Mª Elena Mansilla-INGEMM- Instituto de Genética Médica y Molecular. Hospital Universitario La Paz

1. Cariotipo fetal, FISH y QF-PCR:
limitaciones y precisión de la
técnica
Diploma en Medicina Fetal. 8 de Mayo
Mª Elena Mansilla-INGEMM- Instituto de Genética Médica y Molecular
Hospital Universitario La Paz – Madrid - Spain
Instituto de Genética
Médica y Molecular

2. “Intentaba estudiar los cromosomas humanos y de forma inesperada conté claramente que
las células del tejido en mi microscopio tenían 46 cromosomas, no 48 como se había pensado
durante tantos años”.
comienzo de la CITOGENETICA HUMANA
1956
El cromosoma humano fue observado por primera vez en 1879 por Arnold, a partir de células
tumorales
Cariotipo

3. CITOGENETICA HUMANA: se refiere al estudio de los cromosomas a través
del microscopio tras la aplicación de unas técnicas de bandeo, permitiendo la
identificación de anomalías en el número, de pérdidas y ganancias de material
cromosómico y de cambios de posición
CARIOTIPO: La ordenación de los cromosomas humanos según su tamaño y
posición del centrómero en grupos que van desde A al G y en pares que van
desde el par 1 al 22 más los cromosomas sexuales.
BANDAS G : Resultando un patrón de bandas claras y oscuras. Se utiliza para
estudios convencionales del cariotipo. Cuanto mayor es el nivel de bandas
mayor calidad del estudio. Giemsa, Seabright, 1971
Cariotipo

4. Cariotipo

5. Cariotipo

6. 5-10Mb
Cariotipo

7. EXISTE UN SISTEMA INTERNACIONAL DE NOMENCLATURA DE LOS CROMOSOMAS
ASI COMO DE TODAS LAS VARIANTES. 1978
Cariotipo

8. • Cariotipo convencional: “gold standard” nos
da la información de todos los cromosomas.
• Alteraciones numéricas
• Alteraciones estructurales aparentemente
equilibradas
• Alteraciones estructurales en desequilibrio
(pérdidas y/o ganancias de material
cromosómico)
Cariotipo

9. • Cariotipo convencional: “gold standard” nos
da la información de todos los cromosomas.
• Alteraciones numéricas
• Alteraciones estructurales aparentemente
equilibradas
• Alteraciones estructurales en desequilibrio
(pérdidas y/o ganancias de material
cromosómico)
Técnicas de Diagnóstico Prenatal: Cariotipo

10. 47,XY,+21

11. • Cariotipo convencional: “gold standard” nos
da la información de todos los cromosomas.
• Alteraciones numéricas
• Alteraciones estructurales aparentemente
equilibradas
• Alteraciones estructurales en desequilibrio
(pérdidas y/o ganancias de material
cromosómico)
Cariotipo

12. 46,XY,t(4;12)

13. • Cariotipo convencional: “gold standard” nos
da la información de todos los cromosomas.
• Alteraciones numéricas
• Alteraciones estructurales aparentemente
equilibradas
• Alteraciones estructurales en desequilibrio
(pérdidas y/o ganancias de material
cromosómico)
Cariotipo

14. 47,XX,+mar
Cariotipo

15. Cariotipo

16. INCONVENIENTES:
Nivel de resolución limitado (5-10Mb).
No permite identificar el origen cromosómico
(Técnicas adicionales FISH, MLPA, a-CGH)
Experiencia.
Tiempo que conlleva el cultivo celular (3-4s):
desarrollo de técnicas rápidas de cribado de
las aneuploidías más frecuentes (FISH, QF-
PCR).
Cariotipo

17. LA TECNOLOGIA DELA TECNOLOGIA DE ““HIBRIDACION IN SITUHIBRIDACION IN SITU
FLUORESCENTEFLUORESCENTE: BASADA EN LA DETECCION DE: BASADA EN LA DETECCION DE
SECUENCIAS ESPECIFICAS DE ADN TANTO ENSECUENCIAS ESPECIFICAS DE ADN TANTO EN
CROMOSOMAS COMO EN NUCLEOS INTERFASICOSCROMOSOMAS COMO EN NUCLEOS INTERFASICOS
CITOGENETICA MOLECULARCITOGENETICA MOLECULAR (1977)(1977) :: TTÉÉCNICASCNICAS
IDENTIFICAR DEFECTOS SUBMICROSCOPICOS DELIDENTIFICAR DEFECTOS SUBMICROSCOPICOS DEL
ADNADN
FISH

18. FISH

19. •• SONDAS DE SECUENCIA UNICASONDAS DE SECUENCIA UNICA:: detectan regionesdetectan regiones
especificas (regiones subtelomespecificas (regiones subtelomééricas,ricas,
microdelecciones)microdelecciones)
•• SONDAS CENTROMERICASSONDAS CENTROMERICAS:: son sondas alfa satson sondas alfa satéélitelite
que permiten la deteccique permiten la deteccióón de secuencias altamenten de secuencias altamente
repetitivas de las regiones centromrepetitivas de las regiones centromééricasricas
•• SONDAS PARA EL PINTADO DE CROMOSOMASSONDAS PARA EL PINTADO DE CROMOSOMAS
COMPLETOS (WCPCOMPLETOS (WCP):): detectan secuencias dedetectan secuencias de
eucromatina en determinados brazos o cromosomaseucromatina en determinados brazos o cromosomas
completoscompletos
FISH

21. • FISH:
• Núcleos interfásicos: 13,18,21 y sexuales
• Síndromes de
microdelección/microduplicación (22q11.2)
• Identificación y localización de material
cromosómico.
FISH

22. T 18
T 21
50 núcleos:
13,18,21,15,16,X e Y
Método directo, no requiere
cultivo celular.

23. • FISH:
• Núcleos interfásicos: 13,18,21 y sexuales
• Síndromes de
microdelección/microduplicación (22q11.2)
• Identificación de material cromosómico
FISH

24. FISH

25. FISH
MICRODUPLICACIÓN 22q11.2

26. • FISH:
• Núcleos interfásicos: 13,18,21 y sexuales
• Síndromes de
microdelección/microduplicación (22q11.2)
• Identificación de material cromosómico
FISH

27. FISH : Tetrasomia 15q11 q13
47,XX,+mar.ish(der15) (D15Z1++)(SNRPNx2)
15q11-13

28. INCONVENIENTES:
Número suficiente de núcleos (50)
Requiere metafases y por lo tanto un cultivo
celular.
Regiones específicas, no todos los
cromosomas
FISH

29. Quantitative fluorescent polymerase chain
reaction
Detección de aneuploidías (13, 18, 21, X e Y)
Corionicidad
Maternidad/Paternidad
Extracción de ADN de líquido amniótico y
biopsia corial sin cultivar
Hospital Universitario La Paz
Rapidez diagnóstica
QF-PCR

30. QF-PCR

31. QF-PCR: trisomía 21

32. Contaminación materna
Líquidos amnióticos hemáticos
Muestras de abortos tempranos
Reflejar siempre la contaminación
QF-PCR

33. Más robusta que el FISH para el diagnóstico
de las aneuploidías más frecuentes.
No Requiere un cultivo celular.
Contaminación materna (torunda)/
mosaicismos
QF-PCR

34. Conclusiones
Cariotipo: “gold standard”, permite ver todos
los cromosomas con resolución limitada,
alteraciones estructurales equilibradas.
FISH: identificación y localización de regiones
cromosómicas específicas.
QF-PCR: aneuploidías más frecuentes
Conclusiones