Unidad III:Pericias Químicas de Manchas de Sangre                           Parte 3
Ensayos confirmatorios1. Ensayo del Luminol2. Pruebas microscópicas3. Identificación espectroscópica4. Identificación espe...
1. Ensayo del Luminol
1. Ensayo del Luminol
1. Ensayo del LuminolEsta técnica es altamente sensiblea la presencia de manchas que hansido limpiadas.También se emplea p...
1. Ensayo del Luminol• derivado del ácido ftálico (3-aminonaftilhidracina)• sólido verdoso poco soluble• reacción de quimi...
1. Ensayo del LuminolEste producto puede ser preparado enel laboratorio ó bien adquirido en supreparación comercial.Labora...
1. Ensayo del LuminolMétodoAltamente sensibleEspecíficoPermite tratar rápidamente grandes superficies      y localizar ...
1. Ensayo del LuminolSe aplica por aspersión sobre la zonadonde se cree puede existir un rastrode sangre, de donde viene s...
Hexagon OBTI®es una prueba inmunocromatográfica de confirmación dela presencia de trazas de sangre humana.Se comercializa ...
2. Pruebas microscópicas• Puede usarse aún en manchas secas• Método:a.Tinción con colorantes hemáticosapropiados ( MG-G)b....
2. Pruebas microscópicas                                   vaso                         humanaMO           sangre         ...
3.Identificación espectroscópica• Método: comparación visual con un  patrón• Coloración de la hemoglobina en medio  ácido ...
• Método de Sahli:Reactivo:      HCl = 11,2 ml               H2Od csp 1000 ml    reactivo               muestra
4.Identificación espectrofotométrica• Fundamento:      Hb           MetaHb             CianmetaHb                         ...
5. Identificación cromatográfica• Cromatografía sobre papel.• Técnica resolutiva, específica,práctica  y sensible.• No int...
5. Identificación cromatográficaCromatografía en capa delgadaMateriales: Placas de vidrio             Placas de Silicagel ...
7.Ensayos microcristalográficosa. Modificación de Bertrand             MgCl2= 1g  Reactivo   Glicerol= 5ml             AcA...
7.Ensayos microcristalográficosa. Modificación de Bertrand             MgCl2= 1g  Reactivo   Glicerol= 5ml             AcA...
5. Identificación cromatograficaMancha: tratarla con 0,5 ml de H2Od,macerar hasta obtención del pigmentohemáticoMachas ant...
6. Transformación de porfirinas                  mancha   Luz de Wood: filtro azul                                      H2...
7.Ensayos microcristalográficosFundamento: obtener derivados dedescomposición de la Hb de forma ycolor definidos realizand...
7.Ensayos microcristalográficos•Método de Teichmann: al tratar lamuestra de sangre con AcAc apareceráncristales castaños c...
7.Ensayos microcristalográficosa. Modificación de Bertrand             MgCl2= 1g  Reactivo   Glicerol= 5ml             AcA...
7.Ensayos microcristalográficosb. Modificación de Nippe             KCl= 0,1g  Reactivo   KBr= 0,1g             KI=0,1g   ...
7.Ensayos microcristalográficosc. Modificación de Bruno y Ross             FNa = 0,056g  Reactivo   AcAcg = 100ml         ...
Unidad III ensayos confirmatorios 27 03 3º
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  1. 1. Unidad III:Pericias Químicas de Manchas de Sangre Parte 3
  2. 2. Ensayos confirmatorios1. Ensayo del Luminol2. Pruebas microscópicas3. Identificación espectroscópica4. Identificación espectrofotométrica5. Identificación cromatográfica6. Transformación de porfirinas7. Ensayos microcristalográficos
  3. 3. 1. Ensayo del Luminol
  4. 4. 1. Ensayo del Luminol
  5. 5. 1. Ensayo del LuminolEsta técnica es altamente sensiblea la presencia de manchas que hansido limpiadas.También se emplea para visualizarhuellas sanguinolentas de zapatosdejadas en la escena del delito.
  6. 6. 1. Ensayo del Luminol• derivado del ácido ftálico (3-aminonaftilhidracina)• sólido verdoso poco soluble• reacción de quimioluminiscencia con peróxidos en presencia de complejos de Fe como catalizadores.• usada para la visualización de manchas tan diluidas que son invisibles al examen ocular directo
  7. 7. 1. Ensayo del LuminolEste producto puede ser preparado enel laboratorio ó bien adquirido en supreparación comercial.Laboratorio: presenta la dificultad deser difícil de preparar y estabilizar.
  8. 8. 1. Ensayo del LuminolMétodoAltamente sensibleEspecíficoPermite tratar rápidamente grandes superficies y localizar manchas invisibles al examen ocular directo.No interfiere en la ejecución de ensayos similares.
  9. 9. 1. Ensayo del LuminolSe aplica por aspersión sobre la zonadonde se cree puede existir un rastrode sangre, de donde viene su principalventaja: se puede aplicar en extensassuperficies, detectando sangre hasta anivel de trazas.
  10. 10. Hexagon OBTI®es una prueba inmunocromatográfica de confirmación dela presencia de trazas de sangre humana.Se comercializa como complemento de BLUESTAR®.Es una prueba muy simple de usar.DOS ó TRES minutos son suficientes para comprobar,si la traza revelada por BLUESTAR® es o no sangrehumana.La hemoglobina humana (hHb), reacciona con unconjugado compuesto de partículas azuladas yanticuerpos monoclonales de hemoglobinahumana.
  11. 11. 2. Pruebas microscópicas• Puede usarse aún en manchas secas• Método:a.Tinción con colorantes hemáticosapropiados ( MG-G)b.Observación al MO.Dificultad: mamíferos: carnero, vacuno,equino.
  12. 12. 2. Pruebas microscópicas vaso humanaMO sangre menstrual animal mamífero Pruebas de aglutinación ( grupo y factor: GR intactos).
  13. 13. 3.Identificación espectroscópica• Método: comparación visual con un patrón• Coloración de la hemoglobina en medio ácido HCl Hb hematina +
  14. 14. • Método de Sahli:Reactivo: HCl = 11,2 ml H2Od csp 1000 ml reactivo muestra
  15. 15. 4.Identificación espectrofotométrica• Fundamento: Hb MetaHb CianmetaHb NaHCO3= 1g KCN = 0,05 g reactivo de Drabkin FeCNK= 0,2 g H2Od csp= 1000ml reactivo muestra Filtro verde 540 nm
  16. 16. 5. Identificación cromatográfica• Cromatografía sobre papel.• Técnica resolutiva, específica,práctica y sensible.• No interfieren: citocromos,herrumbre, oxidantes directos, sales metálicas• Peroxidasa vegetales: se destruyen por tratamiento térmico a 100º - 10 ‘
  17. 17. 5. Identificación cromatográficaCromatografía en capa delgadaMateriales: Placas de vidrio Placas de Silicagel GLíquido resolutivo: MetOH- AcAc= 99:1Revelador: mezclar al momento de usar,volúmenes iguales de sol. de bencidina(acética o alcohólica) +H2O2 10 VolTécnica: se recomienda usar placascompradas.
  18. 18. 7.Ensayos microcristalográficosa. Modificación de Bertrand MgCl2= 1g Reactivo Glicerol= 5ml AcAc g= 20 ml H2O d= 1ml flamear
  19. 19. 7.Ensayos microcristalográficosa. Modificación de Bertrand MgCl2= 1g Reactivo Glicerol= 5ml AcAc g= 20 ml H2O d= 1ml flamear
  20. 20. 5. Identificación cromatograficaMancha: tratarla con 0,5 ml de H2Od,macerar hasta obtención del pigmentohemáticoMachas antiguas: HCl 0,02N: hematinaácida.Cromatografía ascendente
  21. 21. 6. Transformación de porfirinas mancha Luz de Wood: filtro azul H2SO4 cfluorescencia fluorescencia semen sangre
  22. 22. 7.Ensayos microcristalográficosFundamento: obtener derivados dedescomposición de la Hb de forma ycolor definidos realizando tratamientosadecuados con reactivos H+ o HO-
  23. 23. 7.Ensayos microcristalográficos•Método de Teichmann: al tratar lamuestra de sangre con AcAc apareceráncristales castaños característicos 60 º
  24. 24. 7.Ensayos microcristalográficosa. Modificación de Bertrand MgCl2= 1g Reactivo Glicerol= 5ml AcAc g= 20 ml H2O d= 1ml flamear
  25. 25. 7.Ensayos microcristalográficosb. Modificación de Nippe KCl= 0,1g Reactivo KBr= 0,1g KI=0,1g AcAc=100ml flamear
  26. 26. 7.Ensayos microcristalográficosc. Modificación de Bruno y Ross FNa = 0,056g Reactivo AcAcg = 100ml H2O d= 1ml flamear
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