Metodos modernos para diagnostico de tuberculosis
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Metodos modernos para diagnostico de tuberculosis Metodos modernos para diagnostico de tuberculosis Presentation Transcript

  • Licda. Yanira E. MeléndezLaboratorio Nacional deReferencia2012
  • • El diagnostico actual se basa en las mismas técnicas bacteriológicas que descubrió Koch hace mas de 100 años.• Se ha tomado conciencia que para lograr su eliminación es mas importante mejorar los métodos diagnósticos.
  • • Cultivos en medio Solido: Loweistein JensenOgawa Kudoh
  •  Crecimiento:Medio en el que crece. Tiempo que tarda en crecer, morfología de la colonia, producción de pigmentos con/sin luz… Pruebas bioquímicas:Prueba de la niacina, reducción de nitratos, catalasa, tween 80.
  • • METODOS CONVENCIONALES. Crecimiento de la micobacteria en medios con el tuberculostàtico correspondiente Medios sólidos: Método de las proporciones (Resultado del estudio: 2-3 meses desde la recogida de la muestra)
  • PROCEDIMIENTO TECNICAS TIEMPO PROMEDIO DEL REPORTE DESDE EL DIA EN QUE SE PROCESA LA MUESTRA EXAMEN DIRECTO Coloración de Kinyoun Coloración de Ziehl- 24 HORAS Neelsen DETECCION DE Lowestein-Jensen CRECIMIENTO Ogawa- Kudoh 20-25 DÌASIDENTIFICACIÓN DE Pbas bioquímicas LA ESPECIE tradicionales (Niacina, 50-55 DIAS Catalasa, Reducción de Nitratos etc)
  • PROCEDIMIENTO TECNICAS TIEMPO PROMEDIO DEL REPORTE DESDE EL DIA EN QUE SE PROCESA LA MUESTRAPRUEBAS DE Método de lasSENSIBILIDAD proporciones 60 DIAS múltiples
  • PROCEDIMIENTO TECNICAS TIEMPO PROMEDIO DEL REPORTE DESDE EL DIA EN QUE SE PROCESA LA MUESTRA EXAMEN DIRECTO Coloración 24 horas Auramina/Rodamina DETECCION DE BACTEC, 15 días CRECIMIENTOIDENTIFICACIÓN DE LA BACTEC, Sondas de 18 días ESPECIE ADN, HPCL
  • PROCEDIMIENTO TECNICAS TIEMPO PROMEDIO DEL REPORTE DESDE EL DIA EN QUE SE PROCESA LA MUESTRA PRUEBAS DE BACTEC 30 días SENSIBILIDAD
  • Microscopía LED Una nueva alternativa diagnóstica Qué es un diodo? Dispositivo semiconductor de paso de corriente eléctrica en un solo sentidoQué es la microscopía LED?Es un tipo de microscopìa fluorescente en la cual la fuente lumínica(halógena o de mercurio) ha sido reemplazada por un diodo emisor deluz
  • AURAMINA O ZIEHL NEELSEN Microscopio de fluorescencia Microscopio óptico. 800 – 1000 200 – 400Bacilos de color rojo sobre fondo Bacilos flourescentes amarillos Azul y blanco. Y brillantes sobre fondo oscuroLa “Limitación” más importante de la baciloscopìa es su bajasensibilidad.Muy importante: Obtener buenas muestras Tiempo de observación
  • Medios de cultivo Líquidos: Radiométricos ( BACTEC ): detecta automáticamente crecimientobacteriano, en caldo Milddlebrook 7H12 midiendo la cantidad de CO2marcado con Carbono Radioactivo (14CO2)
  • Ventajas*Ahorro de tiempo en la detección delcrecimiento(15 a 20 días)*Mayor sensibilidad, tanto para el aislamiento delM. tuberculosis como de otras Micobacterias.*Posibilidad de identificar M. tuberculosis en 4 a 5días y de realizar PSD a fármacos de primeralínea en 3 a 6 días.
  • • Necesita utilizar radioisótopos.• Elevado costo del equipo, reactivo y mantenimiento.• Uso de jeringas, lo que puede ocasionar contaminaciones cruzadas entre muestras así como formación de aerosoles.• Necesita permiso para manipulación y almacenamiento del 14C.
  • • Basado en el mismo principio, pero el marcador ha sido sustituido por Rutenio que emite fluorescencia detectable a medida que disminuye la tensión parcial de O2, usa tubos con caldo Milddlebrook 7H9• Tiene una lectura automatizada• Aprobado como Gold Estándar• Buena concordancia con PS en medio sólido y BACTEC 460
  • VENTAJASMayor sensibilidad.Menor tiempoDESVENTAJASMas costoso.Dependencia del proveedorMayor preparación depersonal
  • Ventajas• Bajo costo• Detecta 100 bacilos en una muestra• Puede ser utilizado para determinación de resistencia a Rifampicina directamente de la muestra de expectoración• Acorta el tiempo 2 díasDesventajas• Mayor frecuencia de contaminaciones
  • Sistema de Medio base Mezcla Sistema Detección de M. Detección de Otrascultivo antibiótica de tuberculosis otras característica detecció media (rango) Micobacterias s n en días media (rango) en díasBactec 4 ml de PANTA 14CO2 10(4-30) 13 (3-30) Radiomé-12 B 7H12 trico más POES
  • POES :Contiene esterato de polioxietileno , sustancia que favorece el crecimiento.PANTA : Polimixina B, Anfotericina B, Ac. Nalidixico,Trimetroprima, Azlociclina. Este suplemento al agregarse almedio 12B inhibe el crecimiento de gérmenescontaminantes.
  • • ADN: Molécula que tiene toda la información genética de cada individuo• PCR: Reacción en cadena de la polimerasa• Descubierta en 1985 por Karry Mullis (USA)• La enzima ADN polimerasa permite fabricar una cadena de ADN complementaria a otra ya existente• Técnica muy sensible y rápida
  • NUCLEOCELULA CROMOSOMA ADN
  • • Este ensayo es basado en la transcripción mediada por un sistema de amplificación (TMA). El mycobacterial rRNA.• EL RNA amplicon producido es detectado en solución usando luminometrico. Esta aprobado solo para muestras respiratorias
  • • 1- La detección del ADN del complejo MTB en muestras de esputo o sedimento concentrado ya sea de esputo o LBA, BAAR + o BAAR -• 2- La detección de la mutación del gen rpoB /región 81bp que esta asociada a la resistencia a la rifampicina en pacientes de alto riesgo• 3- La prueba MTB/RIF-Xpert® esta indicada en pacientes :• con sospecha clínica de TBC• pacientes que no han recibido tratamiento,• pacientes con menos de 7 días de tx. o pacientes que no han recibido tx en los últimos 60 días
  • • 1). Primer instrumento dediagnóstico molecularhomologado por la FDA• 2). El sistema GeneXpertes el único en combinar unapreparación de muestraabordo con PCR en tiemporeal• 3). Resultados demuestras no procesadas enaproximadamente 2 horas.
  • • 1). Se monitoriza ciclo a ciclo el producto amplificado, a través de una señal de fluorescencia en el momento en que se está dando la reacción de PCR• 2). La señal de fluorescencia incrementa en proporción al producto amplificado• 3). La señal fluorescente será colectada en la fase exponencial de la PCR ciclo a ciclo.• 4). La medición puede ser graficada en forma logaritmica o lineal.
  • Baciloscopia Cultivo en L GeneXpert Metodo de J las ProporcionesPositiva Positivo Positivo Sensible/ ResistentePositiva Negativo Positivo No aplicaNegativa Positivo Negativo Sensible /ResistenteNegativa Negativo Positivo No aplica
  • 1 Provenir del sitio de la lesión a investigarMuestra Biológica 2 CantidadAdecuada suficiente 3 Envase adecuado y limpio 6 Transporte 4 Identificación 5 Conservación (tiempo de entrega)
  • Muestra biológica adecuada + Técnica correctaResultado confiable y útil
  • • Los cultivos de bacteriología solo captan: LA PUNTA DEL ICEBERGLa transmisión se da no solo por pacientes infectados,sino que también por pacientes colonizados