Poliphenols detection in wines

Slide 3: Partea Teoretică CuvinteCheie

Slide 7: Obiectiv

Slide 8: Aparatură şi materiale

Slide 9: Tirozinază, din ciuperci, EC.1.14.18.1, 2085 u/mg, pudră liofilizată (Ty) Catechol Glutaraldehidă (GA) Albumină din ser bovin (BSA) Nafion NaH2PO4 si Na2HPO4 Fenol KCl ”Reactivul“ Bucuresti K3[Fe(CN6)] Apă distilată

Slide 10: BSA GA Nafion Ty

Slide 11: Rezultate şi discuţii

Slide 12: Voltamograma ciclica a catecolului pe electrod de grafit Condiţii experimentale: tampon fosfat 0.1 M, pH 6.74; potenţial de start -0.8 V, viteza de baleiaj, 50 mV/s.

Slide 13: Voltamograma ciclică a fenolului pe Voltamograma ciclică a catecolului bioelectrod G/Ty-BSA-Nafion pe bioelectrod G/Ty-BSA-Nafion Condiţii experimentale: tampon fosfat Condiţii experimentale: tampon 0.1 M, pH 6.74; potenţial de start fosfat 0.1 M, pH 6.74; potenţial de

Slide 14: Voltamograma ciclica a 0.1 mM K3[Fe(CN)6] pe bioelectrod G/Ty-BSA-Nafion Condiţii experimentale: potenţial de start -0.1 V.

Slide 15: Panta dependenţei log I vs. log v anodic catodic 0.4  0.008 0.43  0.004 R/n 0.9965 / 7 0.9982 / 7 Ip = 2.69*10-5 n3/2 A D01/2 v1/2 Co* 150 I anodic 100 I catodic 1E-4 Ia / A 50 0 log I -50 Ic / A -100 -150 10 100 0 2 4 6 8 10 12 14 16 log v v 1/2 / (mV/s) 1/2 Dependenţa log I vs. log v (A) si I vs. v1/2 (B).

Slide 16: 150 ciclul 1 100 ciclul 3 ciclul 5 ciclul 10 ciclul 15 50 ciclul 20 Stabilitatea bioelectrodului G/Ty-BSA-Nafion A 0 I/ Condiţii experimentale: 0.1 -50 mM K3[Fe(CN)6] + 0.1 M KCl, potential de start -0.1 V, 50 -100 mV/s. -150 -0.2 -0.1 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 E / V vs. Ag/AgCl, KClsat

Slide 17: Parametrii analitici ai biosenzorului G/Ty-BSA-GA-Nafion

Slide 18: ne- Chinona H20 Ty O2 Catecol Ty O2 Fenol ne- o-Chinona H20 Ty O2 Catecol

Slide 19: I = (3.2e-6+- 2.30e-8[catechol]/M)/ 3.5 6e-5+-1.4e-6 +[catechol]/M 2 R =0.9979, n = 25 3.0 2.5 1.5 2.0 I/A 1.0 1.5 I / A 0.5 1.0 I/ A = 1.2 67 +/1.93e-8 + 0.0 33+- 8.78e-4 [catechol]/ M R = 0.9962, n = 13 0.0 0.5 0.00 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 [catechol]/ mM 0.0 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 [catechol] / mM Înregistrările I vs. timp pentru Curba de calibrare a bioelectrodului G/Ty- bioelectrodul G/Ty-BSA-GA-Nafion BSA-GA-Nafion Condiţii experimentale: potenţial Condiţii experimentale: potenţial aplicat, aplicat, 0.05 V vs. Ag/AgCl, KClsat, 0.05 V vs. Ag/AgCl, KClsat, tampon fosfat tampon fosfat 0.1 M, pH 6.74; agitare 0.1 M, pH 6.74; agitare continuă continuă controlată de EDR, ω = 1500 controlată de EDR, ω = 1500 rpm.

Slide 23: A B C Linearizarea Lineweaver-Burk (A), Eadie- Hofstee (B) si Hanes-Woolf (C) pentru bioelectrodul G/Ty-BSA-GA-Nafion. Condiţii experimentale: potenţial aplicat, 0.05 V vs. Ag/AgCl, KClsat, tampon fosfat 0.1 M, pH 6.74; agitare continuă controlată de EDR, ω = 1500 rpm.

Slide 24: Valorile paramterilor cinetici pentru biosenzorul G/Ty-BSA-GA-Nafion KM / M Imax / A S / A/M R/n 5.75 e-5 ± 1.394 e-6 3.2 e-6 ± 2.3 e-8 0.0556 0.9989 / 25 Fitare Origin Linearizare 4.69 e-5 3.17 e-6 0.0676 0.9978 / 22 Lineweaver-Burk Linearizare 4.79 e-5 3.12 e-6 0.0651 0.9835 / 25 Eadie-Hofstee Linearizare 3.93 e-5 3.11 e-6 0.0791 0.9994/ 22 Hanes-Woolf

Slide 25: Concluzii

Slide 26: Imobilizarea enzimei s-a realizat cu ajutorul unui Peakurile de oxidareGA amestec de BSA si caracteristice catecolului si fenolului sunt deplasate spre Curbele de mai pozitive valori calibrare a bioelectrodului G/Ty-BSA-GA-Nafion au permis determinarea următorilor parametrii analitici: timpul de răspuns < 30 s, domeniul de linearitate 0 - 0.04 mM catechol si sensibilitatea 0.0333 A/mM Reprezentările grafice liniare ale I vs. v1/2 sugerează un comportament difuziv al speciei la electrod, deci o bună permeabilitate a filmului.

Slide 27: -Imobilizarea enzimei s-a realizat cu ajutorul unui amestec de BSA si GA -Peakurile de oxidare caracteristice catecolului si fenolului sunt deplasate spre valori mai pozitive -Curbele de calibrare a bioelectrodului G/Ty-BSA-GA-Nafion au permis determinarea următorilor parametrii analitici: timpul de răspuns < 30 s, domeniul de linearitate 0 - 0.04 mM catechol si sensibilitatea 0.0333 A/mM -Reprezentările grafice liniare ale I vs. v1/2 sugerează un comportament difuziv al speciei la electrod, deci o bună permeabilitate a filmului.

Slide 28: Vă mulţumesc pentru atenţie!

Slide 29: Q&A

Slide 32: Q&A