fMOST
Upcoming SlideShare
Loading in...5
×

Like this? Share it with your network

Share
  • Full Name Full Name Comment goes here.
    Are you sure you want to
    Your message goes here
    Be the first to comment
    Be the first to like this
No Downloads

Views

Total Views
655
On Slideshare
172
From Embeds
483
Number of Embeds
2

Actions

Shares
Downloads
0
Comments
0
Likes
0

Embeds 483

http://l.lj-toys.com 482
https://twitter.com 1

Report content

Flagged as inappropriate Flag as inappropriate
Flag as inappropriate

Select your reason for flagging this presentation as inappropriate.

Cancel
    No notes for slide

Transcript

  • 1. fMOST — fluorescence Mirco-Optical Sectioning Tomography фМОСТ — флуоресцентная Микро-Оптическая Секционная Томография Получение полной структуры мозга мыши с одномикронным разрешением и трассировка аксонов по всему мозгу.
  • 2. Micro-Optical Sectioning Tomography to Obtain a High-Resolution Atlas of the Mouse Brain Anan Li, Hui Gong, Bin Zhang, Qingdi Wang, Cheng Yan Development of a Plastic Embedding Method for Large-Volume and Fluorescent-ProteinExpressing Tissues Zhongqin Yang, Bihe Hu, Yuhui Zhang, Qingming Luo, Hui Gong Continuously tracing brain-wide long-distance axonal projections in mice at a one-micron voxel resolution Hui Gong, Shaoqun Zeng, Cheng Yan, Xiaohua Lv, Zhongqin Yang
  • 3. MOST — разработка метода
  • 4. Пробоподготовка ● Крашение по Гольжи-Коксу: K2Cr2O7 ● К2CrO4 ● ● ● HgCl2 180 дней
  • 5. Пробоподготовка ● ● ● Дегитратация Градиент ацетона и спирта Фиксация в полимере ● ERL-4221, DER763, NSA, DMAE
  • 6. Процессинг изображений ● Удаление периодического шума ● Нормализация интенсивности ● Калибровка
  • 7. Статистика ● 36 млн. изображений (1390 x 1500 px x 8 bit) ● 15400 срезов ● 8 терабайт сырых данных ● 240 часов работы ● 3,6 мм3/час — скорость работы ● ● После реконструкции структуры: 1 x 0,33 x 0,33 мкм — размер вокселя
  • 8. fMOST — модификация MOST ● ● ● ● Отказ от длительного прокрашивания всего мозга ● Отказ от серийного крашения срезов Выбор селективного флуоресцентного мечения нейронов Выбор трансгенных мышей, селективно экспрессирующих XFP ● Отсутствие методик фиксации флуоресцентных образцов большого объѐма Падение интенсивности флуоресценции при фиксации Объект — мыши с eYFP-H под контролем промотора Thy1.
  • 9. Выбранные полимеры GMA — 2-гидроксиметил-метакрилат ● LR white — полигидрокибисфенол-Адиметакрилат ● HPMA — гидроксипропил-метакрилат ● Unicryl — метилметакрилат + стирен Отрабатываемые параметры ● Падение интенсивности флуоресценции ● Время пропитки целого мозга ●
  • 10. Оптимизация ● Падение флуоресценции ● Полнота пропитки 25 200% 20 150% 15 100% 10 Дни 250% 50% 5 0% 0 HPMA GMA Unicryl LR White HPMA GMA GMA Unicryl LR White
  • 11. Оптимизация GMA ● ● Понижение температуры полимеризации с 60º до 55º Коррекция pH 0,1% V этаноламина. ● Удаление ингибитора 4метоксифенола (тушитель)
  • 12. fMOST – применение метода Объекты: Параметры и статистика:  Мозг взрослой мыши Thy1-GFP-M o Ширина среза для GFP и 14 дн. YFP 300 мкм  Мозг взрослой мыши Thy1-eYFP-H o Воксель 0,5x0,5x2 мкм  Мозг мыши 14 дн. Thy1-eYFP-H o Ширина для взрослой YFP 150 мкм o Воксель 1x0,8x2 мкм
  • 13. Трассировка аксонов Пересчѐт существующей аннотаций мозга:  FPMA взросл.  MRI 14 дн.  MRI взросл.  fMOST 14 дн.