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  • 1. METODO DE CUENTA TOTAL DE MOHOS Y LEVADURAS Montes Díaz Elizabeth Morales Salgado Isaac Andres Duran Alvarado María Eugenia Villada García Liliana
  • 2. 10 g. de muestra + 90 ml. de Solución salina isotónica al 0.09 % 10 -1 Los tubos contienen 9 ml. de solución salina isotónica al 0.09 % 10 -2 10 -3 10 -4 Para la realización de disoluciones se trasladara 1 ml. de dilución a dilución. 10 -5 * A partir de este punto sembrar 0.1 ml. Dilucion en placas que contienen Agar papa dextrosa.
  • 3. Preparación de soluciones 0.1 ml 10 ml o 10 g de muestra 1ml 10-1 90 ml SSI 0.1 ml 10-2 1 ml 0.1 ml Incubar 25 C 2-5 días 10-3 Contar el numero de colonias y multiplicarlo por el inverso de la dilución (ufc/gr muestra) 1 ml 10-4 0.1 ml 1 ml 0.1 ml 10 -5
  • 4. Solución salina isotónica. Efecto conservante Agar papa dextrosa Los hidratos de carbono y la infusión de papa favorecen el crecimiento de levaduras y hongos en tanto que por el bajo rango de pH , la flora acompañante se reduce significativamente. Las características morfológicas típicas de los hongos se desarrollan muy bien en este medio de cultivo. • • • • Composición por Litro: Agar -15g Dextrosa - 20g Infusión papa - 4g
  • 5. MOHOS → El termino moho se suele aplicar para designar a ciertos hongos filamentosos multicelulares. → Crecen en la superficie de los alimentos. → Tienen un típico aspecto aterciopelado algodonoso, a veces pigmentado. → Intervienen en la alteración de muchos tipos de alimentos. → Son útiles en la elaboración de ciertos alimentos → La parte principal de su crecimiento suele tener un aspecto blanco, aunque puede tener colores distintos, color oscuro o color humo.
  • 6. Caracteres de los cultivos  Algunos mohos tienen una textura laxa y un aspecto lanoso , mientas que otros son compactos.  Algunos tienen aspecto aterciopelado en su superficie libre, el aspecto de otros es seco y pulverulento, y el de otros es húmedo o gelatinoso.
  • 7.  El aspecto del reverso de un moho que crece en una placa de agar puede ser muy llamativo, por ejemplo: El color negro azulado opalescente o el color negro verdoso de la cara inferior de Cladosporium.
  • 8. Moho
  • 9. LEVADURAS → Aquellos hongos que generalmente no son filamentosos, sino unicelulares y de forma ovoide o esferoide, y que se reproducen por gemación o por fisión. → Se encuentran en los alimentos y estas pueden ser beneficiosas o perjudiciales. Beneficiosas: elaboración de alimentos Perjudiciales: producen alteraciones → Se caracterizan principalmente en base a sus caracteres morfológicos, aunque para el microbiólogo de alimentos, sus propiedades fisiológicas tienen mayor importancia
  • 10. Caracteres de los cultivos  Crecimiento en forma de velo en la superficie de los medios líquidos indica que se trata de una levadura oxidativa o formadora de velo.  La producción de un pigmento carotenoide confirma que la levadura que ha crecido pertenece al genero Rhodoturola.  El aspecto de crecimiento de los microorganismos tiene importancia cuando estos producen un moteado pigmentado en la superficie de los alimentos
  • 11. La mayoría de las colonias jóvenes de levaduras son húmedas y algo mucosas, aunque es posible que tengan aspecto harinoso. Algunas colonias tienen un color crema o rosado. Las levaduras son oxidativas, fermentativas o bien su actividad metabólica es a la vez de ambos tipos.
  • 12.  En la superficie de un liquido, las levaduras oxidativas pueden ser en forma de película, de velo, o espuma y por ello se denominan levadura formadoras de películas.  El aspecto de crecimiento de los microorganismos tiene importancia cuando estos producen un moteado pigmentado en la superficie de los alimentos  Las levaduras fermentativas suelen crecer en toda la masa del liquido y producen dióxido de carbono.
  • 13. Observación de características de mohos Cortar con un bisturí alrededor de cada colonia Colocar los fragmentos de agar separados en el porta objetos Observar el micelio aéreo en microscopio de disección Transferir parte del micelio a otro porta objetos y observar las estructuras en un microscopio óptico. Comparar con bibliografía.
  • 14. IMÁGENES DE ALGUNOS TIPOS DE MOHOS
  • 15. Observación de características de levaduras Extensión de la muestra sobre el portaobjetos . Secado de la preparación FROTIS Extensión de la muestra con el fin de separa los m.o. SIMPLE Fijado o adhesión de las células al portaobjetos Un solo colorante TINCION DIFERENCIAL Frotis se cubre con el colorante Deja actuar (1 – 5 min.) Se lava con agua y se seca Mas de un colorante Forma y tipo de agrupación de m.o. Observan estructuras celulares como endosporas
  • 16. ¿Por qué azul de metileno para la tinción? Tiñe todas las células bacterianas rápidamente.  No produce un color intenso que oscurezca los detalles celulares. Útil para detectar la presencia de bacterias en muestras naturales puesto que la mayor parte del material celular no se tiñe.
  • 17. Seleccionar colonias grandes, ovaladas aisladas o apiculares. Adicionado con Dextrosa Sembrar en medio Wickerham con campana de Durham Adicionado con Rafinosa
  • 18. Seleccionar colonias pequeñas, ovaladas agrupadas en micelio ramificado de levaduras apiculares. Sembrar en Caldo de extracto de malta
  • 19. Medio YM agar (MALT WICKERHAM) Composición : Agar agar bacteriológico 15 g Extracto de levadura 3 g Extracto de malta 3 g Peptona 5 g Glucosa 10 g Agua c.s p 1000 ml
  • 20. Extracto de levadura. Medio nutritivo empleado para el recuento de microorganismos en aguas. Extracto de malta Medio para la detección, aislamiento y enumeración de levaduras y mohos Peptona Nutre a los M.O para que se multipliquen a gran velocidad. Se utiliza para estudios de fermentación.
  • 21. OBSERVACIONES Tubos con: Dextrosa y Rafinosa turbidez y producción de CO2 Fermentación alcohólica Extracto de malta Posible formación de película superficial de micelio Desarrollo de levaduras aerobias formadoras de micelio
  • 22. Realizan diluciones, se siembra e incuba Se cuentan colonias y se seleccionan en: Frotis y Tinción Hongos Levaduras Separan del agar y se observan al microscopio: De bisección y óptico Siembra Caldo de extracto de malta Medio Weckerham dextrosa Formación de película superficial en el medio rafinosa Desarrollo de levaduras aerobias, formadoras de micelio Turbidez Producción de CO2 Fermentación alcohólica