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Cancer Genetica Y Bm 2010 Pdf Ok Presentation Transcript

  • 1. CANCER GENETICA Y BIOLOGICA MOLECULAR ADRIANA MARIA GIL ZAPATA. Msc. CIENCIAS BASICAS BIOMEDICAS Msc.
  • 2. CANCER Es una enfermedad de carácter genético, producida por la inhibición de los restricciones que una célula posee para limitar su división celular. Tiene un patrón de presentación que puede ser heredado o adquirido.
  • 3. CANCER Anomalía genética en el ámbito celular. Cèlulas cancerosas: Multiplicación incontrolada. Capacidad para extenderse o producir metastasis
  • 4. CANCER HOMEOSTASIS ENTRE: Control de la proliferación Diferenciación Muerte celular
  • 5. NEOPLASIA Porciòn anormal de tejido, en crecimiento màs acelerado que los tejidos normales, que se expande sin regulaciòn en forma autònoma e invade y destruye los tejidos adyacentes. TUMOR: Tumefacciòn de una masa en crecimiento. CANCER: Tumor maligno.
  • 6. EPIDEMIOLOGIA DEL CANCER Es una enfermedad de muy alta incidencia y una de las mayores causas de morbi- mortalidad a nivel mundial. En el mundo 10’900.000 personas se ven afectadas anualmente y de ellas mueren 6’700.000, lo cual corresponde a la muerte de una de cada seis personas en el mundo. (Instituto Nacional de Cancerología 2005)
  • 7. EPIDEMIOLOGIA DEL CANCER EN COLOMBIA SEXO INCIDENCIA MORTALIDAD MASCULINO TAE* % TAE* % PROSTATA 45.8 19.7 19.6 13.9 ESTOMAGO 36 16 27.7 19.4 PULMON 20 8.6 19.8 13.5 COLON-RECTAL 11.4 5.3 7.1 5.2 TOTAL 213.7 100 137.6 100 Incidencia estimada y mortalidad por cáncer en Colombia, 1995-1999. cá 1995- *Individuos x 100000 habitantes/año. Instituto Nacional de Cancerología 2005. habitantes/añ Cancerologí
  • 8. EPIDEMIOLOGIA DEL CANCER EN COLOMBIA SEXO INCIDENCIA MORTALIDAD FEMENINO TAE* % TAE* % CUELLO UTERO 36.8 17.7 18.4 15.2 MAMA 30 14 12.4 10.5 ESTOMAGO 20.7 9.5 15.9 13 COLON-RECTAL 13.9 6.4 7.2 6 TOTAL 212.9 100 121.7 100 Incidencia estimada y mortalidad por cáncer en Colombia, 1995-1999. cá 1995- *Individuos x 100000 habitantes/año. Instituto Nacional de Cancerología 2005. habitantes/añ Cancerologí
  • 9. CANCER Se ha dificultado conocer completamente ésta patología porque existen diferencias notables entre los individuos para: Metabolizar los carcinógenos. Reparar el ADN dañado. Responder ante diferentes estímulos especialmente individuos con predisposición heredada al cáncer.
  • 10. CANCER La alteración de la célula se produce como resultado de defectos en la regulación del ciclo celular. Estos defectos son debidos a la desestabilización del genoma provocada por el daño del material genético, causado por factores internos o externos a las células. Su manifestación es la presencia de alteraciones génicas y/o cromosómicas específicas.
  • 11. CANCER El estilo de vida se relaciona con determinados tipos de cáncer. Fumar Cáncer de pulmón Rayos X Leucemias mieloides Rayos UV Cáncer de piel Alimentación Ca. gástrico y Colorectal Todos estos factores ocasionan mutaciones en el material genético que se acumulan y finalmente llevan a alterar el comportamiento celular. (Lichtenstein et al. 2000, Cunningham et al. 2001, Castillo et al. 2002)
  • 12. NATURALEZA DEL CANCER TEORIA CLONAL: Una cèlula normal sufre una alteraciòn en su material genètico y se transforma, y a partir de ella se originan las demàs cèlulas alteradas. Se presenta con mayor frecuencia en cèlulas de tejidos que proliferan abundantemente en condiciones normales. Las cèlulas cancerosas muestran mùltiples lesiones genèticas. La incidencia aumenta con la edad.
  • 13. ETIOLOGIA Sager: El càncer es un proceso genètico con mùltiples estadìos: 1. Daño inicial del ADN. 2. Rupturas cromosòmicas y rearreglos 3. Selecciòn de cèlulas mutantes suceptibles de crecer. 4. Aberraciones cromosòmicas con nuevos patrones de expresiòn gènica.
  • 14. DAÑO DEL ADN AGENTES MUTAGENOS QUE CAUSAN MUTACIONES INDUCIDAS 1. Mutágenos Físicos 2. Mutágenos Químicos 3. Mutágenos Biológicos
  • 15. CARACTERÍSTICAS DEL PROCESO CANCERIGENO 1. Es un proceso que se desarrolla a largo plazo y progresa en cuatro fases obligatorias: a. Fase de inducciòn: 20 años o màs, exposiciòn a agentes mutagènicos. b. Fase in situ: Ocurre la selecciòn clonal y esta localizado c. Fase invasiva: las cèlulas se multiplican e invaden tejidos profundos a travès la m. basal. d. Fase diseminaciòn: En 1 a 5 años hacen metàstasis a distancia del sitio de origen.
  • 16. DETECCION DEL CANCER Es critica la detecciòn antes de la fase D (metàstasis), idealmente en la fase A pero es imposible, por lo cual se busca que la detecciòn se haga en la fase B (carcinoma in situ), como el caso de la citologìa para detecciòn de ca de cervix donde la detecciòn en fase in situ tiene un pronòstico excelente. La mayorìa de los canceres se sigue detectando en fase C (invasiva).
  • 17. CARACTERÍSTICAS DEL PROCESO CANCERIGENO 2. Cambios en la divisiòn celular: La cèlula se inmortaliza. 3. Desdiferenciaciòn celular: La cèlula pasa de un tipo especìfico a uno màs general y produce sustancias propias de estadios embrionarios como proteìnas (Alfa feto proteina) y antìgenos oncofetales (Antìgeno carcinoembrionario)
  • 18. CARACTERÍSTICAS DEL PROCESO CANCERIGENO 4. Invade tejidos alrededor. Entre los factores que influyen està: a. Incremento de la motilidad de los receptores de membranas b. Incremento en la presiòn debido a la activa multiplicaciòn celular. c. Elaboraciòn de sustancias lìticas d. Pèrdida de uniones intercelulares. e. Pèrdida de inhibiciòn por contacto.
  • 19. CAMBIOS DE LA CELULA NEOPLASICA 1. Alteraciones cromosòmicas 2. Transformaciòn 3. Alteraciones de la membrana celular 4. Cambios antigènicos 5. Cambios bioquìmicos
  • 20. GENES SUPRESORES DE TUMORES • Retinoblastoma (RB) • Tumor de Wilms (WT) • Cancer de mama (BRCA1) • Guardian del genoma (p53)
  • 21. ONCOGENES • Los protoncogenes se convierten en Oncogenes por: • Mutaciones puntuales ( glicina 12 y la glutamina 61) • Translocaciones • Sobreexpresiones. Familia génica ras, proteína de 189 a.a. transducción de señales a través de la membrana plasmática
  • 22. ALTERACIONES ESTRUCTURALES ONCOGENES GEN Numero de Numero de codones aminoacidos Gen c-onc H-ras 189 3 K-ras 189 7 mos 369 11 myc 417 2 erbA 408 22 src 533 16
  • 23. Translocación Oncogenes • Oncogen c-abl, esta asociado a leucemia mielogena cronica (CML). • Translocación reciproca cromosoma 9 y 22
  • 24. Genómica del Cáncer Células cancerosas Genoma de cáncer Familia con cáncer Mutación genética
  • 25. MUTACIONES EN EL CANCER
  • 26. HERRAMIENTAS EN CANCER En los ùltimos años se han desarrollado a travès de procesos empìricos de observaciòn y experiencia novedosas avances tècnicos para combatir el càncer. • Biologìa molecular • Bioquimica de cèlulas eucariotas • Inmunologìa celular • Virologìa • Citogenètica y cultivo celular • Modelos animales con estadìos de cancer
  • 27. CAMBIOS DE LOS ANALITOS CON EL CANCER Los analitos bioquìmicos producidos por la cèlula se pueden medir como marcadores tumorales primarios o como test secundarios para detectar invasiòn o metàstasis. Entre los marcadores bioquìmicos que se pueden detectar estàn los antìgenos oncofetales y algunas enzimas, su uso es limitado en diagnòstico pero pueden ser ùtiles para medir respuesta a terapia y como indicador pronòstico. Se pueden detectar en el laboratorio por pruebas de ELISA, quimioluminiscencia, etc.
  • 28. PAPEL DEL LABORATORIO CLINICO Puede desempeñar cuatro funciones importantes: 1. DETECCION: Pruebas de tamizaje 2. CONFIRMACION: Cuando hay sìntomas clìnicos. 3. CLASIFICACION Y ESTADÌO: Determinar el grado de diferenciaciòn. 4. MONITOREO: Es la màs importante.
  • 29. MARCADORES TUMORALES Coombes y Neville han sugerido para seleccionar como un marcador tumoral ideal: 1. Ser especìfico del tumor estudiado. 2. Facil de medir en fluidos biològicos. 3. Mediciòn econòmica. 4. Relaciòn entre niveles plasmàticos y tamaño del tumor. 5. Tener niveles plasmàticos y urinarios estables. 6. Si està presente en tejidos sanos que su concentraciòn sea mucho menor que los valores asociados con el càncer.
  • 30. MARCADORES TUMORALES Es dificil encontrar marcadores que cumplan todos estos requisitos, sin embargo todos deben cumplir: 1. Permitir pronosticar mayor o menor riesgo de recurrencia de la neoplasia 2. Su concentraciòn debe cambiar con los cambios del tumor a lo largo del tiempo. 3. Debe predecir recurrencias antes de que sean clinicamente detectables. Un marcador tumoral debe ser usado para detectar estadios muy tempranos de cancer, especialmente si hay tratamiento disponible.
  • 31. CLASIFICACIÓN MARCADORES TUMORALES SEGÚN SU ESTRUCTURA TIPO DE MARCADOR EJEMPLO Fosfatasa ácida, fosfatasa alcalina, ENZIMAS creatincinasa, deshidrogenasa láctica, enolasa neuroespecífica,… Gonadotropina coriónica humana, HORMONAS, NEUROTRANSMISORES catecolaminas (y metabolitos), Y SUS METABOLITOS serotonina y ácido 5- hidroxindolacético,… α-fetoproteína, antígeno carcinoembriónico, antígeno PROTEÍNAS específico de la próstata, ferritina, inmunoglobulinas, CA19-9, CA15-3,… RECEPTORES CELULARES Estrógeno y progesterona ÁCIDOS NUCLEICOS DNA
  • 32. ENZIMAS ENZIMA SITIO/TUMOR Fosfatasa ácida Próstata Pró Fosfatasa alcalina Metástasis a huesos e hígado, sarcoma osteogénico Metá hí osteogé Próstata, senos, ovarios, colon, pulmón, aparato Pró pulmó Creatincinasa-BB Creatincinasa- digestivo Amilasa Páncreas Lipasa - Tripsina - Ribonucleasa - 5’-nucleotidasa y transferasa de gammaglutamilo Hígado Transferasa de desoxinucleótidilo terminal desoxinucleó Leucemia Colagenasa Huesos Deshidrogenasa láctica Hígado, cuello uterino, colon, leucemia, linfoma Neuroblastoma, cerebro, testículos, tumor pulmonar Neuroblastoma, testí Enolasa específica de neuronas especí de células pequeñas cé pequeñ Carcinoma medular, carcinoma bronquial, Histaminasa carcinoma del embriometrio. embriometrio.
  • 33. HORMONAS HORMONA/NEUROTRANSMISOR SITIO/TUMOR Tumore trofoblásticos, coriocarcinoma, Gonadotropina coriónica humana tumor de células geminales Calcitonina Médula tiroidea Adrenocorticotrópica Suprarenales, pulmonar Catecolaminas y metabolitos Neoroblastoma Serotonina Tumores carcinoides Páncreas, próstata, corteza suprarenal, ADH carcinoma pulmonar de células tipo avena Gastrina Gastrónoma Glucagon Glucagonoma Insulina Insulinota Prolactina Gándula pituitaria Tumor testicular de células de Leydig, Estrógenos, andrógenos tumores ováricos TSH Próstata, carcinoma broncogénico, sangre
  • 34. PROTEÍNAS PROTEÍNA PROTEÍ SITIO/TUMOR O ACCIÓN ACCIÓ α-fetoproteína fetoproteí Hígado, ovario, testículos testí Antígeno carcinoembriónico Antí carcinoembrió Colon, senos, pulmones Antígeno específico de la próstata Antí especí pró Próstata Pró Catepsina-D Catepsina- Senos CA19-9 CA19- Páncreas Antígeno oncofetal pancreático Antí pancreá - Mucina de cáncer de mama cá Senos CA125 Ovarios Células escamosas de cuello uterino, pulmones, cabeza, Antígeno de carcinoma de células escamosas Antí cé cuello P-glucoproteína glucoproteí Marcador de resistencia de fármacos fá CA72-4 CA72- Estómago, ovario, colon, senos y pulmones Estó LASA, ácido siálico asociado con lípidos siá lí Marcador muy genérico para neoplasmas gené Hodking, leucemia mielocítica aguda, pulmones, hígado, Hodking, mielocí hí Ferritina senos y páncreas pá Linfoma, leucemia, mieloma múltiple, macroglobulemia mú Microglobulina-β2 Microglobulina- waldenström waldenströ Hidroxiprolina Metástasis óseas Metá Péptido C Insulinota Inmunoglobulinas Mieloma múltiple, macroglobulemia waldenström mú waldenströ Antígeno polipeptídico de tejidos Antí polipeptí Senos, pulmones, aparato digestivo, vejiga, ovario y útero
  • 35. RECEPTORES CELULARES SITIO/TUMOR O RECEPTOR ACCIÓN Estrógeno, Mamario progesterona Medidas del potencial Laminina metastático Factor de crecimiento Mamas epidérmico Interleucina-2 leucemia
  • 36. ÁCIDOS NUCLEICOS ONCOGEN/AGENTE VIRAL SITIO/TUMOR c-erbB-2 Senos, ovario Pulmones, linfoma, aparato Myc digestivo, colon cerebro P53 Colon Cromosoma Filadelfia Leucemis mielógena crónica Ras Genérico RB Ojos, pulmones, senos, vejiga Virus de papiloma humano Cuello uterino
  • 37. ALFA FETO PROTEINA (AFP) CARACTERISTICAS: Glucoproteina producida por el feto despues de la cuarta semana de gestación, alcanza cantidades elevadas en el segundo trimestre. desaparece en el suero a los 25 días posnatal Valores normales: < 10ng/ml INDICACIONES: Hepatocarcinoma en población en riesgo sensibilidad: 39 – 64 % ESPECIFIDAD: 76-91% CRITERIO: >500ng/ml. En 70-80 % de HC Niveles inferiores pueden ser hallados en grandes metástasis de tumores gástricos ó colónicos En hepatitis aguda ó crónica, <4 veces el valor normal
  • 38. ANTÍGENO CARCINOEMBRIONARIO Y EL CÁNCER DE COLON 22-36% se detectan en fase avanzada. • Glucoproteina oncofetal presente el tejido embrionario y en ciertos tejidos malignos. Suele dar falsos positivos en pacientes fumadores. • se basa en la de pronosticar de forma rápida la reactivación de un tumor, ya que sus valores aumentan sustancialmente al reactivarse. Para estas situaciones tiene una sensibilidad del 60%. VALORES DE VALORES DE VALORES VALORES CONFIRMACI CONFIRMACIÓN DE CONFIRMACIÓ CRÍTICOS CRÍ PACIENTE NORMALES ÓN DE TUMOR METÁSTASIS POR CEA METÁ DE CEA CEA (ng/ml) (ng/ml) POR CEA (ng/ml) ng/ml) (ng/ml) ng/ml) (ng/ml) ng/ml) Hombre/mujer 2.5 Entre 2.5-5 Entre 5-10 5- >20 2.5-
  • 39. FRACCION BETA DE GONADOTROFINA CORIONICA • CARACTERISTICAS – Producida por el trofoblasto y otros tejidos – valores de referencia: < 5 mu/ml • INDICACIONES – Embarazo: diagnóstico precoz de embarazo midiendo en sangre, los valores se incrementan de acuerdo a las semanas de embarazo – Embarazo tubario: amenorrea, dolor en flanco, y beta HCG >5
  • 40. FRACCION BETA DE GONADOTROFINA CORIONICA – Mola Hidatiforme: aumento por encima de los valores normales esperados para el tiempo de embarazo – Coriocarcinoma – Tumor testicular no seminomatoso – Otras NM: pancreas, estómago, pulmón, hígado, mama, ovario. • Para control del Coriocarcinoma • También se eleva en Ca. Embrionario de Testículo, Ovario Hígado, Estómago, Páncreas • El uso de Marihuana y el Embarazo pueden elevarla
  • 41. FOSFATASA ÁCIDA PROSTÁTICA (PAP) • Puede elevarse en el cáncer de próstata, más aún si está extendido y también en etapas tempranas • Puede estar alta en : Leucemia, Linfoma no Hodkins,C.Testiculo • También en Cirrosis Hepática, Embolia Pulmonar, Paget, Gaucher, Osteoporosis • 0 a 1,2 U/L (METODO ENZIMÁTICO) • 2,5 ng/ml(RIA-EIA
  • 42. CA 125 • Se eleva en Cáncer de ovario • También en tumores de : Cuello y cuerpo Uterino, Pancreas, Mama, Colon, Hígado, Pulmón • En procesos benignos como: Pelviperitonitis, Pleuritis, Menstruación, Endometriosis, Embarazo
  • 43. CA 19-9 • Cáncer Colorectal • Cáncer de la Vesícula Biliar. Páncreas, Estómago • Puede elevarse en procesos benignos como Pancretitis, Colecistitis, Cirrosis, Litiasis Vesicular • HASTA 37 UI/ml
  • 44. CA 15-3 • Control del tratamiento del Cáncer de Mama. • Puede elevarse en Pulmón, Ovario, Próstata, • Patologías benignas como: Hepatitis, Endometriosis. • Aumenta en la Lactancia y Embarazo • HASTA 30 UI/ml
  • 45. CA 27-29 • Control de recaídas Cáncer de Mama etapas II y III después de recibir tratamiento. • Puede > en Ca. dePpulmón, Ovario, Páncreas, Riñon, Estomago • > Primer Trimestre del Embarazo. Quiste de Ovario, Endometriosis • < DE 38 U/ml
  • 46. DESHIDROGENASA LÁCTICA (LDH) • Poco específica, se eleva en casi todo tipo de cáncer • Sirve para seguimiento de tratamientos como Ca. de Testículo, Linfoma no Hodkins, Sarcoma de Ewing • Se eleva en Insuficiencia Cardiaca, IAM, Hepatopatías. • 80 a 120 U/L
  • 47. ENOLASA NEURO-ESPECÍFICA (NSE) • >En tumor de Wilms,Neuroblastomas, O, Testículo, Riñon, Tiroides Páncreas, Melanomas • Sirve para informar sobre extensión, pronostico y respuesta al tratamiento
  • 48. ÁCIDO-5-HIDROXIINDOLACÉTICO • TUMOR CARCINOIDE • EN ORINA : • a) CUALITATIVO : NEGATIVO • b) CUANTITATIVO : 1,8 a 6,0 mg /24 hs. (9,4 a 31,4 MOL/24 hs.
  • 49. CATECOLAMINAS • Feocromocitoma y Neuroblastoma Vanil mandélico • a) Orina al azar <14 g/dl • b) Orina 24 hs.: < 100 g/día
  • 50. BIOLOGIA MOLECULAR EN CANCER La presencia de alteraciones génicas y/o cromosómicas específicas, permite el estudio molecular de estas y los hallazgos pueden convertirse en marcadores diagnósticos y pronósticos de una malignidad en particular.
  • 51. VIAS GENETICAS QUE ORIGINAN EL CANCER Desde 1980 se estableció que la inestabilidad genética es un componente fundamental de la neoplasia humana. A partir de 1993 que se definió la existencia de dos formas de inestabilidad genética responsables de desarrollo de malignidad y generadoras de dos vías moleculares de patogénesis. (Ionov, et al 1993)
  • 52. VIAS GENETICAS QUE ORIGINAN EL CANCER 1. VIA SUPRESORA De Inestabilidad cromosómica 2. VIA MUTADORA De Inestabilidad de microsatélites
  • 53. CICLO CELULAR PUNTOS DE CONTROL: G2 / M Quinasas y Ciclinas. G1/ S
  • 54. CICLO CELULAR Genes RER G2 Chequeo de la fidelidad de la is replicación. it os M esis Citocin G1 Replicación del ADN Crecimiento G0 celular. S Genes supresores Proto-oncogenes VIA SUPRESORA
  • 55. VIA SUPRESORA También denominada vía de inestabilidad cromosómica (ICRO). Se requiere de mutaciones que inactivan genes supresores de tumor y activan protooncogenes. Marcada inestabilidad cromosómica, con presencia de rearreglos, aneuploidía y pérdida de heterocigocidad (LOH). Del 80-85% de los cánceres se desarrollan por esta vía. La expectativa de vida es reducida. (Liu T. 1999, Smyrk et al. 1999, Castillo et al. 2002)
  • 56. V I EPITELIO A NORMAL ADENOMA S TEMPRANO APC U β CADENINA P K-Ras R ADENOMA ADENOMA INTERMEDIO E TARDIO S DCC O p53 R A Robbins and Itzkowitz 2002
  • 57. ALTERACION DEL CICLO HOMEOSTASIS PROLIFERACION-MUERTE TUMOR TUMOR
  • 58. DIAGNÓSTICO MOLECULAR VIA SUPRESORA Cáncer de Seno Deleción de AG en el codón 185 del exón 2 del gen BRCA1 (185delAG) 24
  • 59. METODOLOGIA MUESTRA SANGUINEA EXTRACCION DE ADN PCR CON PRIMERS MISMATCH DIGESTION CON ENZIMAS DE RESTRICCIÓN ELECTROFORESIS ANALISIS DE RESULTADOS
  • 60. PCR MISMATCH Jara et al, 2002
  • 61. ELECTROFORESIS EN AGAROSA ALELO MUTADO ALELO NORMAL MARCADOR DE PESO MOLECULAR DE 25 A 500 pb
  • 62. CICLO CELULAR Genes RER G2 VIA MUTADORA Chequeo de la fidelidad de la is replicación. it os M esis Citocin G1 Duplicación del ADN Crecimiento G0 celular. S Genes supresores Proto-oncogenes
  • 63. VIA MUTADORA También denominada vía de inestabilidad de microsatélites (IMI). Se alteran los genes implicados en la reparación de errores posterior a la replicación (RER). Del 15 al 20% de los cánceres se desarrollan por esta vía. Está asociado a una mejor expectativa de vida y una mejor respuesta al tratamiento. (Hemminki et al. 2000, Gryfe et al. 2000, Robbins and Itzkowitz 2002)
  • 64. SISTEMA DE REPARACION DEL ADN ATP ADP hMutL α hMutS α
  • 65. SISTEMA DE REPARACION DEL ADN
  • 66. MLH1, MSH2 V EPITELIO PMS1, PMS2, I NORMAL MSH3 O GTBP, A 6 POLIMERASA M TGFβ-R2, BAX Tef4, IGF2R, E2F4 U Fenotipo MUTACIONES T Hipermutable FRAME-SHIFT A D O RER+ R A Robbins and Itzkowitz 2002
  • 67. DIAGNÓSTICO MOLECULAR VIA MUTADORA Cáncer de Colon El 15 – 20 % del total por esta vía y del heredado (S. de Lynch) 90 – 95% Genes hMSH1 y hMSH2 Proteínas forman parte del complejo de enzimas reparadoras de errores posteriores a la replicación. (RER) Gen hMSH2
  • 68. INESTABILIDAD DE MICROSATELITES Producida por deleciones o inserciones de nucleótidos, debido a eventos consecutivos de slippage de la ADN polimerasa que no son corregidos por los complejos enzimáticos encargados de la reparación. Se inducen mutaciones que se observan como variaciones en el tamaño de las regiones microsatélites (STR’s). El cambio en el tamaño de las regiones microsatélites se conoce como fenotipo de Inestabilidad de microsatélites. (Shibata et al. 1994, Hoang et al. 1997, Perucho 1998, Zhang et al. 2001)
  • 69. REGIONES DEL ADN 85-90% ADN p Medianamente repetitivas Altamente Repetitivas q 10-15% De secuencia única (genes)
  • 70. REGIONES ALTAMENTE REPETITIVAS SHORT TANDEM REPEATS (STR’s) Miles distribuidos a lo largo del genoma en las regiones de heterocromatina. Formados por una unidad de repetición de 1 a 7 nucleótidos repetidos unos tras de otro. De acuerdo con el numero de veces que se presente la repetición, se asignan los alelos.
  • 71. MICROSATELITES UTILIZADOS PARA DETECTAR INESTABILIDAD EN CANCER STR’s Gen Secuencia Tamaño BAT-26 hMSH2 (A)n 116 D175261 p53 (CA)n 128 D3S1283 hMLH1 (CA)n 149 D2S123 hMSH2 (CA)n 210 D3S1611 hMLH1 (CA)n 263
  • 72. BAT-26 Es un STR de una unidad de repetición (A)26, ubicado en el brazo p del cromosoma 2, dentro del gen hMSH2 en el intrón 5. ...CAGGTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGGGTTAAA… BAT 26 GEN MSH2 Parsons et al. 1995, Bocker et al. 1997, Morifuji et al. 2003, Chai et al. 2004
  • 73. BAT-26 • Es un marcador monomórfico • Posee una especificidad > 95% • Su inestabilidad se asocia con la pérdida de la función de los genes hMLH1 y hMSH2 Parsons et al. 1995, Bocker et al. 1997, Morifuji et al. 2003, Chai et al. 2004.
  • 74. METODOLOGIA
  • 75. MONTAJE EN EL EQUIPO ABI MUESTRA MUESTRA REACTIVOS DE DE SANGRE BIOPSIA FORMAMIDA 12 l 12 l TAMRA 500 0.6 l 0.6 l AMPLIFICADO 0.75 l 1.5 l TOTAL 13.35 l 14.1 l
  • 76. ELECTROFEROGRAMAS DEL ABI PRISM 310 Eje Y: Intensidad de la fluorescencia (uf) Eje X: Tamaño del fragmento en pares de bases (pb)
  • 77. ANALISIS DE LA TIPIFICACION FENOTIPO ESTABLE (IMI-) C+: Control Positivo SG035: Muestra de Células Normales (Sangre) T035: Muestra de Células Tumorales (Biopsia)
  • 78. ANALISIS DE LA TIPIFICACION FENOTIPO INESTABLE (IMI+) C+: Control Positivo SG003: Muestra de Células Normales (Sangre) TG003: Muestra de Células Tumorales (Biopsia)
  • 79. INESTABILIDAD EN BAT-26 ELECTROFEROGRAMA DEL MARCADOR BAT 26 CORRIDO EN ABI PRISM 310
  • 80. The catalogue of somatic mutations in COLO-829 Nature 463, 191-196 (14 January 2010) | doi:10.1038/nature08658;
  • 81. Se muestran en todo el anillo exterior y se orientan pter-qter en sentido horario con centrómeros indican en rojo. Otras pistas contienen alteraciones somáticas (de fuera hacia dentro): validado inserciones (luz-rectángulos verdes); validado supresiones (rectángulos de color verde oscuro); heterocigotos (barras de luz de color naranja) y homocigotos (barras de color naranja oscuro) sustituciones se muestra por la densidad por 10 pares de bases. Sustituciones de codificación (cuadrados de colores: gris en silencio, sin sentido, de color morado, un sinsentido en el sitio de empalme en rojo y negro), el número de copias (líneas azules), las regiones de LOH (líneas rojas); validado reordenamientos intracromosomal (líneas verdes); validado intercromosómicos reordenamientos (línea morada).
  • 82. CONCLUSIONES Desde finales de la década de los noventa se ha venido incrementando el uso de pruebas genéticas moleculares como parte del diagnóstico, pronóstico y monitoreo de varios tipos de cánceres. Actualmente existe además un gran interés por la identificación y detección de mutaciones heredadas o adquiridas en genes que causan susceptibilidad o predisposición al cáncer, como una herramienta valiosa en la prevención y detección temprana de esta patología.
  • 83. CONCLUSIONES De acuerdo con la vía genética por la cual se haya desarrollado el tumor, se establecen patrones distintos de evolución y pronóstico de la enfermedad, pues cada una de estas vías genera diferencias en el fenotipo y comportamiento del tumor y por tanto determina la necesidad de implementar técnicas de diagnóstico específicas para cada una de ellas.
  • 84. CONCLUSIONES Los cánceres generados a partir de la vía mutadora han sido relacionados con predisposición heredada al cáncer en algunos pacientes, estadío tumoral bajo y un pronóstico favorable para el paciente. Los tumores que presentan la vía genética supresora en general son más agresivos; de ahí, la importancia del estudio genético en estos tumores, como ayuda en la prevención, diagnóstico, pronóstico y decisión sobre el tratamiento.