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CoulométricoO elemento flui através de um eletrodo de grafite poroso onde praticamente100%das espécies eletroativas são ox...
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Detectores Cromatográficos

  1. 1. Detector Espectrofotometrico UV-VisívelNos detectores espectrofotométricos o seu funcionamento baseia-se na absorbânciade luz por parte da amostra ao passar através dela qualquer radiaçãoeletromagnética; normalmente isto ocorre no ultravioleta até o infravermelho, emum dado comprimento de onda.Trabalhando-se com detectores espectrofotométricos (UV-VIS), deve-se conhecer asregiões de absorção da fase móvel utilizada. Uma indicação melhor é obtida pela análisedo espectro do solvente; em caso de presença de impurezas, as regiões em que o mesmoabsorve podem ser alteradas.É um detector seletivo, pois só detecta os compostos que absorvem no comprimentode ondaem que o detector for ajustado.É o detector mais utilizado em HPLC, poisgrande maioria das substâncias absorvem radiaçãoUV.Tipos de detectores UV-VIS:Existem dois tipos de detectores de luz ultravioleta: o de comprimento de ondavariável (espectrofotômetros), que não só é de aplicação mais variada e sensível,mas também é mais caro, e o chamado fotométrico que funciona com um ou doiscomprimentos de onda fixos.Espectrofotométricos:a. O comprimento de onda é variável entre 190nm e 800nm selecionado através domonocromador (UV = lâmpada de deutério e VIS = lâmpada de tungstênio).b. Possui maior aplicação, pois permite selecionar o comprimento de onda maisadequado para os componentes a serem analisados.c. Maior sensibilidade: escolha do comprimento de onda de maior absorbância.d. Maior seletividade: escolha do comprimento de onda onde o soluto de interesseabsorve e outros não.e. Permite a utilização de análise por gradiente: escolha do comprimento de onda ondeos constituintes da fase móvel não apresentam variação de absorbância.f. Permite obter o espectro de absorbância de cada componenteseparadointerrompendo o fluxo da fase móvel e assim selecionar o melhorcomprimento de onda.
  2. 2. g. Promove eficiência em eluição por gradiente através da habilidade de selecionar umcomprimento de onda onde os componentes da fase móvel não apresentam umavariação de absorbância para diferentes concentrações.Figura 1: Célula do detector de ultravioleta para CLAEConsiderações importantes:i. A fase móvel utilizada não pode absorver no comprimento de onda selecionadoii. A pureza da fase móvel é extremamente importante (traços de impurezas podemabsorver intensamente no comprimento de onda utilizado): Utilizar solventes grauHPLC.Fotométricos:a. É sensível, econômico e mais que suficiente para se conseguir bons resultados comtodos os compostos que absorvem luz no comprimento de onda em que elefunciona.b. É normalmente insensível a variações de vazão e temperatura. A maioria dosdetectores de comprimento de onda fixo, oferecidos no mercado, operam em umcomprimento de onda de 254 nm e um de 280 nm, resultado da absorbância de luzem 254 nm e da emissão de luz em 280 nm por uma substância fosforescente.c. Em ótimas condições, pode-se atingir sensibilidades de até 0,001 unidades deabsorbância e, se o composto absorve intensamente na faixa de UV, é possíveldetectar quantidades de amostras da ordem de nanogramas (10-9 g).d. Quando se aplica gradiente na fase móvel e ela apresenta variação significativa deabsorbância para o UV, é necessário utilizar a cela de referência para compensar
  3. 3. esta variação. Se a fase móvel não absorve ou se a absorbância é constante, pode-sedeixar a cela de referência vazia ou cheia com um dos componentes da fase móvel.Denomina-se de “cutoff” o comprimento de onda abaixo do qual o solvente absorvemais de 1,0 unidade de absorbância numa célula de 1 cm de comprimento. Tabelasapresentando os valores de “cutoff” podem ser úteis para a escolha da fase móveladequada. Esses dados são importantes, uma vez que a resposta do detector depende dadiferença entre a absorbância do solvente e a do composto analisado.Detector EletroquímicoO detector eletroquímico baseia-se na possibilidade de muitos compostos seremoxidados ou reduzidos quando seaplica um potencial elétrico.Em um processoeletroquímico, um par de eletrodos é colocado na cela e um potencialsuficientemente elevado é aplicado provocando uma reação de oxidação oureduçãogerando uma corrente que é medida em um detector eletroquímico. Acorrente gerada éproporcional a concentração do composto.Métodos eletroquímicos de detecção oferecem a mais promissora solução para oproblema de desenvolvimento de um detector para CLAE suficientemente sensívele não baseado em absorbância de luz. Eles oferecem vantagens de alta seletividade,alta sensibilidade e serem muito bons para as análises de traços.É importante destacar que, neste tipo de detecção, a amostra tem que ser constituídade íons ou compostos que sofram ou oxidação ou redução (detectorespolarográficos). Este detector é seletivo, porque detecta somente as espécies que seoxidam (ou reduzem) em um potencial inferior ou igua1 ao fixado. Os detectoreseletroquímicos são bons para as modalidades de cromatografia que usam fasesmóveis aquosas, tais como a cromatografia por troca iônica, por exclusão ou comfase reversa por pares de íons ou ate com fase reversa com compostos oxidáveis nafase água-álcool.Tipos de detectores eletroquímicos:AmperométricoO elemento flui pela superfície do eletrodo onde uma fração dasespécieseletroativas é oxidada ou reduzida (15-20%).
  4. 4. CoulométricoO elemento flui através de um eletrodo de grafite poroso onde praticamente100%das espécies eletroativas são oxidadas ou reduzidas e portanto a sensibilidadeémuito maior (10-15 mol = fentomol).http://www.crq4.org.br/sms/files/file/conceitos_hplc_2010.pdfhttp://www.ebah.com.br/content/ABAAAAUVwAC/apostila-hplc

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