• Save
Tpibaru5
Upcoming SlideShare
Loading in...5
×
 

Tpibaru5

on

  • 684 views

 

Statistics

Views

Total Views
684
Views on SlideShare
684
Embed Views
0

Actions

Likes
0
Downloads
0
Comments
0

0 Embeds 0

No embeds

Accessibility

Categories

Upload Details

Uploaded via as Microsoft PowerPoint

Usage Rights

© All Rights Reserved

Report content

Flagged as inappropriate Flag as inappropriate
Flag as inappropriate

Select your reason for flagging this presentation as inappropriate.

Cancel
  • Full Name Full Name Comment goes here.
    Are you sure you want to
    Your message goes here
    Processing…
Post Comment
Edit your comment

Tpibaru5 Tpibaru5 Presentation Transcript

  • DETEKSI MIKOBAKTERIUM MENGGUNAKAN MANUAL MGIT DAN BACTECTM MGITTM 960 SYSTEM
    DIDIK AGUS SANTOSO,dr
    Dr. JUSAK NUGRAHA,dr,MS,SpPK(K)
    1
  • Manual MGIT
    Micobacterium Growth Indikator Tube
    2
  • BBL™ MGIT™ Tubes (4mL ; 7 mL)
    Modified Middlebrook 7H9 Broth Base
    Fluorescent indicator untukdeteksioxygen
    Fluorochrom, tris4,7-difenil-1,
    10-phenonthroline ruteniumpentahydrateklorida yang ditanamdalamsilikonpadabagianbawahtabung
    Di produksidengan 10% CO2atmosfer.
  • MGIT™ Growth Supplement
    Sebagaisuplemenpertumbuhanmikobakterium
    Oleic Acid – pentinguntukmetabolismemikobakterium
    Albumin (bovine) – mengikatfree fatty acids yang dapatmeracunimikobakterium
    Dextrose – sumberenergiuntukmikobakterium
    Catalase– menghancurkanperoksida
    Polyoxyethylenestearate (POES) -- meningkatkanpertumbuhan of M. tuberculosisdanmembantuuniforminokulasi
    4
  • BBL™ MGIT™ PANTA ™
    Antimicrobial mixture:
    Polymyxin B
    Amphotericin B
    Naladixic Acid
    Trimethoprim
    Azlocillin
    MENEKAN pertumbuhannon-mikobakterium
    5
  • O2
    O2
    O2
    Bagianatas
    O2
    CO2
    O2
    O2
    O2
    O2
    O2
    O2
    CO2
    Broth
    O2
    CO2
    O2
    O2
    CO2
    O2
    FO2
    FO2
    F
    F
    FO2
    F
    F
    FO2
    FO2
    F
    F
    F
    Sensor
    F
    FO2
    FO2
    F
    F
    F
    FO2
    FO2
    Fluoresensikuat
    SedikitatauTidakadaFluoresensi
    SistemDeteksi MGIT
    KulturNegatif
    KulturPositif
    6
  • 7
    BAHAN & ALAT
    Bahan yang disediakandalamsatu Kit MGIT:
    • BBL MGITMycobacteria Growth Indicator Tube, 4 ml, 1 box/ 25 tabung;
    • BBL MGIT OADC, 6 vial, 15 mL, untuk 150 tes
    • Campuranantibiotik BBL MGIT PANTA, 6 vial liophilized, untuk 150 tes.
  • BAHAN & ALAT
    Bahan yang tidakTersediadalam Kit:
    • Tabung FALCON 50 mL ,
    • 4% NaOH, 2,9% Na-Sitrat, bubuk NALC, buferfosfat pH 6,8 steril; ataucukup BBL Mycoprep 75mL atau 150 mL .
    • vortex mixer,
    • inkubator 37oC,
    • pipetsteril Falcon 1mL
    • pipet transfer steril Falcon
    • lampu UV 365 nm,
    • 0,4% larutan Na-sulfituntukkontrolpositif,
    • mikroskopuntuk AFB Staining danbahan-bahanuntukpewarnaanslide,
    • pipet 100 L dan 500  L,
    • desinfektantuberkulosidal.
    8
  • 9
    Pencernaan, DekontaminasidanPemekatanSpesimen
    SPUTUM :
    • Spesimendiprosesmemakaimetode NALC-NaOHsebagaimanaanjuran CDC Public health Mycobacteriology: A Guide for the Level III Laboratory.6
    • Ataumemakai BBL MycoPrep kit.
    GASTRIC ASPIRATES:
    • Spesimendidekontaminasiseperti sputum.
    • Jika volume spesimenlebihdari 10 mL, makapekatkandengansentrifugasi. Resuspensispesimenkesekitar 5 mL air sterildankemudiandidekontaminasi.
    CAIRAN TUBUH (CSF, cairan synovial, cairan pleural, dsb.):
    • Spesimen yang diperolehsecaraaseptikdandiperkirakantidakadabakteridapatdiinokulasilangsungtanpadekontaminasi.
    • Jika volume spesimenlebihdari 10 mL, pekatkandengansentrifugasipada 3.000 x g selama 15 menit. Buangsupernatancairan.
    • Inokulasitabung MGIT denganendapannya.
    • Spesimen yang diperkirakanmengandungbakteri lain harusdidekontaminasi.
    JARINGAN:
    • Spesimenjaringanhendaknyadiprosessebagaimanaanjuran CDC Public health Mycobacteriology: A Guide for the Level III Laboratory.6
    FECES:
    • Suspensikan 1 g feces kedalam 5 mLMiddlebrook Broth. Vortex suspensiselama 5 detik.
    • Lanjutkansebagaimana sputum.
  • ProsedurPencernaan/Dekontaminasi Sputum dengan NALC/NaOH
    10
    Siapkanlarutansegardenganmenambahkandalamjumlah yang sama 4% NaOHdan 2,9% sodium sitrat. Tambah 0,5 g bubuk NALC per 100 mLlarutanNaOH-Na Sitrat. Setelah NALC ditambahkan, gunakanlarutandalam 24 jam.
    2 Masukkanspesimenkedalamtabung Falcon 50 mL.Spesimenjanganlebihdari 10 mL.Tambahkanlarutan NALC dengan volume yang samadenganspesimen. Dengantutuptertutuprapat, vortex tabung (sekitar 5-20 detik per tabung) danbaliktabunguntukmemastikanbahwalarutan NALC menyentuhseluruhpermukaantabungdantutupnya.
    3.Biarkan spesimenselama 15-20 menit.
    4.Isi tabungsampai 45 mLdenganbuferfosfatsterildengan pH 6,8. Kocokdengantangan.
    5.Pekatkan spesimendengansentrifugeberkecepatan 3.000 x g selama 15 menit
    6.Secara hati-hatibuanglarutansupernatandaripelet.
    7.Resuspensi endapandenganbuferfosfatdenganmemakaipipet Pasteur steriluntukmemperolehvolume akhir 1 - 3 mL.
  • Prosedur Pencernaan/Dekontaminasi Sputumdengan MYCOPREP
    LANGKAH 1
    11
    SiapkansatuBotol MYCOPREP (NALC/NaOH). BukatutupBotol. Tekanampuluntukmemecahkan NALC. Tutupbotol. Kocokdenganbaik, larutansiapdigunakan.
    Masukkanspesimenkedalamtabung Falcon 50 mL.Spesimenjanganlebihdari 10 mL.Tambahkanlarutan NALC dengan volume yang samadenganspesimen. Dengantutuptertutuprapat, vortex tabung (sekitar 5-20 detik per tabung) danbaliktabunguntukmemastikanbahwalarutan NALC menyentuhseluruhpermukaantabungdantutupnya.
    LANGKAH 2
    Biarkanspesimenselama 15-20 menit
    LANGKAH 3
    Isitabungsampai 45 mLdenganbuferfosfatsterildengan pH 6,8. Kocokdengantangan.
    LANGKAH 4
    LANGKAH 5
    Pekatkanspesimendengansentrifugeberkecepatan 3.000 x g (Clay Adams Dynac-II/III) selama 15 menit.
    Secarahati-hatibuanglarutansupernatandaripelet.
    LANGKAH 6
    Resuspensiendapandenganbuferfosfatdenganmemakaipipet Pasteur steriluntukmemperoleh volume akhir 1 - 3 mL
    LANGKAH 7
  • ProsedurPenyiapanTabung MGIT
    LANGKAH 1
    12
    Label tabungMGITdengannomorspesimen.
    BukatutuptabungMGIT, dansecaraaseptiktambahkan 0,5 mLMGIT OADC.
    LANGKAH 2
    Secaraaseptiktambah 0,1 mLMGITPANTA yang telahdilarutkan. Untukhasil yang terbaik, tambahkan OADC danantibiotik PANTA tepatsebeluminokulasispesimen.
    LANGKAH 3
    Tambah 0,5 mLsuspensispesimen yang telahdiprosesdenganBBLMycoprep.
    LANGKAH 4
    LANGKAH 5
    Tutuptabungdenganrapatdankocokdenganbaik.
    Bersihkantabungdantutupdengandesinfektantuberculosidal.
    LANGKAH 6
    Inkubasitabungpadasuhu 37oC
    LANGKAH 7
    LANGKAH 8
    Baca tabungsetiapharimulai Hari-2
  • 13
    TabungKontrolPositif
    Kosongkan broth daritabungMGIT baru.
    Label tabung“KontrolPositif”,dandicatattanggalnya.
    Siapkan 0.4% larutan sodium sulfite (0,4 g dalam 100 mLaquades/aquademinsteril).
    Tambahkan 5 mLlarutan sodium sulfite ketabung, kencangkantutupnya, danbiarkan minimum 1 jam padasuhukamarsebelumdipakai.
    KontrolPositifdapatdigunakanberkali-kali. SetiapKontrolPositifdapatdipakaisampaiempatminggujikadisimpandalamsuhukamar.
    TabungKontrolNegatif
    Adalahtabung MGIT baru, yang belumdibukadanbelumdiinokulasi
  • 14
    MembacaTabung MGIT:
    • Ambiltabungdariinkubator
    • Letakkanpadalampu UV bersebelahandenganKontrolPositifdanNegatif.
    • Dianjurkanuntukmembacaantara 4 - 10 tabungsekaligus.
    • Sebaiknyamenggunakankacamatapelindung UV padasaatmengamatifluoresensi.
    • Gunakancahaya normal ruangan. Hindarimembacadibawahmataharilangsungataudiruang yang gelap.
    • TandaitabungMGIT yang berfluoresensiterang,
    • BandingkandenganKontrolPositifdanNegatif.
    • JikatabungMGITlebihmiripKontrolPositif, makatabungtersebutpositif. JikalebihmiripKontrolNegatif, makatabungtersebutnegatif.
    • Pertumbuhanjugabisadiamatidenganadanyakekeruhan yang tidakhomogen, butiran-butiranataulempengankecildalam medium kultur.
    • Dari tabung MGIT Positiflakukanpewarnaan acid-fast bacilli.
    • Tabung yang Smear-nyanegatifdiperiksaadanyakontaminasibakteridenganmenanamnyake blood agar.
    • LakukansubkulturuntukidentifikasidantesresistensiobatdenganmamakaicairandaritabungBBL MGITpositif.
    • TabungMGIT negatifdibacaterussetiapharisampaidelapanmingguatausesuaidenganpengalamanlaboratoriumdimasa yang lalu. Tidakdibacanyatabungselamabeberapahari, misalnyakarenalibur, dapatmenyebabkankelambatanpembacaanpositif, tetapitidakberpengaruhnegatifterhadapperforma media. TabungMGIT yang negatiftidakbisadigunakanlagi.
  • 15
    MGIT AST
    TesSensitivitasAntibiotika
    REAGEN:
    • Larutkanvial liophilizedBBL MGIT Streptomycin dengan 4 mLaquademin/aquadessteriluntukmendapatkankonsentrasi 40 g/mL.
    • Larutkan vial liophilizedBBL MGITIsoniaziddengan 4 mLaquademin/aquadessteriluntukmendapatkankonsentrasi 5 g/mL.
    • Larutkan vial liophilizedBBL MGITRifampindengan 4 mLaquademin/aquadessteriluntukmendapatkankonsentrasi 50 g/mL.
    • Larutkan vial liophilizedBBL MGITEthambutoldengan 4 mLaquademin/aquadessteriluntukmendapatkankonsentrasi 175 g/mL.
    PENYIMPANAN :
    • Setelahditerima, simpanvial liophilizedpada 2 - 8oC. Setelahdilarutkan, larutanantibiotikdapatdibekukandandisimpanpada -70oC sampai 6 bulan. Sekalidicairkan, segeradigunakandanbuangsisanya.
  • 16
    PENYIAPAN INOKULUM dari TABUNG MGIT POSITIF
    Untukpenyiapaninokulum, tabungMGITpositifhendaknyadigunakanseharisetelahiapertama kali menjadipositif, sampaidantermasuktigaharisetelahmula-mulapositif.
    Tabung yang telahpositiflebihdariempathariharusdisubkulturketabung MGIT segardandigunakansatusampaitigaharisetelahtabung MGIT tersebutpositif.
    1. Vortex tabung MGIT selama 10 detik.
    2. Pipet 1,0 mLsuspensidaritabung MGIT tersebutkedalam 4 mL saline steril(pengenceran 1:5).
    Inokulumtelahsiap. Lanjutkanke “ProsedurInokulasiuntukTesSensitivitas”
  • 17
    PENYIAPAN INOKULUM DARI MEDIA PADAT
    1. Tambahkan 4 mL BBL Middlebrook 7H9 Broth kedalamtabungsteril 16,5 x 128 mm dengantutup, yang mengandung8 - 10 glass beads.
    2. Ambildengan loop sterilsebanyakmungkinkoloni yang berumursampaidengan 14 hari. Usahakan agar tidakmengenai media padatnya. SuspensikankolonidalamMiddlebrook 7H9 Broth. Kekeruhansuspensihendaknyalebihdari 1,0 McFarland.
    3. Vortex suspensiselama 2-3 menituntukmemecahkankelompok yang besar.
    4. Biarkansuspensiselama 20 menittanpadiganggu.
    5. Pindahkancairansupernatanketabungbertutupsteril lain (hindariberpindahnyaendapan) danbiarkan 15 menitlagi.
    6. Pindahkancairansupernatan (harusmulus, tanpagumpalan) ketabungsterilketiga.
    7. Sesuaikansuspensinyakestandar 0,5 McFarland dengannephelometer.
    8. Encerkan 1,0 mLsuspensi 0,5 McFarland tersebutkedalam 4 mL saline steril (pengenceran 1:5).
    Inokulumtelahsiap. Lanjutkanke “ProsedurInokulasiuntukTesSensitivitas”
  • 18
    PROSEDUR 1
    ProsedurInokulasiuntukTesSensitivitasMGIT:
    1. Ambil 5 tabung MGIT, label tabungpertamaMGIT GC (Growth Control), selanjutnyaMGIT STR, MGIT INH, MGIT RIF danterakhirMGIT EMB.
    2. Tambahkansecaraaseptik 0,5 mLMGIT OADC ketiaptabung.
    3. Pipetsecaraaseptik, denganmikropipet,
    • 100 L darilarutan 40 g/mLMGIT Streptomycin ketabungMGIT STR.
    • 100 L darilarutan 5 g/mLMGITIsoniazidketabungMGIT INH.
    • 100 L darilarutan 50 g/mLMGITRifampinketabungMGITRIF.
    • 100 L darilarutan 175 L MGITEthambutolketabungMGITEMB.
    • TidakadaantibiotikditambahkanketabungMGITGC.
    4. Inokulasikan 0,5 mLinokulumkedalamtiaptabung. Saputabungdengandesinfektantuberkulosidal. Tutuprapattabungdankocokdenganbaik.
    5. Inkubasipadasuhu 37oC.
    6. Streak 0,1 mLinokulumke TSA dengan 5% Sheep Blood. Masukkankedalamkantungplastik. Inkubasipada 35oC - 37oC. Cekpada 48 jam.
    Jikatidakadapertumbuhan, lanjutkandengan “MembacaTabung MGIT”
    7. Jikaadapertumbuhandi agar darah, buangtabung MGIT, ulangiprosedurdengankulturmurni.
  • 19
    PROSEDUR 2
    MembacaTabungMGIT:
    1. Ambiltabung MGIT dariinkubatorpadahariketigasetelahinokulasidanbacadenganlampu UV gelombangpanjang.
    2. Bandingkantabung MGIT GC dengantabungKontrolPositifdanKontrolNegatif.
    3. Jikafluoresensitabung MGIT GC lebihmiripdenganKontrolPositifdibandingkanKontrolNegatif, makapositifadapertumbuhan. Sekalitabung MGIT GC positif, makaiadipakaiuntukmenginterpretasikantabung yang berisiobat.
    • Tabung yang berisiobatdiinterpretasikanpadaharidimanatabung MGIT GC positif, sampaiduaharikemudian, dantidaklebihdariempatbelashari.
    • Jikatabung MGIT GC tidakberfluoresensidanlebihmiripKontrolNegatif, reinkubasitabungdanlanjutkanmembacasetiapharisampaiharikeduabelassetelahinokulasi. Jikahasilnyaequivokal (sulitmenentukanapakahadafluoresensi) makatabungdianggapnegatifdandireinkubasi.
    • Jikatabung MGIT GC negatifsampaiharike 12, makates-nyatidak valid.
    InterpretasiHasil
    Interpretasikanhasil MGIT sebagaisensitifjikatabung yang berisiobat TIDAK berfluoresensidalamwaktuduaharisetelah MGIT GC positif. Interpretasikansebagairesistenjikatabung yang berisiobatberfluoresensipadaataudalamwaktuduaharisetelah MGIT GC positif.
  • BACTEC™ MGIT™ 960 System
    MerupakanalatgenerasiterbarudalamdeteksiMikobakterium
    BACTEC™ MGIT™ 960 :
    Sederhana
    Efisien
    Performance
    Safety
  • Instrumen BACTECTM MGITTM 960 SystemDi Lab. Mikrobiologidi RSUD dr. Soetomo
    21
  • SistemDeteksi BACTECTM MGITTM 960
    22
  • SistemDeteksi BACTECTM MGITTM 960
    Detektoradadisetiapbagianbawahrak:
    Data dikumpulkandarisetiaptabung, setiap jam sekali.
    Data dievaluasidantube positivityditentukanberdasarkansoftware algorithms.
  • BACTEC™ MGIT™ 960 System
    Di desainuntukmemenuhikebutuhanpemeriksaanberjumlahbanyak. Space-saving 960 tube capacity.
    Satuinstrumenbisamemproseshingga
    8000 specimen per Tahun.
    LamanyaProtokoluntukpertumbuhanmulai 1 sampai 56 hari.
    Lama protokolstandar: 42 days
    24
  • BACTEC™ MGIT™ 960 System
    Optional Data Management: EpiCenter
    Langkahpengerjaan yang mudahdenganscanning barcode :
    • Meminimalkanpotensikesalahan.
    • Instrumensecaraotomatismengarahkanpenempatansetiap tube kedalaminstrumen.
    • Instrumenmengindikasipositifsecara VISUAL dansuara SIGNAL padasaatterjadipertumbuhan
    • 4 Langkah SIMPEL prosedurpenggunaanalat
    25
  • Step 1:Select workflow.
    BACTEC™ MGIT™ 960 System
    26
  • Step 2:Scan tube.
    BACTEC™ MGIT™ 960 System
    27
  • Step 3:Load where indicated by solid green LCD
    BACTEC™ MGIT™ 960 System
    28
  • Step 4:Remove positives and completed negatives as they occur.
    BACTEC™ MGIT™ 960 System
    29
  • +

    !
    Notification of Positives
    Indicator lamp on drawer illuminates.
    Audible alert sounds.
  • #1
    09/19/96
    5 0 0
    7 10 0
    00:59
    0 0 0
    0 0 0
    37.2 ° C
    74 192 0
    1 1 1
    A / D17
    233 117 319
    Notification of Positives
    31
  • LangkahkerjamenggunakanBactec MGIT 960
    Isolasi
    Pengumpulan
    spesimen
    Pemrosesan
    spesimen
    PenyiapanTube
    Instrument
    Loading
  • Instrument Loading
    Load tubes kedalaminstrumensetelahpemrosesandaninokulasi.
    Tempatkantubespadarakand carry to instrument for loading.
    33
  • KulturPositif
    Instrumenakanmengeluarkansinyalbilaadakultur yang positif.
    KeluarkankulturpositifdariinstrumendanlakukanAcid Fast Smear.
    AFB Positive:
    Subkulturpadasolid medium.
    Laporkan : “Instrument Positive”
    “AFB Smear Positive”
    “ID Pending”.
    34
  • BACTEC™ MGIT™ 960 Susceptibility Test / TesSensitifitasAntibiotika
    BACTEC MGIT 960 jugabisadigunakanuntuktessensitivitasantibiotikapadapengobatanTuberkulosis,yaitu:
    Streptomycin
    Isoniazid
    Rifampin
    Ethambutol
    Pyrazinamide
    35
  • BACTEC™ MGIT™ 960
    Pilihantessensitivitasantibiotikaterdiridari:
    Streptomycin, Isoniazid, Rifampin and Ethambutol (SIRE) testing against M. tuberculosis
    SIRE Kit to perform AST at the Critical Concentrations
    Separate kits are available to perform a 2nd test with higher concentrations of S and I if needed
    PZA testing against M. tuberculosis
    36
  • Komponen BACTEC™ MGIT™ 960 SIRE
    Terdiridari:
    BACTEC MGIT 960 SIRE Kit (40 tests/kit)
    BACTEC MGIT 960 STR 4.0 Kit (20 tests/kit)
    BACTEC MGIT 960 INH 0.4 Kit (20 tests/kit)
    BACTEC MGIT 960 EMB 7.5 Kit* (20 tests/kit)
    AST Starter Kit
    * Not available in U.S.
    37
  • 2. Scan AST set into instrument
    1. Prepare Inoculum and inoculate SIRE tubes
    3. When complete, scan out the set
    4. Print the result
    ProsedurAST Instrument
    PZA test is performed in the same way, using just the 2-tube AST Set Carrier
    38
  • Kelebihan BACTEC™ MGIT™ 960 System
    Non-radiometric.
    Menggunakan MGIT media and sensor yang menetap.
    EffisiendenganTeknologifluorometric
    Akurat: deteksipertumbuhanmelaluideteksipenggunaan O2olehMycobacteria.
    Otomatis Quality Control
    Untukmemastikanalatberjalansecarapresisidanlayak.
    39
  • Kelebihan BACTEC™ MGIT™ 960 System
    Monitoring BERKELANJUTAN:
    HASIL cepat, membantupengobatanpasien
    AMAN, Effisien, “on board incubation’.
    TIDAK memerlukanpenanganantransfer tube setelahmasukdalamsistem
    Instrument ‘walk away’
    • Kekurangan:
    • Hargainstrumenmahal
    • Di Surabaya hanyaada 2 , RSUD Dr.Soetomodan RKZ
    40
  • TerimaKasih
    41
  • PenyimpananReagen
    42
    • BBL MGITMycobacteria Growth Indicator Tube:
    • Simpanpada 2-25oC. JANGAN DIBEKUKAN.
    • BBL MGIT OADC,
    • simpanditempatgelappada 2-8oC.
    • hindaripembekuandanpanas.
    • jangandibukasampaidigunakan.
    • hindarikontakdengansinarmataharilangsung.
    • BBL MGIT PANTA
    • carapemakaian : Larutkansatu vial liophilizedcampuranantibiotik PANTA kedalam 3 ml aquadesatauaquademinsteril.
    • simpanpada 2-8oC.
    • setelahdilarutkan agar digunakandalamwaktu 72 jam jikadisimpanpada 2-8oC, atausampai 6 bulanjikadisimpanpada -20oC ataulebihdingin. Sekalidicairkan, campuran PANTA harussegeradigunakandansisanyahendaknyadibuang.
  • BACTEC™ MGIT™ 960 System
    Mengakomodasi 960 tubes:
    154 sample/minggu (protokol 6 mingu)
    Minimal user handling.
    Tracks tube readings and protocol length.
    Simple user interface with picture icons.
    43
  • BACTEC™ MGIT™ 960 System Improved Safety
    • Safe, efficient, on board incubation.
    • No need to handle or transfer tubes once the system is loaded.
    • Uses plastic tubes
    Non-radiometric
    Uses NO sharps
    44
  • M. avium*
    M. abscessus
    M. bovis
    M. celatum
    M. fortuitum*
    M. gastri
    M. gordonae*
    M. haemophilum**
    M. intracellulare
    M. kansasii*
    M. malmoense
    M. marinum
    M. nonchromogenicum
    M. phlei
    M. simiae*
    M. scrofulaceum
    M. smegmatis
    M. szulgai*
    M. terrae
    M. trivale
    M. tuberculosis*
    M. xenopi*
    Species Detected as Positive in the BACTEC™ MGIT™ 960 System
    * Species recovered in clinical evaluation
    ** With addition of hemin
    45
  • Isolation of Mycobacteria
    BBL™ MGIT™ Tubes (7 mL)
    Modified Middlebrook 7H9 Broth Base
    Fluorescent indicator untuk oxygen deteksi
    Di produksi dengan 10% CO2 atmosphere.
  • Isolation of Mycobacteria
    MGIT™ 960 Growth Supplement
    Sebagai supplemen pertumbuhan mycobacterial
    Oleic Acid – penting untuk metabolisma mycobacterial
    Albumin (bovine) – mengikat free fatty acids yang dapat meracuni mycobacteria
    Dextrose – sumber energi untuk mycobacteria
    Catalase– menghancurkan peroxida
    Polyoxyethylene stearate (POES) -- meningkatkan pertumbuhan of M. tuberculosis dan membantu uniform inokulasi
    47
  • Isolation of Mycobacteria
    BBL™ MGIT™ PANTA ™
    Antimicrobial mixture:
    Polymyxin B
    Amphotericin B
    Naladixic Acid
    Trimethoprim
    Azlocillin
    MENEKAN pertumbuhan non-mycobacterial
    48
  • Specimen Collection & Handling
    Collect aseptically.
    If transport delayed > 1 hour, refrigerate specimen to minimize growth of resident flora.
    Refrigerate specimens in laboratory until processing can begin.
    49
  • Specimen Processing
    Process specimens using NALC/NaOH method as recommended in CDC Manual:
    Public Health Mycobacteriology: A Guide for the Level III Laboratory.
    BBL™ MycoPrep™ may be used.
    50
  • Specimen PreparationNALC/NaOH Digestion Procedure - Sputum
    Add the specimen to a 50 mL plastic centrifuge tube.
    The specimen should not exceed 10 mL.
    Add NALC / NaOH solution in volume equal to that of the specimen.
    Invert the tube to ensure that the NALC solution contacts all surfaces of tube and cap.
    Tighten cap securely and vortex tube for 15 - 20 seconds.
    Do not overmix - inactivation of NALC may occur.
    Allow specimen to stand for 15 – 20 minutes at room temperature
    For thick specimens, vortex occasionally.
    51
  • Specimen PreparationNALC/NaOH Digestion Procedure - Sputum
    Fill tube to 50 mL mark with sterile phosphate buffer, pH 6.8.
    Swirl gently by hand to mix.
    Concentrate by centrifugation at 3,000 x g for 15 minutes.
    Insure that centrifuge tubes can withstand these high RCF’s.
    Carefully decant and discard supernatant fluid from pellet.
    Resuspend pellet with 1 - 3 mL sterile phosphate buffer.
    52
  • MGIT™ Tube Preparation
    Prepare tubes while specimens are in centrifuge:
    Label MGIT™ tube with specimen number.
    Prepare PANTA.
    Reconstitute with 15 mL Growth Supplement
    For best results, add PANTA / Growth Supplement solution just prior to specimen inoculation.
    53
  • MGIT™ Tube Preparation
    Unscrew cap and aseptically add 0.8 mL MGIT™ PANTA / Growth Supplement solution.
    54
  • MGIT™ Tube Preparation
    Add 0.5 mL of concentrated specimen.
    • Also add 1 - 2 drops of specimen to a 7H10 agar or to an egg based medium.
    55
  • MGIT™ Tube Preparation
    Tightly recap tube and mix well.
    Wipe tubes and caps with tuberculocidal disinfectant.
    Enter MGIT tubes into MGIT 960 Instrument.
    56
  • KulturPositif
    Kontaminasi:
    Microorganisms other than AFB can grow and be detected as positive.
    May also contain AFB.
    Contaminated tubes may be re-processed and inoculated into fresh MGIT™ tube.
    Refer to User’s Manual for details.
    57
  • KulturPositif
    Positifpalsu
    Tidaktampakorganismepadahapusan.
    Return to instrument to allow tube to complete test protocol.
    Re-enter within 5 hours:
    Resets positivity algorithms
    Retains previous test readings & protocol
    58
  • BACTEC™ MGIT™ 960 AST
    Simple workflow
    Instrument knows from the barcode which AST set is being entered (i.e., 2 tube vs. 8 tube)
    Instrument automatically directs placement of AST set into instrument
    59
  • BACTEC™ MGIT™ 960 AST Capacity and Flexibility
    Designed to meet the needs of laboratories performing mycobacteria growth and detection as well as susceptibility testing
    5 AST tests (SIRE and PZA) per week will utilize approximately one third of a drawer
    Allows flexibility in the definition of an “AST set”
    AST sets can consist of 2, 3, 4, 5 or 8 tubes, one of which is the Growth Control tube
    60
  • BACTEC™ MGIT™ 960 SIRETesting Options
    SIRE Susceptibility test options:
    SIRE Kit to perform AST at the critical concentrations
    Separate kits are available to perform a “2nd Tier” test with higher concentrations of S, I, and E.
    Recommended if the organism shows resistance to the critical concentration of the drug
    Testing can be done in any combination of drugs and concentrations
    61
  • ProsedurAST Inoculation
    Add appropriate Supplement (SIRE or PZA) and drugs to appropriate tubes in AST Set
    Prepare standardized inoculum
    Positive MGIT tube: Use direct if Day 1 – 2 or dilute if Day 3 – 5
    Isolate on solid media : Prepare 0.5 McFarland
    Inoculate drug tubes
    Prepare dilution and inoculate Growth Control tube
    Place AST set into instrument
    62
  • Summary of Clinical Trial Study:
    BACTEC™ MGIT™ 960 System:
    False Positive rate* = 0.8%
    False Negative rate = 0.5%
    Average Breakthrough Contamination:
    8.1%
    range = 1.8% - 14.6%
    *Based on the total number of specimens
    63
  • SMEAR Effective ?
    Days
    G. Pfyffer, et.al, , JCM, Feb. 1997
  • PROTOCOL LENGTH OF MGIT Vs LJ CONVENTIONAL METHOD (DAYS)
    LJ METHOD
    Average (+) 29.6 4.4
    Normal range(+) 28-56 4 – 14
    Negatives 56 – 63 42 – 56
    MGIT
    65
  • RESULTS OF MGIT Vs. LJ FROM OTHER RESEARCHERS
    CONVENTIONAL BACTEC
    STUDY CULTURE   SYSTEM
      
    Van Griethiuysen et al,1996 79.9% 95.9%
    Zanetti et al, 1997 69.3 % 95.0 %
    Jesus et al , 2001 46.6% 86.6%
    Lu et al , 2002 45.5 % 71.1 %
    * Recovery rates from positive samples
    66
  • OBSERVATIONS
    • Most of the studies on evaluation of mycobacteria recovery from the fluorometric BACTEC 960 and the radiometric BACTEC 460 TB system have shown that they are more sensitive in recovery of mycobacteria than the conventional L-J and smear microscopy.
    • Zannetti et al (1997) showed no significant difference between the radiometric BACTEC 460 TB and the fluorometric BACTEC 960 thus 91.9% positivity and 95.1% positivity respectively. But use of radioisotopically labeled substrates has inhibiteduniversal applicationof the radiometric BACTEC 460 TB system.
    67
    • This system is simple, efficient , safe to use and occupies small laboratry space.
    • In poor economies MGIT is relatively expensive to acquire and sustain.
    68