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  • 1. Instituto Tecnológico de Cd. Altamirano MICROBIOLOGIA LIC. EN BIOLOGÍA ALUMNO: JESUS HERRERA BELTRAN. ERIKA OROPEZA BRUNO.Semestre 4 Grupo : 506
  • 2. ESTERILIZACIÓN. Los procesos de esterilización o desinfección son diariamente llevados acabo, no solamente en el laboratorio, donde son fundamentales para evitar la contaminación de medios, cultivos, placas etc.Se utiliza una temperatura adecuada para la destrucción de esos microorganismosLa temperatura aproximada es de 100 grados centígrados
  • 3. Metodos fisicos.Los métodos físicos utilizan técnicas como la microinyección con una finaaguja de cristal y la electroporación (exposición de las células aun choqueeléctrico). La microinyecciónresulta ser una técnica muy potente y eficaz, ya que 1 decada 5 células consigue incorporar el DNA foráneo de forma permanente. Elproblema de esta técnica es que exclusivamente se puede inyectar unacélula cada vez, y por tanto no es el más recomendable para una terapiamédica debido a que es demasiado laboriosa como para obtener un númerode células indicadas (suficientes, aproximadamente un millar o más) paraque el tratamiento tenga éxito.
  • 4. El calor seco es un métodoEl calor húmedo es un método térmico térmico de esterilización y sude esterilización y mata microorganismos efecto enpor la coagulación de proteínas los microorganismos es(desnaturalización), lo que es causado por equivalente al horneado.la rotura de los puentes de hidrógeno que El calor cambiason los que mantienen a las proteínas en su las proteínasmicrobianas porforma tridimensional las proteínas por lo las reacciones de oxidación ytanto regresan a su estructura secundaria, crea un medio interno árido, asíse coagulan y se convierten en proteínas no quema a los microorganismosfuncionales. lentamente.1 Una simple analogía es la lenta carbonización de papel dentro de un horno caliente, aunque la temperatura permanezca por debajo del punto de ignición del papel.
  • 5. METODOS QUIMICOS.Métodos químicos de esterilización son los queinvolucran el empleo deSustancias letales para matar los microorganismos talescomo el oxido de etileno y el perioxido Ejemplos: Formol Etanol Alcoholes Oxido de etileno Esta forma de esterilizacion es que aldehidos algunas sustancias quimicas tienen la capacidad de Promover una o mas reacciones quimicas capaces de producir la muerte de algunos microorganismos.
  • 6. MEDIO DE CULTIVO.Un medio de cultivo consta de un gel ouna solución que cuenta con los nutrientesnecesarios para permitir, en condicionesfavorables de pH y temperatura, elcrecimientode virus, microorganismos, células, tejidosvegetales o incluso pequeñas plantas.Según lo que se quiera hacer crecer, elmedio requerirá unas u otras condiciones.Generalmente se presentan desecados enforma de polvo fino o granular antes de serpreparados; ya preparados puedenencontrarse en estado sólido, semisólido olíquido. El objetivo último del cultivo esvariado: antibiograma, identificación,multiplicación.
  • 7. SEGÚN SU COMPOSICION.Se dividen en varios están los sintéticos, empíricos y semisinteticos. Empíricos: su composición por contener sustancias orgánicas. Sintéticos: por contener sustancias químicas definidas. Semisinteticos: aparecen moléculas de naturales hidrolizadas.
  • 8. COMPOSICIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO.Los mas utilizados por sus contenidos y composición:GelatinaAgarPeptonaSangreSueroExtracto de levaduraEntre mas
  • 9. PREPARACION Y CONTROL. Pesar los reactivos necesarios para preparar 250 mL de medio (por equipo). Ponerlos en el matraz. 2. Con la probeta, medir 250 mL de agua destilada y añadirla al matraz con el polvo. 3. Poner el matraz sobre el agitador con una mosca para que la suspensión se mezcle homogéneamente. 4. Cuando la solución esté homogénea, retirarla del agitador, sacar la mosca y tapar con un pedazo de aluminio. 5. La autoclave estará prendida previamente por la profesora. Con su ayuda, introduce tu matraz en el interior de la autoclave. Ciérrala siguiendo las indicaciones de la maestra.
  • 10. MÉTODOS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTOEn Microbiología se entiende comosiembra al proceso mediante el cual sellevauna porción de una población demicroorganismos (inóculo), de un cultivocrecido aun medio nutritivo parasu crecimiento. La siembra puede ser :▪ Por inoculación Por estrías simples ,Por dispersión o agotamiento, Por puntura, extensión.
  • 11. ESTRIAS CRUZADAS.Es lograr aislar colonias, por eso estasestrias se hacen con la misma cantidad demuestra que se tomo inicialmente con elasa, algunas personas acostumbranflamear el asa despues de hacer susprimeras estriasy se van haciendo de tal forma que lacantidad de muestra en cada estria va sersiempre menor, y eso nos garantizara elcrecimiento de colonias.
  • 12. TEMPERATURA.. - Según su comportamiento frente a la temperatura, los organismos pueden ser térmofilos, mesófilos y psicrotrofos.Congelación.- La congelación detiene el crecimiento detodos los microorganismos. RADIACION ULTRAVIOLETA. - La radiación ultravioleta produce una disminución exponencial en el número de células vegetativas o de esporas vivas con el tiempo de irradiación. Por tanto se pueden calcular los valores D para la irradiación.
  • 13. TEMPERATURA:El aumento de la temperatura aumenta elpoderbactericida del agente, siempre que no lodesnaturalice.Así para temperaturas bajas, por logeneral, por cada10ºC de incremento de esta, la tasa demortalidad seDuplica.
  • 14. LOS MICROORGANISMOSNECESITAN LA PRESENCIA DE AGUA en una forma disponible, para crecer yllevar a cabo sus funciones metabólicas. Lamejor forma de medir la disponibilidad deagua es mediante la actividad de agua (aw).La aw de un alimento se puede reduciraumentando la concentración de solutos enla fase acuosa de los alimentos mediante laextracción del agua o mediante la adiciónde solutos. Algunas moléculas del agua seorientan en torno a las moléculas delsoluto y otras quedan absorbidas por loscomponentes insolubles de los alimentos.En ambos casos, el agua queda en unaforma menos reactiva.
  • 15. Varios métodos de conservación utilizan estos conceptos. La deshidratación es unmétodo de conservación de los alimentos basado en la reducción de la aw (lo que seconsigue eliminando el agua de los productos). También el agregado de solutosdesciende la aw lo cual se da durante el curado y salado, así como en el almíbar yotros alimentos azucarados.La aw de un alimento o solución se define como la relación entre la presión de vapordel agua del alimento (p) y la del agua pura (po) a la misma temperaturaA medida que una solución se concentra, la presión de vapor disminuye y laaw desciende a partir de un valor máximo de 1 para el agua pura (en ausencia decapilares o fuerzas de adsorción). La aw está relacionada con el punto de congelacióny con el de ebullición así como con la humedad relativa en equilibrio (HRE) y lapresión osmótica.
  • 16. PRECISIÓN HIDROSTÁTICA. la presión hidrostática es la fuerza porunidad de área que ejerce un liquido enreposo sobre las paredes del recipiente quelo contiene y sobre cualquier cuerpo que seencuentre sumergido, como esta presión sedebe al peso del liquido, esta presióndepende de la densidad(p), la gravedad(g)y la profundidad(h) del el lugar dondemedimos la presión(P)P=p*g*h
  • 17. La acidez de una sustancia es el grado en el que es ácida. El concepto complementario es la basicidad. La escala más común para cuantificar la acidez o la basicidad es el pH, que sólo es aplicable para disolución acuosaNeutofilo: ph optimo de 7, bacterias patogenasAcidofico: ph optimo de 7 menor hongosBasofilo: ph optimo mayor 7 ejemplo suelos y aguas ricas en carbonatos. La acidez de una sustancia se puede determinar por métodos volumétricos. Ésta medición se realiza mediante una titulación, la cual implica siempre tres agentes o medios: el titulante, el titulado (o analito) y el indicador
  • 18. PH:Entre otras cosas determina el grado de ionización delagente, siendo en general la forma no disociada la que atraviesa mejor las paredes del microorganismo
  • 19. DE ACUERDO AL OXIGENO.Algunas bacterias requieren de oxigeno y se clasifican en :Aerobias: dependen del oxigeno para su crecimiento y desarrollo.Anaerobias: facultativos no requieren de oxigeno ejemplo las levaduras.Microaerofilos: solo se pueden desarrollar en una presencia baja deTensiones de oxigeno menor de 12 % y altas tensiones de oxigeno.
  • 20. RADIACIÓNLas radiaciones ultravioleta (uv), Rayos Xy radiación g producen efectos esterilizantés (destrucción de microorganismos) alalterar las proteínas, membranas, ácidosnucleídos y al generar radicales libres deltipo OH· y H·. El tratamiento matemáticode la destrucción de microorganismos porestos procedimientos es similar al descritopara el uso de altas temperaturas. Hay queconsiderar, sin embargo, los poderes depenetración de los diferentes tipos deradiación. Así, por ejemplo, la radiación uvtiene un poder de penetración muy bajoy, por consiguiente, se utiliza paraesterilizar superficies, mientras que laradiación X o log tiene poderes depenetración mucho mayores.
  • 21. MORFOLOGIA COLONIAL.Generalmente se reporta la morfologíacolonial tal como uno la percibe, porejemplo si se ves que las coloniasbacterianas son como puntitos, puesreportan que son puntiformes, si son lisaspues reportan que son lisas, si observasque están como moco, pues reportan queestán mucosas, si su color es amarillentopues reportan que son de coloramarillento, y así sucesivamente., tambiénpuedes agregar características queconsideres importante paraidentificarlas, por ejemplo el olor., Aun asícheca las siguientes imágenes paraorientarte.
  • 22. MORFOLOGIA MICROSCOPICA.unque existe un enorme número de bacterias implicadasen procesos infecciosos todas ellas se parecen mucho entresi desde el punto de vista morfológico. Su formaindividual y su agrupación sólo en raras ocasiones generanun diagnóstico definitivo. La tinción de gram es muy frecuentemente el primer paso del esquema de identificación bacteriana, y por eso se realiza muchísimo. Cabe destacar que no siempre es fácil ubicar los aislamientos bacterianos en la clasificación de gram. Algunas bacterias no presentan una forma constante (pleomorfismo) y otras pueden cambiar sus propiedades de tinción según la antigüedad del cultivo.
  • 23. METODOS DE TINCION.Tinción Simple Se utiliza un solo colorante, por lo que todas las estructuras celulares se tiñen con la misma tonalidad (Tinta china, AzulMetileno de Loeffler, Azul de lactofenol).El Hidróxido de potasio al 10% (solución de KOH) permite ver elementos de hongos ya que el KOH digiere parcialmente loscomponentes proteicos, por ejemplo de la célula huésped, pero no actúa sobre los polisacáridos de las paredes celulares de los hongos. Tinción Diferencial Se utilizan varios colorantes combinados. Las estructuras celulares se diferencian en función de los diferentes colorantes que fijan de acuerdo con su propia constitución química. Los ejemplos clásicos sería la tinción de GRAM o la de Ziehl-Neelsen En la imagen: BGN y levaduras en una tinción GRAMSin Tinción No se utiliza ningún tipo de colorante.Es el montaje directo húmedo o examen en fresco: las muestras se extiendendirectamente sobre la superficie de un portaobjetos para su observación. El materialque es demasiado espeso para permitar la diferenciación de sus elementos puedediluirse con igual volumen de solución salina fisiológica estéril. Se depositasuavemente un cubreobjetos sobre la superficie del mate
  • 24. TÉCNICAS DE FIJACIÓN:Se puede entender por técnicas de fijación dos conceptos: 1º laconservación de los tejidos, células y estructuras en el estado másaproximado posible a la materia viva; 2º la fijación de loscolorantes con otras sustancias, para que seanestables, longevos, que penetren y tengan un poder cromógenoadecuado para el uso que se persigue. Al empleo de estassustancias se le llama comúnmente, utilización demordiente, aunque la palabra ‘mordiente’ tiene otra acepciónradicalmente distinta, generando cierta confusión.Mordiente, también es el punto en que algunas sustancias, muycercanas al secado, están ligeramente pringosas al tacto, pero nomanchan, por ejemplo en la técnica del Mixtión.
  • 25. LA TINCIÓN SIMPLE se basa en laafinidad del colorante por los componentescelulares. La tinción puede ser uniforme opresentar algunos gránulos en su interior.Utiliza un solo colorante (violeta degenciana, azul de metileno, fuscinadiluida).La tinción simple se utiliza paradestacar el microorganismo completo paraque se vean las formas y las estructurascelulares básicas. En lastinciones simplesse usa un único reactivo, quepreferentemente es de tipo básico ycontiene un cromógeno (compuesto que dacolor al tinte) con carga positiva, ya que lapared celular de las bacterias poseecomponentes con carga negativa queatraen y enlazan el cromógeno. Se utilizansolamente para incrementar el contraste;todas las células absorberán el colorante yquedarán teñidas del mismo color.

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