Your SlideShare is downloading. ×
TUTOR IMUNOLOGI<br />MINICAPCapillary Electrophoresis<br />SiswantoDarmadi, dr, SpPK(K) /<br />RantiPermatasari, dr<br />1...
PENDAHULUAN<br />2<br />ELEKTROFORESIS :<br />carapemisahandanpengukurandarimakromolekul, seperti protein, lipoprotein, is...
KOMPONEN ALAT<br />3<br />Reagent Compartement<br />Analysis Unit<br />Rotating Sampler (carousel)<br />
4<br />ROTATING SAMPLER<br />
5<br />ANALYSIS UNIT<br />
Reagent Compartment<br />Reagent cups<br />holder<br />Buffer 1<br />Buffer 2<br />H2O<br />Wash<br />Loaded reagent cups<...
PRINSIP KERJA<br />7<br />MINICAP menggunakansistem CE yang memisahkanmolekulberdasarkankecepatanelektroforesisnyadalambuf...
STEP 1<br />Back wash to clean capillary<br />P<br />Opened chamber<br />Closed Chamber<br />Anode<br />Cathode<br />Wash ...
STEP 2<br />Back wash to fill capillary with buffer<br />P<br />Opened chamber<br />Closed Chamber<br />Anode<br />Cathode...
STEP 3<br />Diluted sample injection:Vacuum (P) during a fixed period of time (t)<br />P<br />Sample micro cup<br />Clos...
STEP 4<br />Migration and Detection:High voltage applied (V) and Detection at 200 nm<br />Detector<br />V<br />Opened Cha...
STEP 4<br />Migration and Detection:High voltage applied (V) and Detection at 200 nm<br />Detector<br />V<br />-<br />+<b...
KEGUNAAN MINICAP<br />13<br />
ELEKTROFORESIS PROTEIN<br />Reagendanperlengkapan yang dibutuhkan :<br />14<br />
Sampel yang disarankanuntukelektroforesis protein yaitu serum. Hindari serum yang hemolisisatau serum yang sudah lama atau...
Frozen : 1 bulan</li></li></ul><li>PROSEDUR<br />16<br />
LANGKAHOTOMATIS<br />Pembacaan barcode padatabung (jikaada)<br />Pengenceransampeldenganbuferdanpencucianprobe.<br />Pencu...
QUALITY CONTROL<br />18<br />Serum kontroldiperolehdari pool serum manusiadandikemasdalambentukliofilisasi. Serum kontrold...
19<br />
20<br />
ELEKTROFORESIS HEMOGLOBIN<br />Reagendanperlengkapan yang dibutuhkan :<br />21<br />
22<br />
Sampel yang digunakanuntukelektroforesisHbyaitudarahantikoagulan. Antikoagulan yang dapatdigunakanyaitu EDTA, sitratatau h...
PROSEDUR<br />24<br />
25<br />
LANGKAH OTOMATIS<br />Pembacaan barcode padatabung (jikaada)<br />Pengenceransampeldenganbuferdanpencucianprobe.<br />Penc...
QUALITY CONTROL<br />27<br />Kontrol normal HbA2 diperolehdari pool darahmanusiadandikemasdalambentukliofilisasi. <br />Ko...
28<br />
IMMUNOTYPING<br />Reagendanperlengkapan yang dibutuhkan :<br />29<br />
30<br />
31<br />Sampel yang disarankanuntukimmunotypingyaitu serum. Hindari serum yang hemolisisatau serum yang sudah lama atautid...
Frozen : 1 bulan</li></li></ul><li>PROSEDUR<br />Pilih menu immunotypingkemudianpilih program dilution sesuaidengankadar t...
Hemoglobin Capillary electrophoresis<br />Protein Capillary electrophoresis<br />33<br />
Perbandinganhasilelektroforesis protein hydrageldgnminicap (%)<br />34<br />
Normal serum<br />35<br />
Double Alpha 1->Heterozygousphenotype of alpha 1 antitrypsin<br />36<br />
37<br />Hb A<br />Hb A=93.4% Hb F=1.1% HbA2=5.5%<br />Hb A2<br />Hb F<br /> ß-thalassemia- minor<br />
38<br />Hb A<br />Hb A2<br />Hb F<br />HbBart’s<br />Hb H<br />Hb H and Bart’s - Alpha-thalassemia<br />
NILAI NORMAL<br />Elektroforesis Protein<br />Albumin	    : 53-65%	<br />α1- globulin : 2.5-5%<br />α2 - globulin: 7-13%<b...
40<br />ΤεЃιΜαΚαςιΗ<br />
41<br />
42<br />
Hb identification for Capillarys/Minicap<br />Z 15 : Hb H<br />Z 14 : //<br />Z 13 : Hb-J Rovigo, Hb N-Baltimore<br />Z 12...
Kriteriadx MM<br />Mayor:<br />BM-plasmacytosis >30%<br />Histologidxplasmacytoma<br />Serum paraproteinIgG>3,5g/dl atauIg...
Hemoglobin normal padadewasa<br />Hb A (α2β2) 97%<br />HbF (α2γ2) 3-5%<br />HbA2(α2β2) 1.5 – 3.5%<br />45<br />
Upcoming SlideShare
Loading in...5
×

Tibaru12

724

Published on

Published in: Business, Technology
0 Comments
0 Likes
Statistics
Notes
  • Be the first to comment

  • Be the first to like this

No Downloads
Views
Total Views
724
On Slideshare
0
From Embeds
0
Number of Embeds
1
Actions
Shares
0
Downloads
0
Comments
0
Likes
0
Embeds 0
No embeds

No notes for slide

Transcript of "Tibaru12"

  1. 1. TUTOR IMUNOLOGI<br />MINICAPCapillary Electrophoresis<br />SiswantoDarmadi, dr, SpPK(K) /<br />RantiPermatasari, dr<br />1<br />
  2. 2. PENDAHULUAN<br />2<br />ELEKTROFORESIS :<br />carapemisahandanpengukurandarimakromolekul, seperti protein, lipoprotein, isoenzim, dan hemoglobin dalamberbagaimacamcairantubuh<br />Capillary electrophoresis (CE) : elektroforesiskinerjatinggi yang dikerjakandalamtabungkapiler diameter 20-200 μm, denganatautanpapelapis, denganmenggunakanmedanlistrik.<br />
  3. 3. KOMPONEN ALAT<br />3<br />Reagent Compartement<br />Analysis Unit<br />Rotating Sampler (carousel)<br />
  4. 4. 4<br />ROTATING SAMPLER<br />
  5. 5. 5<br />ANALYSIS UNIT<br />
  6. 6. Reagent Compartment<br />Reagent cups<br />holder<br />Buffer 1<br />Buffer 2<br />H2O<br />Wash<br />Loaded reagent cups<br />Discarded<br /> reagent cupscontainer<br />Waste<br />bottle<br />6<br />
  7. 7. PRINSIP KERJA<br />7<br />MINICAP menggunakansistem CE yang memisahkanmolekulberdasarkankecepatanelektroforesisnyadalambufer alkali dengan pH tertentudalamtabungkapilerdengan diameter 100 μm, yang dipengaruhioleh pH elektrolitdanelectroosmotic flow.<br />
  8. 8. STEP 1<br />Back wash to clean capillary<br />P<br />Opened chamber<br />Closed Chamber<br />Anode<br />Cathode<br />Wash solution<br />8<br />
  9. 9. STEP 2<br />Back wash to fill capillary with buffer<br />P<br />Opened chamber<br />Closed Chamber<br />Anode<br />Cathode<br />Buffer solution<br />9<br />
  10. 10. STEP 3<br />Diluted sample injection:Vacuum (P) during a fixed period of time (t)<br />P<br />Sample micro cup<br />Closed Chamber<br />Anode<br />Dilution Segment<br />Cathode<br />Buffer<br />10<br />
  11. 11. STEP 4<br />Migration and Detection:High voltage applied (V) and Detection at 200 nm<br />Detector<br />V<br />Opened Chamber<br />-<br />+<br />Anode<br />Buffer<br />Cathode<br />Buffer<br />11<br />
  12. 12. STEP 4<br />Migration and Detection:High voltage applied (V) and Detection at 200 nm<br />Detector<br />V<br />-<br />+<br />Anode<br />Buffer<br />Cathode<br />Buffer<br />12<br />
  13. 13. KEGUNAAN MINICAP<br />13<br />
  14. 14. ELEKTROFORESIS PROTEIN<br />Reagendanperlengkapan yang dibutuhkan :<br />14<br />
  15. 15. Sampel yang disarankanuntukelektroforesis protein yaitu serum. Hindari serum yang hemolisisatau serum yang sudah lama atautidakdisimpandenganbaik. <br />15<br />Penyimpanansampel: <br /><ul><li>Suhu 2-8 ⁰ C : 10 hari
  16. 16. Frozen : 1 bulan</li></li></ul><li>PROSEDUR<br />16<br />
  17. 17. LANGKAHOTOMATIS<br />Pembacaan barcode padatabung (jikaada)<br />Pengenceransampeldenganbuferdanpencucianprobe.<br />Pencuciankapiler<br />Sampel yang telahdiencerkandimasukkankedalamkapiler<br />Prosesmigrasiberlangsungdengantegangan yang konstanselama 4 menit<br />Protein dibacalangsungpadapanajnggelombang 200 nm danhasilnyamunculpadalayar LCD.<br />17<br />
  18. 18. QUALITY CONTROL<br />18<br />Serum kontroldiperolehdari pool serum manusiadandikemasdalambentukliofilisasi. Serum kontroldapatdigunakanuntuk quality control elektroforesis protein, lipoprotein, kolesteroldanapolipoprotein<br />
  19. 19. 19<br />
  20. 20. 20<br />
  21. 21. ELEKTROFORESIS HEMOGLOBIN<br />Reagendanperlengkapan yang dibutuhkan :<br />21<br />
  22. 22. 22<br />
  23. 23. Sampel yang digunakanuntukelektroforesisHbyaitudarahantikoagulan. Antikoagulan yang dapatdigunakanyaitu EDTA, sitratatau heparin. Darahantikoagulandisentrifusdengankecepatan 5000rpm selama 5 menitkemudianbuangplasmanyadan vortex selama 5 detik.<br />23<br />
  24. 24. PROSEDUR<br />24<br />
  25. 25. 25<br />
  26. 26. LANGKAH OTOMATIS<br />Pembacaan barcode padatabung (jikaada)<br />Pengenceransampeldenganbuferdanpencucianprobe.<br />Pencuciankapiler<br />Sampel yang telahdiencerkandimasukkankedalamkapiler<br />Prosesmigrasiberlangsungdengantegangan yang konstanselama 8 menit<br />Protein dibacalangsungpadapanjanggelombang 415 nm danhasilnyamunculpadalayar LCD.<br />26<br />
  27. 27. QUALITY CONTROL<br />27<br />Kontrol normal HbA2 diperolehdari pool darahmanusiadandikemasdalambentukliofilisasi. <br />Kontrol normal HbA2 dirancanguntukdapatdigunakanuntuk quality kontroljumlahdanposisi hemoglobin A2<br />
  28. 28. 28<br />
  29. 29. IMMUNOTYPING<br />Reagendanperlengkapan yang dibutuhkan :<br />29<br />
  30. 30. 30<br />
  31. 31. 31<br />Sampel yang disarankanuntukimmunotypingyaitu serum. Hindari serum yang hemolisisatau serum yang sudah lama atautidakdisimpandenganbaik. <br />Penyimpanansampel: <br /><ul><li>Suhu 2-8 ⁰ C : 10 hari
  32. 32. Frozen : 1 bulan</li></li></ul><li>PROSEDUR<br />Pilih menu immunotypingkemudianpilih program dilution sesuaidengankadar total Ig.<br />Hypergamma: total kadarIg >2 g/dl<br />Hypogamma: total kadarIg <0.8 g/dl<br />Standard: total kadarigantara 0.8 – 2 g/dl<br />32<br />
  33. 33. Hemoglobin Capillary electrophoresis<br />Protein Capillary electrophoresis<br />33<br />
  34. 34. Perbandinganhasilelektroforesis protein hydrageldgnminicap (%)<br />34<br />
  35. 35. Normal serum<br />35<br />
  36. 36. Double Alpha 1->Heterozygousphenotype of alpha 1 antitrypsin<br />36<br />
  37. 37. 37<br />Hb A<br />Hb A=93.4% Hb F=1.1% HbA2=5.5%<br />Hb A2<br />Hb F<br /> ß-thalassemia- minor<br />
  38. 38. 38<br />Hb A<br />Hb A2<br />Hb F<br />HbBart’s<br />Hb H<br />Hb H and Bart’s - Alpha-thalassemia<br />
  39. 39. NILAI NORMAL<br />Elektroforesis Protein<br />Albumin : 53-65% <br />α1- globulin : 2.5-5%<br />α2 - globulin: 7-13%<br />β - globulin : 8-14% <br />γ - globulin : 12-22%<br /> (BISHOP 2005)<br />Elektroforesis Hemoglobin<br />Dewasa<br />Hb A : 97%<br />Hb A2:: 2-3.3%<br />Hb F : 0.2-1%<br />(DACIE and LEWIS 2006)<br />39<br />
  40. 40. 40<br />ΤεЃιΜαΚαςιΗ<br />
  41. 41. 41<br />
  42. 42. 42<br />
  43. 43. Hb identification for Capillarys/Minicap<br />Z 15 : Hb H<br />Z 14 : //<br />Z 13 : Hb-J Rovigo, Hb N-Baltimore<br />Z 12 : Hb Bart’s, Hb J-Providence, Hb J-Mexico, Hb J-baltimore….<br />Z 11 : DenaturatedHb A, HbKaoshiung<br />Z 10 : Hb Hope, Hb M-Iwate<br />Z 9 : Hb A,HbCamperdown, Hb Phnom Penh……<br />Z 8 : Acetylated Hb F, HbAltanta, Hb Athens-GA<br />Z 7:Hb F,denaturatedHb S, Hb Porto-Alegre…….. <br />Z 6 : Hb D-Punjab, denaturatedHb E, HbKorle-Bu, HbLepore, Hb Köln….<br />Z 5 : Hb S, HbHasharon, HbHandsworth, denaturatedHb O-Arab.<br />Z 4 : Hb E, denaturatedHb C, Hb Köln, Hb A2 variants, M-Iwate Hb A2 variants<br />Z 3 : Hb A2, Hb O-Arab<br />Z 2 : Hb C, Hb Constant Spring, Setif HbA2 variant<br />Z 1 : HbdA2 HbaA2, HasharonHb A2 variant, Winnipeg Hb A2 variant……<br />43<br />
  44. 44. Kriteriadx MM<br />Mayor:<br />BM-plasmacytosis >30%<br />Histologidxplasmacytoma<br />Serum paraproteinIgG>3,5g/dl atauIgA>2,0 g/dl<br />Minor:<br />BM-plasmacytosis 10-30%<br />Serum paraprotein < dr mayor<br />Osteoliticlession<br />Hipogammaglobulinemia<br />Waldenstormmacrogabulinemia : <br />Tumor infiltrasi<br />Circulating IgM<br />Tissue IgM<br />44<br />
  45. 45. Hemoglobin normal padadewasa<br />Hb A (α2β2) 97%<br />HbF (α2γ2) 3-5%<br />HbA2(α2β2) 1.5 – 3.5%<br />45<br />

×