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muestra las utilidades del microscopio, sus partes y recomendaciones de uso.

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Microscopio Microscopio Document Transcript

  • LABORATORIO No.1 ESTUDIO Y MANEJO DEL MICROSCOPIOINTRODUCCIÓN Holanda, conserva uno de los primerosDesde los inicios de la microscopia, los microscopios conocidos, probablementeinvestigadores vienen desarrollando fabricado por uno de los hermanosmétodos cada vez más sensibles, Janssen. Estos aparatos, eraneficaces y con mejor resolución. Al extremadamente simples, por lo que soloprincipio ellos debieron enfrentarse a los permitían el examen de cuerpos opacos.problemas de aberraciones ópticas, A fines del siglo XVII el italiano Campingimágenes borrosas y pobre desarrollo de construyó un microscopio que hizolentes, los cuales se mantuvieron hasta posible la observación de preparacionesmediado del siglo XIX que aparecieron transparentes. Las imágenes obtenidaslos lentes objetivos que reducían la por estos microscopios eran muyaberración cromática con una apertura deficientes.numérica entre 0.65 y 1.25. Estos En Inglaterra el científico Robert Hooke,avances se iniciaron con los reportes trató de construir lentes más eficaces,sobre los métodos de iluminación que pero sus resultados no fueronpropuso el profesor August Kölher, en satisfactorios; sin embargo, sus1893, y que sentaron las bases de la observaciones contribuyeron almicrofotografía moderna. En las últimas establecimiento de la microscopía comodécadas se ha incrementado la ciencia. Mientras, en el siglo XVII Jonhaplicación de la microscopía óptica en los Marshall y otros fabricantes delaboratorios de investigación de una microscopios, perfeccionaron mucho elamplia variedad de disciplinas como la diseño mecánico, pero no la calidad debiología celular y molecular, los lentes. Pero fue, durante el siglo XIX,microbiología, inmunología y que se realizaron grandes progresos envirología. El rápido desarrollo de los sistemas ópticos y en la microscopíadiferentes métodos como los de en general; aún así, fue imposible evitarfluorescencia, contraste de fases, la dispersión de la luz en sus coloresconfocal y de campo oscuro entre otros, componentes en la fabricación deque sumados a los avances en la microscopios. Este fenómeno conocidodigitalización y análisis de imágenes, han como aberración cromática, producía unapermitido a los microscopistas obtener imagen borrosa y coloreada.resultados rápidos, cuantificables y Las primeras lentes adecuadamenteconfiables de una gran variedad de corregidas para microscopios,especimenes biológicos. Al margen de denominadas acromáticas, hicieron suestos avances, las bases del aparición alrededor de 1830; pero lafuncionamiento de los distintos tipos de aberración esférica, también producíamicroscopios ópticos siguen siendo los una imagen desenfocada. En 1886, Ernotmismos que se presentan en esta Abbe y Caol Zeiss en Alemaniapráctica y con los cuales el estudiante fabricaron unas lentes apocromáticasdeberá familiarizarse. que corrigieron ambas aberraciones. A finales del siglo XIX, los microscopiosBREVE HISTORIA DEL MICROSCOPIO comenzaron a adquirir la forma queTres eminentes holandeses, Antón Van tienen actualmente, con los aportes deLeeuwenhoek, Hans y Zaccharias Khöler.Janssen, fabricantes de lentes, Desde el año 1900, los microscopios secontribuyeron al desarrollo de la han modificado poco en sus principiosmicroscopía. El museo de Middleburg, en fundamentales, pero mucho en sus 5
  • detalles. Estos perfeccionamientos 1.3 CLASES DE MICROSCOPIOS:incluyen, la incorporación de varios Existen dos tipos de microscopios:objetivos, cada uno de aumento diferente simples y compuestosy roscados a un tambor giratorio o Microscopios simples : Consta derevolver. un solo sistema de lenteEn 1935, Frizt Zenique inventó la técnica Microscopios compuestos:del contraste de fase que hace posible la Constan de dos (2) sistemas deobservación de especimenes antes lentes: el objetivo y el ocular.invisibles. El microscopio compuesto es unEl microscopio electrónico, desarrollado instrumento que aumentaen vísperas de la segunda guerra considerablemente la imagen de losmundial, ha sido de gran utilidad para el objetivos que en él se observan. Entreestudio de moléculas químicas, virus y las variedades de éste microscopioorganelas celulares. encontramos el electrónico y el fotónico uExiste un tipo de microscopio electrónico, óptico. Este último tipo de microscopiollamado de barrido, que ha adquirido una está formado por una parte mecánica yextraordinaria utilidad, ya que ofrece una parte óptica. (Figura No.1.1)representaciones tridimensionales muyreales de las células y las estructuras Parte Mecánica:celulares. a. Pie o Base: Generalmente en forma de herradura o rectangular, es el apoyo de las demás piezas del microscopio. El1.1 OBJETIVOS: pie debe ser sólido y pesado para1.1.1 OBJETIVO GENERAL: asegurar su estabilidad.• Valorar la importancia del b. Columna o Brazo: Este elemento microscopio como instrumento básico relaciona el tubo del microscopio con el para el estudio e investigación en las pie; sostiene la platina y el condensador Ciencias Biológicas. y de ella se agarrará el microscopio cuando se traslada durante los trabajos.1.1.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS: En algunos microscopios la columna es• Identificar las diferentes partes que móvil constituyen el microscopio y reconocer las funciones de cada una de ellas• Adquirir habilidad en el uso y manejo correcto del microscopio, siguiendo las indicaciones de las guías de laboratorio.1.2 MATERIALES Microscopios Porta-objetos y cubre-objetos Papel limpia lentes Goteros Hilos de lana y algodón Flores con polen Figura No.1.1 Microscopio Óptico Para observar imágenes de las diferentes partes del microscopio haz clic aquí 6
  • c. Tubo del Ocular: Está colocado en la Parte óptica:parte superior del microscopio, donde Esta integrada por los objetivos, ocularesestán acoplados los oculares, que y el aparato de iluminación (espejo,pueden tener movimiento vertical, con diafragma, condensador y filtros). Estosayuda de una cremallera sobre la elementos son los que permiten lacolumna. En algunos microscopios el iluminación, ampliación y la visióntubo del ocular es inclinado y se aumentada del objetivo.mantiene fijo, en este caso se mueve la a. Objetivo: Es la pieza más importanteplatina. del microscopio. Ellos se acopland. Revólver o Disco Giratorio: Está mediante roscas estándar al revólver ydebajo del tubo ocular donde están pueden ser cambiados de posición conacoplados los objetivos, presenta sólo rotarlos. Reciben el nombre demovimiento giratorio para facilitar el objetivos porque son los lentes que estáncambio de un objetivo a otro. más cerca del objeto. La mayoría de lose. Platina: Es una placa que puede ser microscopios tienen tres o cuatrocuadrada, circular o rectangular, con un objetivos. Las lentes de los objetivos sonorificio central que permite el paso de la de aumentos diversos, los más usadosluz a través de ella. Su función es son:sostener las placas con los preparados Objetivos de pequeños aumentos 3.5x;biológicos que se van observar 4x, 5x, 6x, 8x y 10x; objetivos de grandesf. Carro: es un dispositivo ubicado sobre aumentos 40x, 45x, 50x y objetivos dela platina, cuya función es sujetar y inmersión 90x, 95x y 100x.mover la placa que se va a estudiar.Posee dos tornillos que permiten Las lentes de inmersión se emplean conmovimientos horizontales (hacia aceite de inmersión para conectar laadelante, hacia atrás, hacia la derecha y lente frontal (lente inferior del objetivo) alhacia la izquierda) del portaobjeto. porta-objeto. Entre el objetivo y el objeto se produce una pérdida de luz porCuando la platina carece del anterior reflexión que se corrige adicionando aldispositivo, lleva dos soportes para fijar preparado unas gotas de aceite de cedrolas placas llamadas ganchos o uñas. (aceite de inmersión) cuyo índice de refracción 1.515, es próximo al cristal.g. Mecanismos de Movimiento: Está Este aceite también reduce o suprimeintegrado por el tornillo macrométrico y el por completo la refracción de los rayosmicrométrico de luz provenientes de la fuente Tornillo Macrométrico: Acerca o luminosa. aleja rápidamente el objetivo del preparado a observar; su función es lograr un enfoque más o menos claro o aproximado del objeto. Tornillo Micrométrico: Acerca o aleja el objetivo del preparado, pero lentamente, casi imperceptiblemente, permite desplazamientos muy finos de la platina o del tubo del ocular. Durante la observación y enfoque este tornillo debe estarse moviendo permanentemente; su función es darle nitidez al enfoque. Figura No. 1.2 Especificaciones de los objetivos. 7
  • b. Ocular: Están colocados en la parte sucede cuando se trabaja con objetivossuperior del tubo ocular. Está formado de menor aumento (4x, 10x).por dos sistemas de lentes dispuestos de g. Filtros: Entre la fuente de luz y elun cilindro. Su finalidad es aumentar la condensador de algunos microscopiosimagen dada por el objetivo y existe un portafiltros en el cual se puedeeventualmente corregir algunos defectos colocar filtros a voluntad del observador.de la misma. Reciben dicho nombre Los filtros son elementos de cuarzo o deporque son las lentes que se encuentran vidrio, pueden ser de color azul, amarillomás cerca del ojo. Hay oculares de 3.5x; o verde. Ellos interceptan el haz de rayos5x; 6,3x; 10x; 12.5x; 15x; 20x y 25x. luminosos antes de entrar alEl aumento de la imagen de un objeto condensador, esto se hace con el objetoobservado a través de un microscopio, de seleccionar un tipo de luzse calcula multiplicando el número de determinada para una experiencia dada.aumento del objetivo con el cual se está Para observar imágenes de filtros haz clic aquí.trabajando por el número de aumento delocular que se está utilizando. 1.4 LA LUZ:c. Aparato de iluminación: Está La luz es una forma de energíaconformado por la fuente de luz, el transportada continuamente por eldiafragma, el condensador y los filtros. espacio a velocidades muy elevadasd. Fuente de luz: Puede ser natural o (330.000 Km/s en el vacío). La luz estáartificial, cuando es natural (solar) o formada por pequeños corpúsculos queprocede de un foco luminoso situado salen de un foco luminoso en forma defuera del microscopio, un espejo recoge ondas. El brillo de la luz es proporcionalla luz del medio y la refleja a través del a la altura o amplitud de la onda y suobjeto y del sistema de lentes. La luz color depende de la longitud de ésta. Laartificial la constituye generalmente un luz blanca está constituida por una gamabombillo ubicado en el microscopio y de colores del espectro visible, éstosconectado a un circuito eléctrico de bajo colores son: rojo, anaranjado, amarillo,voltaje. verde, azul y violeta.e. Diafragma: Está ubicado entre la Cada color corresponde a una longitudfuente de luz y el condensador, de onda determinada, por consiguiente,inmediatamente debajo de la platina, su la luz blanca se compone de muchosfunción es regular la intensidad de luz rayos de luz, todos vibrando conque atraviesa el objeto. El diafragma diferentes longitudes de onda. (Figurastiene una palanquita que al moverla 1.3 y 1.4).hacia delante o hacia atrás agranda oachica el orificio central, dejando pasarmayor o menor cantidad de luzrespectivamente.f. Condensador: Es un elemento cónicoque posee un sistema de dos lentesconvergentes que recogen o concretanlos rayos luminosos para enviarlos alobjetivo por el agujero de la platina.Existe un tornillo manual que permiteguardar la altura del condensador. Estagraduación es importante cuando setrabaja con objetivos de gran aumento(40x, 100x), ya que en la medida que se Figura No.1.3. Naturaleza Ondulatoria detrabaja con éstos objetivos el la Luzcondensador debe subirse. Lo contrario 8
  • La luz de una sola longitud de onda se Los detalles solo se observan si lallama monocromática. Si bien se utilizan preparación es lo suficientementecasi solo microscopios de luz blanca, la delgada para que seamayoría de las lentes modernas están transparente con la luz que recibe. Paradiseñadas para el uso de luz realizar preparaciones microscópicas losmonocromática verde. porta y cubre-objetos deben limpiarse antes de usarse. Un buen método es guardarlos en alcohol y antes de utilizarlos secarlos con un paño limpio y libre de grasa. Los cubre-objetos deben limpiarse con mucho cuidado porque son frágiles. Las preparaciones microscópicas pueden ser acuosas o en seco. Las preparaciones acuosas son las más simples y fáciles usadas para examinar cualquier objeto fluido, como agua de estanque o sangre. Se deposita una gotita del líquido que se desea observar en el centro del porta-objeto, se coloca elFigura No.1.4. Espectro de Luz Visible cubreobjeto sobre el porta, forme con las dos láminas un ángulo de 45 grados y1.5 LENTES: luego deje caer suavemente la laminillaLas lentes son el componente más cubre-objeto sobre el preparado,importante del microscopio; se fabrican evitando la formación de burbujas. Figurade vidrio u otros materiales No.1.5.transparentes.Pueden ser convexas o cóncavas en El líquido no debe rebosar los bordes delambas superficies, planas en una cara o cubre-objeto, en caso de que sucedatener cualquier combinación de éstas dos seque cuidadosamente el líquidoformas en su superficie. sobrante usando papel absorbente oLas lentes son de dos tipos: positivas y papel toalla. La preparación queda asínegativas. lista para la observación. Estas Lentes Positivas: Hacen converger preparaciones son de corta duración los rayos de luz, es decir, los porque se secan rápidamente; para concentra para formar una imagen hacerlas más duraderas debe cerrarse real. herméticamente los bordes del cubre Lentes Negativas: Hacen divergir los objeto; la duración de ésta preparación rayos de luz, sin formar ninguna no es indefinida. Los bordes se pueden imagen real. cerrar con vaselina o esmalte. Un cierre más hermético se consigue cerrando con1.6 PREPARACIONES bálsamo de Canadá (Euparal).MICROSCÓPICAS:Debemos tener en cuenta que a través Las preparaciones en seco como lodel microscopio solamente se pueden índica su nombre, se hacen paraobservar objetos que dejan pasar rayos observar objetos secos, tales como alasde luz, por esta razón el preparado debe de insectos. Aquí se utiliza gomaser lo más delgado y transparente arábiga, la cual se extiende sobre elposible, pues un preparado grueso solo porta, luego se deposita el objeto sobrenos permite observar una mancha negra. la superficie y se deja endurecer la 9
  • goma. Una vez endurecida la goma se que se emplea el reactivo incoloro depone un poco de bálsamo de Canadá Schiff par teñir el DNA en tonos rojizossobre el objeto y se coloca el cubre- purpúreos. (Figura 1.6)objeto.Figura No.1.5. Preparaciones Acuosas Figura No.1.6. Colorantes. Haz clic aquí.1.7 COLORANTES : 1.8 MANEJO DEL MICROSCOPIO:Los colorantes son sales compuestas por Antes de iniciar una observaciónun ácido y una base. Se clasifican en microscópica se debe iluminarácidos, básicos y neutros, según la parte completamente el campo visual, para lode los mismos que imparta el color. En cual se procede de la siguiente manera:los colorantes ácidos el grupo cromóforo,el que imparte el color, es el componente 1. Gire el revólver hasta que el objetivoácido, el componente básico es incoloro. de menor aumento quede en posición deLo contrario sucede con los colorantes trabajo, o sea que quede alineado conbásicos. Los colorantes neutros tienen los oculares. Usted sentirá un golpecitocoloreado el componente ácido y el (como un clic) cuando el objetivo llegue abásico. su posición de uso.La mayoría de los colorantes son 2. Lleve el condensador a su posiciónsintéticos, aunque se emplean todavía más alta.algunos naturales. La hematoxilina y el 3. Accione el tornillo macrométrico hastacarmín son los colorantes naturales más que el objetivo de menor aumentoimportantes para la tinción de tejidos. El descienda lo máximo posible o hasta quecarmín es producido por la conchinilla la mesa ascienda lo máximo posible,(Coccus cacti). según sea el modelo del microscopio.La hematoxilina se extrae de la madera Esta operación se hace llegar hasta unde un árbol de México, el palo punto de parada (tope).Campeche. 4. Mire a través del ocular o gire elOtro colorante es la orceína que se espejo hacia la fuente de luz hastaextrae de líquenes. Existen tres técnicas obtener un máximo de iluminación. Si elde tinción de uso general: la coloración campo visual no queda uniformementeseca o de tejidos muertos, la coloración iluminado, baje lentamente elvital o de tejidos vivos y la histoquímica, condensador hasta obtener unaen la cual se utilizan las reacciones de iluminación uniforme. Si su microscopiolos colores para hacer visible los es eléctrico siga los pasos 1, 2 y 3.elementos estructurales de las células y Enchufe el cable del transformador a lade los tejidos. Una reacción histoquímica fuente de energía.muy conocida es la de Feulgen, en la 10
  • Conecte el cable del microscopio al juntas. Mantenga las lentes limpias. Notransformador y luego accione el botón toque las lentes con los dedos, ya que elde éste para que encienda la bombilla. sudor las daña. Nunca limpie las lentesMire por el ocular. con otra cosa que no sea papel especial5. Una vez lograda una correcta para lentes.iluminación coloque el preparado sobre 4. No permita que líquidos,la platina. Mirando de lado, asegúrese especialmente ácidos o alcoholes, seque el objeto a observar esté centrado pongan en contacto con su microscopio.justo debajo del objetivo de menor 5. Use siempre cubre-objetos cuandoaumento. observe en agua u otros líquidos6. Mirando a través del ocular mueva 6. Localice siempre el objeto con elsuavemente el tornillo macrométrico, si el objetivo de menor aumentoobjeto está bien centrado aparecerá su 7. Los sedimentos de grasa, el aceite deimagen en el campo visual. Déle nitidez inmersión y los residuos de éstosal enfoque accionando el tornillo productos deben eliminarsemicrométrico. Mueva el carro en inmediatamente con un poco dediferentes direcciones para seleccionar el disolvente como éter o xilol. Nunca semejor campo posible. Puede controlar la debe emplear alcohol, ya que disuelve elintensidad de la luz, mediante el cemento utilizado en la fabricación de losdiafragma o el regulador de la intensidad lentes. La limpieza final es más efectivade la luz de la bombilla. usando un poco de agua destilada.Para hacer un enfoque con mayor 8. Cuando no se esté usando elaumento debe seguir las indicaciones microscopio, debe mantenerse siempreanteriores. Una vez obtenido el enfoque cubierto con una funda.correcto con menor aumento, mueva el 9. Al finalizar sus actividades derevolver y coloque en posición de trabajo laboratorio, tenga en cuenta lo siguiente:el objetivo de mayor aumento. Si su 9.1 Antes de apagar la fuente de luz,microscopio está bien calibrado debe llevar el dispositivo que regula laaparecer enfocada la imagen del objeto. intensidad luminosa hasta O (cero).Este enfoque se refina accionando el 9.2 Dejar el microscopio con el objetivotornillo micrométrico. de menor aumento en la posición de enfoque y la platina en su máximaCuando el microscopio es monocular posición superior.debe acostumbrarse a mantener también 9.3 Desenchufar el microscopio yabierto el ojo que no utilice en la colocarle la funda protectora.observación microscópica, esto le evitacansancio. 2.0 EJERCICIO DE APLICACIÓN: Con las siguientes prácticas se ejercitará1.9 RECOMENDACIONES QUE DEBEN inicialmente al estudiante en el uso yOBSERVARSE PARA EL BUEN USO manejo del microscopio.Y CUIDADO DEL MICROSCOPIO:1. El microscopio es un instrumento 1. Fibra de lana o algodón:costoso y de precisión, con muchas Coloca varias fibras de lana o algodón departes delicadas, por lo tanto, debemos diferentes colores sobre un portaobjetos,darle el mejor cuido posible. coloque el cubre-objetos, enfoque con2. Si su Microscopio presenta algún menor y mayor aumento.defecto, consulte con su profesor. No Esquematice sus observaciones.trate de arreglarlo Usted.3. Las lentes del microscopio cuestancasi tanto como todas las demás partes 11
  • 2. Granos de polen:Coloque granos de polen del estigma deuna flor en un porta-objetos, con ayudade un gotero ponga una gota de agua,ubique el cubre-objetos y observe conmenor y mayor aumento. Haga unesquema de lo observado.3.0 CUESTIONARIO:1. Coloque los nombres a las diferentes partes del microscopio numeradas en la Fig. No. 1.6 e investigue las funciones de cada una de ellas.2. ¿Qué otros tipos de microscopios se utilizan en la investigación biológica?3. ¿Qué son objetivos secos?4. ¿Qué son objetivos de inmersión?5. Para qué se utiliza el aceite de cedro, cuando usamos el objetivo de inmersión?Cuando se utiliza un microscopio deespejo:6. ¿Qué importancia tiene utilizar la parte cóncava del espejo?7. ¿Qué importancia tiene utilizar la parte plana del espejo?8. Investigue sobre el funcionamiento de los diferentes microscopios electrónicos y establezca diferencias entre ellos.9. Describa las principales técnicas de preparación de muestras empleadas en microscopía óptica.10. ¿Qué son los colores complementarios y que utilidad tendrían en microscopía óptica.3.1 ENLACES http://tq.educ.ar/tq03027/tipos.htm : Como usar el microscopio, tipos, generalidades http://www.itg.uiuc.edu/technology/at las/: Página con atlas de imágenes obtenidas en diferentes tipos de microscopios.• Retornar a tabla de contenido 12
  • FIGURA 1.6 EL MICROSCOPIO ÓPTICO 13
  • GALERIA DE IMÁGENES1. LAS PARTES DEL MICROSCOPIO1.1 OCULARES 1.5 CONDENSADOR1.2 OBJETIVOS Y REVOLVER 1.6 TORNILLOS1.3 PLATINA Y CARRO 1.7 BRAZO 1.8 LA IMAGEN1.4 DIAFRAGMA Volver 14
  • 2. FILTROS 3. TINCIÓN DE MUESTRAS2.1 FILTROS POLARIZADORES2.2 FILTROS MONOCROMATICOS Volver2.3 UBICACIÓN DE LOS FILTROS2.4 COLORES COMPLEMENTARIOS Volver 15