Pemeriksaan Immunoglobulin A (IgA) dengan metode Radial Immunodiffusion<br />Ferdy,dr/ Endang Retnowati, dr, MS, SpPK(K)<b...
2 subklas: <br />IgA1 dan IgA2<br />Antibodi penting pada imunitas mukosa.<br />IgA<br />3-5 gram/hari disekresi ke lumen ...
Struktur Ig A<br />Gambar 1: Struktur Ig A (Sumber: Siemel, 2006)<br />3<br />
Pendahuluan<br />4<br />
Arti klinis<br />Ig A menurun:<br />Selective IgA deficiency<br />Infeksi Neisseria gonorrhœae<br />5<br />
IgA meningkat<br />Ig A nephropathy<br />Penyakit kronis seperti hepatitis<br />Sirosis hepatis<br />Myeloma<br />Penyakit...
Pemeriksaan Immunoglobulin A<br />Metode :<br />Radial immunodifusion<br />Radioimmunoassay<br />Nefelometri<br />ELISA<br...
Presipitasi<br />8<br />
9<br />
Kurva Presipitasi<br />Gambar2. KurvaPresipitasi. (Sheehan, 1990)<br />10<br />
Gambar3. Kompleks Ag – Ab.  (Sheehan, 1990)<br />11<br />
RADIAL IMMUNODIFFUSION (RID)<br />12<br />Antisera/ Ab<br />Gel agarosa fase cair (50oC)<br />50 – 80 jam  <br />cincin p...
KECEPATAN DIFUSI<br />Ukuran molekul<br />Interaksi <br />matriks gel &<br />reaktan<br />FAKTOR<br />Viskositas &<br />Hi...
CARA PEMBACAAN RID <br />METODE<br />Mancini, endpoint diffusion.<br />Fahey, kinetic diffusion.<br />14<br />(Sheehan, 19...
CARA PEMBACAAN RID<br />Fahey<br />Mancini<br /><ul><li>diameter cincinpresipitasidiukurstl 18 jam
Grafiksemilogaritmik; sumbuy:kadarygdianalisa;
sumbu x :diameter cincinpresipitasi (termasuksumuran)
Ag dibiarkanberdifusimencapaipresipitasimaks
IgA; inkubasi 48 jam
Grafik; </li></ul>sumbu y:kadar Ag & sumbux: cincinpresipitasi.<br />15<br />(Sheehan, 1990)<br />
Gambar 4. Grafik Fahey (kinetic diffusion method)<br />16<br />(Sheehan, 1990)<br />
Gambar 5. Grafik Mancini (endpoint method) <br />17<br />(Sheehan, 1990)<br />
18<br />HASIL<br />Hasil dikali <br />faktor <br />pengenceran<br />Hasil kurang <br />dari standar<br />(Sheehan, 1990)<b...
mengisi sumuran terlalu sedikit/ banyak <br />menumpahkan serum pasien ke dalam gel agarosa  <br />hasiltdkakurat<br />pe...
Gambar6. PolacincinpresipitasipadaRID(Sheehan, 1990)<br />20<br />
Pemeriksaan IgA di Instalasi Patologi Klinik RSUD.dr.Soetomo<br />Prinsip pemeriksaan (RID):<br />Ig A serum/plasma manusi...
Reagen: <br />Tiap plate NOR partigen mempunyai 12 sumuran imunodifusi untuk menentukan Ig A serum/plasma.<br />Komposisi:...
23<br />Gambar7. NOR Partigen Plate<br />(Lab. PK, 2011)<br />
Penyimpanan dan stabilitas<br />NOR Patigen sebaiknya disimpan pada suhu 2-8°C pada pembungkus yang belum dibuka, stabil s...
Spesimen<br />serum maupun plasma segar (24 jam sesudah pengambilan)<br />bila sampel tidak langsung dikerjakan sebaiknya ...
Prosedur<br />5 µl sampel<br />1<br />Tes serum<br />2<br />8<br />Antisera <br />dalam agar<br />Tes serum<br />3<br />7<...
Gambar8. Meβ Projector, Lab. PK. Dr. Soetomo, 2011<br />27<br />
28<br />Gambar9. TabelReferensi<br />(Lab. PK, 2010)<br />
Nilai normal<br />IgA	: 70 – 350 mg/ dL<br />29<br />
TERIMAKASIH<br />30<br />
we defined IgA deficiency as plasma samples with less than 100 ngIgA per mL,<br />decreased level of IgA as plasma samples...
IgA measurement by nephelometry<br />Beckman Coulter, Inc. (Fullerton,Calif.).<br />IgA levels were considered deficient w...
Grafik Semilogaritmik<br />33<br />
34<br />NEFELOMETRI <br />Nephelometri : <br />carapengukurankadarzatdenganmengukurpendarancahaya (scattered) yang mengena...
35<br />PRINSIP NEPHELOMETRI (1)<br />Prinsip nephelometri :<br />		1. pendaran cahaya,<br />		2. kinetik cairan pada fase...
36<br />PRINSIP NEPHELOMETRI (2)<br />PENDARAN CAHAYA<br />Pendarancahayadipengaruhi : <br />		a. diameter partikel,<br />...
37<br />PRINSIP NEPHELOMETRI (3)<br />	b. partikellebihbesar (komplek Ag-Ab) :<br />		- menghasilkanpendarancahayaRaeyleig...
38<br />PRINSIP NEPHELOMETRI (4)<br />
39<br />PRINSIP NEPHELOMETRI (5)<br />
Upcoming SlideShare
Loading in …5
×

Tibaru13

1,238 views
1,141 views

Published on

Published in: Health & Medicine, Technology
0 Comments
0 Likes
Statistics
Notes
  • Be the first to comment

  • Be the first to like this

No Downloads
Views
Total views
1,238
On SlideShare
0
From Embeds
0
Number of Embeds
24
Actions
Shares
0
Downloads
0
Comments
0
Likes
0
Embeds 0
No embeds

No notes for slide

Tibaru13

  1. 1. Pemeriksaan Immunoglobulin A (IgA) dengan metode Radial Immunodiffusion<br />Ferdy,dr/ Endang Retnowati, dr, MS, SpPK(K)<br />TUTOR IMUNOLOGI<br />1<br />
  2. 2. 2 subklas: <br />IgA1 dan IgA2<br />Antibodi penting pada imunitas mukosa.<br />IgA<br />3-5 gram/hari disekresi ke lumen intestinal<br />75% Ig total dihasilkan tubuh<br />2<br />Pendahuluan<br />
  3. 3. Struktur Ig A<br />Gambar 1: Struktur Ig A (Sumber: Siemel, 2006)<br />3<br />
  4. 4. Pendahuluan<br />4<br />
  5. 5. Arti klinis<br />Ig A menurun:<br />Selective IgA deficiency<br />Infeksi Neisseria gonorrhœae<br />5<br />
  6. 6. IgA meningkat<br />Ig A nephropathy<br />Penyakit kronis seperti hepatitis<br />Sirosis hepatis<br />Myeloma<br />Penyakit autoimun seperti SLE<br />6<br />
  7. 7. Pemeriksaan Immunoglobulin A<br />Metode :<br />Radial immunodifusion<br />Radioimmunoassay<br />Nefelometri<br />ELISA<br />7<br />
  8. 8. Presipitasi<br />8<br />
  9. 9. 9<br />
  10. 10. Kurva Presipitasi<br />Gambar2. KurvaPresipitasi. (Sheehan, 1990)<br />10<br />
  11. 11. Gambar3. Kompleks Ag – Ab. (Sheehan, 1990)<br />11<br />
  12. 12. RADIAL IMMUNODIFFUSION (RID)<br />12<br />Antisera/ Ab<br />Gel agarosa fase cair (50oC)<br />50 – 80 jam  <br />cincin presipitasi<br />Serum standar<br />1<br />Tes serum<br />2<br />8<br />Antisera <br />dalam agar<br />Tes serum<br />3<br />dinginkan pd<br />suhu kamar<br />7<br />Tes serum<br />4<br />Ukur diameter cincin presipitasi, tempatkan pd kurva standar  menentukan kadar imunoglobulin secara kuantitatif<br />6<br />5<br />Tes serum<br />Tes serum<br />(Handojo, 2003) <br />
  13. 13. KECEPATAN DIFUSI<br />Ukuran molekul<br />Interaksi <br />matriks gel &<br />reaktan<br />FAKTOR<br />Viskositas &<br />Hidrasi gel<br />Berat molekul <br />Ag<br />Temperatur<br />13<br />(Sheehan, 1990)<br />
  14. 14. CARA PEMBACAAN RID <br />METODE<br />Mancini, endpoint diffusion.<br />Fahey, kinetic diffusion.<br />14<br />(Sheehan, 1990)<br />
  15. 15. CARA PEMBACAAN RID<br />Fahey<br />Mancini<br /><ul><li>diameter cincinpresipitasidiukurstl 18 jam
  16. 16. Grafiksemilogaritmik; sumbuy:kadarygdianalisa;
  17. 17. sumbu x :diameter cincinpresipitasi (termasuksumuran)
  18. 18. Ag dibiarkanberdifusimencapaipresipitasimaks
  19. 19. IgA; inkubasi 48 jam
  20. 20. Grafik; </li></ul>sumbu y:kadar Ag & sumbux: cincinpresipitasi.<br />15<br />(Sheehan, 1990)<br />
  21. 21. Gambar 4. Grafik Fahey (kinetic diffusion method)<br />16<br />(Sheehan, 1990)<br />
  22. 22. Gambar 5. Grafik Mancini (endpoint method) <br />17<br />(Sheehan, 1990)<br />
  23. 23. 18<br />HASIL<br />Hasil dikali <br />faktor <br />pengenceran<br />Hasil kurang <br />dari standar<br />(Sheehan, 1990)<br />
  24. 24. mengisi sumuran terlalu sedikit/ banyak <br />menumpahkan serum pasien ke dalam gel agarosa <br />hasiltdkakurat<br />perludiulang<br />melubangi <br />samping <br />sumuran <br />Waktu&suhu <br />Inkubasi<br />tdk tepat <br />KESALAHAN PEMBACAAN RID<br />(Sheehan, 1990)<br />19<br />
  25. 25. Gambar6. PolacincinpresipitasipadaRID(Sheehan, 1990)<br />20<br />
  26. 26. Pemeriksaan IgA di Instalasi Patologi Klinik RSUD.dr.Soetomo<br />Prinsip pemeriksaan (RID):<br />Ig A serum/plasma manusia membentuk kompleks imun dengan antibodi spesifik pada gel agarose pada cakram Partigen<br />Diameter cincin presipitasi berbanding lurus dengan konsentrasi Ig A dalam sampel<br />Hasil dikonversi ke dalam konsentrasi Ig A menggunakan tabel nilai referensi.<br />21<br />
  27. 27. Reagen: <br />Tiap plate NOR partigen mempunyai 12 sumuran imunodifusi untuk menentukan Ig A serum/plasma.<br />Komposisi:<br />Cakram NOR partigen mengandung lapisan agarose gel yang mengandung antiserum monospesifik terhadap Ig A dalam plasma. <br />Antisera diperoleh dari kelinci, domba, kuda, kambing yang diimunisasi dari manusia.<br />Cakram NOR Partigen juga mengandung sodium azide (<1 g/l) dan sodium timerfonate (<0.1 g/l) sebagai pengawet.<br />22<br />
  28. 28. 23<br />Gambar7. NOR Partigen Plate<br />(Lab. PK, 2011)<br />
  29. 29. Penyimpanan dan stabilitas<br />NOR Patigen sebaiknya disimpan pada suhu 2-8°C pada pembungkus yang belum dibuka, stabil sesuai masa berlaku<br />Kontrol<br />Sebaiknya digunakan kontrol sampel yang tersedia komersial<br />24<br />
  30. 30. Spesimen<br />serum maupun plasma segar (24 jam sesudah pengambilan)<br />bila sampel tidak langsung dikerjakan sebaiknya disimpan pada suhu 2-8°C maksimum 8 hari <br />Penyimpanan pada suhu -20°C dapat bertahan hingga 1 tahun.<br />25<br />
  31. 31. Prosedur<br />5 µl sampel<br />1<br />Tes serum<br />2<br />8<br />Antisera <br />dalam agar<br />Tes serum<br />3<br />7<br />UKUR DIAMETER CINCIN PRESIPITASI SETELAH 48 JAM<br />Tes serum<br />4<br />6<br />5<br />Tes serum<br />Tes serum<br />(Handojo, 2003) <br />26<br />
  32. 32. Gambar8. Meβ Projector, Lab. PK. Dr. Soetomo, 2011<br />27<br />
  33. 33. 28<br />Gambar9. TabelReferensi<br />(Lab. PK, 2010)<br />
  34. 34. Nilai normal<br />IgA : 70 – 350 mg/ dL<br />29<br />
  35. 35. TERIMAKASIH<br />30<br />
  36. 36. we defined IgA deficiency as plasma samples with less than 100 ngIgA per mL,<br />decreased level of IgA as plasma samples with 100 ng to600 mg IgA per mL, <br />and normal level of IgA as plasmasamples with more than 0.6 mg per mL as determined by the IgA-ELISA<br />31<br />
  37. 37. IgA measurement by nephelometry<br />Beckman Coulter, Inc. (Fullerton,Calif.).<br />IgA levels were considered deficient when they were less than thelower limit of established age-dependent reference intervals. <br />These limits:<br />70 mg/dl for teenagers and adults, <br />23 mg/dl for children 3 to 12 years old,<br /> 17mg/dl for children ,3 years old.<br />32<br />
  38. 38. Grafik Semilogaritmik<br />33<br />
  39. 39. 34<br />NEFELOMETRI <br />Nephelometri : <br />carapengukurankadarzatdenganmengukurpendarancahaya (scattered) yang mengenaipartikeldalamlarutan.<br />Dasarpemeriksaan :<br />reaksipresipitasi antigen-antibodi.<br />Metodeinidigunakanuntukmengetahuikuantitas protein spesifiksecaralebihakuratdanprecise.<br />
  40. 40. 35<br />PRINSIP NEPHELOMETRI (1)<br />Prinsip nephelometri :<br /> 1. pendaran cahaya,<br /> 2. kinetik cairan pada fase presipitasi.<br />
  41. 41. 36<br />PRINSIP NEPHELOMETRI (2)<br />PENDARAN CAHAYA<br />Pendarancahayadipengaruhi : <br /> a. diameter partikel,<br /> b. panjanggelombang.<br />Contoh :<br />a. partikelkecil (albumin, Ig.G,Ig.M) :<br /> - pendarancahaya Rayleigh semetrisantaraforwarddanbackward.<br /> - pendarancahaya minimum dilihatpada90º darisumbercahaya.<br />
  42. 42. 37<br />PRINSIP NEPHELOMETRI (3)<br /> b. partikellebihbesar (komplek Ag-Ab) :<br /> - menghasilkanpendarancahayaRaeyleigh-Debye<br /> - pendarandilihatdariforward (sudutmendekatinol) intensitascahayalebihbesar.<br />Sudutuntukmendeteksipendarancahayaikutmenentukansensitivitas, dimanaintensitassumbercahayamakinkuatmakasudut yang dihasilkanmakinkecil<br />
  43. 43. 38<br />PRINSIP NEPHELOMETRI (4)<br />
  44. 44. 39<br />PRINSIP NEPHELOMETRI (5)<br />
  45. 45. 40<br />PRINSIP NEPHELOMETRI (6)<br />2. KINETIK CAIRAN PADA FASE PRESIPITASI<br />Sinartampak (visible) yang mengenaibentukanlatticependarancahaya Rayleigh-Debye.<br />Latticemaksimalzonaekivalen.<br />Nephelometrimengukurkonsentrasi antigen padakeadaankelebihanantibodi, dimanaterdapatjumlahlattice pendarancahaya yang terukursesuaijumlah antigen sampel.<br />
  46. 46. Low values Ig A<br /> Some people are born with low or absent levels of IgA antibodies. <br />Low levels of IgA occur in some types of leukemia, <br />kidney damage (nephrotic syndrome)<br />a problem with the intestines (enteropathy)<br />a rare inherited disease that affects muscle coordination (ataxia-telangiectasia). <br />41<br />
  47. 47. High values IgA<br />monoclonal gammopathy of unknown significance (MGUS) or multiple myeloma<br />autoimmune diseases, such as rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus (SLE), and in liver diseases, such as cirrhosis and long-term (chronic) hepatitis.<br />42<br />
  48. 48. 3 most commonly used methods for the quantitative determination of serum IgA concentration: nephelometry (or turbidimetry), passive hemagglutination inhibition assay (PHAI), and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). <br />The basic principle of nephelometric and turbidimetric assays for quantifying IgA concentration is light scatter at various angles by immune complexes formed between IgA (antigen) in the patient's serum and anti-IgA (antibody) antiserum added to the patient's serum. <br />Passive hemagglutination techniques use hemagglutination as the end point of the antigen-antibody reaction, while ELISA methods use a capture antibody bound to the well of a microtiter plate to "capture" antigen (eg, IgA) and a signal antibody, containing an enzyme "signal", that recognizes a different epitope on the antigen than the capture antibody. <br />The addition of substrate specific for the enzyme attached to the signal antibody results in the production of a color whose intensity is directly proportional to the amount of antigen present. <br />43<br />
  49. 49. Among these methods for the quantitation of IgA concentration, ELISA methods provide the best analytical sensitivity [ie, lower limit of detection (LLD) <0.005 mg/dL] ( Table 2 ). <br />Nephelometric or turbidimetric methods are used routinely in most clinical laboratories for the quantitation of serum IgA concentration because these methods are rapid, easy to use, and are amenable to automation. <br />According to the data in the College of American Pathologists (CAP) 2004 Diagnostic Immunology Survey Set-B Summary, 93.6% (712 of 760) of participating laboratories used nephelometric or turbidimetric methods for the quantitation of IgA, with the majority (55.2%) of these laboratories reporting the use of nephelometry over turbidimetry.[2]<br />44<br />

×