Comparison of human and soil candida tropicalis isolates2

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Comparison of human and soil candida tropicalis isolates2

  1. 1. COMPARISON OF HUMAN AND SOIL CANDIDATROPICALIS ISOLATES WITHREDUCED SUSCEPTIBILITY TO FLUCONAZOLE Yun-Liang Yang, Chih-Chao Lin, Te-Pin Chang, Tsai-Ling Lauderdale, Hui-Ting Chen,Ching-Fu Lee, Chih-Wen Hsieh, Pei-Chen Chen, Hsiu-Jung Lo Sebastian Quijano Mazo Ana Milena Sanchez Henao Medical Students 3 semester Molecular Biology
  2. 2. MAPA
  3. 3. Comparison of Human and Soil Candida tropicalis Isolates with Reduced Susceptibility to Fluconazole Aislamientos Humanos Del sueloCon susceptibilidad reducida al Con susceptibilidad reducida al fluconazol fluconazol Susceptibles al fluconazol Mismo patrón Crecimiento luego de 97% de similitud Resistentes a electroforético exposición a droga fluconazol y azoles Inhibición de No comparten patrón crecimiento por azoles electroforético Manejo prudente de azoles en clínica y agricultura
  4. 4. INTRODUCTION
  5. 5. CANDIDA 4-6 um Asexual It is part of the reproduction flora normal and mucocutaneou s membranesGram stain aregram-positive, aerobic Have more or lessmetabolism is 100 species and primarily Are in to de 10 have a cause imperfect fungies of frequently ( deuteromycota) infections of the type Is a gener of blastomyceles unicelulars and to the family fungies  criptococcacease stain
  6. 6. CANDIDA TROPICALIS  To infection should be in the form of yeast  Species associated with vaginitis or bronchopulmonary candidiasis  Colonies white and smooth, globoid or ovoid  Produced true micelles
  7. 7. FLUCONAZOLE Treatment and prevention Antifungal of superficial and systemic fungal infectionsInhibits of the fungal cytochrome P450 This inhibition1 α demethylase enzyme prevents the conversion of lanosterol to ergosterol Is used to prevent fungal growth or eliminate
  8. 8. RELATION C. tropicalis is a fungal type blastoconidia that are in our organism for this reason because they must suffer adaptability to suit the environment in which they live and so to survive has increased tolerance to stimuli that are generated, investigated the possibility the presence in soil of such C. tropicalis strains by pulsed field gel electrophoresis (PFGE), C. tropicalis exhibiting reduced susceptibility to fluconazole from the human hosts and environmental samples. Therefore, to prevent patients from acquiring C. tropicalis with reduced susceptibility to azoles, must be have a prudent use of them to increase the effectiveness of antifungal treatments
  9. 9. OBJETIVE Investigated the presence in soil of C.Tropicalis strains exhibiting reduced susceptibility to fluconazole and performed a comparison with the human strains
  10. 10. MATERIALES Y METODOSCepa Conjunto de especies bacterianas que comparten, al menos, una característica •NHUE10 NHUE11 •NHUE28 NHUE27 Cepa •NHUE33 NHUE36 •NHUE40 NHUE42 suelo •NHUE48 NHUE52 •NHUE56 •YM990275 YM990659 •YM990490 Cepas •YM990537 •YM990579 humanas •YM990592 •YM990649
  11. 11. CEPA 1 gr de suelo 9 ml de agua esteril Incubación por 3 dias0.2 ml de suspension se a 24ºCsembraron en YMA 3 colonias fueron recogidas Todas las cepas de levaduras fueron identificadas por la secuencias del dominio D1/D2 de los genes LSU rRNA
  12. 12. SUSCEPTIBILIDAD A LA DROGA El crecimiento de cada cepa fue medida por la placa de Biotrak II lector espectrofotométrico después de incubación a 24 h para 35ºC y 48 h. El MIC de anfotericina B se define como el mínimo concentraciones del fármaco capaz de inhibir la célula crecimiento Por la susceptibilidad a la anfotericina B, los aislamientos con MIC § 2 mg / l fueron considerados resistentes y aquellos con MIC -1 Mg / l fueron susceptibles
  13. 13.  La CIM para el fluconazol y voriconazol se define como la menor concentración capaz de la reducción de la turbidez de las células en más de un 50% Los aislamietos con fluconazol MICs $ 64 mg / L se consideraron como haber reducido susceptibilidad y # 8 mg / L susceptible Las cepas con CIM en el intervalo de 16-32 mg / L fueron consideradas sensibles a dosis dependiente (SDD). Los aislamientos con CMI de 2 mg / L se conoce como SDD.
  14. 14. PFGEEs una técnica diseñada especialmente para laseparación de ADN de alto peso molecular (>100kb). PFEG opera alternando dos diferentes camposeléctricos sobre una matriz de agarosa; de esta maneraes posible alterar la migración del ADN hacia diferentesdirecciones facilitando la separación de dos grandesmoléculas de ADN.
  15. 15. 7 humanas + 11 suelo = 18 total Todos mostraron susceptibilidad reducida a fluconazol Pulsos alternos en un ángulo de 120 grados en un 5-50 s pulso-tiempo de gradiente de 20 h Una escalera de Salmonella El coeficiente de Dice se utilizóse usó como marcador del para analizar las similitudes de lospeso patrones de bandas. La par no molecular ponderado método grupo utilizando medias aritméticas (UPGMA) se utilizó para el análisis de conglomerados.
  16. 16. SECUENCY 18 cepas exhiben sensibilidad reducida a fluconazol El ADN fragmentos de seis genes: ICL1, MDR1, SAPT2, SAPT4, XYR1 y ZWF1a se secuenciaron para los análisis. Las secuencias resultantes se alinearon con BioNumerics 3,0 y se compararon con los de la base de datos de C. tropicalis para obtener los identificadores
  17. 17. CURVAS DE CRECIMIENTO Bioscreen Cse utiliza para volver a evaluar el crecimiento de diferentes aislam Aproximadamente 16104 células en 200 ml de medio RPMI 1640 (Gibco BRL31800-022) se cultivaron en ausencia o en la presencia de diferentes drogas, incluyendo el fluconazol, fluquinconazol,penconazol, tebuconazol, y tridimenol, en 35ºC
  18. 18. CURVAS DE CRECIMIENTO Las neoplasias de células se determinaron cada 15 minutos. Debido a la solubilidad de fluquinconazol, la concentración más alta de este fármaco en el presente estudio fue 16 mg / Len lugar de 64 mg / L 2 veces
  19. 19. RESULTADOS Se analizaron 56 aislados de 26 muestras de suelo de 477 muestras recogidas de los suelos entre 2006 y 2008 en Taiwán Suelo contaminado de petróleo, campo de agricultura, suelo pantanoso y bosques Para diferenciar las múltiples cepas de una muestra se tomaron 3 colonias individuales representativas para el estudio
  20. 20. RESULTADOS 10 solo tenia 1 aislado de C. tropicalis 8 tenían 2 aislados de C. tropicalis 5 tenían 3 aislados de C. tropicalis 2 tenían 4 aislados de C. tropicalis 1 tenia 7 aislados de C. tropicalis
  21. 21. RESULTADOS Todos fueron susceptibles a amfotericin B Se uso fluconazol en 18 muestras De estas 18, 17 recibieron voriconazol después de 48 h Para determinar si los aislados con susceptibilidad reducida de muestras de suelo se relacionaban genéticamente con las humanas se uso PFGE
  22. 22. RESULTADOS 18 muestras: 11 del suelo y 7 humanas 11 de suelo: 6 susceptibilidad reducida y 5 susceptibles 7 humanas: todos susceptibilidad reducida Humanas: YM990275, 490, 537, 579, 592, 649 and 659
  23. 23. RESULTADOS
  24. 24. DISCUSSION
  25. 25. Was said by They said Right or wrong. Cheng MF, Yu KW, Tang RB, Fan YH, YangYL, et al. 10. Pfaller MA, Jones RN, Doern GV, Candida tropicalis is one of the most frequently isolated nonalbicans Sader HS, Messer SA, et al. Lord AT,. Candida species from patientsBarchiesi F, Calabrese D, Sanglard D,Falconi DF, Caselli F, et al. Calvet HM, Furthermore, C. tropicalis develops drug resistance in Yeaman MR, Filler SG the presence of fluconazole much more rapidly than other Candida species28. Cowen LE (2001) Predicting theemergence of resistance to antifungal drugs. In fungi, drug resistance is more likely to be the outcome of FEMS Microbiol Lett 204: 1–7. sequential accumulation of29. Cowen LE, Sanglard D, Calabrese D, adaptive mutations in the chromosomesSirjusingh C, Anderson JB, et al.. Chen FJ, Lo HJ (2003) 34. McDonald LC,Chen FJ, Lo HJ, Yin HC, Lu PL, et al. The observation that azole-resistant Aspergillus fumigatus isolates recovered from soil and compost (2001)35. Yang YL, Lauderdale TL, Lo HJ were genetically related to clinical resistant isolates suggests the existence of an environmental route(2004) 36. Akins RA (2005) 37. White TC, Marr for developing drug resistance in fungi. Similar toKA, Bowden RA (1998) 38. Yang YL, some antibiotic resistance in bacteria, fluconazole resistance in fungi also involves step-wise mutations affecting more than oneMuller FM, Staudigel A, Salvenmoser S,Tredup A, Miltenberger R, et al Previous study has shown that in human immunodeficiency virus infected patients, C.  albicans and other yeast species were cross- resistant to medical and agricultural azole drugs
  26. 26. CONCLUSIONS Isolates with reduced suceptibility grow better under influence of azole drugs The human isolates share an electroforetic pattern with soil isolates with reduced suceptibility The suceptibles one didn’t have similar electroforetic patterns with soil or human isolates with reduced suceptibility
  27. 27. CONCLUSIONES All humans strains shown reduced suceptibility to fluconazo Dont do treatments with long exposures to azoles because it can cause a reduced suceptibility to the treatment and bad results to it

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