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Práctica 2. Tinción de Gram
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Práctica 2. Tinción de Gram

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Descripción de la técnica de tinción de Gram.

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  • 1. Identificar la morfología (coco, bacilo,etc) y tipo de tinción (Gram positiva o Gram negativa) de las cepas proporcionadas.
  • 2. La tinción de Gram es una técnica diferencialcomúnmente empleada en el diagnóstico microbiológico,fue descubierta por Hans Christian Gram en 1884. La mayor parte de las muestras sometidas a examencuando se sospecha infección bacteriana deben serextendidas en frotis sobre laminillas de vidrio, teñidas yexaminadas en el microscopio.Los reactivos empleados en la tinción de Gram son elcristal violeta (colorante básico), lugol (mordiente), alcoholcetona (decolorante) y safranina (colorante de contraste).
  • 3. El cristal violeta sirve como colorante básico uniéndose a lapared celular bacteriana, con ayuda del mordiente (lugol) querefuerza la unión del colorante. Las bacterias Gram positivas,debido a la estructura y composición bioquímica de su paredcelular retienen el complejo cristal violeta-lugol y aun después deltratamiento con el decolorante conserva el colorante básico, por loque se observan de color púrpura o violeta al microscopio. Las bacterias Gram negativas pierden el colorante básicocuando son tratadas con el decolorante debido a que el alcoholdisuelve el contenido lipídico de la pared celular (lo que aumentala permeabilidad celular), dando como resultado la pérdida delcomplejo cristal violeta-lugol. Las bacterias decoloradas captanentonces el colorante de contraste, razón por la cual estasbacterias se observan de color rojo al microscopio.
  • 4. Equipo: Microscopio óptico Materiales: •Mechero de Bunsen •Asa bacteriológica •Portaobjetos •Varillas de vidrio (soporte) •Pizeta •Gasas Reactivos: •Cristal violeta •Solución de lugol Muestra: Proporcionada •Alcohol acetona por el profesor (a). •Safranina •Aceite de inmersión
  • 5. Limpiar el portaobjetos con gasas y encender el mechero.Colocar una gota de solución salina sobre el portaobjetos y luego esterilizar el asa bacteriológica.
  • 6. Tomar una pequeña muestra de la cepa y diluirla en el portaobjetos. Posteriormente esterilizar el asa.
  • 7. Fijar la muestra al calor flameándola en el mechero, cuidando no quemar la muestra.Colocar el portaobjetos sobre un soporte.
  • 8. Cubrir la muestra con cristal violeta. Esperar que transcurra 1 minuto. Escurrir y enjuagar.
  • 9. Cubrir la muestra con solución de lugol y esperar que transcurra 1 minuto. Escurrir y enjuagar.
  • 10. Cubrir la muestra con alcohol cetona.Esperar que transcurran 5 segundos. Escurrir y enjuagar.
  • 11. Cubrir la muestra con safranina, yesperar que transcurra 1 minuto. Escurrir y enjuagar.
  • 12. Dejar secar la muestra. Agregar una gota de aceite deinmersión y observar en el microscopio a 100x.
  • 13. En nuestra muestra seobservaron levaduras en destrucción.
  • 14. Se observaron bacilos Se identificaron bacilos Gram –Gram + en la muestra de En el campo se logran observar otro equipo. extractos del medio de cultivo de donde obtuvimos la muestra.
  • 15. Levadurasen etapa de destrucción.
  • 16. El tamaño de las bacterias dificulta su visión al microscopio, por eso latinción de estas en la microbiología es un apartado sumamente trascendente.La técnica de tinción tiene como finalidad crear un contraste entre la célula y elmedio que la rodea, y una de las más importantes, tanto por su aplicaciónclínica para hacer una identificación preliminar de la bacteria causal de lainfección y por su practicidad, es la tinción de Gram. Es por eso que estatécnica se vuelve fundamental en el estudio de la microbiología, y elconocimiento de su correcta realización es prácticamente obligatorio para todoaquel que se encuentra en el aprendizaje las ciencias médicas. El estudio de laliteratura acerca de la tinción de Gram nos permite tener un preámbulo parapoder diferenciar frente al microscopio los diferentes tipos de microorganismos,.Sin embargo, no hay que pasar por alto que es de suma importancia tener uncompleto estudio previo de los organismos y su reacción a la tinción para poderdar una respuesta certera ante el cuestionamiento de la naturaleza de unmicroorganismo.
  • 17. • Jawetz E., et al. “Microbiología Médica de Jawetz, Melnick y Adelberg”. Editorial Manual Moderno, 19a Ed. México 2008; 702-703.• Murray PR, et al. “Microbiología Médica”. Editorial Elsevier Mosby. 6a Ed. España 2009: 158-159.• Caldas A. L., “Guía de Microbiología y Parasitología básico clínica”. Disponible en: http://www.facultadsalud.unicauca.edu.co/Documento s2010/DptoMedInt/Tencion_de_gram.pdf.