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Antibiograma

  1. 1. 8 - ANTIBIOGRAMA 119 8. ANTIBIOGRAMAUn antibiótico es una sustancia de origen biológico que inhibe el crecimiento de losmicroorganismos a concentraciones muy bajas.Un antibiograma es un estudio de la sensibilidad "in vitro" de un microorganismo patógenofrente a las sustancias antimicrobianas.Existen distintos métodos siendo los más importantes los de : Difusión: Habitualmente cualitativos. Atendiendo al halo de inhibición que aparece alrededor del disco, se clasifican los microorganismos como sensibles (S), intermedios (I) o resistentes (R) según sea la eficacia obtenida por el agente amtimicrobiano frente al microorganismo. Dilución: Es un estudio cuantitativo. Se emplean una serie de tubos con distintas concentraciones de agente antimicrobiano (4-128 g/ml). Se observa el crecimiento de los microorganismos mediante la aparición de turbidez, o el cambio de color del indicador incorporado al medio.La sensibilidad de una bacteria a un antibiótico viene dada por la C.M.I. es la concentración mínima inhibitoria, representa la mínima cantidad de antimicrobiano capaz de inhibir el crecimiento de un microorganismo. C.M.B. concentración mínima bactericida. Es la concentración mínima que mata el microorganismo. Normalmente, la CMI es suficiente para combatir una determinada infección ya que los mecanismos inmunitarios se encargan de eliminar al microorganismo. Detección de beta lactamasas: Algunos microorganismos son capaces de producir estas enzimas, que destruyen los derivados del grupo de las penicilinas, hidrolizando el anillo betalactámico. Se aplica esta prueba a los siguientes microorganismos: Staphylococcus aureus, Haemóphilus influenzae y Neisseria gonorrhoeae.El antibiograma por el método de difusión en agar es una de las pruebas utilizadas paradeterminar la sensibilidad de un microorganismo frente a un antibiótico. En esta prueba seenfrenta la bacteria inoculada sobre la superficie de un medio de agar a una soluciónantibiótica absorbida en discos de papel de filtro o en pastillas.Procedimiento: 1. Preparar 3 placas Petri con agar Müeller Hinton. 2. A partir de un cultivo fresco de las bacterias que hay que ensayar (E. coli, Staphilococcus, ...), inocular 4-5 colonias en un tubo con 5 ml de caldo TSB. 3. Utilizando un hisopo de algodón sumergirlo en el inóculo y eliminar el exceso presionándolo sobre la pared interna del tubo.
  2. 2. 8 - ANTIBIOGRAMA 120 4. Inocular la superficie de una placa de agar Müeller Hinton con el hisopo pasándolo uniformemente por toda la superficie en tres direcciones. Por ultimo, pasar el hisopo por el reborde de la placa. 5. Dejar secar 10 min con la tapa algo abierta (junto al mechero). 6. Preparación de los discos con antibiótico. Disolver una cápsula, comprimido, gragea o vial de antibiótico en agua destilada; elegir una presentación de antibiótico fácilmente soluble (Calcular el volumen de dilución que precisa cada tipo de antibiótico, según la tabla 8.1). 7. Preparar un banco de diluciones (-1, -2) con agua destilada. 8. Con micropipeta Pasteur impregnar los discos para antibiograma con 1 gota de micropipeta (32 l) de las disoluciones de antibiótico (se puede utilizar la misma pipeta si se realiza de menor a mayor concentración). Anotar la concentración y el volumen de antibiótico añadido en cada disco.
  3. 3. 8 - ANTIBIOGRAMA 121 9. Colocar el disco de antibiótico (con pinzas estériles) sobre la superficie del agar y apretarlo suavemente sobre la superficie del medio. Los discos no deben estar a menos de 15 mm de los bordes de la placa y a unos 20 mm uno de otro para que no se superpongan las zonas de inhibición. (No mover los discos una vez implantados). 10. Realizar la operación con: a. Placa 1 (Staphilococcus):3 discos con las diluciones (1,-1, -2 ) de Amoxicilina. b. Placa 2 (Staphylococcus):3 discos con las diluciones (1,-1, -2 ) de Penicilina G c. Placa 3 (E.coli): 3 discos con las diluciones (1,-1, -2 ) de Amoxicilina, 3 discos con las diluciones (1,-1, -2 ) de Penicilina G. 1. Marcar placas y dejarlas 15 a temperatura ambiente para que difunda el antibiótico. 2. Anotar las concentraciones y el tipo de antibiótico sembrado en cada disco. 3. Incubar la placa en posición invertida a 37 ºC durante 24 h. 4. Medir los diámetros de las zonas de inhibición con una regla. 5. Interpretación: Atendiendo a los resultados obtenidos con los criterios de inhibición aceptables indicados en la tabla 7.1., clasificar los microorganismos investigados como S, I, R. Determinar la C.M.I. Tabla 8.1. Halos de inhibición aceptables según las normas de la NCCLS para los antibiogramas de difusión Halos de inhibición (mm) Antibiótico /carga E. coli S. aureus P. aeruginosa del disco (g) ATCC 25922 ATCC 25923 ATCC 27853 Amicacina/30 19-26 20-26 18-26 Amoxicilina-clavulánico/20/10 19-25 28-36 NA Ampicilina/10 16-22 27-35 NA Cefazolina/30 23-29 29-35 NA Cefotaxima/30 29-35 25-31 18-22 Ceftazidima/30 25-32 16-20 22-29 Cefuroxima/30 20-26 27-35 NA Cloranfenicol/30 21-27 19-26 NA Ciprofloxacina/5 30-40 22-30 25-33 Clindamicina/2 NA 24-30 NA Doxiciclina/30 18-24 23-29 NA Eritromicina/15 NA 22-30 NA Gentamicina/10 19-26 19-27 16-21 Imipenem/10 26-32 NA 20-28 Ácido nalidíxico/30 22-28 NA NA Nitrofurantoína/300 20-25 18-22 NA Norfloxacina/10 28-35 17-28 22-29 Oxacilina/1 NA 18-24 NA Penicilina G/10 NA 26-37 NA Piperacilina/100 24-30 NA 25-33 Tobramicina/100 18-26 19-29 19-25 Trimetoprim/Sulfametoxazol/ 24-32 24-32 NA 1,25/23,75 Vancomicina/30 NA 15-19 NA NA = No aplicable
  4. 4. 8 - ANTIBIOGRAMA 122Clasificación de las sustancias antimicrobianasLa evaluación de sensibilidad permite seleccionar el compuesto más adecuado para eltratamiento de una infección bacteriana.1. Inhibidores de la síntesis de la pared celular( Betalactámicos)Comprende un nutrido grupo deantibióticos naturales ysemisintéticos que tienen en comúnpresentar en su estructura químicaun anillo -lactámico (Penicilinas,cefalosporinas...). Su mecanismo deacción se basa en la inhibición de laformación del peptidoglucano,componente esencial de la paredcelular (mureína).El esqueleto de la pared celular bacteriana está constituido por un heteropolímero, elglucopéptido mureína1. En su composición intervienen sustancias que no se presentan ni enplantas ni en animales. Estos elementos estructurales singulares, constituyen un tendón deAquiles para la terapia médica.La penicilina evita la formación de la mureína, impidiendo la formación de unionestransversales por transpeptidación entre aminoácidos.Las bacterias se diferencian esencialmente de los animales y plantas en los componentes, laestructura, así como en las reacciones implicadas en la síntesis de la pared celular.Los agentes terapéuticos que afecten específicamente sólo a la pared celular bacteriana y a susíntesis, deben ser inocuos para el organismo superior hospedador.La presencia de una capa de glucopéptido en las paredes celulares es una característicageneral de todas las eubacterias dentro de las procariotas. Tan solo las arqueobacterias(metágenas, termófilas extremas, halófilas extremas) y otros pequeños grupos (micoplasmas)no forman glucopéptidos del tipo descrito.1.1 PenicilinasDesde el descubrimiento de la penicilina en 1928, se han desarrollado una multitud decompuestos de esta familia, cuyo compuesto base es el ácido 6-aminopenicilánico (6-APA).Por reacciones de sustitución con ácidos clorados pueden sintetizarse cientos de penicilinas.1 Mureína: Heteropolímero formado por cadenas en las que se alternan N-acetilglucosamina(G) y el ácido N-acetilmurámico (M), unidos mediante enlaces -1,4 glucosídicos. Entre losaminoácidos de estas cadenas rectas, se forman enlaces peptídicos.
  5. 5. 8 - ANTIBIOGRAMA 123Muchas penicilinas semisintéticas no se abren por la acción de la penicilinasa2 y puedenadministrarse por vía oral gracias a su estabilidad frente a los ácidos. Penicilinas naturales: Penicilina G. Activa frente a Gram (+). No actúa sobre enterobacterias. Penicilina V. Permite la administración oral por su mayor resistencia a pH ácidos. Penicilinas semisintéticas. Poseen cadenas laterales en el anillo betalactámico, que les proporciona una relativa resistencia a las penicilinasas. Oxacilina, Cloxacilina. Son penicilinas resistentes a la penicilinasa, presente en microorganismos como el S.aureus. Amoxicilina (Clavumox, Ardine, Clamoxil...). Amplio espectro. Actúan sobre algunas enterobacterias. La resistencia va en aumento, 40 % de cepas E.coli.ç Inhibidores de beta-lactamasa. Su actividad antibacteriana es reducida, pero sus unión con algunas -lactamasas impide que éstas destruyan a los antibióticos - lactámicos, proporcionándoles un aumento de espectro (ácido clavulánico)1.2 Cefalosporinas Productos de fermentación del hongo Cephalosporium, cuyo anillo base es el 7-ACA, ácido 7-aminocefalosporánico. Los derivados semisintéticos de las cefalosporinas se clasifican por generaciones. Las cefalosporinas de 3ª generación son efectivas frente a penicinilasas, microorganismos Gram negativos y enfermedades graves como: menngitis, neumonía y la septicemia.2 Penicinilasas: Enzimas producidas por ciertas cepas bacterianas resistentes a las penicilinasmediante la destrucción del anillo beta-lactámico (beta-lactamasas).Porcentaje de cepas S.aureus resistentes a penicilina G: 1940- 3%, 1948-58%, 1990-90%
  6. 6. 8 - ANTIBIOGRAMA 1242. Inhibidores de la síntesis de proteínas. Extenso y heterogéneo grupo de antibióticos. Su actividad se centra en el ribosoma bacteriano3 70S, aunque cada grupo actúa en distintos puntos del proceso de síntesis de las proteínas. Actinomicetos y streptomicetos son grupos bacterianos que se caracterizan por crecer formando micelio. Tienen una gran significación industrial como productores de antibióticos muy activos: estreptomicina (tuberculosis), tetraciclina.. Cloranfenicol. Se encontró, en primer lugar, en cultivos de Streptomyces venezuelae, pero actualmente se obtiene por síntesis química. Es extraordinariamente estable y actúa contra muchas bacterias Gram negativas, también contra espiroquetas, rickettsias, actinomicetos, anaerobios y virus de gran tamaño. No obstante, se suele reservar para infecciones graves, debido a su toxicidad.3. Inhibidores de la síntesis de ácidos nucleicos. Quinolonas: Productos de síntesis química (quimioterápicos). Su mecanismo de acción inhibe la formación de la enzima ADN girasa, necesaria para la duplicación del ADN. Son bactericidas.4. Inhibidores de la síntesis del ácido fólico. Sulfamidas. Son antibióticos químicos de síntesis. Actúan bloqueando la síntesis de ácido fólico, imprescindible para la producción de proteínas. Antibióticos de amplio espectro. Se utilizan en infecciones leves. Inhibición competitiva: El ácido paraaminobenzoico (PABA) es un componente preciso para la síntesis del ácido fólico. Dos moléculas, sulfamida y PABA compiten por el mismo sitio activo.Los organismos animales no son capaces de sintetizar ácido fólico, así que toman lacoenzima (vitamina) completa en los alimentos.3 Estos antibióticos actúan también sobre los ribosomas (70 S) de las mitocondrias ycloroplastos de las eucariotas. Pero ya que la membrana externa de las mitocondrias, es muypoco permeable a las moléculas de antibiótico, apenas tienen efecto sobre las célulaseucariotas, a las bajas concentraciones en que se utilizan con los procariotas.
  7. 7. 8 - ANTIBIOGRAMA 125Cuestionario1. Explica las causas de la resistencia que presentan ante la acción de la mayoría de antibióticos de eficacia antibacteriana: a. Los hongos b. Los micoplasmas c. Los virus2. ¿Qué es la CMI?, ¿ y la CMB?3. ¿Cómo se clasifican los microorganismos según el grado de crecimiento alcanzado frente a un antibiótico?4. ¿Qué diferencia existe entre un antibiótico y un quimioterápico?5. Clasifica los antibióticos citados en este capítulo, según sean naturales, de síntesis o semisintéticos.6. Recopilar en una tabla los datos siguientes: Agente Lugar de la célula Mecanismo de Espectro de antimicrobiano en que actúa actuación aplicación
  8. 8. 8 - ANTIBIOGRAMA 126

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