Tibaru12

TUTOR IMUNOLOGI
MINICAPCapillary Electrophoresis
SiswantoDarmadi, dr, SpPK(K) /
RantiPermatasari, dr
1

PENDAHULUAN
2
ELEKTROFORESIS :
carapemisahandanpengukurandarimakromolekul, seperti protein, lipoprotein, isoenzim, dan hemoglobin dalamberbagaimacamcairantubuh
Capillary electrophoresis (CE) : elektroforesiskinerjatinggi yang dikerjakandalamtabungkapiler diameter 20-200 μm, denganatautanpapelapis, denganmenggunakanmedanlistrik.

KOMPONEN ALAT
3
Reagent Compartement
Analysis Unit
Rotating Sampler (carousel)

4
ROTATING SAMPLER

5
ANALYSIS UNIT

Reagent Compartment
Reagent cups
holder
Buffer 1
Buffer 2
H2O
Wash
Loaded reagent cups
Discarded
reagent cupscontainer
Waste
bottle
6

PRINSIP KERJA
7
MINICAP menggunakansistem CE yang memisahkanmolekulberdasarkankecepatanelektroforesisnyadalambufer alkali dengan pH tertentudalamtabungkapilerdengan diameter 100 μm, yang dipengaruhioleh pH elektrolitdanelectroosmotic flow.

STEP 1
Back wash to clean capillary
P
Opened chamber
Closed Chamber
Anode
Cathode
Wash solution
8

STEP 2
Back wash to fill capillary with buffer
P
Opened chamber
Closed Chamber
Anode
Cathode
Buffer solution
9

STEP 3
Diluted sample injection:Vacuum (P) during a fixed period of time (t)
P
Sample micro cup
Closed Chamber
Anode
Dilution Segment
Cathode
Buffer
10

STEP 4
Migration and Detection:High voltage applied (V) and Detection at 200 nm
Detector
V
Opened Chamber
-
+
Anode
Buffer
Cathode
Buffer
11

STEP 4
Migration and Detection:High voltage applied (V) and Detection at 200 nm
Detector
V
-
+
Anode
Buffer
Cathode
Buffer
12

KEGUNAAN MINICAP
13

ELEKTROFORESIS PROTEIN
Reagendanperlengkapan yang dibutuhkan :
14

Sampel yang disarankanuntukelektroforesis protein yaitu serum. Hindari serum yang hemolisisatau serum yang sudah lama atautidakdisimpandenganbaik.
15
Penyimpanansampel:
Suhu 2-8 ⁰ C : 10 hari
Frozen : 1 bulan

PROSEDUR
16

LANGKAHOTOMATIS
Pembacaan barcode padatabung (jikaada)
Pengenceransampeldenganbuferdanpencucianprobe.
Pencuciankapiler
Sampel yang telahdiencerkandimasukkankedalamkapiler
Prosesmigrasiberlangsungdengantegangan yang konstanselama 4 menit
Protein dibacalangsungpadapanajnggelombang 200 nm danhasilnyamunculpadalayar LCD.
17

QUALITY CONTROL
18
Serum kontroldiperolehdari pool serum manusiadandikemasdalambentukliofilisasi. Serum kontroldapatdigunakanuntuk quality control elektroforesis protein, lipoprotein, kolesteroldanapolipoprotein

ELEKTROFORESIS HEMOGLOBIN
21

Sampel yang digunakanuntukelektroforesisHbyaitudarahantikoagulan. Antikoagulan yang dapatdigunakanyaitu EDTA, sitratatau heparin. Darahantikoagulandisentrifusdengankecepatan 5000rpm selama 5 menitkemudianbuangplasmanyadan vortex selama 5 detik.
23

PROSEDUR
24

LANGKAH OTOMATIS
Pembacaan barcode padatabung (jikaada)
Pengenceransampeldenganbuferdanpencucianprobe.
Pencuciankapiler
Sampel yang telahdiencerkandimasukkankedalamkapiler
Prosesmigrasiberlangsungdengantegangan yang konstanselama 8 menit
Protein dibacalangsungpadapanjanggelombang 415 nm danhasilnyamunculpadalayar LCD.
26

QUALITY CONTROL
27
Kontrol normal HbA2 diperolehdari pool darahmanusiadandikemasdalambentukliofilisasi.
Kontrol normal HbA2 dirancanguntukdapatdigunakanuntuk quality kontroljumlahdanposisi hemoglobin A2

IMMUNOTYPING
29

31
Sampel yang disarankanuntukimmunotypingyaitu serum. Hindari serum yang hemolisisatau serum yang sudah lama atautidakdisimpandenganbaik.
Penyimpanansampel:
Suhu 2-8 ⁰ C : 10 hari
Frozen : 1 bulan

PROSEDUR
Pilih menu immunotypingkemudianpilih program dilution sesuaidengankadar total Ig.
Hypergamma: total kadarIg >2 g/dl
Hypogamma: total kadarIg <0.8 g/dl
Standard: total kadarigantara 0.8 – 2 g/dl
32

Hemoglobin Capillary electrophoresis
Protein Capillary electrophoresis
33

Perbandinganhasilelektroforesis protein hydrageldgnminicap (%)
34

Normal serum
35

Double Alpha 1->Heterozygousphenotype of alpha 1 antitrypsin
36

37
Hb A
Hb A=93.4% Hb F=1.1% HbA2=5.5%
Hb A2
Hb F
 ß-thalassemia- minor

38
Hb A
Hb A2
Hb F
HbBart’s
Hb H
Hb H and Bart’s - Alpha-thalassemia

NILAI NORMAL
Elektroforesis Protein
Albumin : 53-65%
α1- globulin : 2.5-5%
α2 - globulin: 7-13%
β - globulin : 8-14%
γ - globulin : 12-22%
(BISHOP 2005)
Elektroforesis Hemoglobin
Dewasa
Hb A : 97%
Hb A2:: 2-3.3%
Hb F : 0.2-1%
(DACIE and LEWIS 2006)
39

40
ΤεЃιΜαΚαςιΗ

Hb identification for Capillarys/Minicap
Z 15 : Hb H
Z 14 : //
Z 13 : Hb-J Rovigo, Hb N-Baltimore
Z 12 : Hb Bart’s, Hb J-Providence, Hb J-Mexico, Hb J-baltimore….
Z 11 : DenaturatedHb A, HbKaoshiung
Z 10 : Hb Hope, Hb M-Iwate
Z 9 : Hb A,HbCamperdown, Hb Phnom Penh……
Z 8 : Acetylated Hb F, HbAltanta, Hb Athens-GA
Z 7:Hb F,denaturatedHb S, Hb Porto-Alegre……..
Z 6 : Hb D-Punjab, denaturatedHb E, HbKorle-Bu, HbLepore, Hb Köln….
Z 5 : Hb S, HbHasharon, HbHandsworth, denaturatedHb O-Arab.
Z 4 : Hb E, denaturatedHb C, Hb Köln, Hb A2 variants, M-Iwate Hb A2 variants
Z 3 : Hb A2, Hb O-Arab
Z 2 : Hb C, Hb Constant Spring, Setif HbA2 variant
Z 1 : HbdA2 HbaA2, HasharonHb A2 variant, Winnipeg Hb A2 variant……
43

Kriteriadx MM
Mayor:
BM-plasmacytosis >30%
Histologidxplasmacytoma
Serum paraproteinIgG>3,5g/dl atauIgA>2,0 g/dl
Minor:
BM-plasmacytosis 10-30%
Serum paraprotein < dr mayor
Osteoliticlession
Hipogammaglobulinemia
Waldenstormmacrogabulinemia :
Tumor infiltrasi
Circulating IgM
Tissue IgM
44

Hemoglobin normal padadewasa
Hb A (α2β2) 97%
HbF (α2γ2) 3-5%
HbA2(α2β2) 1.5 – 3.5%
45

Tibaru12

by andreei

Accessibility

Categories

Upload Details

Usage Rights

2 Embeds 15

Statistics

Tibaru12 Presentation Transcript

http://pdspatklinsby.com	14
http://www.pdspatklinsby.com	1