Variabilidade Genética na Medicina Forense

A VARIABILIDADE GENÉTICA Biologia Molecular da Célula Trabalho elaborado por: Carolina Correia Cátia Barão Francisco Santos Vânia Caldeira NA MEDICINA FORENSE

Variabilidade Genética
Meiose
> Crossing-over (profase I)
> Colocação de cada cromossomas de cada par de homólogos, de um lado ou outro do plano equatorial do fuso acromático é feita ao acaso (metafase I)
Resulta de: mutações e recombinação génica durante a meiose e a fecundação:
Fecundação

Medicina Legal e Forense
Especialidade médica e jurídica
Usa conhecimentos técnico-científicos de Medicina para o esclarecimento de factos de interesse da Justiça
Reúne o estudo da Medicina, do Direito, da Biologia, da Química, da Balística, da Física, da Sociologia...
Divide-se em várias áreas:
> Antropologia forense
> Traumatologia forense
> Sexologia forense
> Tanatologia…

Variabilidade e Polimorfismos na Medicina Legal e Forense
O objectivo da análise de DNA é diferenciar um
indivíduo de outro pelo maior nº de características possível.
Na espécie humana 10% do genoma codifica proteínas através do RNA, o restante são sequências repetitivas.
É a variabilidade deste restante, ou seja, das regiões polimórficas, de função estrutural que se utiliza nos exames forenses de DNA.

Variabilidade e Polimorfismos na Medicina Legal e Forense
Alelo - cada uma das variantes possíveis de um locus polimórfico.
Locus – posição de um gene ou de um marcador genético num cromossoma.
Tipos de polimorfismos:
> SNPs
> VNTRs
> Polimorfismos de repetição de transposões
Polimorfismos: verificados em mais de 1% da polulação, sendo transmissíveis à descendência. Geralmente sem ou com consequências fenótipicas não negativas.
Mutações: geralmente associadas a patologias, daí não se “alastrararem” muito (menos de 1% da população).
Variações genéticas

Caso de Estudo – a Medicina Forense e a Violação Sexual
Nos casos de violação e noutros cenários criminais, as recolhas de amostras biológicas (sangue, cabelo, sémen, etc…) permitem o isolamento do DNA de um eventual suspeito.
Após a recolha e amplificação da amostra de DNA pela técnica de PCR bem como a sequenciação destes é possível ainda a descoberta de polimorfismos particulares e consequente identificação do criminoso.

A Investigação de uma Violação
A vítima de violação foi uma rapariga de 14 anos, portadora de Síndroma de Down, no Rio de Janeiro em 1998.
O crime foi notificado apenas alguns meses mais tarde, quando a gravidez resultante da violação se tornou evidente.
Assim, a análise forense do sémen do violador estava fora de questão.
A vítima obteve autorização judicial para uma interrupção da gravidez.
O feto abortado foi então analisado para identificar o pai biológico, tal como a mãe e 4 suspeitos deste caso de violação.

Técnicas Utilizadas: Extracção do DNA
Material biológico:
Recolha de sangue da vítima e suspeitos
Tecido da pele do feto
Incubação (15-18 horas, 56ºC)
Uso de fenol e clorofórmio para extracção de DNA
Suspensão das preparações de DNA em solução ( 10 mM Tris-Cl, 1 mM EDTA)
Verificação da integridade do DNA: amostras colocadas num gel de agarose 0,8% com brometo de etídio  electroforese, 100V, 15 minutos  medição da densidade do DNA

Técnicas Utilizadas: PCR
Análise de 6 loci STRs
DNA template + dNTP’s de STR + primers sintéticos (CTT ou FFv) + U Taq polimerase
PCR:
Desnaturação inicial, 2 min, 96ºC
10 ciclos de: 1 min a 94ºC, 1 min a 60ºC, 1,5 min a 70ºC
20 ciclos de 1 min a 90ºC, 1 min a 60ºC e 1,5 min a 70ºC
Os produtos da amplificação por PCR foram analisados num gel de agarose, 2%.

Técnicas Utilizadas
Análise dos Alelos STRs:
Desnaturação a 95ºC, 2 min
O material amplificado foi introduzido num gel de poliacrilamida (4%) com “corante de prata” e submetido a electroforese
Análise de 3 loci VNTRs
Digestão do DNA com enzimas de restrição:
Amostras de DNA genómico foram digeridas com Hae III, a 37ºC
Os fragmentos resultantes foram precipitados pela
adição de acetato de amónio e etanol
Incubação a -20ºC, 2 horas
Centrifugação, velocidade máxima, 10 min
Suspensão em solução tampão

Técnicas Utilizadas
Electroforese:
Os fragmentos foram separados num gel de agarose, 0.8%, 24 horas, 20V
Transferência e sequenciação por hibridação:
Tratamento e transferência de gel para membrana de nylon
Hibridação desta com sequências de DNA quimioluminescentes (sondas)
Análise Estatística
Recorrência a uma base de dados da população do Rio de Janeiro
Southern blot

Resultados
Os resultados da electroforese mostram que três dos suspeitos podem ser excluídos e apenas o suspeito nº3 é um potencial pai biológico do feto, depois da sequenciação dos vários loci (VNTR e STR).
Os alelos sequenciados nos 6 loci STR em cada suspeito encontram-se esquematizados na tabela seguinte.

Resultados
Loci de STRs que se revelaram motivo de exclusão dos suspeitos:
Suspeito nº1 – TPOX, F13A01 e vWA
Suspeito nº2 – CSF1PO, TPOX, THO1, FESFPS, vWA
Suspeito nº4 – TPOX, F13A01, FESFPS, vWA
Loci de VNTRs que se revelarem mais um motivo de inclusão do suspeito nº3, em comparação com a vítima e o feto:
D7S467, D8S358 e D10S28
Conclusão
O Índice de Paternidade Combinado é de 412.860, pelo que a probabilidade de ser o pai biológico do feto abortado é de 99,9997%.
Assim, conclui-se que o violador é o Suspeito nº3.

Referências Bibliográficas
http://www2.ufp.pt/~jcabeda/pdf/sebenta-sequenciacao.pdf
GOES, Andréa Carla de Souza, SILVA, Dayse Aparecida da, DOMINGUES, Cristiane Santana et al . Identification of a criminal by DNA typing in a rape case in Rio de Janeiro, Brazil . Sao Paulo Med. J., May 2002, vol.120, no.3, p.77-79. ISSN 1516-3180
COOPER, Geoffrey M.; HAUSMAN, Robert E., “The Cell – A Molecular Approach”, ASM Press e Sinauer Associates, 4ª edição, 2007

http://rizomas.net	846
http://digao.bio.br	82
http://www.rizomas.net	44
http://www.slideshare.net	39
http://www.digao.bio.br	28
http://webcache.googleusercontent.com	1

Variabilidade Genética na Medicina Forense

by Vânia Caldeira on Feb 28, 2008

Accessibility

Categories

Tags

Upload Details

Usage Rights

6 Embeds 1,040

Statistics

Variabilidade Genética na Medicina Forense — Presentation Transcript