EPIGENETIKAI ÉS GENETIKAI VIZSGÁLATOK FOLLICULÁRIS LYMPHOMÁBAN

  • 648 views
Uploaded on

 

  • Full Name Full Name Comment goes here.
    Are you sure you want to
    Your message goes here
    Be the first to comment
    Be the first to like this
No Downloads

Views

Total Views
648
On Slideshare
0
From Embeds
0
Number of Embeds
2

Actions

Shares
Downloads
2
Comments
0
Likes
0

Embeds 0

No embeds

Report content

Flagged as inappropriate Flag as inappropriate
Flag as inappropriate

Select your reason for flagging this presentation as inappropriate.

Cancel
    No notes for slide

Transcript

  • 1. EPIGENETIKAI ÉS GENETIKAI VIZSGÁLATOK FOLLICULÁRIS LYMPHOMÁBAN: EZH2 mutációk, Hiszton és DNS metiláció Bödör Csaba [email_address] Veszprém, 2010. november 18. 1, Institute of Cancer, Barts and The London School of Medicine and Dentistry, 2, Semmelweis Egyetem, 1. Patológiai és Kísérleti Rákkutató Intézet
  • 2. Bevezetés – Epigenetika
  • 3. Bevezetés – Epigenetika
  • 4. Az Epigenetikai Kód
    • DNS metiláció
    • Hiszton modifikáció (metiláció, acetyláció, foszforiláció)
    DNS metiláció Hiszton metiláció DNMT PRC2
  • 5. Hiszton metiláció: PRC2 komplex
    • Polycomb Repressive Complex 2 (EZH2, EED, SUZ12)
    • EZH2 : HMTáz aktivitás
    • Transzkripció repressziója embrionális őssejtekben
    • Reaktiváció a differenciáció során
    H3K27 me3 transzkripciós represszor H3K27
    • DNS metilációval való kapcsolat
    SUZ12 EZH2 EED UTX DNMT EZH2
  • 6. EZH2 fiziológiás és patológiás szerepe
    • Fiziológiás
    • Daganatokban
    • Fokozott expresszió (mRNS és/vagy fehérje) és kedvezőtlen prognosztikus szerep prosztata-, emlő-, tüdődaganatokban
    Lehetséges onkogén szerep
    • Hiszton és DNS metiláció
    • Fokozott expresszió a centrum germinativumban
    • Korai B-sejt fejlődés, Immunglobulin génátrendeződés
    DNMT EZH2
  • 7. EZH2 Y641 mutációk GC lymphomákban
    • EZH2 Y641 kodon mutációi FL 8% -ában (Nat ure Gen etics , 2010)
    • Mutáció a kulcsfontosságú SET katalikus doménben
    • GC specifi kus !
      • Tirozin szubsztitúció (Y641N, Y641F, Y641H, Y641S)
      • Morin és mtsai, Nat Gen, 2010
    • Metiltranszferáz aktivitás csökkenés
    Funkcióvesztés ( in vitro!) H3K27 me3 transzkripciós represszor X X
    • Tumor szupresszor szerep FL-ben ??
    • de …. !
    EZH2
  • 8. G A A T A / T C T G T Y641F G A A T / A A C T G T G A A T / C A C T G T Y641N Y641H G A A T A / C C T G T Y641S D1 D2 CXC SET
      • Y641N (8), Y641F (14), Y641H (3),Y641S (1)
    EZH2 Y641 mutációk: Saját eredmények
    • 26 mutáció 221 vizsgált beteg esetében (12%)
    • 31 FL és tFL mintapár analízise: 9 mutáció (29%)
  • 9. EZH2 Y641 mutációk: Mechanizmus?
    • Megváltozik-e a gén expressziója (EZH2) a mutációk hatására ?
    • Változik-e a globális DNS metilációs profil a mutációk hatására ?
    • Milyen hatással vannak a mutációk a H3K27 trimetilációra ? Valóban funkcióvesztés?
    • Mutáns és vad típusú GC B-sejtvonalak
    • FL szövetminták
  • 10. EZH2 Y641 mutációk: Mechanizmus?
    • Megváltozik-e a gén expressziója (EZH2) a mutációk hatására ?
    EZH2 mutáns EZH2 vad típus SU-DHL - 4 SU-DHL - 6 Karpas 422 SC-1 DOHH - 2 HRC57 Nc - Nc EZH2 GAPDH FL-1 FL-2 FL-3 FL-4 FL-5 FL-6 Tonsil-1 Tonsil-2 Tonsil-3 Q-PCR WB EZH2 EZH2 IHC
  • 11. EZH2 Y641 mutációk: Mechanizmus?
    • Megváltozik-e a gén expressziója (EZH2) a mutációk hatására ?
    Mi állhat a heterogén EZH2 expresszió hátterében??
    • MikroRNS általi szabályozás: miR-101, miR-26a
    • AKT kináz általi szabályozás
    • Ciklin dependens kinázok általi szabályozás
    miR-101 miR-26a EZH2 AKT CDK
  • 12.  
  • 13. EZH2 Y641 mutációk: Mechanizmus?
    • Változik-e a globális DNS metilációs profil a mutációk hatására ?
    Array (chip) alapú metilációs analízis Mindössze 2% különbség az EZH2 mutáns és vad típusú esetek között. DNMT EZH2
  • 14. EZH2 Y641 mutációk: Mechanizmus?
    • Milyen hatással vannak a mutációk a H3K27 trimetilációra ? Valóban funkcióvesztés?
    H3K27 me3 transzkripciós represszor X X EZH2
  • 15. Kitekintés: EZH2 mutációk myeloid kórképekben Inactivating mutations of the histone methyltransferase gene EZH2 in myeloid disorders. Ernst et al, Nature Genetics,. 2010, July 4 Somatic mutations of the histone methyltransferase gene EZH2 in myelodysplastic syndromes. Nikoloski et al, Nature Genetics,. 2010, July 4 D1 D2 CXC SET
    • Különböző típusú mutációk a génben, de az Y641 kodon érintetlen!!
    • Gyakran homozigóta mutációk >>> egyértelmű funkcióvesztés
    H3K27 me3 transzkripciós represszor X X
      • Makishima és mtsai, Leukemia, 2010
    EZH2
  • 16. EZH2 Y641 mutációk: Mechanizmus?
    • Milyen hatással vannak a mutációk a H3K27 trimetilációra ? Valóban funkcióvesztés?
    X X ? SU-DHL - 4 SU-DHL - 6 Karpas 422 SC-1 DOHH - 2 HRC57 Nc - Nc EZH2 H3K27me3 GAPDH FL-1 FL-2 FL-3 FL-4 FL-5 FL-6 Tonsil-1 Tonsil-2 Tonsil-3 WB IHC H3K27me3 LOW HIGH H3K27me3 Nem valószínű a funkcióvesztés, sőt… ! EZH2
  • 17. EZH2 Y641 mutációk: Hogyan tovább?
    • Valószínű a funkciószerzés, tehát az EZH2 onkogén szerepe FL-ben
    • Mutáns konstrukciók szerkesztése és expressziója:
      • változik-e az inaktivált gének „névsora”?
      • hozzájárul-e a mutáció az FL sejtek kemorezisztenciájához?
      • HMTáz és DNS metiláció gátlókkal való kezelés
      • specifikus EZH2 SET domén inhibítorok
      • demetilázok vizsgálata
    • Az EZH2-H3K27me3 tengely egyéb szabályozói
    • Hamarosan: … újabb hiszton metiltranszferáz (MLL2) mutációi FL-ben!
    Mendez-Lago et al , ASH 2010.
  • 18. Az Epigenetikai kód, Epigenetikai terápia DNMT HDAC
    • DNS metiláció
    • Hiszton modifikáció (metiláció, acetyláció, foszforiláció)
    HMT 5-aza-2'-deoxycytidine … Panobinostat DZNep ( 3-deazaneplanocin)
  • 19. Epigenom projekt …
  • 20.  
  • 21.  
  • 22. Köszönöm a figyelmet !