Marcha quimica physalis

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Marcha quimica physalis

  1. 1. A. 3. Ensayos químicos para la identificación de distintas familias de compuestos químicos. El material vegetal seco fue sometido a un estudio químico preliminar mediante reacciones de identificación que caracterizan a diferentes familias de compuestos químicos(Figura 3.6). Como primer paso se extrajo el material vegetal mediante un proceso de maceración con EtOH-H2O(1:1). Luego, el extracto resultante fue concentrado a sequedad para eliminar el contenido alcohólico y poder realizar las particiones sucesivas con el fin de separar las sustancias químicas según su polaridad, llevándose a cabo reacciones de identificación que caracterizan a diferentes familias de compuestos químicos. Para ello, se siguió la marcha analítica de la Figura 3.6.
  2. 2. Esta marcha química involucra la realización principalmente de reacciones de coloración que permiten obtener una visualización del contenido químico de la planta (Rondina y Coussio, 1969; Harborne, 1984): Figura 3.6: Marcha analítica para realizar el estudio químico preliminar.
  3. 3.  Taninos: A 0,5 ml del filtradoI se agregó 5 gotas de FeCl3 al 1 % en EtOH. La reacción se consideró positiva cuando apareció un precipitado o coloración azul-negruzca o pardo verdoso (Harborne, 1984).  Proantocianidinas: A 1 ml del filtradoI se le agregó HCl hasta pH 2 y se calentó a la llama. La reacción se consideró positiva, cuando la coloración cambia a rojiza, y con agregado de n-butanol o alcohol amílico ésta coloración pasa a la fracción alcohólica (Harborne, 1984).  Hidratos de carbono reductores: Al extractoacuosoII (2 ml) se le agregó3 gotas de reactivo de Molich y luego, se vertió por las paredes del tubo H2SO4de manera cuidadosa para formar dos fases. Se consideró positivo si el límite entre las dos fases se visualizó de color rojo (Evans, 1991).  Antocianinas y betacianinas: para diferenciar estos 2 tipos de estructuras, al extractoacuosoII se le realizaron diferentes test (Tabla 3.1):
  4. 4. Tabla 3.1: Ensayos para diferenciar antocianinas de betacianinas. Si bien ambas presentan la misma coloración (rojo), son químicamente diferentes. Los primeros son derivados fenólicos y los segundos, derivados nitrogenados.  Saponinas: A 2 ml del extractoacuosoII se le añadieron 3 ml de agua y se agitó vigorosamente, luego de 5 min si la espuma permanece, la reacción es positiva.  Flavonoides sulfatados: Se agregó 8 gotas de HCl al extractoacuosoII, se calentó a baño maría durante 30 min, se dejó enfriar y se le adicionó una solución acuosa de Cl2Ba 2M. Se consideró positivó cuando apareció un precipitado blanco (Markham, 1982).  Flavonoides (Ensayo de Shinoda) o (A) Glicósidos: al extractoacuosoIV (2 ml) se le añadieron 8 gotas de HCl y limaduras de Mg. Se consideró positiva la reacción, cuando apareció una coloración roja que pasó al n-ButOH (butanol) cuando éste fue agregado (0,5 ml) (Geissman, 1962). o (B) Aglicones: se concentró el extractoetéreoV a sequedad y se retomó con 2 ml de agua destilada, luego se procedió como se describió en el inciso anterior.  Antraquinonas(Reacción de Bortraëger) o (A) Aglicones (Reacción de Bortraëger directa): al Test Respuesta de antocianinas Respuesta de betacianinas Calentar con HCl 2M durante 5’ a 100 ºC Color rojo que es extraído con alcohol amílico Color rojo que se desvanece con el tiempo. Agregar NH4(OH) en gotas Cambia de rojo a azul/verde Cambia de rojo a amarillo Cromatografía en papel (CP) en HCl 1% Rf bajos a intermedios Rf altos CP en BAW (4:1:5) Rf medios (10-40) Rf muy bajos (00-10) Electroforésis (10 mV) con papelWhatman nº 1 y buffer pH 2 Migra al cátodo Migra al ánodo Espectro visible en MeOH- HCl Máximo en el rango 505-535 nm Máximo en el rango 532-554 nm
  5. 5. extractobencénico(XIII) se le agregó 1 ml de KOH 10 % (en etanol) o NH4(OH). Fue positivo cuando apareció una coloración rosa/roja(Wagner et al., 1984). o (B) Glicósidos (Reacción de Bortraëger indirecta): al extractoacuosoXII se le agregó 5 gotas de HCl y se colocó a baño maría durante 60 min con el fin de hidrolizar los glicósidos. Se enfrío y se extrajo con benceno (Inoue et al., 1981). A 1 ml de benceno se añadió 1 ml de KOH 10 % (en etanol) o NH4 (OH). La reacción se consideró positiva cuando apareció una coloración rosa/roja en la fase inferior.  Fitoesteroides (Lieberman-Burchard): A 1 ml del extracto clorofórmicoXI se le agregó igual volumen de anhídrido acético y 5 gotas de ácido sulfúrico concentrado. La reacción fue positiva cuando apareció una coloración verde azulada.  Alcaloides: Con los extractos, clorofórmicoVIII y acuosoácidoX, se realizó una prueba de toque en una placa de sílica gel, luego se agrego una gota de "Reactivo de Dragendorff". Se consideró positiva si apareció una coloración rojo ladrillo (Harborne, 1984). Cabe destacar que los extractos obtenidos, tanto orgánicos como acuosos, también fueron sometidos a los ensayos arriba mencionados a fin de establecer el tipo de compuestos predominantes en los mismos. A.3.1.Reactivos utilizados  Reactivo de Molich: 5 gr. de timol se disolvieron en cantidad suficiente de EtOH 90º hasta completar 100 ml y finalmente se filtró (Farmacopea Nacional Argentina, 1978).  Reactivo de Dragendorff: la solución A se preparó disolviendo 0,85 gr. de nitrato de bismuto en 40 ml de agua y se agregaron 10 ml deAcOH glacial. La solución B se obtuvo disolviendo 20 gr. de ioduro de potasio en 50 ml de agua. El reactivo se consiguió mezclando la solución A con la B y agregando 200 ml de AcOH glacial y agua en cantidad suficiente para 1000 ml (Sthaland
  6. 6. Schorn,1969).  BAW (4:1:5): Butanol: acido acético: agua (4:1:5). Sustancias que se necesitan: - Ethanol (ETOH) - FeCl3 - HCl - n-butanol - H2SO4 - NH4(OH) - Cl2Ba - H2O destilada - K(OH) - Benceno

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