Capitulo 13 dna

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Capitulo 13 dna

  1. 1. Capitulo 13 DNA: de copias.En los cromosomas hay 30,000 genes cada Enzima restrictiva- Compuesto químico queuno tiene una función. Tienen 3 x 109 pares corta el DNA en un lugar en específico.de células. Impresión de DNA:Nucleótido- Consiste de una azúcar, fosforo y Tandem Repeats (TR)- Es una región en eluna base nitrogenada. La azúcar es una cromosoma que contiene secuencias depentosa, fosforo de fosfato y las bases bases repetidas un número de veces, 30%nitrogenadas (Adenina, Citocina, Guanina, del genoma está compuesto de segmentosTimina). repetidos. En humanos tienen el mismo tipoEl material genético consiste de una hilera de de repeticiones pero no existe muchanucleótidos, esta hilera está unida a otra por variación en el número de repeticiones.Puentes de Hidrogeno formando una doble Restriction Fragment Length Polimorphisms-hélice. El puente de Hidrogeno lo forman la (RFLP)- Son fragmentos de diferentes largosunión de base complementaria, Adenina se de par de bases que se producen al cortar elune a Timina (A=T) y Guanina a Citocina DNA con una enzima restrictiva. Típicamente(G=C). Si en una hilera esta Adenina en la una secuencia medular consiste de 15 a 35otra hilera esta Timina y viceversa. Lo mismo bases de larga y la misma se repite miles decon Guanina y Citocina una base está en una veces.hilera y la otra en otra hilera. Ambas hilerascontienen la misma información genética.Reacción de cadenas de Polimerasa- (PCR)técnica para reproducir una porción de lahilera de DNA. Esta técnica produce millones En la técnica RFLP la enzima restrictiva corta los cromosomas en cientos de fragmentos. Algunos de estos fragmentos van a tener las secuencias repetidas consecutivas. El DNA se trata químicamente después de la Electrophoresis para separar las hileras...................................................................... 1 | P a g e
  2. 2. cortadas. El material de DNA se coloca en la RFLP- Fue utilizada en el análisis de lagelatina electrophoretica y se le aplica la mancha de semen del traje azul de Mónicacorriente eléctrica para separar los Lewinsky. Hubo pareo con la muestra delfragmentos según su tamaño. Los más Presidente Clinton.pequeños y de menor peso se mueven másrápido que los más grandes y pesados. Los Probabilidad:fragmentos son transferidos a una Negro- 1.440 x 1012membrana de nylon utilizando una técnicaque se conoce como Southern blotting. Blanco- 7.870 x 1012Luego se hace la Hibridización que consiste Hispano (este)- 3.14 x 1012en añadir sondas marcadas con el materialradioactivo que contiene la secuencia de Hispano (oeste)- 9.43 x x1011bases complementarias de la secuenciarepetida consecutiva.Luego la membrana de nylon se colocacontra una placa de rayos x y se deja exponerpor varios días. Los marcadores radioactivoshacen que se marquen las bandas en laplaca. Se corren fragmentos de DNAconocidos para determinar el largo de cadafragmento. Se van a producir dos (2) bandasuna por cada cromosoma. Un númerolimitado de la población va a tener el mismofragmento de DNA por lo tanto NO es unaprueba individualizada.Se utilizan diferentes sondas que reconocendiferentes segmentos de repeticiones en elDNA. Aumento la capacidad discriminatoriahaciendo la prueba más individualizada.Ej. Cuatro sondas con las siguientesprobabilidades:A= B=C= D=Uno en un millardo la probabilidad de otrapersona seleccionada al azar tenga lasmismas bandas....................................................................... 2 | P a g e
  3. 3. Reacción de la cadena de Polimerasa (PCR):Variant Number Tandem Repeat (VNTR)Short Tándem Repeat (STR)- El número debases que se repiten es menor que en VNTRy el número de repeticiones también esmenor. Son secuencias pequeñas que serepiten consecutivamente.En PCR vamos a reproducir un pedazopequeño de DNA millones de veces.Pasos en PCR: Calentar a 94° C para separar las hileras de DNA. Anadir iniciadores y bajar la temperatura para que se unan al DNA. Añadir la polimerasa y una mezcla de nucleótidos (GATC) y calentar a 72° C para que se reproduzca el STR en las dos (2) hileras. [el primer ciclo reproduce cuatro (4) hileras]. 30 ciclos reproducen 1, 000,000 de copias a 2 minutos por ciclo. Separación por Electrophoresis.PCR se usa para producir hileras cortas (200bases) y estas se degradan menos. Se STR- Son abundantes en el genoma humano.necesita menos DNA para PCR. La técnica La secuencia de bases que se repiten estánamplifica muestras tan pequeñas como 10-9 entre tres (3) y siete (7) bases y el largo totalgramos. de las repeticiones es menor de 400 bases. Se utiliza STR de diferentes locus que las bandas no interfieran una con las otras. Multiplexing- La técnica que simultáneamente detecta más de un STR en un solo análisis. Se producen 2 bandas identificadas una del padre de tres (3) repeticiones y una por la madre de cinco (5) repeticiones por tanto este locus es (3, 5). Si se utilizan varios locus se va individualizando la evidencia de DNA....................................................................... 3 | P a g e
  4. 4. La secuencia de bases se comprara con aproximadamente 5,000 secuencias diferentes en el banco de datos para ver su frecuencia en la población la secuencia puede ser común, rara o única. El mt-DNA no tiene la capacidad de discriminación del DNA nuclear. Evidencia biológica para DNA:Ej. THIO, TPOX y D75820 Se puede hacer un análisis con 250pg si la célula tiene 7pg de DNA solo se necesitan[Blanco] 0.081 x 0.195 x 0.065= 0.00103= 0.36 células para análisis. La cantidad tan1/974 baja necesaria permite el análisis en sangre seca, mancha de semen, en sellos y sobresEl locus Amelogenina en el cromosoma del tocados con saliva, vasos, latas, goma desexo. Hay varios STR-Y en el cromosoma Y. mascar, bandas para el sudor, sabanas, tejidoPara mezclar varios varones se pueden usar 6 transferido, guantes, bolígrafos, gorras,STR diferentes en el cromosoma Y. El sombreros etc.cromosoma X no dará ninguna banda. STR-Yda una banda por locus. El locus Hay que perpetuar la localización deAmelogenina da dos (2) bandas para varón y la evidencia y no afectar posiblesuna para la mujer. patrones de sangre. Ropa, toallas, paños, sabanas, etc.DNA mitocondrial: Empacar en bolsas de papel paraEl DNA mitocondrial se hereda de la madre evitar hongos.solamente y se encuentra en las La sangre se saca con un hisopomitocondrias que están en el citoplasma de húmedo y se toma muestra controlla célula. En la célula hay un núcleo con DNA de al lado.nuclear y hay entre 500 y 1,000 Toda evidencia debe mantenerse enmitocondrias. Por esta ser abundante se nevera o frasco.puede usar cuando el DNA nuclear esta Sangre control o tejido epitelial. Ej.degenerado. Ej. Cuerpos quemados, troncos Cepillo de dientes, pelo, navajas.de pelo sin raíz, hueso, dientes etc.El análisis de mt-DNA es más laborioso y máscostoso. El mt-DNA es circular y consta de16,569 bases y 37 genes. Hay dos regionesque tienen hipervariabilidad. HV-1 (342b) yHV-2 (268b). Mediante PCR se multiplicanestas regiones luego se determina el ordenque aparecen las bases en esta región estose conoce como secuenciamiento....................................................................... 4 | P a g e

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