Pruebas de laboratorio

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Descripción de pruebas de laboratorio …

Descripción de pruebas de laboratorio
ELISA
PCR
Western Blot

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  • 1. Pruebas de LaboratorioELISAWestern BlotReacción en Cadena dePolimerasa (PCR)Dr. Luis Aragón D.
  • 2. ELISAEnzymeLinkedImmunoSorventAssay
  • 3. Qué es?Prueba de inmunoanálisis empleada para el estudiocuantitativo de antigenos y anticuerpos específicos.Se basa en el uso de antígenos o anticuerposmarcados con una enzima, e insolubilizado sobre unsoporte (inmunoadsorbente) en donde la reacciónantígeno-anticuerpo queda inmovilizada, se leagrega un substrato especifico que al actuar con laenzima produce un color cuantificable mediante eluso de un espectrofotómetro o un colorímetro.
  • 4. Tipos• ELISA Directo (Ac marcados con enzima)• ELISA Indirecto (suero – Antígenosfijados)• ELISA Competitivo (Ac específicos delagente patógeno a detectar )• ELISA sándwich– Doble (DAS)– Heterólogo (HADAS)
  • 5. En qué consiste? Pasos generales de un ELISA.1.Se agrega el antígeno o anticuerpo.2.Se mezcla la muestra con los antígenos oanticuerpos. Se unen3.Se lava el exceso no unido4.Se agrega el anticuerpo (2) marcado con laenzima y se une al antígeno5.Lavado eliminar el exceso de enzima no unida6.Por ultimo se agrega el substrato este su une a laenzima desarrollando el color, listo para cuantificar
  • 6. Aplicaciones Hormonas Gonadotropina coriónica Progesterona Testosterona Hormonas tiroideas (T3, T4) Cuantificación de inmunoglobulinas IgG (rubeola) IgE IgA IgM (toxoplasma) Inmunopatología Anticuerpos contra HIV-1 Anticuerpos contra antígeno de superficie (anti Hbs) Antígeno superficie (AgH- Bs) Factor reumatoide Inmunocomplejos circulantes
  • 7. Aplicaciones Enfermedades producidas por parásitos Babesias y tripanosomas Toxocara canis Toxoplasmosis Enfermedades producidas por Micoplasmas Enfermedades producidas por bacterias Mycobacterium tuberculosis Enterotoxinas Vibrio cholerae Estreptococos Salmonela Enfermedades producidas por virus
  • 8. Western Blot El término “blotting” hacereferencia a latransferencia demacromoléculas biológicasdesde un gel hasta unamembrana y su posteriordetección en la superficiede la misma.
  • 9. Qué es?• La técnica del Western Blot también llamado“inmunoblotting” utiliza anticuerpos para detectar elantígeno o los antígenos específicos de interés.• La especificidad de la unión antígeno –anticuerpo permitela detección de una única proteína dentro de una mezclacompleja de otras proteínas. En la actualidad se utilizacomo criterio de identificación positivo de una proteínaespecifica en una mezcla compleja y para obtener datoscualitativos y semicuantitativos sobre la misma.
  • 10. Método DirectoEl anticuerpoprimariomarcado se une alantígeno de lamembrana yreaccionacon el sustratooriginando una señaldetectable.
  • 11. Método IndirectoEl anticuerpoprimario sinmarcar reaccionacon el antígeno.Luego, unanticuerpo(2)marcado se uneal primario yreacciona con elsustrato.
  • 12.  1.Separación de las macromoléculas mediante geles deelectroforesis. 2.Las macromoléculas ya separadas en función de su diferentepeso molecular se transfieren a una segunda matriz(membrana denitrocelulosa). Posteriormente, se bloquea la membrana paraevitar la unión inespecífica a su superficie de los anticuerpos quese van a utilizar para la detección de la proteína de interés. 3.Se une a dicha proteína transferida un anticuerpo especificomarcado con una enzima 4.Finalmente se añade un sustrato para dicha enzima con lo quese produce un producto detectable Se utilizan sustratos quimioluminiscentes que cuando se combinancon la enzima correspondiente, producen luz como producto final,que se detecta con una película o una cámara especializada. La intensidad de la señal se correlaciona con la cantidad delantígeno en la superficie de la membrana.
  • 13. PCRReacción enCadena dePolimerasa
  • 14. Qué es?• Prueba de amplificación genética, que permitedetectar en sangre o en ganglios linfáticos célulasmalignas.• Hace posible la multiplicación de segmentos deADN por un factor de hasta 10 a la sexta potencia• A partir de cantidades pequeñas como una solacélula es posible identificar elementos específicosque faciliten el diagnóstico de procesos neoplásicos.
  • 15. En qué consiste?• Transcripción inversa: se amplifican las secuenciasmensajeras ARNm para convertirlas a ADNcomplementaria (enzima reversa transcriptasa-polimerasa)• Mediante la técnica RT-PCR la ADNc es amplificaday esto permite identificar una población celular queporte la molécula ARNm especifica.
  • 16. Aplicaciones• Diagnóstico enfermedades infecciosas• Diagnóstico infección por VIH (neonatal)• Anemia células falciformes• Leucemias• Melanomas• Neoplasias
  • 17. Bibliografía• Angel G, Angel M, Interpretation Clínica de Laboratorio, 7aEdición 2006• Morrison K, Laboratorio Clínico y Pruebas de Diagnóstico,1era Edición en Español• Harrison T, Harrison Principios de Medicina Interna, 16aEdición, 2006• Masson, Diccionario Médico, 4a Edición, 2005
  • 18. Playa Hermosa, Costa Rica