF, cairan synovial, cairan pleural, dsb.): <br /><ul><li>Spesimen yang diperolehsecaraaseptikdandiperkirakantidakadabakteridapatdiinokulasilangsungtanpadekontaminasi.
  23. 23. Jika volume spesimenlebihdari 10 mL, pekatkandengansentrifugasipada 3.000 x g selama 15 menit. Buangsupernatancairan.
  24. 24. Inokulasitabung MGIT denganendapannya.
  25. 25. Spesimen yang diperkirakanmengandungbakteri lain harusdidekontaminasi.</li></ul>JARINGAN: <br /><ul><li>Spesimenjaringanhendaknyadiprosessebagaimanaanjuran CDC Public health Mycobacteriology: A Guide for the Level III Laboratory.6</li></ul>FECES: <br /><ul><li>Suspensikan 1 g feces kedalam 5 mLMiddlebrook Broth. Vortex suspensiselama 5 detik.
  26. 26. Lanjutkansebagaimana sputum.</li></li></ul><li>ProsedurPencernaan/Dekontaminasi Sputum dengan NALC/NaOH<br />10<br />Siapkanlarutansegardenganmenambahkandalamjumlah yang sama 4% NaOHdan 2,9% sodium sitrat. Tambah 0,5 g bubuk NALC per 100 mLlarutanNaOH-Na Sitrat. Setelah NALC ditambahkan, gunakanlarutandalam 24 jam.<br />2 Masukkanspesimenkedalamtabung Falcon 50 mL.Spesimenjanganlebihdari 10 mL.Tambahkanlarutan NALC dengan volume yang samadenganspesimen. Dengantutuptertutuprapat, vortex tabung (sekitar 5-20 detik per tabung) danbaliktabunguntukmemastikanbahwalarutan NALC menyentuhseluruhpermukaantabungdantutupnya.<br />3.Biarkan spesimenselama 15-20 menit. <br />4.Isi tabungsampai 45 mLdenganbuferfosfatsterildengan pH 6,8. Kocokdengantangan.<br />5.Pekatkan spesimendengansentrifugeberkecepatan 3.000 x g selama 15 menit<br />6.Secara hati-hatibuanglarutansupernatandaripelet.<br />7.Resuspensi endapandenganbuferfosfatdenganmemakaipipet Pasteur steriluntukmemperolehvolume akhir 1 - 3 mL.<br />
  27. 27. Prosedur Pencernaan/Dekontaminasi Sputumdengan MYCOPREP<br />LANGKAH 1<br />11<br />SiapkansatuBotol MYCOPREP (NALC/NaOH). BukatutupBotol. Tekanampuluntukmemecahkan NALC. Tutupbotol. Kocokdenganbaik, larutansiapdigunakan.<br />Masukkanspesimenkedalamtabung Falcon 50 mL.Spesimenjanganlebihdari 10 mL.Tambahkanlarutan NALC dengan volume yang samadenganspesimen. Dengantutuptertutuprapat, vortex tabung (sekitar 5-20 detik per tabung) danbaliktabunguntukmemastikanbahwalarutan NALC menyentuhseluruhpermukaantabungdantutupnya.<br />LANGKAH 2<br />Biarkanspesimenselama 15-20 menit<br />LANGKAH 3<br />Isitabungsampai 45 mLdenganbuferfosfatsterildengan pH 6,8. Kocokdengantangan.<br />LANGKAH 4<br />LANGKAH 5<br />Pekatkanspesimendengansentrifugeberkecepatan 3.000 x g (Clay Adams Dynac-II/III) selama 15 menit.<br />Secarahati-hatibuanglarutansupernatandaripelet.<br />LANGKAH 6<br />Resuspensiendapandenganbuferfosfatdenganmemakaipipet Pasteur steriluntukmemperoleh volume akhir 1 - 3 mL<br />LANGKAH 7<br />
  28. 28. ProsedurPenyiapanTabung MGIT<br />LANGKAH 1<br />12<br />Label tabungMGITdengannomorspesimen.<br />BukatutuptabungMGIT, dansecaraaseptiktambahkan 0,5 mLMGIT OADC.<br />LANGKAH 2<br />Secaraaseptiktambah 0,1 mLMGITPANTA yang telahdilarutkan. Untukhasil yang terbaik, tambahkan OADC danantibiotik PANTA tepatsebeluminokulasispesimen.<br />LANGKAH 3<br />Tambah 0,5 mLsuspensispesimen yang telahdiprosesdenganBBLMycoprep. <br />LANGKAH 4<br />LANGKAH 5<br />Tutuptabungdenganrapatdankocokdenganbaik. <br />Bersihkantabungdantutupdengandesinfektantuberculosidal. <br />LANGKAH 6<br />Inkubasitabungpadasuhu 37oC <br />LANGKAH 7<br />LANGKAH 8<br />Baca tabungsetiapharimulai Hari-2<br />
  29. 29. 13<br />TabungKontrolPositif<br />Kosongkan broth daritabungMGIT baru.<br />Label tabung“KontrolPositif”,dandicatattanggalnya.<br />Siapkan 0.4% larutan sodium sulfite (0,4 g dalam 100 mLaquades/aquademinsteril).<br />Tambahkan 5 mLlarutan sodium sulfite ketabung, kencangkantutupnya, danbiarkan minimum 1 jam padasuhukamarsebelumdipakai.<br />KontrolPositifdapatdigunakanberkali-kali. SetiapKontrolPositifdapatdipakaisampaiempatminggujikadisimpandalamsuhukamar.<br />TabungKontrolNegatif<br />Adalahtabung MGIT baru, yang belumdibukadanbelumdiinokulasi<br />
  30. 30. 14<br />MembacaTabung MGIT:<br /><ul><li>Ambiltabungdariinkubator
  31. 31. Letakkanpadalampu UV bersebelahandenganKontrolPositifdanNegatif.
  32. 32. Dianjurkanuntukmembacaantara 4 - 10 tabungsekaligus.
  33. 33. Sebaiknyamenggunakankacamatapelindung UV padasaatmengamatifluoresensi.
  34. 34. Gunakancahaya normal ruangan. Hindarimembacadibawahmataharilangsungataudiruang yang gelap.
  35. 35. TandaitabungMGIT yang berfluoresensiterang,
  36. 36. BandingkandenganKontrolPositifdanNegatif.
  37. 37. JikatabungMGITlebihmiripKontrolPositif, makatabungtersebutpositif. JikalebihmiripKontrolNegatif, makatabungtersebutnegatif.
  38. 38. Pertumbuhanjugabisadiamatidenganadanyakekeruhan yang tidakhomogen, butiran-butiranataulempengankecildalam medium kultur.
  39. 39. Dari tabung MGIT Positiflakukanpewarnaan acid-fast bacilli.
  40. 40. Tabung yang Smear-nyanegatifdiperiksaadanyakontaminasibakteridenganmenanamnyake blood agar.
  41. 41. LakukansubkulturuntukidentifikasidantesresistensiobatdenganmamakaicairandaritabungBBL MGITpositif.
  42. 42. TabungMGIT negatifdibacaterussetiapharisampaidelapanmingguatausesuaidenganpengalamanlaboratoriumdimasa yang lalu. Tidakdibacanyatabungselamabeberapahari, misalnyakarenalibur, dapatmenyebabkankelambatanpembacaanpositif, tetapitidakberpengaruhnegatifterhadapperforma media. TabungMGIT yang negatiftidakbisadigunakanlagi. </li></li></ul><li>15<br />MGIT AST<br />TesSensitivitasAntibiotika<br />REAGEN:<br /><ul><li>Larutkanvial liophilizedBBL MGIT Streptomycin dengan 4 mLaquademin/aquadessteriluntukmendapatkankonsentrasi 40 g/mL.
  43. 43. Larutkan vial liophilizedBBL MGITIsoniaziddengan 4 mLaquademin/aquadessteriluntukmendapatkankonsentrasi 5 g/mL.
  44. 44. Larutkan vial liophilizedBBL MGITRifampindengan 4 mLaquademin/aquadessteriluntukmendapatkankonsentrasi 50 g/mL.
  45. 45. Larutkan vial liophilizedBBL MGITEthambutoldengan 4 mLaquademin/aquadessteriluntukmendapatkankonsentrasi 175 g/mL.</li></ul>PENYIMPANAN :<br /><ul><li>Setelahditerima, simpanvial liophilizedpada 2 - 8oC. Setelahdilarutkan, larutanantibiotikdapatdibekukandandisimpanpada -70oC sampai 6 bulan. Sekalidicairkan, segeradigunakandanbuangsisanya.</li></li></ul><li>16<br />PENYIAPAN INOKULUM dari TABUNG MGIT POSITIF <br />Untukpenyiapaninokulum, tabungMGITpositifhendaknyadigunakanseharisetelahiapertama kali menjadipositif, sampaidantermasuktigaharisetelahmula-mulapositif.<br />Tabung yang telahpositiflebihdariempathariharusdisubkulturketabung MGIT segardandigunakansatusampaitigaharisetelahtabung MGIT tersebutpositif.<br />1. Vortex tabung MGIT selama 10 detik.<br />2. Pipet 1,0 mLsuspensidaritabung MGIT tersebutkedalam 4 mL saline steril(pengenceran 1:5).<br />Inokulumtelahsiap. Lanjutkanke “ProsedurInokulasiuntukTesSensitivitas”<br />
  46. 46. 17<br />PENYIAPAN INOKULUM DARI MEDIA PADAT <br />1. Tambahkan 4 mL BBL Middlebrook 7H9 Broth kedalamtabungsteril 16,5 x 128 mm dengantutup, yang mengandung8 - 10 glass beads. <br />2. Ambildengan loop sterilsebanyakmungkinkoloni yang berumursampaidengan 14 hari. Usahakan agar tidakmengenai media padatnya. SuspensikankolonidalamMiddlebrook 7H9 Broth. Kekeruhansuspensihendaknyalebihdari 1,0 McFarland.<br />3. Vortex suspensiselama 2-3 menituntukmemecahkankelompok yang besar.<br />4. Biarkansuspensiselama 20 menittanpadiganggu.<br />5. Pindahkancairansupernatanketabungbertutupsteril lain (hindariberpindahnyaendapan) danbiarkan 15 menitlagi.<br />6. Pindahkancairansupernatan (harusmulus, tanpagumpalan) ketabungsterilketiga.<br />7. Sesuaikansuspensinyakestandar 0,5 McFarland dengannephelometer.<br />8. Encerkan 1,0 mLsuspensi 0,5 McFarland tersebutkedalam 4 mL saline steril (pengenceran 1:5).<br />Inokulumtelahsiap. Lanjutkanke “ProsedurInokulasiuntukTesSensitivitas” <br />
  47. 47. 18<br />PROSEDUR 1<br />ProsedurInokulasiuntukTesSensitivitasMGIT: <br />1. Ambil 5 tabung MGIT, label tabungpertamaMGIT GC (Growth Control), selanjutnyaMGIT STR, MGIT INH, MGIT RIF danterakhirMGIT EMB.<br />2. Tambahkansecaraaseptik 0,5 mLMGIT OADC ketiaptabung.<br />3. Pipetsecaraaseptik, denganmikropipet,<br /><ul><li>100 L darilarutan 40 g/mLMGIT Streptomycin ketabungMGIT STR.
  48. 48. 100 L darilarutan 5 g/mLMGITIsoniazidketabungMGIT INH.
  49. 49. 100 L darilarutan 50 g/mLMGITRifampinketabungMGITRIF.
  50. 50. 100 L darilarutan 175 L MGITEthambutolketabungMGITEMB.
  51. 51. TidakadaantibiotikditambahkanketabungMGITGC.</li></ul>4. Inokulasikan 0,5 mLinokulumkedalamtiaptabung. Saputabungdengandesinfektantuberkulosidal. Tutuprapattabungdankocokdenganbaik.<br />5. Inkubasipadasuhu 37oC.<br />6. Streak 0,1 mLinokulumke TSA dengan 5% Sheep Blood. Masukkankedalamkantungplastik. Inkubasipada 35oC - 37oC. Cekpada 48 jam.<br />Jikatidakadapertumbuhan, lanjutkandengan “MembacaTabung MGIT”<br />7. Jikaadapertumbuhandi agar darah, buangtabung MGIT, ulangiprosedurdengankulturmurni. <br />
  52. 52. 19<br />PROSEDUR 2<br />MembacaTabungMGIT: <br />1. Ambiltabung MGIT dariinkubatorpadahariketigasetelahinokulasidanbacadenganlampu UV gelombangpanjang.<br />2. Bandingkantabung MGIT GC dengantabungKontrolPositifdanKontrolNegatif.<br />3. Jikafluoresensitabung MGIT GC lebihmiripdenganKontrolPositifdibandingkanKontrolNegatif, makapositifadapertumbuhan. Sekalitabung MGIT GC positif, makaiadipakaiuntukmenginterpretasikantabung yang berisiobat. <br /><ul><li>Tabung yang berisiobatdiinterpretasikanpadaharidimanatabung MGIT GC positif, sampaiduaharikemudian, dantidaklebihdariempatbelashari.
  53. 53. Jikatabung MGIT GC tidakberfluoresensidanlebihmiripKontrolNegatif, reinkubasitabungdanlanjutkanmembacasetiapharisampaiharikeduabelassetelahinokulasi. Jikahasilnyaequivokal (sulitmenentukanapakahadafluoresensi) makatabungdianggapnegatifdandireinkubasi.
  54. 54. Jikatabung MGIT GC negatifsampaiharike 12, makates-nyatidak valid.</li></ul>InterpretasiHasil<br />Interpretasikanhasil MGIT sebagaisensitifjikatabung yang berisiobat TIDAK berfluoresensidalamwaktuduaharisetelah MGIT GC positif. Interpretasikansebagairesistenjikatabung yang berisiobatberfluoresensipadaataudalamwaktuduaharisetelah MGIT GC positif.<br />
  55. 55. BACTEC™ MGIT™ 960 System<br />MerupakanalatgenerasiterbarudalamdeteksiMikobakterium<br />BACTEC™ MGIT™ 960 :<br />Sederhana<br />Efisien<br />Performance<br />Safety<br />
  56. 56. Instrumen BACTECTM MGITTM 960 SystemDi Lab. Mikrobiologidi RSUD dr. Soetomo<br />21<br />
  57. 57. SistemDeteksi BACTECTM MGITTM 960<br />22<br />
  58. 58. SistemDeteksi BACTECTM MGITTM 960<br />Detektoradadisetiapbagianbawahrak:<br />Data dikumpulkandarisetiaptabung, setiap jam sekali.<br />Data dievaluasidantube positivityditentukanberdasarkansoftware algorithms.<br />
  59. 59. BACTEC™ MGIT™ 960 System<br />Di desainuntukmemenuhikebutuhanpemeriksaanberjumlahbanyak. Space-saving 960 tube capacity.<br />Satuinstrumenbisamemproseshingga<br />8000 specimen per Tahun.<br />LamanyaProtokoluntukpertumbuhanmulai 1 sampai 56 hari.<br />Lama protokolstandar: 42 days<br />24<br />
  60. 60. BACTEC™ MGIT™ 960 System<br />Optional Data Management: EpiCenter<br />Langkahpengerjaan yang mudahdenganscanning barcode :<br /><ul><li>Meminimalkanpotensikesalahan.
  61. 61. Instrumensecaraotomatismengarahkanpenempatansetiap tube kedalaminstrumen.
  62. 62. Instrumenmengindikasipositifsecara VISUAL dansuara SIGNAL padasaatterjadipertumbuhan
  63. 63. 4 Langkah SIMPEL prosedurpenggunaanalat</li></ul>25<br />
  64. 64. Step 1:Select workflow.<br />BACTEC™ MGIT™ 960 System<br />26<br />
  65. 65. Step 2:Scan tube.<br />BACTEC™ MGIT™ 960 System<br />27<br />
  66. 66. Step 3:Load where indicated by solid green LCD<br />BACTEC™ MGIT™ 960 System<br />28<br />
  67. 67. Step 4:Remove positives and completed negatives as they occur.<br />BACTEC™ MGIT™ 960 System<br />29<br />
  68. 68. +<br />–<br />!<br />Notification of Positives<br />Indicator lamp on drawer illuminates.<br />Audible alert sounds.<br />
  69. 69. #1<br />09/19/96<br />5 0 0<br />7 10 0<br />00:59<br />0 0 0<br />0 0 0<br />37.2 ° C<br />74 192 0<br />1 1 1<br />A / D17<br />233 117 319<br />Notification of Positives<br />31<br />
  70. 70. LangkahkerjamenggunakanBactec MGIT 960<br />Isolasi<br />Pengumpulan<br />spesimen<br />Pemrosesan<br />spesimen<br />PenyiapanTube<br />Instrument<br />Loading<br />
  71. 71. Instrument Loading<br />Load tubes kedalaminstrumensetelahpemrosesandaninokulasi.<br />Tempatkantubespadarakand carry to instrument for loading.<br />33<br />
  72. 72. KulturPositif<br />Instrumenakanmengeluarkansinyalbilaadakultur yang positif.<br />KeluarkankulturpositifdariinstrumendanlakukanAcid Fast Smear.<br />AFB Positive:<br />Subkulturpadasolid medium.<br />Laporkan : “Instrument Positive”<br /> “AFB Smear Positive”<br /> “ID Pending”.<br />34<br />
  73. 73. BACTEC™ MGIT™ 960 Susceptibility Test / TesSensitifitasAntibiotika<br />BACTEC MGIT 960 jugabisadigunakanuntuktessensitivitasantibiotikapadapengobatanTuberkulosis,yaitu:<br />Streptomycin<br />Isoniazid<br />Rifampin<br />Ethambutol<br />Pyrazinamide<br />35<br />
  74. 74. BACTEC™ MGIT™ 960 <br />Pilihantessensitivitasantibiotikaterdiridari:<br />Streptomycin, Isoniazid, Rifampin and Ethambutol (SIRE) testing against M. tuberculosis<br />SIRE Kit to perform AST at the Critical Concentrations<br />Separate kits are available to perform a 2nd test with higher concentrations of S and I if needed<br />PZA testing against M. tuberculosis<br />36<br />
  75. 75. Komponen BACTEC™ MGIT™ 960 SIRE <br />Terdiridari:<br />BACTEC MGIT 960 SIRE Kit (40 tests/kit)<br />BACTEC MGIT 960 STR 4.0 Kit (20 tests/kit)<br />BACTEC MGIT 960 INH 0.4 Kit (20 tests/kit)<br />BACTEC MGIT 960 EMB 7.5 Kit* (20 tests/kit)<br />AST Starter Kit<br />* Not available in U.S.<br />37<br />
  76. 76. 2. Scan AST set into instrument<br />1. Prepare Inoculum and inoculate SIRE tubes<br />3. When complete, scan out the set<br />4. Print the result<br />ProsedurAST Instrument <br />PZA test is performed in the same way, using just the 2-tube AST Set Carrier<br />38<br />
  77. 77. Kelebihan BACTEC™ MGIT™ 960 System<br />Non-radiometric.<br />Menggunakan MGIT media and sensor yang menetap.<br />EffisiendenganTeknologifluorometric<br />Akurat: deteksipertumbuhanmelaluideteksipenggunaan O2olehMycobacteria.<br />Otomatis Quality Control<br />Untukmemastikanalatberjalansecarapresisidanlayak.<br />39<br />
  78. 78. Kelebihan BACTEC™ MGIT™ 960 System<br />Monitoring BERKELANJUTAN:<br />HASIL cepat, membantupengobatanpasien<br />AMAN, Effisien, “on board incubation’.<br />TIDAK memerlukanpenanganantransfer tube setelahmasukdalamsistem<br />Instrument ‘walk away’<br /><ul><li>Kekurangan:
  79. 79. Hargainstrumenmahal
  80. 80. Di Surabaya hanyaada 2 , RSUD Dr.Soetomodan RKZ</li></ul>40<br />
  81. 81. TerimaKasih<br />41<br />
  82. 82. PenyimpananReagen<br />42<br /><ul><li>BBL MGITMycobacteria Growth Indicator Tube:
  83. 83. Simpanpada 2-25oC. JANGAN DIBEKUKAN.
  84. 84. BBL MGIT OADC,
  85. 85. simpanditempatgelappada 2-8oC.
  86. 86. hindaripembekuandanpanas.
  87. 87. jangandibukasampaidigunakan.
  88. 88. hindarikontakdengansinarmataharilangsung.
  89. 89. BBL MGIT PANTA
  90. 90. carapemakaian : Larutkansatu vial liophilizedcampuranantibiotik PANTA kedalam 3 ml aquadesatauaquademinsteril.
  91. 91. simpanpada 2-8oC.
  92. 92. setelahdilarutkan agar digunakandalamwaktu 72 jam jikadisimpanpada 2-8oC, atausampai 6 bulanjikadisimpanpada -20oC ataulebihdingin. Sekalidicairkan, campuran PANTA harussegeradigunakandansisanyahendaknyadibuang.</li></li></ul><li>BACTEC™ MGIT™ 960 System<br />Mengakomodasi 960 tubes:<br />154 sample/minggu (protokol 6 mingu)<br />Minimal user handling.<br />Tracks tube readings and protocol length.<br />Simple user interface with picture icons.<br />43<br />
  93. 93. BACTEC™ MGIT™ 960 System Improved Safety<br /><ul><li>Safe, efficient, on board incubation.
  94. 94. No need to handle or transfer tubes once the system is loaded.
  95. 95. Uses plastic tubes</li></ul>Non-radiometric<br />Uses NO sharps<br />44<br />
  96. 96. M. avium*<br />M. abscessus<br />M. bovis<br />M. celatum<br />M. fortuitum*<br />M. gastri<br />M. gordonae*<br />M. haemophilum**<br />M. intracellulare<br />M. kansasii*<br />M. malmoense<br />M. marinum<br />M. nonchromogenicum<br />M. phlei<br />M. simiae*<br />M. scrofulaceum<br />M. smegmatis<br />M. szulgai*<br />M. terrae<br />M. trivale<br />M. tuberculosis*<br />M. xenopi*<br />Species Detected as Positive in the BACTEC™ MGIT™ 960 System<br />* Species recovered in clinical evaluation<br />** With addition of hemin<br />45<br />
  97. 97. Isolation of Mycobacteria<br />BBL™ MGIT™ Tubes (7 mL)<br />Modified Middlebrook 7H9 Broth Base<br />Fluorescent indicator untuk oxygen deteksi <br />Di produksi dengan 10% CO2 atmosphere.<br />
  98. 98. Isolation of Mycobacteria<br />MGIT™ 960 Growth Supplement<br />Sebagai supplemen pertumbuhan mycobacterial<br />Oleic Acid – penting untuk metabolisma mycobacterial<br />Albumin (bovine) – mengikat free fatty acids yang dapat meracuni mycobacteria<br />Dextrose – sumber energi untuk mycobacteria<br />Catalase– menghancurkan peroxida<br />Polyoxyethylene stearate (POES) -- meningkatkan pertumbuhan of M. tuberculosis dan membantu uniform inokulasi<br />47<br />
  99. 99. Isolation of Mycobacteria<br />BBL™ MGIT™ PANTA ™<br />Antimicrobial mixture:<br />Polymyxin B<br />Amphotericin B<br />Naladixic Acid<br />Trimethoprim<br />Azlocillin<br />MENEKAN pertumbuhan non-mycobacterial<br />48<br />
  100. 100. Specimen Collection & Handling<br />Collect aseptically.<br />If transport delayed > 1 hour, refrigerate specimen to minimize growth of resident flora.<br />Refrigerate specimens in laboratory until processing can begin.<br />49<br />
  101. 101. Specimen Processing<br />Process specimens using NALC/NaOH method as recommended in CDC Manual:<br />Public Health Mycobacteriology: A Guide for the Level III Laboratory.<br />BBL™ MycoPrep™ may be used.<br />50<br />
  102. 102. Specimen PreparationNALC/NaOH Digestion Procedure - Sputum<br />Add the specimen to a 50 mL plastic centrifuge tube.<br />The specimen should not exceed 10 mL.<br />Add NALC / NaOH solution in volume equal to that of the specimen.<br />Invert the tube to ensure that the NALC solution contacts all surfaces of tube and cap. <br />Tighten cap securely and vortex tube for 15 - 20 seconds.<br />Do not overmix - inactivation of NALC may occur.<br />Allow specimen to stand for 15 – 20 minutes at room temperature<br />For thick specimens, vortex occasionally.<br />51<br />
  103. 103. Specimen PreparationNALC/NaOH Digestion Procedure - Sputum<br />Fill tube to 50 mL mark with sterile phosphate buffer, pH 6.8.<br />Swirl gently by hand to mix.<br />Concentrate by centrifugation at 3,000 x g for 15 minutes. <br />Insure that centrifuge tubes can withstand these high RCF’s. <br />Carefully decant and discard supernatant fluid from pellet.<br />Resuspend pellet with 1 - 3 mL sterile phosphate buffer.<br />52<br />
  104. 104. MGIT™ Tube Preparation<br />Prepare tubes while specimens are in centrifuge:<br />Label MGIT™ tube with specimen number.<br />Prepare PANTA.<br />Reconstitute with 15 mL Growth Supplement<br />For best results, add PANTA / Growth Supplement solution just prior to specimen inoculation.<br />53<br />
  105. 105. MGIT™ Tube Preparation<br />Unscrew cap and aseptically add 0.8 mL MGIT™ PANTA / Growth Supplement solution.<br />54<br />
  106. 106. MGIT™ Tube Preparation<br />Add 0.5 mL of concentrated specimen.<br /><ul><li>Also add 1 - 2 drops of specimen to a 7H10 agar or to an egg based medium.</li></ul>55<br />
  107. 107. MGIT™ Tube Preparation<br />Tightly recap tube and mix well.<br />Wipe tubes and caps with tuberculocidal disinfectant.<br />Enter MGIT tubes into MGIT 960 Instrument.<br />56<br />
  108. 108. KulturPositif<br />Kontaminasi:<br />Microorganisms other than AFB can grow and be detected as positive.<br />May also contain AFB.<br />Contaminated tubes may be re-processed and inoculated into fresh MGIT™ tube.<br />Refer to User’s Manual for details. <br />57<br />
  109. 109. KulturPositif<br />Positifpalsu<br />Tidaktampakorganismepadahapusan.<br />Return to instrument to allow tube to complete test protocol.<br />Re-enter within 5 hours:<br />Resets positivity algorithms<br />Retains previous test readings & protocol<br />58<br />
  110. 110. BACTEC™ MGIT™ 960 AST<br />Simple workflow<br />Instrument knows from the barcode which AST set is being entered (i.e., 2 tube vs. 8 tube)<br />Instrument automatically directs placement of AST set into instrument<br />59<br />
  111. 111. BACTEC™ MGIT™ 960 AST Capacity and Flexibility<br />Designed to meet the needs of laboratories performing mycobacteria growth and detection as well as susceptibility testing<br />5 AST tests (SIRE and PZA) per week will utilize approximately one third of a drawer<br />Allows flexibility in the definition of an “AST set”<br />AST sets can consist of 2, 3, 4, 5 or 8 tubes, one of which is the Growth Control tube<br />60<br />
  112. 112. BACTEC™ MGIT™ 960 SIRETesting Options<br />SIRE Susceptibility test options:<br />SIRE Kit to perform AST at the critical concentrations<br />Separate kits are available to perform a “2nd Tier” test with higher concentrations of S, I, and E.<br />Recommended if the organism shows resistance to the critical concentration of the drug<br />Testing can be done in any combination of drugs and concentrations <br />61<br />
  113. 113. ProsedurAST Inoculation <br />Add appropriate Supplement (SIRE or PZA) and drugs to appropriate tubes in AST Set<br />Prepare standardized inoculum<br />Positive MGIT tube: Use direct if Day 1 – 2 or dilute if Day 3 – 5<br />Isolate on solid media : Prepare 0.5 McFarland<br />Inoculate drug tubes<br />Prepare dilution and inoculate Growth Control tube<br />Place AST set into instrument<br />62<br />
  114. 114. Summary of Clinical Trial Study:<br />BACTEC™ MGIT™ 960 System:<br />False Positive rate* = 0.8%<br />False Negative rate = 0.5%<br />Average Breakthrough Contamination:<br />8.1%<br />range = 1.8% - 14.6%<br />*Based on the total number of specimens<br />63<br />
  115. 115. SMEAR Effective ?<br />Days<br />G. Pfyffer, et.al, , JCM, Feb. 1997<br />
  116. 116. PROTOCOL LENGTH OF MGIT Vs LJ CONVENTIONAL METHOD (DAYS) <br /> LJ METHOD<br />Average (+) 29.6 4.4<br />Normal range(+) 28-56 4 – 14<br />Negatives 56 – 63 42 – 56 <br />MGIT<br />65<br />
  117. 117. RESULTS OF MGIT Vs. LJ FROM OTHER RESEARCHERS<br />CONVENTIONAL BACTEC<br />STUDY CULTURE   SYSTEM<br />  <br /> Van Griethiuysen et al,1996 79.9% 95.9%<br /> Zanetti et al, 1997 69.3 % 95.0 %<br /> Jesus et al , 2001 46.6% 86.6%<br /> Lu et al , 2002 45.5 % 71.1 %<br />* Recovery rates from positive samples<br />66<br />
  118. 118. OBSERVATIONS<br /><ul><li>Most of the studies on evaluation of mycobacteria recovery from the fluorometric BACTEC 960 and the radiometric BACTEC 460 TB system have shown that they are more sensitive in recovery of mycobacteria than the conventional L-J and smear microscopy.
  119. 119. Zannetti et al (1997) showed no significant difference between the radiometric BACTEC 460 TB and the fluorometric BACTEC 960 thus 91.9% positivity and 95.1% positivity respectively. But use of radioisotopically labeled substrates has inhibiteduniversal applicationof the radiometric BACTEC 460 TB system.</li></ul>67<br />
  120. 120. <ul><li>This system is simple, efficient , safe to use and occupies small laboratry space.
  121. 121. In poor economies MGIT is relatively expensive to acquire and sustain.</li></ul>68<br />

×