Laboratorio de microbiologia

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Laboratorio de microbiologia

  1. 1. LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA Instrumentación y principios básicos 1
  2. 2. 2
  3. 3. LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍAInstrumentación y principios básicos d La Habana, 2004 3
  4. 4. Datos CIP-Editorial Ciencias MédicasGonzález Alfaro José Laboratorio de Microbiología: Instrumentación y principios básicos/ José González Alfaro, Boris González González, Rosa T. Barrial González. La Habana: Editorial Ciencias Médicas; 2004 256p. Fig.Incluye índice general. Está dividida en 19 capítulos.Listado de referencias al final de la obra.ISBN 959-212-131-11. MICROBIOLOGÍA 2. PERSONAL DE LABORATORIO3. TÉCNICAS MICROBIOLÓGICAS. LIBRO DE TEXTOI. González González Boris II. Barrial González Rosa T.QW23Diseño: Ac. Luciano O. Sánchez NúñezEmplane: Maria Pacheco Gola© José González Alfaro, Boris González González y Rosa T. Barrial González, 2004© Sobre la presente edición Editorial Ciencias Médicas, 2004Editorial Ciencias MédicasCentro Nacional de Información de Ciencias MédicasCalle I No. 202, esquina Línea, Vedado,Ciudad de La Habana, 10400, CubaCorreo electrónico: ecimed@infomed.sld.cuTeléfonos: 55 3375, 832 5338 4
  5. 5. "Vivid en la serena paz de los laboratorios y preguntaos cada día:-¿Qué puedo hacer para mejorar la calidad del servicio que presto? -¿Cómo puedo ayudar a mi país? -¿Cómo puedo servir a la humanidad? Luis Pasteur 5
  6. 6. AUTORESJosé González AlfaroTécnico de Microbiología Especializado en Docencia, Profesor Facultad Tec-nológica Dr. Salvador AllendeBoris González GonzálezLic. En Microbiología Hospital Salvador Allende, Profesor Facultad Tecnológi-ca Dr. Salvador AllendeRosa T. Barrial GonzálezMcS en Microbiología Hospital Salvador Allende, Profesora Facultad Tecnoló-gica Dr. Salvador Allende 6
  7. 7. ÍNDICEEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA / 17INTRODUCCIÒN / 17LABORATORIO CLÍNICO / 17LABORATORIO DE MEDICINA TRANSFUSIONAL / 17LABORATORIO DE RAYOS X / 17LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA. GENERALIDADES / 18ACTIVIDADES FUNDAMENTALES / 18RECURSOS HUMANOS / 18ESTRUCTURA ADMINISTRATIV / 18 AIMPORTANCIA DEL TRABAJO DE LOS PROFESIONALES Y TÉCNICOS DEMICROBIOLOGIA / 19ESTRATEGIA ORGANIZATIV DE TRABAJO / 19 ADISPOSICIÓN DE LOS MATERIALES DE TRABAJO / 20CERTEZA DE LOS MEDIOS REACTIVOS O MEDIOS A EMPLEAR / 20ORDENAMIENTO DE LAS MUESTRAS / 20PLANIFICACIÓN DEL TRABAJO A REALIZAR. / 20CONCENTRACIÓN EN EL TRABAJO / 21CUESTIONARIO / 21BIOSEGURIDAD / 22INTRODUCCIÒN / 22RIESGOS FÍSICOS / 22RIESGOS QUÍMICOS / 22RIESGOS BIOLÓGICOS / 22BIOSEGURIDAD. CONCEPTO / 22DAÑO INDIVIDUAL Y COMUNITARIO. / 23PRINCIPALES CAUSAS / 23NIVELES DE RIESGO BIOLOGICO / 23PRINCIPIOS BÁSICOS / 24PARA LA CORRECTA REALIZACIÓN DE LAS TÉCNICAS DE LABORATORIO / 24EMPLEO SISTEMÁTICO DE EQUIPOS Y MEDIOS DE SEGURIDAD / 25EL DISEÑO ADECUADO DE LOS LABORATORIOS / 26MEDIDAS DE PREVENCIÓN / 33PRECAUCIONES A TENER EN CUENTA PARA LA / 33DESINFECCIÓN DE JERINGUILLAS Y AGUJAS REUSABLES, ANTES DE SU ESTERI-LIZACIÓN / 33INDICACIONES EN CASOS DE ACCIDENTE / 34LAVADO DE MANOS / 35TIPOS DE LAVADO DE MANOS / 36LAVADO SOCIAL DE LAS MANOS / 36 7
  8. 8. LAV ADO HIGIÉNICO O MÉDICO DE LAS MANOS / 36LAV ADO QUIRÚRGICO DE LAS MANOS / 37MANEJO DE DESHECHOS PELIGROSOS / 38CUESTIONARIO / 38ETICA MEDICA / 40INTRODUCCION / 40LA MORAL / 40ETICA / 41TEORÍA DE LA MORAL / 41ÉTICA NORMATIV / 41 AÉTICA MÉDICA / 41EN RELACIÓN CON EL PACIENTE Y SUS FAMILIARES / 42EN RELACIÓN CON EL RESTO DE LOS TRABAJADORES DE LA SALUD / 44EN LAS RELACIONES ENTRE EL DOCENTE Y LOS EDUCANDOS / 44COMO PARTE DE LA SOCIEDAD / 44LAS COMISIONES DE ÉTICA MÉDICA / 45CUESTIONARIO / 45EL AGUA / 46INTRODUCCIÓN / 46IMPORTANCIA / 46CALIDAD DEL AGUA / 46PURIFICACIÓN DEL AGUA / 47DESTILACIÓN / 47DESIONIZACIÓN / 48PH DEL AGUA DESTILADA / 48CONDUCTIVIDAD DEL AGUA / 48CUESTIONARIO / 49CRISTALERÍA DE LABORATORIO / 50INTRODUCCIÓN / 50COMPONENTES DEL VIDRIO / 50SUSTITUTOS MODERNOS DEL VIDRIO / 50CLASIFICACION / 51CARACTERIZACIÓN DE LOS DIFERENTES TIPOS / 52DE CRISTALERÍA / 52CRISTALERÍA GENERALDE TRABAJO / 52CRISTALERÍA DE MEDICIÓN / 59MATERIALES DE PORCELANA / 63LIMPIEZA Y DESINFECCIÓN / 64PREPARACIÓN PREVIA DE LA CRISTALERÍA / 65PARA SU ESTERILIZACIÓN / 65CUESTIONARIO / 67ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCIÓN / 68INTRODUCCIÓN / 68TÉRMINOS EMPLEADOS RELACIONADOS CON LA ESTERILIZACIÓN Y LA DES-INFECCIÓN / 68 8
  9. 9. ESTERILIZACIÓN / 68EL CALOR / 69PROTOTIPO STANDARD DEL AUTOCLAVE / 70MANIPULACIÓN DEL AUTOCLAVE / 71CALOR HÚMEDO A 1000 C / 72CALOR HÚMEDO A MENOS DE 1000C / 74CALOR SECO / 74USO DEL HORNO / 75INCINERACIÓN / 76MECHEROS / 76LAS RADIACIONES / 79RADIACIONES IONIZANTES / 79RADIACIONES NO IONIZANTES / 80FILTRACIÓN / 81CARACTERÍSTICAS DE LOS FILTROS / 81PREPARACIÓN DE LOS FILTROS / 81DESINFECCIÓN / 83SELECCIÓN DE LOS DESINFECTANTES / 84CUESTIONARIO / 85EQUIPOS CALORIFICOS / 87INTRODUCCION / 87INCUBADORA / 87REQUERIMIENTO DE TEMPERATURAS / 87CLASIFICACIÓN DE LOS MICROORGANISMOS DE ACUERDO CON SUS NECESI-DADES DE OXÍGENO / 88INCUBACIÓN DE BACTERIA ANAEROBIAS / 90INCUBADORA PARA ANAEROBIOS / 92BAÑO DE AGUA CALIENTE. (BAÑO DE MARÍA) / 92CUESTIONARIO / 94MICROSCOPIO / 95INTRODUCCIÓN / 95MICROSCOPIO. CONCEPTO / 96DIFERENTES TIPOS / 96MICROSCOPIO ÓPTICO / 96CLASIFICACIÓN / 97SISTEMA MECÁNICO / 98PRINCIPIOS BÁSICOS / 109INDICACIONES PARA EL MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO / 111OTRAS V ARIANTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO / 112MICROSCOPIO ESTEREOSCÓPICO / 117CUIDADO, LIMPIEZA Y MANTENIMIENTO DEL MICROSCOPIO / 119MICROSCOPIO ELECTRÓNICO / 121ESTRUCTURA DEL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO / 121FUNCIONAMIENTO / 123 9
  10. 10. CUESTIONARIO / 124INSTRUMENTOS MECÁNICOS / 126INTRODUCCIÓN / 126PIPETAS MECÁNICAS / 126PIPETA TIPO MARBURG / 127EQUIPOS ELECTROMECÁNICOS / 131LAS CENTRÍFUGAS / 131PRINCIPIO TÉCNICO / 133BALANCE DE LOS TUBOS / 133FUNCIONAMIENTO / 134EL ROTOR / 135DISEÑO DEL EQUIPO / 135FUNCIONAMIENTO / 136EL AGITADOR / 136DISEÑO DEL EQUIPO / 137FUNCIONAMIENTO / 137POTENCIOMETROS / 138ESTRUCTURA / 138ELECTRODOS / 139TIPOS DE ELECTRODOS / 139PRINCIPIO FUNCIONAL / 139MEDICIÓN DEL PH / 140PROCEDIMIENTO PARA EL MANEJO DEL POTENCIÓMETRO / 140CUESTIONARIO / 141BALANZAS / 143INTRODUCCIÓN / 143PRINCIPIO / 143DIFERENTES TIPOS DE BALANZAS / 143BALANZAS GRANATARIAS / 144FUNCIONAMIENTO / 145PROCEDIMIENTOS PARA EFECTUAR LA PESADA / 145CAJA DE PESAS / 146PRECAUCIONES / 147BALANXA DE UN SOLO PLATILLO (TIPO OHAUS) / 147BALANZA DE PRECISION O ANALÍTICA / 147BALANZA DE PRECISIÓN MECÁNICA / 148PROCEDIMIENTO PARA REALIZAR LA PESADA / 150PRECAUCIONES / 151BALANZA DE PRECISIÓN ELÉCTRICA / 151FUNCIONAMIENTO / 153PESADA / 154DETERMINACIÓN DEL PESO / 155BALANZA ANALITICA DIGITAL / 156CUESTIONARIO / 156INSTRUMENTOS DE MEDICIÓN / 158 10
  11. 11. NO VOLUMÉTRICOS / 158INTRODUCCIÓN / 158INSTRUMENTOS. DIFERENTES TIPOS / 158RELOJES / 158TERMÓMETROS / 159DENSÍMETROS / 160CUESTIONARIO / 161ACCCESORIOS, INSTRUMENTAL QUIRÚRGICO Y M ATERIALES DE CURACIO-NES / 162INTRODUCCION / 162ACCESORIOS / 162GRADILLAS / 162CESTOS / 163SOPORTE UNIVERSAL / 163PINZAS DE SUJECCIÓN / 164TRÍPODE / 164MALLA DE AMIANTO / 165INSTRUMENTAL QUIRÚRGICO / 165MATERIALES DE CURACIONES / 166CUESTIONARIO / 167TOMA DE MUESTRAS / 168INTRODUCCIÓN / 168MUESTRA. CONCEPTO / 168MUESTRA REPRESENTATIV / 168 AMÉTODOS DE CONSERV ACIÓN / 169CALIDAD DE LA MUESTRA / 170INSTRUCCIONES AL PACIENTE / 172DIFERENTES TIPOS DE MUESTRAS / 172EXUDADOS / 172LÍQUIDOS ORGÁNICOS / 179SANGRE / 181LINFA / 182EXCRECIONES / 183FANERAS / 185PRODUCTOS PATOLÓGICOS / 185CUESTIONARIO / 186PREPRACIÓN DE MUESTRAS EN LÁMINAS PARA EXÁMENES MICROSCÓPI-COS / 187INTRODUCCIÓN / 187DIFERENTES MÉTODOS / 187PREPARACIÓN DE MUESTRAS EN LÁMINAS PARA EXAMEN MICROSCÓPICOEN FRESCO / 187MÉTODO DE LA GOTA COLGANTE / 188PREPARACIÓN EN LÁMINAS DE MUESTRAS COLOREADAS / 189 11
  12. 12. CUESTIONARIO / 191COLORANTES Y COLORACIONES / 192INTRODUCCIÓN / 192CONCEPTO / 192FUENTES DE OBTENCIÓN DE LOS COLORANTES / 192COLORANTES NATURALES / 192COLORANTES SINTÉTICOS / 193CLASIFICACIÓN / 193AFINIDADES TINTORIALES / 194TOXICIDAD DE LOS COLORANTES. VENTAJAS Y DESVENTAJAS / 194METODOS DE COLORACIÓN / 195COLORACIÓN DE GRAM / 195COLORACIÓN DE "ZIEHL NEELSEN / 199CCOLORACIÓN DE ZIEHL NEELSEN (MODIFICADA PARA MYCROBACTERIUMLEPRAE) / 202COLORACIÓN FRAGELAR DE LEIFSON (MODICFICACIÓN DE CLARK) / 203COLORACIÓN DE CÁPSULAS / 204COLORACIÓN DE ESPORAS / 205CUESTIONARIO / 206MEDIOS DE CULTIVO / 208INTRODUCCIÓN / 208OBJETIVOS DE LA NUTRICION MICROBIANA / 208CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO / 208CONSISTENCIA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO / 212COMPUESTOS NUTRITIVOS BASICOS / 213ELABORACION DE MEDIOS DE CULTIVO / 217DISTRIBUCIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO / 220CONSERV ACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO COMERCIALES / 222CONSERV ACIÓN DE MEDIOS ELABORADOS / 222COMPROBACIÓN DE LA ESTERILIDAD DE LOS MEDIOS ELABORADOS / 223CUESTIONARIO / 223SIEMBRA E INCUBACIÓN / 225INTRODUCCIÓN / 225INSTRUMENTOS DE SIEMBRA / 225DIFERENTES TIPOS / 226MÉTODOS DE SIEMBRA / 227INCUBACIÓN / 232MANIFESTACIONES DEL CRECIMIENTO BACTERIANO / 233EN LOS MEDIOS DE CULTIVO / 233CULTIVO PURO / 233CULTIVO MIXTO / 233RESIEMBRA / 233CUESTIONARIO / 234PRODUCTOS QUÍMICOS Y BIOLÓGICOS PARA EL DIAGNÓSTICO / 235INTRODUCCIÓN / 235 12
  13. 13. HIDRATOS DE CARBONO / 235INDICADORES / 236SANGRE Y HEMODERIV ADOS / 237COLORANTES / 237PRODUCTOS QUÍMICOS / 238AMINOÁCIDOS / 238ANTIBIÓTICOS / 238SUEROS / 240ANTÍGENOS / 240LÁTEX / 241CUESTIONARIO / 241GARANTÍA DE LA CALIDAD / 243INTRODUCCIÓN / 243OBJETIVOS / 243DIFERENTES TIPOS DE CONTROL / 244PRUEBAS ESTADÍSTICAS / 245PRINCIPALES FUENTES DE ERRORES / 245MANUAL DE NORMAS Y PROCEDIMIENTOS / 246REGULACIONES DEL CONTROL DE CALIDAD / 247EN BACTERIOLOGIA / 247CONTROL DE EQUIPOS E INSTRUMENTOS / 247CONTROL DE MEDIOS DE CULTIVO / 248CONTROL DE COLORANTES Y REACTIVOS / 248CONTROL DE DISCOS PARA ANTIBIOGRAMA / 249CONTROL DE ANTÍGENOS Y ANTISUEROS / 249CONSERV ACIÓN DE CEPAS PARA EL CONTROL BIOLÓGICO / 249DEL LABORATORIO DE REFERENCIAALLABORATORIO QUE SERÁ EV ALUADO / 251DEL LABORATORIO DE LA UNIDAD AL LABORATORIO DE REFERENCIA / 251CUESTIONARIO / 253REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS / 254 13
  14. 14. 14
  15. 15. PREFACIOComo parte de la política del estado cubano de universalizar la enseñan-za, los cursos de técnicos medios de la salud que durante casi 4 décadasse impartieron, en más de 20 especialidades, en los institutos politécnicos,creados al efecto en todo el país, fueron diseñados como carreras univer-sitarias, a partir del curso 2003-2004, mediante un nuevo modelo peda-gógico que comprende dos niveles de formación intermedia: técnico básicoy técnico medio, culminando la formación universitaria como licenciadoen tecnología de la salud en diferentes perfiles.Los planes de estudio se han sustentado en la modalidad de estudio-trabajo,lo que permite a los estudiantes desarrollar progresivamente las habilidadesen los propios escenarios donde se encuentran los diferentes servicios desalud, bajo la asesoría de profesionales y técnicos de experiencia, con lo quese pretende que adquieran la capacitación adecuada para brindar un servi-cio de excelencia a nuestra población, así como desempeñarse con eficacia ycompetitividad en cualquier otro país donde se requiera su colaboración.Como apoyo al diseño curricular del perfil de microbiología, hemos edita-do este libro de texto para que sea utilizado como bibliografía básica en elestudio de la asignatura Fundamentos y Principios Básicos del Laborato-rio de Microbiología.Cada tema ha sido abordado con una proyección tecnológica, atendiendoa los contenidos del programa y el perfil de salida de los egresados, paralo cual se tuvo en cuenta precisar la particularidad utilitaria de cadaequipo, instrumento, accesorios y otros materiales de trabajo, así como,todo lo concerniente a su descripción estructural estándar y sus varian-tes, la función de cada una de las partes y su interacción con el resto delsistema, el principio de su funcionamiento y el algoritmo de trabajo, ade-más de todo lo concerniente a su cuidado y conservación.En los capítulos correspondientes a los procederes de laboratorio, cadaaspecto ha sido explicado pormenorizadamente, de manera que, siguien-do al pie de la letra las instrucciones que se proporcionan, los estudiantespueden realizar sin contratiempos los procederes en cuestión. 15
  16. 16. Al finalizar cada tema se ha incluido un cuestionario de preguntas, con elobjetivo de que sea utilizado como guía de estudio individual o colectivo.Esperamos que este texto te sea de utilidad en el proceso de aprendizaje,no solo para alcanzar buenos resultados docentes, sino más bien, comouna herramienta que te proporciona una capacitación perdurable, sobreel que se sustente tu desempeño profesional, que es, en definitiva, el obje-tivo esencial de tu formación. Los autores 16
  17. 17. CAPITULO 1EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIAINTRODUCCIÒN Los laboratorios son edificados especialmente diseñados, para la realiza-ción de experimentos, investigaciones científicas o el análisis de diferentes mues-tras, así como, para la producción de medicamentos, reactivos o la obtención deproductos biológicos. Como parte del Sistema Nacional de Salud, en Cuba, existen diferentestipos de laboratorios, por ejemplo:Laboratorio Clínico La actividad básica que se realiza en este tipo de laboratorio es la de recibirlas ordenes de análisis del médico de asistencia, tomar y recibir muestras bioló-gicas, tales como: sangre, líquido cefalorraquídeo, jugo gástrico, orina, etc, a lascuales se les realizan análisis bioquímicos, hematológicos, serològicos, etc. Paradeterminar sus alteraciones en relación con sus valores de referencia. Realizaanálisis de urgencia e informa los resultados.Laboratorio de Medicina Transfusional El laboratorio de Medicina Trasnfusional, recibe indicaciones y solicitudesmédicas, toma y recibe muestras biológicas, realiza sangrías a donantes, análisisinmunohematológicos y serológicos e informa los resultados. Transfunde san-gre total o sus derivados. Y obtiene y procesa componentes de la sangre parauso terapéutico o de investigaciones. Cumple indicaciones de urgencia e infor-ma los resultados.Laboratorio de Rayos X El Laboratorio de Rayos X, recibe indicaciones médicas, administra con-traste a los pacientes, para las investigaciones que así lo requiera, realiza exá-menes radiológicos convencionales o mediante la utilización de técnicas modernas 17
  18. 18. de imagenología, para detectar alteraciones anatomofibiológicas en partes blan-das u óseas del organismo asi como la presencia de cuerpos extraños. Cumpleindicaciones de urgencia e informa los resultados.LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA. GENERALIDADESActividades fundamentales El laboratorio de microbiología clínica, recibe indicaciones médicas, toma yrecibe muestras biológicas a las que realiza investigaciones microbiológicasmediante exámenes microscópicos directos y por cultivos, con el objetivo deidentificar a los agentes causales de las infecciones estudiadas, precisar sucuantía en los casos que así se requiera o demostrar la presencia de anticuerposevocadores de la presencia del agente etiológico en cuestión. El servicio de microbiología, proporciona al medico de asistencia, informa-ción precisa relacionada con la sensibilidad o resistencia del agente infeccioso alos diferentes antibióticos, con lo cual aporta un dato de inestimable valor para laindicación del tratamiento También brinda apoyo especializado al Comité de Prevención y Control delas Infecciones Nosocomiales (infecciones intra hospitalarias) originadas en elhospital u otro establecimiento de atención de salud.Recursos humanos El personal de los laboratorios de microbiología clínica, esta compuesto porprofesionales universitarios; médicos especialistas de 1er o 2do. grado(microbiólogos), Ms.C. o Licenciados en microbiología, así como bioquímicos,biólogos y otros tecnólogos, ademas de técnicos medios, especializados o no,personal de oficina y auxiliares generales entrenados.Estructura administrativa Todos los laboratorios están gerenciados por un jefe de servicio, cargo queocupa generalmente un médico especialista o en su defecto otro profesional. Las diferentes secciones están dirigidas a su vez por diferentes profesionales. En la mayoría de los laboratorios, un técnico medio experimentado, se des-empeña como jefe técnico, asumiendo determinadas funciones delegadas por eljefe de servicio. 18
  19. 19. IMPORTANCIA DEL TRABAJODE LOS PROFESIONALES Y TÉCNICOSDE MICROBIOLOGIA Dado el incremento actual de las enfermedades emergentes y reemergentes,así como el desarrollo cada vez más creciente de cepas resistentes a losantibióticos de uso tradicional, el trabajo de los profesionales y técnicos de mi-crobiología, adquiere cada día mayor protagonismo, al proporcionar datos exac-tos acerca de la identidad de los microorganismos en estudio, diagnósticadospor procedimientos habituales o de diagnósticos rápidos, así como mediantetécnicas serodiagnósticas de alta sensibilidad y por aportar el patrón de suscep-tibilidad a los antibióticos de los microorganismos en cuestión, todo lo cual am-plia la capacidad del diagnóstico médico a magnitudes que están fuera del alcancede los métodos clínicos, posibilitando la indicación de un tratamiento mas eficaz. El perfeccionamiento del trabajo microbiológico se proyecta en dos direc-ciones:1. La prestación de este servicio a toda la población del país, a nivel de la atención primaria, en policlínicos, así como en unidades hospitalarias o cen- tros especializados, ya que ha sido y es política de la Revolución que los servicios médicos sean accesibles a todos los ciudadanos. Para ellos, casi todos los hospitales y policlínicos cuentan con servicios de microbiología y en la actualidad se esta concretando un proyecto de estaciones microbiológicas destinadas fundamentalmente al diagnostico mediante exámenes directores, en las investigaciones donde resulte factible, así como la toma y preservación de muestras en medios de transporte para su envió a los laboratorios de referencia.2. Mejorar la calidad del servicio, mediante el acceso a las tecnologías más modernas, el perfeccionamiento en la formación de los profesionales del sec- tor y la superación científico-técnica de los graduados a través de diplomados y cursos de post-grado, maestrías y doctorado.ESTRATEGIA ORGANIZATIVA DE TRABAJO Para lograr una buena eficacia en la realización de los procederes de labo-ratorio, resulta indispensable sistematizar una estrategia de trabajo, que permitaasegurar la calidad de los resultados, incrementar la productividad de las deter- 19
  20. 20. minaciones y al mismo tiempo que proporcione una adecuada protección contraposibles accidentes. Para el logro de estos propósitos el laboratorista debe cumplir con las si-guientes indicaciones:Disposición de los materiales de trabajo Seleccione todos los utensilios (escrupulosamente limpios o estériles) quese requieran para el trabajo a realizar (gradillas, tubos, pipetas, etc) y ubíquelosordenadamente sobre la mesa de trabajo, de manera que queden al alcance dela mano. En este sentido es importante tener la certeza de que no falte ningúnmaterial que implique tener que interrumpir el procedimiento para su localiza-ción, ya que además de ocasionar una pérdida de tiempo innecesaria, la discon-tinuidad de la marcha analítica, puede en algunos casos, introducir causas deerrores, por alteración del tiempo establecido en algún paso de la técnica y enconsecuencia afectarse los resultados.Certeza de los medios reactivos o medios a empleara) Al seleccionar los reactivos, lea cuidadosamente la etiqueta del frasco para evitar errores, cerciórese del nombre del reactivo, su concentración y que la fecha de vencimiento no haya caducado.b) Verifique mediante un examen visual que no se encuentran alterados (preci- pitados, turbios, etc).c) Cerciórese de que se le haya hecho control de calidad.d) Colóquelos en la mesa de trabajo en el orden en que serán utilizados.e) Al destaparlos coloque cada tapa delante del frasco correspondiente para evitar errores al taparlo que impliquen su contaminación.Ordenamiento de las muestras Coloque las muestras en la mesa de trabajo por orden numérico de izquier-da a derecha.Planificación del trabajo a realizar. Siempre que resulte pertinente conviene planificar el trabajo a realizar en ellaboratorio, para aprovechar al máximo el tiempo disponible. Por ejemplo, si se 20
  21. 21. van a preparar exámenes microscópicos directos de heces fecales, para la bús-queda de protozoos, por los métodos eocina y lugol, es conveniente hacer lasdos preparaciones por separados en una misma lamina portaobjetos, lo quefacilita la operatoria microscópica sin pérdida de tiempo al no tener que inter-cambiar láminas.Concentración en el trabajo Durante todo el tiempo que dure la ejecución del procedimiento, concentresu atención en cada paso de la técnica, evite interrupciones innecesarias y abs-téngase de mantener conversaciones ajenas a lo que esta haciendo. Trabajecon meticulosidad y esmero y aplique las medidas de asepsia cuando la determi-nación así lo requiera.CUESTIONARIO1. Especifique El concepto que Ud. tenga de lo que es un laboratorio.2. Nombre diferentes laboratorios que pertenezcan al Sistema Nacional de Sa- lud.3. Refiérase a las actividades fundamentales que se realizan en un laboratorio de microbiología clínica.4. Indique las diferentes categorías ocupacionales del personal que labora en un laboratorio de microbiología.5. Explique la estructura administrativa de los laboratorios.6. ¿En que radica la importancia del trabajo de los profesionales y técnicos de microbiología?7. Explique cada uno de los indicadores establecidos para la estrategia organizativa del puesto de trabajo. 21
  22. 22. CAPÍTULO 2BIOSEGURIDADINTRODUCCIÒN Los profesionales y técnicos de la salud que laboran en unidades hospitala-rias, policlínicos, etc o en centros de investigaciones biomédicas, están expues-tos, por la naturaleza de su trabajo, a diversos riesgos profesionales, que puedenclasificarse según su origen en:Riesgos físicos Ocasionados regularmente por, traumas, exposiciones al calor, la electrici-dad, las radiaciones, etc.Riesgos químicos Originados por el manejo con sustancia inflamables, corrosivas, tóxicas,cancerigenas, etc.Riesgos biológicos Debido a la manipulación frecuente de pacientes infectados, el manejo deproductos sépticos y el nivel de contaminación ambiental predominante en elámbito hospitalario, especialmente en los laboratorios donde se realizan exáme-nes de sangre, líquidos corporales, excreciones y productos patológicos.BIOSEGURIDAD. CONCEPTO Es la disciplina que se ocupa de la prevención y control del riesgo biológicoal que están expuestas, directa o indirectamente las personas, los animales y lasplantas como consecuencias de accidentes o negligencias, en los laboratoriosde microbiología, clínicos, etc. Así como en la industria biotecnológica y el tra-bajo con organismo transgénicos. 22
  23. 23. DAÑO INDIVIDUAL Y COMUNITARIO.PRINCIPALES CAUSAS Los accidentes imprevistos y el deficiente desempeño del personalocupacionalmente expuesto, son las principales causas del daño individual quebajo determinadas circunstancia, puede extenderse al entorno hospitalario o a lacomunidad, ocasionando diversos grados de afectaciones médicas, veterinariaso fitosanitarias con el consiguiente perjuicio económico o ecológico.NIVELES DE RIESGO BIOLOGICO Cuadro 1: Diferentes niveles de riesgo biológico. Los niveles de riesgo para un laboratorio básico, son los de tipo I y II. RIESGO CARACTERIZACIÒN DE LOS AGENTES PATÓGENOS INVOLUCRADOS INDIVIDUAL COMUNITARIOI ESCASO ESCASO TIENEN POCAS PROBABILIDADES DE PROVOCAR ENFERMEDADES EN LOS SERES HUMANOS Y EN LOS ANIMALES PUEDEN PROVOCAR ENFERMEDADES EN LOS SERES HUMANOS Y EN LOS ANIMALES.II MODERADO LIMITADO TIENEN POCAS PROBABILIDADES DE ENTRAÑAR RIESGOS GRAVES PARA EL PERSONAL DEL LABORATORIO, LA COMUNIDAD, LOS ANIMALES Y EL MEDIO AMBIENTE. SU EXPOSICIÓN EN EL LABORATORIO PUEDENPROVOCARINFECCIONESGRA VES.III ELEVADO ESCASO PUEDEN PROVOCAR ENFERMEDADES GRAVES EN SERES HUMANOS. GENERALMENTE LA INFECCIÓN NO SE PROPAGA DE UN INDIVIDUO A OTRO.IV ELEVADO ELEVADO PUEDEN PROVOCAR ENFERMEDADES GRAVES EN SERES HUMANOS Y EN LOS ANIMALES. PUEDEN PROPAGARSE FÁCILMENTE DE UN INDIVIDUO A OTRO, DIRECTA O INDIRECTAMENTE. 23
  24. 24. PRINCIPIOS BÁSICOS Los principios básicos, regidos por las normas de bioseguridad para la pre-vención y control del riesgo biológico son los siguientes: 1. La correcta realización de las técnicas de laboratorio. 2. El empleo sistemático de los equipos y medios de seguridad. 3. El diseño adecuado de los laboratorios. Para dar cumplimiento a estos principios se establece en el reglamentoun código practico, con las indicaciones y regulaciones a cumplimentar porel personal de laboratorio, que serán expuestas resumidamente a continua-ción.Para la correcta realización de las técnicas de laboratorioa) Regulaciones básicas. - Aplicar rigurosamente las medidas de asepsia y antisepsia en todas las ocasiones en que la acción a realizar así lo requiera. - Los instrumentos de siembra de platino o nicròn, se deben esterilizar a la llama del mechero, antes y después de su uso. A los efectos de evitar salpicaduras del material residual empleado, el instrumento debe introducirse gradualmente en la llama del mechero hasta ponerse al rojo vivo. - Los frotis coloreados, así como los portaobjetos, cubreobjetos y pipetas utilizadas se depositaran en recipientes apropiados que contengan solu- ción desinfectante. - Los procederes técnicos han de realizarse de manera que se evite en lo posible la formación de aerosoles siendo las causas mas frecuentes las siguientes. . Flameos de instrumentos de siembra contaminadas con productos biológicos infecciosos. . Pipeteo energético. . Retirar la aguja de las jeringuillas que contengan material contami- nado. . Apertura de cultivos liofilizados en ámpulas. . Abrir la tapa de la centrífuga antes de que esta se detenga o de inmediato, cuando se ha centrifugado muestras biológicas o material contaminado. 24
  25. 25. . La caída brusca de las placas o tubos de cultivos, aún cuando no llegaran a romperse. Los tubos de ensayo que contengan cultivos, deben mantenerse siempreen posición vertical en una gradilla. Nunca dejarlos en posición horizontal, yaque el agua de condensación puede arrastrar los gérmenes del cultivo, hume-decer los tapones de algodón y contaminar la mesa de trabajo. Los cultivos en placas deben mantenerse con la tapa hacia abajo en elinterior de la incubadora o sobre la mesa de trabajo.b) Higiene del laboratorio y el personal. - Mantener el laboratorio escrupulosamente limpio, retirando del mismo material que no tenga relación con el trabajo. - Las superficies de las mesetas se descontaminaran al menos una vez al día y en caso de derramamiento de sustancia potencialmente peligrosas de inmediato. - Velar por el cumplimiento del programa de lucha contra insectos y roedores. - En las zonas de trabajo del laboratorio, no comer, beber, fumar, guardar alimentos ni aplicar cosméticos, realizando estas actividades solamente en las áreas autorizadas. - No humedecer las etiquetas de los frascos con la lengua. - Lavarse las manos después de haber manipulado pacientes, material con- taminado, o animales y al retirarse del laboratorio (ver mas adelante, procedimiento para el lavado de manos).Empleo sistemático de equipos y medios de seguridad - Utilizar bata sanitaria u otras prendas apropiadas cuando la envergadura del trabajo así lo requiera, como: batones, botas, nasobucos, etc. - Emplear guantes quirúrgicos en todo trabajo que entrañe contacto con sangre, material infecciosos o animales infectados. Los guantes se de- ben retirar asépticamente y ser esterilizados en autoclave. - Utilizar pipetas mecánicas para manipular líquidos infecciosos. Nunca pipetear con la boca esos productos peligrosos. - Siempre que sea necesario, proteger los ojos y la cara de salpicaduras e impactos mediante gafas de seguridad, viseras, pantalla facial u otros dispositivos de protección. - Cuando la naturaleza del trabajo a realizar así lo requiera, recurrir al empleo de campanas químicas, gabinetes, o cabinas de seguridad. 25
  26. 26. - Utilizar incineradas de asas microbiológicas.Fig. 1 : Equipos y medios de seguridad: a) Incinerador de asas, b) Guantes de polietileno, Lentes de seguridad, d) Nasobuco.El diseño adecuado de los laboratorios Debido a los diversos riesgos implícitos en las investigaciones microbiológicas,la construcción o adaptación de un laboratorio de microbiología clínica, requiere decondiciones especiales que propicien el establecimiento de una organización de tra-bajo, que permita al personal del laboratorio, el cumplimiento estricto de las normasde asepsia y antisepsia establecidas para la manipulación de los pacientes, el manejoy control de los microorganismos presentes en las diferentes muestras y cultivosdurante el proceso de la investigación, así como, el de los gérmenes ambientales ocontaminantes que por diversas vías pueden tener acceso a las áreas de trabajo. Dentro de los requerimientos esenciales del diseño constructivo se encuen-tran los siguientes.1. Como medida de seguridad, la construcción de un laboratorio de microbiolo- gía se hará en un área separada de locales destinados a otros fines.2. Las paredes, en especial la parte inferior, el piso y el techo, deben ser lisos, sin grietas o ralladuras donde se pueda acumular la suciedad y el polvo que dificulten su limpieza y desinfección.3. Casi todas las salas o cubículos del laboratorio dispondrán de mesetas, generalmente empotradas en las paredes o instaladas en el centro del local. Las mesetas deben ser construidas con acero inoxidable u otro material simi- 26
  27. 27. lar que propicie un terminado de su superficie liso y sin poros y que sea al mismo tiempo muy resistente a la acción de los ácidos, álcalis y sustancias corrosivas, de manera que puedan ser desinfectadas o esterilizadas por métodos físicos o quími- cos sin que se deterioren. La superficie de estas mesetas no deben reflejar exce- sivamente la luz para que no interfiera la lectura de algunos exámenes ni afecte con el tiempo la vista del laboratorista.Las que sean destinadas para trabajar senta- do, tendrán una altura de 75 a 80 cm de altura por 60 cm de ancho, no debiendo existir ninguna construcción debajo que dificulte la colocación de las piernas y solo de ser necesario podrá disponer de una gaveta. Las destinadas para trabajar de pie tendrán una altura de 85 a 90 cm de alto y el mismo ancho que la anterior. Estas mesetas generalmente están provistas de gavetas y estantes con anaque- les, destinados a la colocación de la cristalería, los frascos con reactivos coloran- tes, medios de cultivos, así como otros materiales e instrumentos.Fig. 2 : Disposición de las mesetas en el laboratorio.4. Las ventanas deben estar situadas a unos 30 cm, mínimo, por encima de la altura de las mesetas para evitar la exposición directa del aire y el polvo procedente del exterior.5. El laboratorio dispondrá de instalaciones de : agua, electricidad, aire y gas. El grado de iluminación y ventilación se debe adecuar a las normas establecidas para locales cerrados o abiertos, atendiendo a la cantidad de personas pre- vistas, que estarán presentes en un turno de trabajo.Caracteres estructurales La estructura de un laboratorio de microbiología, dependerá esencialmentede la disponibilidad de espacio. En aquellos laboratorios que cuenten con sufi- 27
  28. 28. cientes salas y cubículos, las actividades suelen ser compartimentadas en lassiguientes áreas o secciones de trabajo: - Sala de recepción y archivo. - Cubículo para las tomas de muestras. - Sala principal de trabajo. - Cuarto de siembra. - Cubículo para la preparación de medios de cultivo, reactivos y colorantes. - Cubículo para la esterilización y preparación de materiales. La sala de recepción y archivo, debe estar a la entrada de la edificación yel resto de las secciones de trabajo, se ubicará estratégicamente en el interiordel laboratorio, de menor a mayor nivel de contaminación. (áreas bio limpias obio sucias) con esta estrategia, los pacientes, familiares y visitantes no tendránacceso a las áreas de riesgo, siendo limitado para el resto del personal dellaboratorio y otros visitantes, no relacionados con la actividad que se realiza enesas secciones de trabajo, todo lo cual está encaminado a reducir la probabili-dad de posibles propagaciones de agentes patógenos por todo el laboratorio y lacomunidad.Sala de recepción y archivo En esta sección, un personal de oficina entrenado, recepciona las órdenesde análisis entregadas por los propios pacientes o enviadas desde las salas de launidad hospitalaria, en caso de pacientes encamados, o procedentes de otrasunidades de salud vinculadas al centro, donde se procederá a asentar en el librode registro de entrada, el numero, que consecutivamente le corresponde a esasolicitud, la fecha de registro, los datos del paciente (nombre y dos apellidos ynúmero de historia clínica), la procedencia (consulta externa, sala donde seencuentra hospitalizado o unidad de salud que hace la solicitud), y el tipo deinvestigación que se indica.Fig. 3 : Libro de registro. 28
  29. 29. En un pequeño cuadrante que se encuentra impreso en el ángulo superiorderecho de la orden de análisis se notara el número asignado en el registro deentrada.Fig. 4 : Orden de análisis. Cuando la orden se entrega conjuntamente con la muestra (orina, heces,esputo, etc) en los frascos se anota con lápiz cristalográfico, el mismo númerode registro. Como medida de seguridad, los frascos que contienen muestras nodeben estar en contacto con las órdenes de análisis, dada la posibilidad de quese haya producido algún derramamiento durante su recolección en cuyo caso, lamanipulación ulterior de las ordenes pueden propiciar una vía de contagio. Si se tratara de un tipo de muestra que deba ser tomada en el laboratorio(exudados, lesiones infecciosas en la piel, etc) después de registrada, la orden leserá devuelta al paciente, quien la entregara al técnico que le vaya a tomar lamuestra. Concluida la investigación, los resultados serán debidamente informados enla orden de análisis, por el técnico que realizó el examen, quien la firmará yanotara la fecha de realización, debiendo reintegrarla a la sección de recepcióny archivo, donde se anotará los datos en el libro de registro de resultados, lo quepermitirá en caso de extravío de la orden, emitir un duplicado. Las ordenes conlos resultados serán enviadas al Dpto. de archivo de la unidad hospitalaria paraque sean archivados en las historias clínicas o en el laboratorio cuando debanser recogidas por los interesados. Si el examen no se puede realizar y se solicite su repetición, en la orden deanálisis se especificaran las causas (muestras escasa, muestra contaminadas,suero hemolizado, etc). Además de estos datos primarios que se registran diariamente, la sección dearchivo tiene la función de procesar un resumen bioestadístico mensual con los resul- 29
  30. 30. tados de cada tipo de investigación y adicionalmente llevar un control estadísticoestablecido por los programas de enfermedades de transmisión sexual y tuberculosis.Cubículos para las tomas de muestras En este local, el laboratorista dispondrá de los recursos necesarios (guan-tes, hisopos estériles, instrumentos de siembra, mechero, etc, etc) para la tomade las diferentes muestras (exudado faringeo, óptico, conjuntival, etc) debiendocontar con la privacidad requerida y las condiciones necesarias, para la toma delexudado vaginal, uretral, etc tales como parabanes, camillas ginecológicas, etc).Sala principal de trabajo Esta sala puede contar de uno o varios cubículos, constituyendo cada uno deellos, una sección de trabajo independiente, en la que se realizan determinadas in-vestigaciones, por ejemplo: Urocultivo, coprocultivo, misceláneas, tuberculosis,parasitología, serología, etc. En algunas unidades, particularmente, centros munici-pales o provinciales, pueden existir otras secciones especializadas para la investiga-ción de lepra, leptospirosis, etc. Cada sección contará con los recursos necesariospara la realización de esas investigaciones especificas, tales como: preparación ycultivo de las muestras, tinciones, observaciones microscópicas, pruebas de iden-tificación, etc. Estas secciones de trabajo deben estar climatizadas.Cuarto de siembra Generalmente los laboratorios pequeños que disponen de una sala principalen un único local tienen anexado un pequeño cubículo que es donde radica elcuarto de siembra. Este cuarto esta provisto de mesetas y de todos los materialese instrumentos para la realización de siembras, resiembras y de aquellas activida-des que requieran de una estricta asepsia, así como de una lámpara de luz ultravioletapara la esterilización del medio ambiente, o la superficie del inmueble y el mobilia-rio. Al igual que la sala principal de trabajo, debe estar climatizado.Cubículo para la preparación de medios de cultivos, reactivos y colo-rantes Este local estará equipado con balanzas, baño de María, potenciómetro,refrigerador, etc., así como de la cristalería y otros accesorios para estos fines. En sus estantes y anaqueles se almacenará el stok de productos químicos,medios de cultivos y otros reactivos y colorantes, debiendo contar con una colec-ción de cepas microbianas certificadas para la realización del control de calidad. 30
  31. 31. Cubículo para la esterilización y preparación de materiales Este local se destina para la realización de diversas actividades, entre lasque se encuentran las siguientes. . Limpieza y desinfección de la cristalería y otros materiales, incluyendo su secado. . Empaquetamiento y preparación de la cristalería y otros materiales para su esterilización. . Esterilización. . Destilación de agua.Limpieza y desinfección de la cristalería y otros materiales, incluyendosu secado En este local se instala una meseta con tres fregaderos colindantes; en elprimero se friega la cristalería con detergentes especiales y agua abundanteempleando hisopo de tamaño apropiado. En el segundo de enjuaga, con aguacruda y en el tercero con agua destilada. Las pilas de estos fregaderos debenestar lo suficientemente altas como para permitir el enjuague de las pipetas enposición vertical.Fig. 5 : Hisopo para la limpieza de la cristalería. En un área de este local se situara un recipiente grande con solución desin-fectante o sulfocromica con el objetivo de sumergir la cristalería que asi lorequiera.Empaquetamiento y preparación de la cristalería y otros materiales parasu esterilización La cristalería de trabajo y otros materiales que vayan a ser sometidos a unproceso de esterilización, en horno o autoclave, deben ser previamente taponados 31
  32. 32. con algodón y/o empaquetados con papel de estraza, para evitar su posteriorcontaminación una vez estériles, por las manipulaciones ulteriores y losmicroorganismos presentes en el medio ambiente.Esterilización El local debe estar dividido en dos áreas; una para esterilizar el materiallimpio y la otra para esterilizar el material sucio. Como se comprenderá serequieren de dos autoclaves. El área para el tratamiento del material limpio contará al menos con unhorno que además de ser utilizado para la esterilización se puede emplear parael secado.Destilación de agua Generalmente, los laboratorios que disponen de destiladores metálicos, losinstalan en este lugar (Área limpia) procediendo a la destilación y recoleccióndel agua destilada en botellones con tapón de goma.Fig. 6 : Destilador metálico de agua. El flujo de trabajo en esta sección es el siguiente: entrada del material sucio,esterilización, fregado, preparación y esterilización del material limpio. 32
  33. 33. MEDIDAS DE PREVENCIÓN1. El personal del laboratorio recibirá, a través de su director una minuciosa información acerca de: a) Las medidas de seguridad establecidas. b) La existencia y localización de un manual de seguridad y de operaciones en el que se identifiquen los riesgos actuales y potenciales y se indiquen los procedimientos para su reducción. c) Los riesgos mas probables que pueden ocurrir debido al tipo de investi- gaciones que se realizan en ese laboratorio.2. A todos los miembros del personal del laboratorio y demás personas expues- tas se les tomara muestras de sangre periódicamente y con el suero se reali- zaran determinaciones que servirán de referencia en función de los agentes infecciosos manipulados.3. Durante el horario de trabajo las puertas del laboratorio permanecerán cerra- das y solo tendrán acceso el personal del laboratorio y las personas autoriza- das que hayan sido debidamente informadas sobre los posibles riegos y satis- fagan cualquier requisito que se exija para tener acceso, como por ejemplo la inmunización actualizada. No se permitirá la presencia de niños en las zonas de trabajo del laboratorio.4. No se permitirá tampoco la entrada en el laboratorio de animales que no tengan relación con el trabajo que se esté realizando.PRECAUCIONES A TENER EN CUENTA PARA LADESINFECCIÓN DE JERINGUILLAS Y AGUJAS REUSABLES,ANTES DE SU ESTERILIZACIÓN1. La manipulación se hará siempre con guantes quirúrgicos estériles observan- do un cuidado extremo para evitar pinchazos o cortaduras.2. Dejar las agujas colocadas en la jeringuillas.3. Sumergir la jeringuilla con la aguja ensamblada, en posición horizontal, en el interior de una bandeja que contenga solución desinfectante y exponerla a su acción por un espacio de tiempo no menor de 20 minutos.4. Descargar la solución desinfectante contenida en la jeringuilla a través de la aguja.5. Enjuagar la jeringuilla y la aguja con agua (llenar y vaciar). Observar que no queden restos de sangre ni manchas.6. Examinar la aguja y la jeringuilla cerciorándose de que el ajuste de la boquilla de la aguja a la jeringuilla es adecuado y que las marcas volumétricas se mantienen legibles. 33
  34. 34. 7. Secar y proceder a empaquetar las agujas y las jeringuillas por separado con doble envoltura para su esterilización en autoclave.INDICACIONES EN CASOS DE ACCIDENTEEn caso de derrame de muestras biológicas o material contaminadoa) Colocarse guantes quirúrgicos.b) Cubrir la sustancia derramada con material absorbente (algodón, papel de filtro, etc).c) Aplicar solución desinfectante de hipoclorito de calcio o sodio al 1% alrede- dor del derrame y sobre el material absorbente esperar de 10 a 20 minutos.d) Remover el material absorbente y colocarlo en un contenedor destinado para materiales contaminados.e) Limpiar nuevamente el área contaminada con el desinfectante y posterior- mente con detergente y agua abundante.Fig. 7 : Desinfección de muestras biológicas o material infeccioso derramado accidental- mente: a)Cubrir el área con un material adsorbente, b)Aplicar solución desinfectante, c)Remover el material infeccioso, d)Aplicación nuevamente de desinfectante, e) y f) Limpieza con agua y detergente. 34
  35. 35. En caso de lesiones o contacto no protegido con material contami-nado o muestras biológicasa) Lavar de inmediato la lesión con agua y jabón.b) Estimular el sangramiento, para arrastrar mecánicamente a los agentes in- fecciosos.c) Aplicar una solución desinfectante débil de hipoclorito de sodio o calcio. Cu- rar y cubrir la lesión.d) Para continuar el trabajo colóquese un débil o guante.e) En caso de salpicaduras de sangre en los ojos o la boca, debe irrigarse de inmediato con cantidades de agua abundantes o solución salina fisiológica.f) Los derrames accidentales, punturas, lesiones o exposiciones con muestras o material contaminado, deben ser comunicados lo antes posible al jefe del labo- ratorio, quien registrará el hecho en el libro de control que existe al efecto.g) El jefe de Dpto. verificara la procedencia de la muestra y si comprueba que el instrumental estaba contaminado con sangre o liquido corporal de un en- fermo o portador de VIH, lo notificara al Dpto. de Epidemiología y orientará al trabajador que reporte cualquier síntoma febril agudo, sobre todo si es acompañado de rash, diarreas o adenopatías que ocurra dentro de las 12 semanas con posterioridad a la exposición. El personal accidentado debe ser puesto en observación epidemiológica que incluya pruebas para detectar anticuerpos contra el VIH que serán realizadas 6 semanas después de la exposición. Si la prueba es negativa, se repite a los 3 meses y con esa perio- dicidad durante un año. Si al cabo de ese tiempo continua negativa se da, el alta epidemiológica.LAVADO DE MANOS Objetivo: Eliminar la micro biota transitoria y disminuir la residente o normalde las manos y los antebrazos. Justificación: La medida básica mas importante, relacionada con la higienepersonal lo constituye sin lugar a dudas el lavado de manos. La manipulación delos pacientes o materiales, trae como consecuencia la contaminación de lasmanos y las muñecas pudiendo extenderse a los antebrazos, por lo que de nodebe aplicarse con sistematisidad estas medidas higiénicas al personal de lasalud puede propagar la infección de un paciente a otro y contribuir de estamanera al incremento de las infecciones nosocomiales. En el lavado de manos intervienen elementos mecánicos y químicos. Elagua arrastra mecánicamente una parte de los microorganismo presentes en las 35
  36. 36. manos, mientras que el jabón emulsiona las materias extrañas y reduce la ten-sión superficial de los gérmenes presentes lo que facilita su lisis, conjuntamentecon la eliminación de los ácidos grasos y la suciedad.TIpos de lavado de manos . Lavado social. . Lavado higiénico. . Lavado quirúrgico.Lavado social de las manos Concepto: Es la limpieza mecánica de las manos con agua y jabón conven-cional, que elimina todo tipo de suciedad visible. Empleo: Siempre que se perciban las manos sucias, al realizar actividadesfisiológicas, personales o sociales que lo requiera y antes y después del contactocon pacientes en procederes no invasivos y sin riesgo.Procedimiento1. Retire las prendas de las manos y las muñecas.2. Abra la llave del agua y tome el jabón. Remoje las manos hasta las muñecas y haga una abundante espuma.3. Con la punta de los dedos, enjuague el jabón y colóquelos en la jabonera.4. Cierre la llave con una de las manos y enjabónelas.5. Frote rigurosamente las manos con movimiento rotativo y haga que la espu- ma se extienda hasta las muñecas.6. Abra la llave hasta que salga un chorro abundante de agua y enjuague las manos y manténgalas en un plano horizontal.7. Junte las manos en forma de recipiente, llénelas de agua y enjuague la llave.8. Cierre la llave y séquese las manos con servilletas, papel o paño para cada una, sin frotárselas.Lavado higiénico o médico de las manos Concepto: Es la limpieza mecánica de las manos con agua y jabón conven-cional, las que se frotan de forma enérgica se enjuagan abundantemente duran-te un minuto y después del secado se aplica solución antiséptica.. Empleo: Se utiliza ante las maniobras semicriticas, con el objetivo dearrastrar suciedades, evitar infecciones cruzadas y proteger al personal desalud. 36
  37. 37. Procedimiento1. Realice el lavado social de las manos hasta el paso en que se enjuaga la llave con las manos juntas en forma de recipiente.2. Moje las manos y antebrazos (5 cm por encima de las muñecas) enjabónelas con jabón convencional o bacteriostático y haga una abundante espuma.3. Frote las manos de la siguiente forma: a) Palma con palma. b) Palma derecha sobre dorso de la mano izquierda o viceversa. c) Palma con palma intercalando los dedos. d) Dorso de los dedos flexionados para cada mano. e) Pulgar derecho con la mano izquierda y viceversa. f) Frotación de las yemas de los dedos sobre las palmas. g) Frote en forma circular la superficie de los antebrazos 5 cm por encima de las muñecas. h) Realice un enjuague abundante y deje que el agua corra hacia los codos. i) Seque las manos y antebrazos con paños, servilletas o papel estéril (uno para cada mano) apriete suavemente la piel sin restregar, comience por las manos y finalice en los codos nunca regrese a las manos. j) Aplicar solución antiséptica y déjela actuar sobre las manos por un tiem- po no menor de 2 minutos antes de la maniobra semicritica.Lavado quirúrgico de las manos Concepto: Es la limpieza mecánica de las manos con agua, jabón y cepillo,con utilización de solución antiséptica después del secado. Empleo: Antes de cualquier maniobra critica.Procedimiento1. Realice el lavado social de las manos hasta enjuagar la llave con las manos juntas.2. Moje las manos y antebrazos hasta 2 pulgadas arriba del codo, enjabónelos con jabón convencional en forma circular y haga una abundante espuma.3. Frote las manos igual que para lavado higiénico incluyendo los antebrazos.4. Tomar un cepillo estéril para cada mano, aplíquele jabón y cepille bien las uñas, lechos ungueales y la yema de los dedos.5. Enjuague bien sin dejar ningún residuo de jabón, mantenga las manos siempre levantadas para que el agua corra hacia los codos. 37
  38. 38. MANEJO DE DESHECHOS PELIGROSOS Se debe establecer un sistema de identificación y separación de los mate-riales contaminados (y de sus recipientes). a) Deshechos no contaminados que pueden eliminarse con la basura. b) Objetos aguzados y cortantes (agujas, jeringuillas, etc). c) Material contaminado para tratamiento en autoclave y reutilización. d) Material contaminado para su eliminación. Objetos aguzados y cortantes: Las agujas hipodérmicas deben ser coloca-das en recipientes con paredes que no puedan traspasarse fácilmente. Cuandoestos estén llenos se colocaran dentro de otros recipientes para desechos con-taminados y se incineran, incluso cuando las normas de laboratorio consistan enesterilizarlos primero en autoclave. Material contaminado para tratamiento en autoclave y reutilización: Estematerial se coloca en recipientes impermeables poco profundos que contengauna cantidad desinfectante suficiente para cubrir el contenido y se llevan alautoclave. No se efectúa ninguna acción previa; cualquier limpieza o repara-ción que se considere se hará después de esterilizados. Material contaminado para eliminación: Todos los cultivos y materiales con-taminados suelen esterilizarse en autoclave, previamente introducidos en reci-pientes impermiables,antes de proceder a su eliminación. Después del tratamientoen autoclave puede colocarse el material en recipientes apropiados para el trans-porte al incinerador o a otro lugar de evacuación. Lo mejor es poner los deshechos en un saco plástico que se introduce enuna caja de cartón, con lo que se puede incinerar el contenido y el continente.Si se utiliza recipientes especiales concebidos para el transporte, habrá quelimpiarlos y desinfectarlos después de descargar transporte, habrá que lim-piarlos y desinfectarlos después de descargar el contenido y antes de devol-verlos al laboratorio. Estos recipientes deben ser impermeables y estar provistosde tapa herméticas.CUESTIONARIO 1. Nombre los diferentes tipos de riesgo a los que están expuestos los pro- fesionales y técnicos de microbiología en el ejercicio de su trabajo. 2. Enuncie el concepto de Bioseguridad. 38
  39. 39. 3. ¿Cuáles son las principales causas del daño individual? 4. Especifique que elemento biológico resultan vulnerables de ser afectados en la comunidad por negligencias o accidentes en un laboratorio que tra- baja con agentes biológicos peligrosos. 5. Caracterice los diferentes niveles de riesgo, en cuanto a la afectación individual y comunitaria. 6. Mencione los principios básicos establecidos para la prevención y control del riesgo biológico. 7. Refiérase a las medidas establecida para evitar la formación de aerosoles. 8. Mencione las prohibiciones establecidas en el código practico o regla- mento de estricto cumplimiento para el personal que labora en el labora- torio, que están encaminadas a evitar la ocurrencia de contagio infeccio- sos. 9. Describa como debe ser el diseño constructivo de un laboratorio de mi- crobiología.10. ¿Qué instalaciones debe tener el laboratorio para su buen funcionamiento?11. Nombre las diferentes salas o cubículos con que se estructura un laboratorio de microbiología.12. Especifique las característica constructivas que debe tener cada una de las salas o cubículo, y su equipamiento.13. Indique cuales don las actividades que se realizan en cada sala o cubículo del laboratorio.14. Precise las medidas de prevención que debe conocer el personal que labora en los laboratorios.15. ¿Qué indicaciones se establecen en caso de accidente?.16. ¿Cuáles son las indicaciones a seguir en el caso de que se produzcan derra- mes de muestras biológicas o material contaminado?17. Describa pormenorizadamente las normas establecidas para efectuar las diferentes técnicas de lavado de manos.18. ¿Cómo se clasifican los objetos peligrosos antes de ser deshechos?19. Explique como usted procede con cada tipo de material u objeto contamina- do, teniendo en cuenta su reutilización o eliminación. 39
  40. 40. CAPITULO 3ETICA MEDICAINTRODUCCION La sociedad está formada pro un conjunto de seres humanos que convivendentro un mismo ámbito cultural, relacionándose de un modo u otro, para obte-ner los medios de subsistencia necesarios (alimentos, vestidos, vivienda, instru-mentos de producción, etc.). En todo sistema social impera un modo de producción que determina labase económica de esa sociedad, cuya estructura responde a los intereses de laclase dominante, mediante el establecimiento de relaciones de producción basa-da en la propiedad sobre los medios de producción que va a delimitar el grado deaccesibilidad a los bienes materiales y culturales de cada clase y/o capa socialexistente, lo que dependerá del lugar que ocupen en la escala social y el carác-ter privado o social de las fuerzas productivas. Como una necesidad de las sociedades divididas en clases, surge el Estado;una organización política de la clase dominante que tiene como finalidad mante-ner el orden establecido y aplastar la resistencia de las clases antagónicas, paralo cual crea organizaciones represivas o políticas e instituciones productivas yde servicio que responden a sus intereses económicos o tienen el encargo deinfluir ideológicamente con iguales propósitos sobre la conciencia común (esta-do de opinión, juicios, criterios etc.) de la población, mediante la inculcación deideas, concepciones políticas, jurídicas, morales, estéticas,, religiosas, filosófi-cas, que en su conjunto forman la conciencia social. A diferencia de las relaciones de producción que se forman independiente-mente de la voluntad del hombre, las concepciones ideológicas pasan primeropor la conciencia, antes de constituirse en patrones del comportamiento.LA MORAL La moral puede definirse, como el conjunto de convicciones, fundadas odogmáticas, que cada individuo incorpora a su escala de valores, debido a in-fluencias socioculturales y que se expresa mediante opiniones, representacio-nes, normas y evaluaciones sobre la regulación de la conducta de los individuos,constituyendo obligaciones con respecto a otros individuos, la familia, su clasesocial, la patria y el Estado, evaluando estas relaciones de buenas o malas, dejustas o injustas, de honestas o deshonestas etc. Y fijándolas en su concienciacomo principios o normas morales. La moral está condicionada por la base 40
  41. 41. económica el régimen social, pero a la vez como otras formas de la concienciasocial incide y actúa sobre ella. Al cumplir esta función, la moral no se apoya en leyes formales, sino en lafuerza de la persuasión y el ejemplo, en la autoridad moral de algunas personaso en la opinión publica de determinadas colectividades. Como quiera que en la sociedad dividida en clases los intereses son contra-dictorios, existen en aquellas morales diferentes.ETICA La ética es la ciencia de la moral y de la moralidad. A diferencia de la moral, que surge y se desarrolla como resultado de lasrelaciones de producción, estableciéndose como hábito o costumbre en la con-ciencia, la ética investiga científicamente las concepciones morales en su senti-do mas amplio y establece las regulaciones para su aplicación. Para su estudio la ética se divide en. Teoría de la Moral y Ética Normativa.Teoría de la moral Investiga la esencia de la moral, su origen y desarrollo, las leyes a queobedece, sus normas y carácter histórico.Ética normativa Investiga el problema del bien y del mal, establece el código moral de laconducta, señala que aspiraciones son dignas, que conducta es buena y cual esel sentido de la vida. En los últimos tiempos se ha incorporado una nueva modalidad denominadaMetaética, que investiga los enunciados éticos y su relación con la verdad.ÉTICA MÉDICA La ética médica es una manifestación de la ética general y se refiereespecíficamente, a los principios y normas que rigen la conducta de los profe-sionales y técnicos de la salud, así como de los trabajadores administrativos y deservicio que laboran en instituciones biomédicas. Cuando los actos del personal médico o paramédico dan lugar, de manerairreversible, a afectaciones somáticas, psíquicas o morales en el paciente, susfamiliares o a la comunidad, se incurre en violaciones de la BIOETICA, con 41
  42. 42. independencia de que la acción se haya producido de manera intencional oinconscientemente. El comportamiento bioético, está regulado básicamente pro 4 principios: lano maleficencia, la justicia, la beneficencia y la autonomía. En el primero seestablece, no causar daño al paciente de manera intencional, por negligencia uomisión. El principio de beneficencia preconiza que todas las acciones y esfuer-zos deben estar encaminados a beneficiar al enfermo. En cuanto al principio dejusticia, establece la equidad, es decir, todos los pacientes tienen las mismasoportunidades de beneficiarse por igual, de los recursos y atención que presta lainstitución y por último, la autonomía, donde se respeta la decisión del pacientede someterse a acciones médicas o experimentales que puedan afectar su inte-gridad físico, psíquica o moral. El carácter socialista del Sistema Nacional de salud de nuestro país, consti-tuye la base material sobre la que se sustenta la moral y la ética de los trabaja-dores de la salud, basados en los siguientes principios: a) La voluntad política del estado cubano de crear una infraestructura que ha permitido llevar los servicios médicos a todo el país, aún en las zonas más apartadas y recónditas. b) El carácter gratuito de la atención médica, tanto preventiva como curati- va en las instituciones de salud, con independencia del elevado costo que pueda tener para el Estado. c) La disposición los profesionales y técnicos de la salud de participar en misiones internacionalistas. Para brindar su colaboración en cualquier lugar del mundo. Es por ello que en el ejército de nuestra función social debemos observarprincipios éticos - morales de profundo contenido humano, ideológico y patrióti-co, tales como; dedicar todos nuestros esfuerzos y conocimientos científicos ytécnicos al mejoramiento de la salud del hombre; trabajar consecuentemente allídonde la sociedad lo requiera; estar siempre dispuesto a brindar la atenciónnecesaria, con el elevado espíritu internacionalista. Nuestra conducta en relación con el paciente y sus familiares, con el restode los trabajadores y estudiantes del sector y con la sociedad, debe estar basadaen la estricta observancia de los siguientes principios éticos:En relación con el paciente y sus familiares- Dedicar nuestros esfuerzos a la prevención, recuperación, rehabilitación y promoción de la salud humana.- Evitar que se produzcan daños a personas sanas o enfermas en los trabajos de investigación que realicemos. 42
  43. 43. - Respetar el decoro, el pudor y la dignidad de las personas bajo nuestra atención.- Propiciar una adecuada relación personal con el paciente que le inspire un buen estado de ánimo y seguridad.- Escuchar las preocupaciones y dificultades del paciente y sus familiares, darles la atención requerida y esforzarnos por viabilizar las soluciones posi- bles.- Utilizar en todo momento de nuestras relaciones con los pacientes y fami- liares, un lenguaje claro, sencillo y comprensible, sin alardes de tecnicismos y erradicando cualquier expresión de mal gusto.- Conservar el secreto profesional, teniendo en cuenta los intereses del pa- ciente siempre que ello no ocasione un perjuicio social ni ponga en peligro la salud de otras personas.- No divulgar aspectos de la enfermedad que puedan estar relacionados con la vida intima del paciente o sus familiares.- Mantener en los casos de enfermedades de curso fatal absoluta o relativa reserva sobre el diagnóstico y pronóstico en relación con el paciente.- Abstenerse de realizar trabajos investigativos con los pacientes sin su con- sentimiento.- Atender, de forma solícita, a toda persona que recabe nuestros servicios, sin mostrar prisa o indiferencia hacia sus padecimientos, ni hacer comenta- rios indiscretos en su presencia.- Evitar que lleguen a manos de los pacientes o de sus familiares las historias clínicas, informes de laboratorio o cualquier otro documento que pueda dar- le indebida o perjudicial información.- Exigir, de aquellos trabajadores que nos están subordinados, la conducta adecuada ante el paciente y sus familiares y en el mismo sentido actuar sobre aquellos que, aunque no estén subordinados, intervienen de una for- ma u otra en el trato con los pacientes.- Cuidar de no incurrir en el error técnico que resulta de una equivocación, aunque no exista mala fe, ni elementos de negligencia, despreocupación e ignorancia, evitando a toda costa que nuestro trabajo se afecte por el apresuramiento, la superficialidad o la rutina.- Los errores técnicos deben ser conocidos y analizados críticamente en re- uniones del departamento con la libertad y profundidad necesaria que per- mitan derivar de ellas la experiencia que impidan su repetición.- Los profesionales y técnicos de la salud deben poseer la honestidad nece- saria para reconocer sus errores y eliminarlos. 43
  44. 44. En relación con el resto de los trabajadores de la salud- Mantener, para con nosotros mismos y con los demás profesionales y técni- cos de la salud, una actitud crítica y autocrítica sobre los asuntos referidos a la relación con los pacientes, cuidar que las opiniones y criterios se basen en el mas profundo análisis científico posible.- Evitar indiscreciones que menoscaben el prestigio de otros compañeros o instituciones del sistema de salud.- Poner en conocimiento de las autoridades correspondientes cualquier viola- ción que nos conste, tanto de estos principios éticos como de los reglamentos establecidos en las Unidades de Salud Pública.En las relaciones entre el docente y los educandos- El docente debe promover en sus alumnos los principios éticos, a través de la palabra y su ejemplo.- Propiciará que las relaciones entre el y sus educandos se enmarquen en la debida autoridad y respeto que se requieren en la actividad docente.- Prestar especial atención a su superación individual, teórica y práctica, como aspecto esencial para el cumplimiento de sus responsabilidades docentes.- Inducir en los alumnos la disposición de recibir entrenamiento especializado en aquellas disciplinas que lo demanden, a fin de satisfacer las necesidades de nuestro pueblo y las tareas internacionalistas que se requieran.Como parte de la sociedad- Ejercer con altruismo las actividades propias de su esfera de trabajo, subor- dinando el interés personal al social.- Comportarse en todo momento con sencillez, modestia honestidad y dentro de las reglas de una elevada educación formal y política.- Estar siempre en disposición de cumplir las obligaciones que le correspondan como ciudadano, así como aquellas que, por razón del carácter excepcional de nuestro trabajo, exija el mayor esfuerzo, dedicación y sacrificio.- Actualizar y perfeccionar los conocimientos de forma continua, para lograr la optima calidad de los servicios que prestamos a la sociedad.- Procurar que la información que se ofrezca con propósitos de divulgación científica y educativa sea correcta y adecuada, absteniéndose de emitir con- ceptos u opiniones que pueden alarmar innecesariamente a la ciudadanía.- Mantener en todo momento un buen porte y aspecto personal, utilizando el vestuario adecuado en las diferentes áreas de trabajo. 44
  45. 45. LAS COMISIONES DE ÉTICA MÉDICA En todas las unidades del Sistema Nacional de Salud se crean las comisio-nes de Etica Medica, que de común acuerdo entre la administración y el sindi-cato, es elegida para un mandato de 2 años quedando integrado por 5 miembros,3 en activo y dos suplentes, que serán seleccionados entre los compañeros demás prestigio laboral científico, moral y político del centro. Esta comisión es la encargada de conocer toda denuncia o quejas sobreviolaciones de la ética, realizando las investigaciones pertinentes en el plazo de20 días. En el caso de arribar al criterio de que se incurrió en violación de laética, trasladará su criterio a la dirección y al sindicato, los que a partir de esemomento actuarán de acuerdo con la legislación laboral vigente.CUESTIONARIO 1. En su opinión ¿Qué cosa es la ética? 2. ¿Cuáles son los aspectos generales de la ética médica? 3. ¿Qué usted entiende por violaciones de la Bioética? 4. ¿Cúales son los principios que regulan el comportamiento bioético? 5. ¿Cúales son los principios éticos que regulan las relaciones entre el per- sonal de la Salud con los pacientes y familiares? 6. Refiérase a los principios éticos que se ponen de manifiesto en las rela- ciones con otros trabajadores del sector y con los estudiantes. 7. ¿Cómo se materializa el comportamiento ético cuando el profesional o técnico se siente parte de la sociedad. 8. ¿Qué son y cómo se crean las comisiones de ética médica? 9. ¿Cuál es la competencia y el desempeño de los integrantes de las comi- siones de ética médica en los centros de Salud? 45
  46. 46. CAPÍTULO 4EL AGUAINTRODUCCIÓN El agua es un líquido transparente, incoloro, inodoro e insípido. Se congela a00c, pasando al estado sólido y hierve a 1000c, pasando al estado de vapor deagua. Químicamente está compuesta por 2 átomos de hidrógeno unidos a un áto-mo de oxígeno, formando la molécula una configuración especial no lineal, sinoangular, por lo que se clasifica el enlace como polar, lo cual propicia que sobreel átomo de oxígeno exista una cierta densidad de cargas negativas y sobre elhidrógeno una densidad de cargas positivas, lo que determina sus propiedadesdisolventes.IMPORTANCIA El agua es indispensable para la vida, por constituir el elemento esencial detodos los tejidos y líquidos orgánicos, siendo considerada como el solvente uni-versal para la disolución de una gran cantidad de solutos y otros compuestos enestado líquido. En el laboratorio, el agua es el reactivo más empleado, desempe-ñando un protagonismo esencial en las reacciones químicas, debido a que alionizarse se une a muchos óxidos, formando ácidos y bases con otros compues-tos para formar hidratos.CALIDAD DEL AGUA El agua tal y como se encuentra en la naturaleza no es pura. Durante lasprecipitaciones, el agua de lluvia se une a diversos elementos gaseosos presen-tes en el aire, como el nitrógeno, dióxido de carbono, helio, metano, etc. Al caerse disemina o se filtra en el suelo, contaminándose con los diversos compuestosorgánicos e inorgánicos que estén presentes. Posteriormente en los afluentes,ríos, represas o acueductos donde va a parar, continua el proceso de contamina-ción, que variará, dependiendo de los compuestos presentes en cada lugar, loque unido al tratamiento con cloro a que es sometida en los acueductos para supotabilización, hacen que en conjunto pierda su pureza, pasando a ser un líquidoque contiene múltiples sustancias en disolución. 46
  47. 47. PURIFICACIÓN DEL AGUA Para las determinaciones de laboratorio, resulta indispensable que el aguasea lo más pura posible, ya que de lo contrario algunos componentes, provoca-rían efectos indeseables distorsionando la fiabilidad de los resultados. Por ejem-plo: el cloro libre, posee un gran poder de oxidación por lo que puede alterar lacomposición química de uno o varios compuestos del sustrato empleado. Por suparte el fluor y el cobre inactivan a las enzimas, mientras que las sales demercurio las activan. Para lograr la purificación del agua se emplean dos méto-dos: la destilación y la desionización.DESTILACIÓN La destilación consiste, en someter al agua a temperatura de ebullición en elinterior de un destilador metálico o de vidrio, diseñado para que los vapores quese desprendan en este proceso, pasen por un sistema de enfriamiento que loscondensan, haciendo que pasen nuevamente al estado líquido con una mejorcalidad, ya que los contaminantes al no tener la capacidad de evaporarse, que-dan retenidos en el destilador.Fig. 8 : Destilador de vidrio. 47
  48. 48. El agua destilada, obtenida por el procedimiento explicado no es totalmentepura, ya que el vapor de agua que se forma puede arrastrar mecánicamentepartículas de agua que no estén en estado de vapor. No obstante, el agua destiladapuede emplearse en el trabajo diario sin que introduzca errores apreciables. Si se quiere, para algunas determinaciones, una mayor calidad de pureza, elagua destilada, debe ser sometida nuevamente al proceso de destilación con loque se obtiene el agua bidestilada. Si se sometiera a una tercera esterilizaciónobtendríamos el agua tridestilada.DESIONIZACIÓN La desionización consiste en hacer pasar el agua corriente por una columnade resinas, las cuales captan los aniones y cationes que la contaminan, con locual adquiere un buen estado de pureza, incluso, mejor que la del agua bidestilada,aunque tiene la desventaja, que como el proceso no lleva implícito su esteriliza-ción, debe ser renovada diariamente. Para el trabajo del laboratorio de microbiología, el procedimiento común-mente empleado es la destilación.PH DEL AGUA DESTILADA El ph del agua destilada oscila entre 4 a 5, debido a la presencia de dióxidode carbono atmosférico disuelto. Si se desea neutralizar ese pH ácido para queno interfiera en algunos procederes, como por ejemplo en la preparación demedios de cultivo, que requieren generalmente, un pH neutro o ligeramentealcalino, el agua destilada debe ser sometida a un proceso de descarboxilación,lo cual se realiza de la siguiente manera: 1. Se vierte el agua en un erlenmeyer y se somete a temperatura de ebulli- ción por espacio de 3 a 5 minutos. 2. Antes de apagar la fuente de calor, tapar el erlenmeyer con un tapón perforado de caucho, provisto de un tubo trampa con perlas de hidróxido de sodio. 3. Después que el agua se ha enfriado, se verterá en recipientes apropiados, donde se conservará hasta su empleo.CONDUCTIVIDAD DEL AGUA Mediante la conductividad eléctrica se puede determinar el grado de purezadel agua, como se ilustra en la siguiente tabla: 48
  49. 49. Cuadro 2 : Grado de pureza de los distintos tipos de agua en correspon-dencia con su conductividad. TIPO DE AGUA CONDUCTIVIDAD ( ohms -1 cm -1 ) Corriente 300 Destilada 5 Bidestilada 1 Desionizada 0,2CUESTIONARIO 1. ¿Cuál Es la importancia del agua para los laboratorios? 2. ¿Cómo es la calidad del agua, tal como se encuentra en la naturaleza? 3. ¿Explique por qué causa el agua empleada en el laboratorio debe ser lo más pura posible? 4. ¿Cómo se denomina el método más empleado en los laboratorios para purificar el agua? 5. ¿En que consiste la destilación? 6. ¿Cuál es la diferencia entre el agua destilada y la bidestilada? 7. ¿Por qué se hace necesario bidestilar o tridestilar el agua? 8. Explique el proceso de desionización del agua. 9. ¿Cuál es la ventaja y la desventaja de la desionización sobre la esteriliza- ción del agua?10. ¿Cuál es el pH del agua destilada?11. ¿Mediante que procedimiento se puede determinar el grado de pureza del agua? 49
  50. 50. CAPÍTULO 5CRISTALERÍA DE LABORATORIOINTRODUCCIÓN Se denomina cristalería de laboratorio, al conjunto de objetos utilizados en larealización de diferentes procedimientos técnicos, que independientemente desu forma y tamaño están constituidos solamente por vidrio.COMPONENTES DEL VIDRIO El vidrio se fabrica mediante la fusión de arena sílice con sales de sosa opotasa a una temperatura de 1, 0000c. El producto fundido, en ese estado líqui-do, se vierte en diversos moldes de acuerdo a los objetos que se requieranproducir, debido a la propiedad de no cristalizarse cuando se enfría. Quedandocomo un cuerpo sólido, generalmente transparente. De esta manera se obtieneel cristal empleado para cubrir puertas o ventanas, así como para la fabricaciónde vasos, copas y otros objetos. Como se sabe, este tipo de cristal es muy vulnerable a los impactos mecá-nicos, exposiciones a elevadas temperaturas,. Etc., lo que no resulta apropiadopara la fabricación de la cristalería de laboratorio la cual requiere del empleo deotros componentes como el borosilicato de sodio y el aluminio, cuya aleación leconfiere una alta resistencia mecánica, térmica y química. La cristalería fabri-cada con estos componentes, se identifica por estar rotulada con el nombre de"Pyrex" (Pairex).SUSTITUTOS MODERNOS DEL VIDRIO En la actualidad, los diversos objetos de vidrio que integran la cristalería delaboratorio, también se fabrican de material plástico, especialmente con teflón(tetrafluoruroetileno) un polímero de bajo costo, caracterizado por su dureza, loque le confiere una alta resistencia contra impactos, además tiene la propiedadde permanecer inerte durante las reacciones químicas, lo que lo valida como unsustituto eficaz del vidrio, con la ventaja de que dado su bajo costo, algunosobjetos, como por ejemplo: las jeringuillas utilizadas, pueden ser desechadas singrandes afectaciones económicas para la institución. 50
  51. 51. CLASIFICACION La cristalería de laboratorio de clasifica de la siguiente manera:Cuadro 3: Clasificación de la cristalería de laboratorio.CLASIFICACION SUB-CLASIFI CARACTERIZACIÓN DIFERENTES TIPOS CACIÓN - Alta resistencia química Todos los frascos o reciopientes DE ALMACE destinados a contener o almace- NAJE - Cierre hermético. nar, productos químicos - Fotorresistencia (materias primas) o soluciones G y reactivos elaborados E ________________________________________________________ N - Utilización para la Frascos erlenmeyer E realización de diver- Frascos Kitasatos R sos procedimientos Frascos para reactivos A técnicos. Frascos de fondo plano L DE - La mayoría se fabri- Frascos goteros TRABAJO can de diferentes Vaso de Koplin tamaños y capaci- Tubos de ensayo dades. Vidrio reloj Placas de Petry Embudos Condensadores Láminas de portaobjetos Láminas cubre objetos Láminas excavadas TC (Para contener) - No revelan magni- Pipetas de : Shali, tudes volumétricas.Thoma o Westergreen DE (No utilizadas en el laboratorio de microbiología)MEDICION _______________________________________________________VOLUMETRICA TD (Para dis- - Expresan magnitu- Pipeta tribuir) des volumétricas. Probetas - Pueden tener o no Beaker (Vaso de precipitado) rotulada una escala Matraces de graduación Copa cónica - Se fabrican de dife- Buretas rentes tamaños. Jeringuillas - Están calibradas para trabajar a 200c. 51
  52. 52. CARACTERIZACIÓN DE LOS DIFERENTES TIPOSDE CRISTALERÍACRISTALERÍA GENERAL DE TRABAJOErlenmeyerFig.. 9 : Erelenmeyer Los erlenmeyer son recipientes de forma cónica y fondo plano, que secaracteriza por tener un diámetro 3 ó 5 veces mayor en su porción inferior conrespecto a su porción superior. Si lo colocamos sobre la mesa de trabajo y lo observamos de arriba haciaabajo podemos percatarnos que en el extremo superior presenta una aberturacircular con rebordes, que corresponde a la boca, seguida de una porción cilín-drica de algunos cm a manera de cuello. Al concluir este espacio se va ensan-chando progresivamente de forma oblicua adquiriendo la forma cónica que locaracteriza. Aunque los erlenmeyer pueden emplearse para la preparación de diferen-tes reactivos, esta cristalería está diseñada específicamente para la preparaciónde compuestos que requieran ser sometidos a la acción del calor, como porejemplo, la preparación de medios de cultivo, debido a que su forma cónica,hace que los vapores se condensen en el cuello, lo que propicia que no afectesignificativamente el volumen de la preparación. Los erlenmeyer se fabrican de diferentes tamaños. Los más empleadosen el laboratorio de microbiología son los de: 100, 250, 300,500 y 1 000 ml.Los de menor o mayor volumen de capacidad se utilizan con menor fre-cuencia. 52
  53. 53. KitasatosFig.10 : Frasco de kitasato Los frascos de Kitasatos, son similares a los erlenmeyer con la diferenciade que en el cuello tiene insertado un pequeño tubo corto en dirección horizon-tal abierto en su porción distal siendo las paredes de vidrio más gruesas, parasoportar las diferencias de presiones externas e internas provocadas por lastécnicas de filtración al vacío para los que básicamente son empleados. Al igualque los erlenmeyer se fabrican de diferentes tamaños.Frascos para reactivosFig.11 : Frasco para reactivos. Los frascos para reactivos son de diferentes tipos y pueden contener deacuerdo a su tamaño entre 25 ml y 1 litro. La tapa del frasco puede ser de cristalesmerilado o plástica si el cierre es de rosca, lo que dependerá del tipo dereactivo que contenga. Con ambas variantes se consigue el cierre hermético delfrasco. Esta cristalería puede ser incolora o ámbar para la protección de reactivosfotosensibles. 53
  54. 54. Frascos de fondo planoFig.12 : Frasco de fondo plano Se utilizan para la preparación de determinadas disoluciones, fabricándosede diferentes tamaños, debiendo ser termorresistentes por si se requiere some-terlos a la acción del calor. En el trabajo microbiológico se utilizan regularmentepara la preparación del antígeno de cardiolipina, utilizado en las pruebasserológicas VDRL.Frascos goterosFig.13 : Frascos goteros Existen en el mercado diferentes modelos. Los de vidrio, tradicionalmenteempleado son incoloros o ámbar. De acuerdo con su capacidad, pueden conte-ner entre 25 y 100 ml. Estos frascos poseen una tapa de vidrio esmeriladoprovista de una ranura perpendicular, que cuando se rota la tapa y se hacecoincidir con la ranura en el cuello del frasco, el contenido goteará si se inclinael frasco adecuadamente. Otros modelos consisten en frascos provistos de un gotero con tapón decaucho, similar a los empleados en los frascos de medicamentos, en tanto queotro están diseñados para que comiencen a gotear si el frasco es invertido. 54
  55. 55. Vaso de KoplinFig.14: Vaso de Koplin Estos vasos se caracterizan por ser cuadrados con paredes rectangula-res. Algunos están diseñados para ser utilizados en posición vertical y otros deforma horizontal, pero todos tienen, en dos de sus paredes inferiores que quedanfrente a frente, 4 ó más salientes de vidrio de 1mm de grosor alineados a todo lolargo con una separación de 2 mm entre sí, lo que posibilita la insertación devarias láminas portaobjetos, de manera que quedan separados. Estos vasos están provistos de tapas de vidrio y se utilizan para fijar prepa-raciones sobre láminas portaobjetos y/o colorearlas.Tubos de ensayoFig.15: Tubos de ensayo Son pequeños recipientes de vidrio o plástico, fabricados de diferentes ta-maños, con capacidad variable. Todos son cilíndricos, aunque la forma de susextremos varía en función de su empleo. Los utilizados comúnmente en análisiscualitativos y cuantitativos tiene el fondo ligeramente cóncavos, en tanto que lostubos para cultivo son similares, pero se diferencian en que están provistos ensu extremo superior de aristas helicoidales por donde se enrosca una tapa debaquelita, resina sintética obtenida por polimerización del fenol y el formaldehído, 55
  56. 56. generalmente con estrías longitudinales para facilitar su sujeción cuando se vana desenroscar, mientras que los tubos de centrífuga se caracterizan por tener elfondo cónico, para acoplarse a los portatubos de la centrífuga, pudiendo tenerimpresa una escala de graduación en ml. Los tubos ordinarios y los empleados para cultivo, mayormente utilizados enlos laboratorios de microbiología, son los de 12 x 75, 13 x 100, 15 x 125 y16 x 150 mm, correspondiendo el primer valor al diámetro y el segundo a lalongitud. Se utiliza esencialmente para contener, conservar y procesar muestras bio-lógicas, cultivar microorganismos y realizar pruebas de identificación para eldiagnóstico de laboratorio, de las especies investigadas.Vidrio relojFig.16: Vidrio reloj Es un tipo de cristalería circular y cóncava de aspecto transparentes, simi-lar a las utilizadas para cubrir las esferas de algunos relojes despertadores. Se utilizan regularmente para efectuar pesadas de productos sólidos conexcepción de aquellos que sean higroscópicos que absorben la humedad del aireo volátiles.Placas de "Petry"Fig.17: Placas de "Petry" 56
  57. 57. Están constituidas por una caja circular de vidrio de 11 ó más cm de diáme-tro con el fondo plano pudiendo o no estar tabicado con un borde de 1 cm dealtura en todo su perímetro. La placa se completa con una tapa igualmente devidrio con un diseño similar al de la caja, pero, ligeramente superior en diámetro.Cuando las dos partes se ensamblan, la superficie interior de la tapa quedadescansando sobre el borde de la caja. En el trabajo microbiológico se utiliza comúnmente para contener algúnmedio de cultivo sólido.EmbudosFig.18 : Embudos Los embudos presentan la porción superior cónica y la posterior en formade un tubo cilíndrico y delgado cortado oblicuamente en su extremo terminal,pudiendo tener una longitud, menor , igual o mayor que la porción cónica, cuyacapacidad oscila entre 30 ml y 5 litros, teniendo las paredes internas, según elmodelo, estriadas o lisas. Se emplean para traspasar líquidos.Láminas portaobjetosFig.19 : Lámina potaobjetos 57
  58. 58. Las láminas portaobjetos son planas, delgadas y lisas, de aspecto transpa-rente y forma rectangular. Miden 7,5 cm de largo por 2,5 cm de ancho. Se utilizan esencialmente para colocar sobre su superficie pequeñas frac-ciones o volúmenes de muestras, que serán sometidas o no a un proceso decoloración, con la finalidad de ser observadas a través del microscopio. Estetipo de lámina se emplea igualmente como soporte para realización de pruebasserológicas de aglutinación.Láminas excavadasFig.20 : Lámina portaobjetos excavada Son similares a las láminas portaobjetos ordinarias, con la diferencia de quepresentan una excavación cóncava de algo más de 1 cm de diámetro en centrode la lámina en forma de pozuelo. Se utilizan para la preparación de la "gota colgante", una técnica mediantela cual se determina microscópicamente si la bacteria en estudio es o nomóvil.Láminas cubre objetosFig. 21: Láminas cubreobjetos 58
  59. 59. Son laminillas muy delgadas, transparentes e incoloras. La forma varía decuadradas a rectangular; cuando son cuadradas miden 22 x 22 mm y cuandoson rectangulares 22 x 50 mm. Son empleadas para cubrir las muestras o preparaciones que han sido coloca-das previamente sobre las láminas portaobjetos para ser observadas al microscopio.Cristalería de mediciónPipetasFig. 22: Pipetas Son tubos de vidrio rectos, de longitud y grosor variable que se caracterizanpor tener el extremo inferior ligeramente cónico. Se fabrican diferentes tipos, que han sido diseñados para diversos procede-res de laboratorio, siendo utilizada básicamente para medir y/o transferir volú-menes exactos de líquidos. Las más utilizadas en los laboratorios de microbiología, son las pipetas gra-duadas, principalmente las de 1, 2, 5, y 10 ml. Este tipo de pipeta tiene impresoen la parte superior un número que equivale a su capacidad volumétrica y a todolo largo una escala graduada en ml, que indica numéricamente los espacios enque se divide el volumen total. Cada espacio a su vez se divide en 10 líneasequidistantes que corresponden a las subdivisiones volumétricas. Por ejemplo:En una pipeta de 5 ml de capacidad, la escala queda dividida en 5 espaciosiguales, cada uno de los cuales equivale a 1 ml. Cada especio a su vez sesubdivide en 10 líneas, equivalente cada una de ellas a 0,1 ml. Las pipetas serológicas, son similares a las graduadas, pero su capacidad esde 1 ml o menos, estando dividida en 0,1 y/o 0,01 ml. En el trabajo microbiológico se utiliza en ocasiones un tipo de pipeta nograduada, denominada pipeta de Pasteur, que puede ser fabricada en el propio 59
  60. 60. laboratorio con tubos de cristal fusible mediante su exposición a la llama delmechero de gas. Este tipo de pipeta suele emplearse cuando no se requiere precisar conexactitud el volumen a pipetear. Procedimientos para el manejo de las pipetas graduadas: 1. Sostenga la pipeta por su parte superior mediante los dedos pulgar y medio.Fig. 23 : Forma correcta de sostener la pipeta. 2. Haga penetrar la pipeta en el líquido que va a ser aspirado. 3. Introduzca el otro extremo en la boca y aspire suavemente, observando simultáneamente la escala graduada, hasta que la columna de líquido so- brepase ligeramente la marca deseada. 4. Retire la pipeta de la boca y de inmediato tape el orificio con la yema dedo índice, ejerciendo la presión suficiente para evitar que el líquido descien- da por gravedad. 5. Manteniendo la presión del dedo índice, proceda a retirar el exceso de líquido de la parte exterior de la pipeta, con un paño, gasa o servilleta limpia. 6. Introduzca la pipeta en el frasco o tubo donde se extrajo el líquido y haga que la punta contacte con la pared interna. Estando la pipeta en posición perpendicular ir aflojando la presión del dedo índice para propiciar que la columna de líquido descienda del por gravedad, hasta observar que la 60
  61. 61. curvatura en la superficie del líquido (menisco) contacte justamente so- bre la línea correspondiente que marca el volumen deseado. En ese mo- mento exacto, proceda nuevamente a ejercer presión con el dedo índice para evitar que el líquido continúe descendiendo. Al realizar la lectura volumétrica, evitar incurrir en el error de paralaje, ocasionado por no estar el ojo del observador en el mismo plano horizontal con respecto al menisco, que ocasionaría errores en la lectura.Fig. 24: Ubicación correcta del ojo para efectuar la lectura del menisco 7. Introduzca la punta de la pipeta en el frasco o tubo receptor, apoyando la punta, en la parte superior de la pared interna y nunca sobre el fondo, pues al retirar la pipeta parte del líquido trasegado quedarán adherido al exterior de la pipeta, siendo arrastrado al retirarla, afectando la exactitud del volumen pipeteado. 8. Proceda a aflojar la presión del dedo para distribuir el volumen deseado en cada tubo. 9. Al vaciarse el contenido de la pipeta, en el extremo de la punta quedará un pequeño volumen residual. Si la pipeta utilizada, tiene una banda esmerilada o coloreada en el extremo superior proceda a soplar para que salga y completar el volumen previsto. Si la pipeta carece de franja esmerilada o coloreada no se debe soplar ya que están diseñadas para desestimar ese residuo sin que se afecte el volumen deseado. En el caso de las pipetas serológicas, se soplarán las que estén marcadas en la parte superior con la letra "D" (to de livery) no debiendo soplarse las marcadas con la letra "C" (to contain). 61

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