Effects of Hemoglobin (Hb) E and Hb D Traits On Measurements of Glycated Hb (HbA1C)  by 23 Methods<br />Clinical Chemistry...
PENDAHULUAN<br /><ul><li>Glikohemoglobin (GHB) /HbA1c :  marker untuk kontrol glukosa darah jangka panjang
DCCT dan United Kingdom Prospective Diabetes Study menyimpulkan bahwa resiko terjadinya komplikasi berhubungan langsung de...
The National Glycohemoglobin Standardization Program didirikan untuk menstandarisasi hasil HbA1c </li></ul>2<br />
PENDAHULUAN<br /><ul><li>Akurasi beberapa metode HbA1c dapat dipengaruhi oleh adanya varian Hb
The National Glycohemoglobin Standardization Program tidak memasukkan interferens ini sebagai bagian dari program sertifikasi
Varian Hb yang paling banyak adalah HbS, HbE, HbC dan HbD</li></ul>3<br />
PENDAHULUAN<br /><ul><li>Banyak penelitian yang mengevaluasi  metode HbA1c dengan HbS dan HbC trait, tetapi hanya beberapa...
PENDAHULUAN<br />Hb E <br /><ul><li>Substitusi lisin pada asam glutamat  pada posisi 26 rantai β
Varian Hb terbanyak ke-2 di dunia dan sering ditemukan di Asia Tenggara, prevalensinya 30-40 % Thailand, Laos dan Kamboja
Hb varian yang sering ditemukan di Amerika Serikat karena  banyaknya imigran yang masuk </li></ul>5<br />HbE<br />
PENDAHULUAN<br /><ul><li>HbD Los Angeles
Substitusi glutamin pada asam glutamat  pada posisi 121 rantai β
Paling sering ditemukan pada daerah Punjab,India (prevalensi 2-3% pada Sikh,Punjab)</li></ul>6<br />Hb D Punjab<br />
BAHAN DAN METODE<br />SAMPEL<br />Whole Blood : 	- Hb A (n=49)<br />				- Hb E trait (n=42)<br />				- Hb D trait (n=42)<b...
METODE PEMERIKSAAN<br />Primus ultra2 HPLC<br />Enzim<br />HbA1c<br />Immunoassay<br />Ion-exchange HPLC<br />Capillary el...
METODE PEMERIKSAAN<br />9<br />IMMUNOASSAY<br />A1C Now (Bayer/Metrika), Synchron DxC (Beckman Coulter), Dimension (Dade B...
10<br />ION-EXCHANGE HPLC<br /><ul><li>Bio-Rad Laboratories : D 10 (Short and Extended programs), Variant, Variant II Turb...
Menarini Diagnostics : HA 8160 Diabetes (DM) Mode dan HA 8160 Thalassemia program (TP) mode
Tosoh : A1c 2.2 plus, G7 dan G8</li></li></ul><li>11<br />Tina-quant<br />917<br />G7<br />HA8160 DM<br />ultra2<br />CE<b...
ANALISIS DATA<br />12<br /><ul><li>Untuk setiap metode, hasil dari setiap tipe sampel ( HbA homozigot, HbE trait, HbD trai...
Regresi linier  (SAS software) untuk menentukan apakah  adanya Hb E atau Hb D trait menyebabkan perbedaan statistik yang s...
Analisis regresi untuk menentukan apakah adanya HbE/HbD trait memberikan perbedaan klinis yang signifikan pada hasil HbA1c...
HASIL<br />14<br />
<ul><li>Walaupun didapatkan perbedaan yang signifikan secara statistik pada lebih dari separuh metode, tetapi hanya</li></...
Gambar 1. Perbedaan absolut antara metode tes dan metode pembanding<br />16<br />Immunoassay<br />Ion exchange HPLC<br />C...
17<br />
<ul><li>Tidak ada interferens  HbE dan HbD trait pada metode immunoassay, enzimatik dan boronate affinity, karena Hb varia...
Tidak ada interferens yang disebabkan HbE dan HbD pada metode immunoassay karena letak substitusi asam amino jauh dari N-t...
METODE ION EXCHANGE<br />Tosoh 2.2 plus<br /><ul><li>Instruksi manual menyatakanbahwadapatmelaporkan “HbVar” peak setelah ...
Jikaadapeak yang tidakdapatdiidentifikasisebelumAopeak, hasiltidakdapatdikeluarkan.HaliniterjadipadaHbEtrait, danpadapenel...
Tosoh G7<br /><ul><li>Setiappeak abnormal sebelum HbA0akanmenyebabkanhasil HbA1c yang error, danhasiltidakdapatdilaporkan,...
HasilHbEtdkdapatdikeluarkankarenaadanyapeak ekstra yang munculantarapeak A1Cdan A0</li></ul>20<br />
Bio-Rad Variant<br /><ul><li>Tidakadainformasidarialat yang menyebutkanbahwaapakahdenganadanyaHbEatauHbDtraithasildapatdit...
Data menunjukkanbahwakromatogramHbE trait tidakdapatdibedakandenganHbAA, untungnyahasildaripenelitianinimenerangkanbahwaha...
<ul><li>Hasil penelitian ini juga menyatakan bahwa hasil HbD trait tidak dapat diterima , sesuai dengan penelitian sebelumnya
Walaupun tidak disebutkan dalam instruksi manual, sampel HbD trait akan memberikan gambaran kromatogram dengan peak yang t...
BIO-RAD Variant II NU<br /><ul><li>Instruksi manual menyatakanbahwahasildariHbEdanHbDdapatditerimadanmenunjukkankromatogra...
HasilpenelitianinimenunjukkanbahwahasilHbEdanHbDtraitpadaalatinidapatditerima</li></ul>23<br />
BIO-RADVariant II Turbo<br /><ul><li>Instruksi manual tidakmenyebutkantentangHbEdanHbDtrait
SemuaHbEdanHbDtraitkromatogramnyamasukdalam peak “variant window” yang tampaksebagaisplitpada peak A0
Hasilpenelitianinimenunjukkanbahwahasil Varian II Turbo tidakdapatditerima</li></ul>24<br />
BIO-RAD D-10<br />1.Short Program<br />- HbEdanHbD trait : peak yang tereluasisetelahpeak A0pada “variant window”<br />2.E...
HbEmunculterpisah HbA2 window, menyebabkannilai HbA2 yang sangattinggi (sampai 30%)
Secaraklinisdapatditerima, hasillebihbaikdenganshort program</li></ul>25<br />
Menarini HA-8160<br /><ul><li>DM mode:
HbDtraitmenunjukkanpeakekstrapada “S/C Window”
Pada 75% kasus,peaktidakberlabel, hasil HbA1c tidakkeluardanpadakromatogrammengindikasikanadanya “separasi abnormal”</li><...
Upcoming SlideShare
Loading in...5
×

Jh5

1,213

Published on

Published in: Technology, Health & Medicine
0 Comments
0 Likes
Statistics
Notes
  • Be the first to comment

  • Be the first to like this

No Downloads
Views
Total Views
1,213
On Slideshare
0
From Embeds
0
Number of Embeds
1
Actions
Shares
0
Downloads
0
Comments
0
Likes
0
Embeds 0
No embeds

No notes for slide

Jh5

  1. 1. Effects of Hemoglobin (Hb) E and Hb D Traits On Measurements of Glycated Hb (HbA1C) by 23 Methods<br />Clinical Chemistry 54:8<br />1277-1282 (2008)<br />Diah Puspita Rini/Fery Hudowo Soedewo<br />
  2. 2. PENDAHULUAN<br /><ul><li>Glikohemoglobin (GHB) /HbA1c : marker untuk kontrol glukosa darah jangka panjang
  3. 3. DCCT dan United Kingdom Prospective Diabetes Study menyimpulkan bahwa resiko terjadinya komplikasi berhubungan langsung dengan kontrol glukosa darah yang diukur sebagai HbA1c
  4. 4. The National Glycohemoglobin Standardization Program didirikan untuk menstandarisasi hasil HbA1c </li></ul>2<br />
  5. 5. PENDAHULUAN<br /><ul><li>Akurasi beberapa metode HbA1c dapat dipengaruhi oleh adanya varian Hb
  6. 6. The National Glycohemoglobin Standardization Program tidak memasukkan interferens ini sebagai bagian dari program sertifikasi
  7. 7. Varian Hb yang paling banyak adalah HbS, HbE, HbC dan HbD</li></ul>3<br />
  8. 8. PENDAHULUAN<br /><ul><li>Banyak penelitian yang mengevaluasi metode HbA1c dengan HbS dan HbC trait, tetapi hanya beberapa data saja yang menunjukkan akurasi pengukuran HbA1c dengan adanya HbE dan HbD trait</li></ul>Tujuan Penelitian : mengevaluasi efek HbE dan HbD trait pada 23 metode HbA1c komersial dengan menggunakan Primus boronate affinity HPLC assay (ultra2) sebagai metode pembanding<br />4<br />
  9. 9. PENDAHULUAN<br />Hb E <br /><ul><li>Substitusi lisin pada asam glutamat pada posisi 26 rantai β
  10. 10. Varian Hb terbanyak ke-2 di dunia dan sering ditemukan di Asia Tenggara, prevalensinya 30-40 % Thailand, Laos dan Kamboja
  11. 11. Hb varian yang sering ditemukan di Amerika Serikat karena banyaknya imigran yang masuk </li></ul>5<br />HbE<br />
  12. 12. PENDAHULUAN<br /><ul><li>HbD Los Angeles
  13. 13. Substitusi glutamin pada asam glutamat pada posisi 121 rantai β
  14. 14. Paling sering ditemukan pada daerah Punjab,India (prevalensi 2-3% pada Sikh,Punjab)</li></ul>6<br />Hb D Punjab<br />
  15. 15. BAHAN DAN METODE<br />SAMPEL<br />Whole Blood : - Hb A (n=49)<br /> - Hb E trait (n=42)<br /> - Hb D trait (n=42)<br />IdentifikasiHb E/HbD :<br />Bio-Rad βthalassemia HPLC system<br />Sebiahydrasyselectrophoresis, pH asamdanbasa<br />7<br />
  16. 16. METODE PEMERIKSAAN<br />Primus ultra2 HPLC<br />Enzim<br />HbA1c<br />Immunoassay<br />Ion-exchange HPLC<br />Capillary electrophoresis<br />8<br />Boronate affinity<br />
  17. 17. METODE PEMERIKSAAN<br />9<br />IMMUNOASSAY<br />A1C Now (Bayer/Metrika), Synchron DxC (Beckman Coulter), Dimension (Dade Behring) Au400 (Olympus Diagnostics), Vitros (Ortho-Clinical Diagnostics), HbA1C (Pointe Scientific) Integra Gen2 dan Tina Quant 917 (Roche Diagnostics), DCA 2000 (Siemen Medical Solutions)<br />
  18. 18. 10<br />ION-EXCHANGE HPLC<br /><ul><li>Bio-Rad Laboratories : D 10 (Short and Extended programs), Variant, Variant II Turbo, Variant II NU
  19. 19. Menarini Diagnostics : HA 8160 Diabetes (DM) Mode dan HA 8160 Thalassemia program (TP) mode
  20. 20. Tosoh : A1c 2.2 plus, G7 dan G8</li></li></ul><li>11<br />Tina-quant<br />917<br />G7<br />HA8160 DM<br />ultra2<br />CE<br />Capillary Electrophoresis : Analis PAGE 5000 (Beckman Coulter)<br />Enzyme : Direct Enzimatic HbA1c (Diazyme laboratories)<br />Boronate Affinity : Afinion (Axis-Shield) PDQ (Primus Diagnostics)<br />National Glycohemoglobin Standardization Program Secondary Reference laboratory (SRL) Methods<br />
  21. 21. ANALISIS DATA<br />12<br /><ul><li>Untuk setiap metode, hasil dari setiap tipe sampel ( HbA homozigot, HbE trait, HbD trait) dibandingkan dengan hasil dari ultra2
  22. 22. Regresi linier (SAS software) untuk menentukan apakah adanya Hb E atau Hb D trait menyebabkan perbedaan statistik yang signifikan (P<0.01) pada hasil HbA1c, dibandingkan dengan metode pembanding
  23. 23. Analisis regresi untuk menentukan apakah adanya HbE/HbD trait memberikan perbedaan klinis yang signifikan pada hasil HbA1c (bias relatif > 10%)</li></li></ul><li>American Diabetes Association merekomendasikan batas referens atas 6% <br /> DCCT conventional group,mean HbA1c 9%<br />13<br />Batas evaluasi 6% dan 9%<br />
  24. 24. HASIL<br />14<br />
  25. 25. <ul><li>Walaupun didapatkan perbedaan yang signifikan secara statistik pada lebih dari separuh metode, tetapi hanya</li></ul> 5 dari 23 metode (HbE)<br /> 3 dari 23 metode (HbD) <br /> memberikan perbedaan yang signifikan secara klinis<br />15<br />
  26. 26. Gambar 1. Perbedaan absolut antara metode tes dan metode pembanding<br />16<br />Immunoassay<br />Ion exchange HPLC<br />CE<br />BA<br />ENZ<br />
  27. 27. 17<br />
  28. 28. <ul><li>Tidak ada interferens HbE dan HbD trait pada metode immunoassay, enzimatik dan boronate affinity, karena Hb varian tidak dapat dikenali dengan metode ini
  29. 29. Tidak ada interferens yang disebabkan HbE dan HbD pada metode immunoassay karena letak substitusi asam amino jauh dari N-terminal dari rantai β, dimana glikasi HbA1c dan antigen binding terjadi</li></ul>18<br />
  30. 30. METODE ION EXCHANGE<br />Tosoh 2.2 plus<br /><ul><li>Instruksi manual menyatakanbahwadapatmelaporkan “HbVar” peak setelah HbA0 termasukHbDtrait. Hasilpeneliti- an inimengkonfirmasihaltersebut
  31. 31. Jikaadapeak yang tidakdapatdiidentifikasisebelumAopeak, hasiltidakdapatdikeluarkan.HaliniterjadipadaHbEtrait, danpadapenelitianinijugahasilHbEtidakdapatdilaporkan</li></ul>19<br />
  32. 32. Tosoh G7<br /><ul><li>Setiappeak abnormal sebelum HbA0akanmenyebabkanhasil HbA1c yang error, danhasiltidakdapatdilaporkan, termasukpeak dariHbEtrait</li></ul>Tosoh G8<br /><ul><li>Hasil HbA1c dariHbDtrait dapatdikeluarkan , karenapeakvariandanpeak P00 tereluasisetelah A0danjumlahnyatidak >55%
  33. 33. HasilHbEtdkdapatdikeluarkankarenaadanyapeak ekstra yang munculantarapeak A1Cdan A0</li></ul>20<br />
  34. 34. Bio-Rad Variant<br /><ul><li>Tidakadainformasidarialat yang menyebutkanbahwaapakahdenganadanyaHbEatauHbDtraithasildapatditerima
  35. 35. Data menunjukkanbahwakromatogramHbE trait tidakdapatdibedakandenganHbAA, untungnyahasildaripenelitianinimenerangkanbahwahasildarikromatogramHbEinidapatditerima</li></ul>21<br />
  36. 36. <ul><li>Hasil penelitian ini juga menyatakan bahwa hasil HbD trait tidak dapat diterima , sesuai dengan penelitian sebelumnya
  37. 37. Walaupun tidak disebutkan dalam instruksi manual, sampel HbD trait akan memberikan gambaran kromatogram dengan peak yang tidak dapat dikenali, salah satunya memisahkan peak antara A1c dan A0</li></ul>22<br />
  38. 38. BIO-RAD Variant II NU<br /><ul><li>Instruksi manual menyatakanbahwahasildariHbEdanHbDdapatditerimadanmenunjukkankromatogram yang tipikaldanakanmunculpada “E,D” window
  39. 39. HasilpenelitianinimenunjukkanbahwahasilHbEdanHbDtraitpadaalatinidapatditerima</li></ul>23<br />
  40. 40. BIO-RADVariant II Turbo<br /><ul><li>Instruksi manual tidakmenyebutkantentangHbEdanHbDtrait
  41. 41. SemuaHbEdanHbDtraitkromatogramnyamasukdalam peak “variant window” yang tampaksebagaisplitpada peak A0
  42. 42. Hasilpenelitianinimenunjukkanbahwahasil Varian II Turbo tidakdapatditerima</li></ul>24<br />
  43. 43. BIO-RAD D-10<br />1.Short Program<br />- HbEdanHbD trait : peak yang tereluasisetelahpeak A0pada “variant window”<br />2.Extended Program<br /><ul><li>SampelHbDmempunyaipeaklebar yang tidakdikenalisetelah HbA2
  44. 44. HbEmunculterpisah HbA2 window, menyebabkannilai HbA2 yang sangattinggi (sampai 30%)
  45. 45. Secaraklinisdapatditerima, hasillebihbaikdenganshort program</li></ul>25<br />
  46. 46. Menarini HA-8160<br /><ul><li>DM mode:
  47. 47. HbDtraitmenunjukkanpeakekstrapada “S/C Window”
  48. 48. Pada 75% kasus,peaktidakberlabel, hasil HbA1c tidakkeluardanpadakromatogrammengindikasikanadanya “separasi abnormal”</li></ul>26<br />
  49. 49. <ul><li>± 25% kromatogram HbD trait menunjukkan hasil HbA1c, perbedaannya hanya pada peak ekstra pada S/C Window
  50. 50. Untuk sampel HbD trait yang hasil HbA1c-nya keluar, hasil diluar batas klinis yang diterima
  51. 51. HbE trait,peak ekstra yang kecil pada pinggir dari peak A0 yang tidak terpisah sepenuhnya atau teridentifikasi </li></ul>27<br />
  52. 52. Menarini HA-8160<br />28<br /><ul><li> TP Mode:
  53. 53. HbD: tampaksebagaiseparasi</li></ul> abnormal, peak tidakberlabel, hasil<br /> HbA1c tidakdikeluarkan<br /><ul><li>HbE: tereluasipada “A2/Var” window, menunjukkanhasil A2meningkatpalsu
  54. 54. hasilpenelitian: HbEpada TP Mode dapatditerima</li></li></ul><li>DISKUSI<br />29<br />
  55. 55. <ul><li>HbA1c berhubungan langsung dengan resiko komplikasi diabetes, banyak dianjurkan oleh guidelines
  56. 56. Beberapa penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa beberapa metode HbA1c dipengaruhi oleh adanya Hb varian seperti HbS dan HbC trait, tetapi sedikit data tentang HbE dan HbD trait
  57. 57. HbD dan HbE trait urutan ke 2 dari 4 Hb varian paling sering di US dan dunia</li></ul>30<br />
  58. 58. <ul><li>Karena Hb varian biasanya tidak menunjukkan gejala yang berarti, klinisi mungkin tidak mengetahui bahwa pasien DM mereka memiliki Hb varian
  59. 59. Pada penelitian ini,metode immunoassay, enzimatik dan boronate affinity tidak menunjukkan interferens yang signifikan secara klinis, sedangkan beberapa metode ion-exchange HPLC menunjukkan interferens terhadap HbE, HbD trait, atau keduanya</li></ul>31<br />
  60. 60. <ul><li>Semua metode ion-exchange menunjukan adanya interferens terhadap HbE dan HbD trait dengan hasil yang rendah palsu, kecuali Varian II Turbo hasilnya tinggi palsu
  61. 61. Hasil HbA1c yang salah dapat menyebabkan:
  62. 62. Terapi yang kurang untuk hiperglikemia, menyebabkan peningkatan komplikasi
  63. 63. Terapi berlebihan menyebabkan resiko terjadinya hipoglikemia </li></ul>32<br />
  64. 64. <ul><li>Laboratorium harus mengetahui keterbatasan metode yang mereka gunakan, terutama adanya Hb varian dan memberikan informasi terhadap klinisi
  65. 65. Klinisi harus mempertimbangkan kemungkinan adanya Hb varian jika hasil HbA1c pasien tidak sesuai dengan glukosa darah, hasil diagnostik tes yang lain atau gejala klinis
  66. 66. Selain interferens dari Hb varian, faktor biologis lain juga harus dipertimbangkan, cnth: masa hidup eritrosit atau varian Hb yang kecepatan glikasinya berbeda dengan HbA menyebabkan hasil HbA1c rendah/tinggi palsu</li></ul>33<br />
  67. 67. Thank You !<br />
  68. 68. Kromatogram Variant<br />35<br />
  69. 69. Kromatogram Variant II Turbo<br />36<br />
  70. 70. Kromatogram Menarini DM Mode<br />37<br />
  71. 71. Kromatogram Menarini TP Mode<br />38<br />
  72. 72. 39<br />
  73. 73. 3 ways cation-exchange gHb affected by variant Hbs<br />40<br />
  74. 74. Efek HbS dan HbC pada HbA1c immunoassay<br />41<br />
  75. 75. Faktor-faktor yang berpengaruh pada pengukuran HbA1c<br /> Hemoglobin Variants and Derivatives: Genetic variants (e.g. HbS trait, HbC trait) and chemically modified derivatives of hemoglobin (e.g. carbamylated Hb in patients with renal failure, acetylated Hb in patients taking large amounts of aspirin) can affect the accuracy of HbA1c measurements.  The effects vary depending on the specific Hb variant or derivative and the specific HbA1c method. When selecting an assay method, laboratories should take into consideration characteristics of the patient population served, (e.g. high prevalence of hemoglobinopathies or renal failure).Shortened Erythrocyte Survival: Any condition that shortens erythrocyte survival or decreases mean erythrocyte age (e.g., recovery from acute blood loss, hemolytic anemia) will falsely lower HbA1c test results regardless of the assay method used HbA1c results from patients with HbSS, HbCC, and HbSC must be interpreted with caution given the pathological processes, including anemia, increased red cell turnover, transfusion requirements, that adversely impact HbA1c as a marker of long-term glycemic control.  Alternative forms of testing such as glycated serum protein (fructosamine) should be considered for these patients.Other factors: Vitamins C and E are reported to falsely lower test results, possibly by inhibiting glycation of hemoglobin ; vitamin C may increase values with some assays .  Iron-deficiency anemia is reported to increase test results .  Hypertriglyceridemia, hyperbilirubinemia, uremia (see carbamylated Hb ), chronic alcoholism, chronic ingestion of salicylates, and opiate addiction are reported to interfere with some assay methods, falsely increasing results<br />42<br />
  76. 76. 43<br />
  77. 77. 44<br />
  78. 78. Metode Immunoassay<br />45<br />
  79. 79. 46<br />
  80. 80. 47<br />
  81. 81. 48<br />

×