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    T.6 T.6 Presentation Transcript

    • TEMA 6. RECONOCIMIENTO DE ESTRUCTURASBACTERIANAS MEDIANTE TINCIONES SELECTIVAS 2°ENFERMERÍA MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA PROF. PATRICIA NARBÓN
    • Tinciones selectivas• Las tinciones selectivas nos permiten observar estructuras de lascélulas gracias a su mayor afinidad por los colorantes utilizados• Se pueden observar estructuras como la pared celular, cápsula,flagelos, material nuclear, e inclusiones como depósitos demateriales de reserva de poli-ß-hidroxibutirato, glucógeno ygránulos metacromáticos.
    • Observación de esporas• Algunas bacterias son capaces de desarrollar formas deresistencia denominadas esporas como mecanismo de defensa aagresiones ambientales. Son estructuras de pared gruesa en lasque el microorganismo logra soportar las condicionesdesfavorables de calor, desecación, acidez, etc. Cuando lascondiciones ambientales vuelven a ser favorables las esporas"germinan" y vuelven a generarse formas vegetativas.• Las endosporas son impermeables a los colorantes, por lo quecuando se hace una tinción, se observan al microscopio comocuerpos altamente refringentes y sin teñir. Sin embargo, lasendosporas se pueden teñir aplicando calor a la preparaciónpreviamente cubierta con una solución de colorante que en latécnica de Shaeffer y Fulton es el verde de malaquita. El lavadocon agua elimina este colorante de las células vegetativas y laaplicación de un colorante de contraste permitirá distinguirclaramente a las esporas de color verde.
    • La detección de esporas debe realizarse en cultivos concondiciones estresantes para la célula. Suelen utilizarsecultivos viejos en los que la escasez de nutrientes provocala esporulación de las bacterias.La presencia de esporas en el ámbito clínico nos dirigehacia los géneros Clostridium y Bacillus. Algunas esporas sedesarrollan sin deformar a la célula vegetativa. Otras si lohacen y generan según la disposición formas centrales oterminales (palillo de tambor). La posición relativa y lamorfología de la espora constituyen caracteres taxonómicosen las especies de ambos géneros.
    • POSICIÓN DE ENDOSPORAS EN LAS BACTERIASterminal subterminal central
    • Bacillus
    • Observación de cápsula•Algunas bacterias presentan una capa externa a lapared denominada cápsula. Está compuesta deazúcares y proteínas. No es una estructura vital parala bacteria, de modo que es posible que bajodeterminadas condiciones ambientales o del propiodesarrollo genere cápsula y bajo otras no lo haga. Seha comprobado que la presencia de cápsula dificultade algún modo la fagocitosis de las bacterias, es decirlas cápsulas constituyen un factor de virulencia de losmicroorganismos.
    • • La tinción de cápsula se denomina tinción negativa porque tiñe el fondo de la preparación y no el microorganismo. Desde el punto de vista formal no es una tinción propiamente dicha, porque no fija los microorganismos. Se parece más a una preparación en fresco. Su realización consiste en colocar la muestra húmeda sobre el porta objetos y mezclarla con tinta china. La tinta cubre toda la preparación a excepción de las cápsulas. En el microscopio se observa el fondo negro y los microorganismos con cápsula sin color.
    • Método de la tinta china para cápsula• 1.-En el centro de unportaobjetos se coloca una gotade agua, otra de tinta china y unpoco del cultivo de una cepacapsulada. Se mezclasuavemente sin extender.• 2.-Se coloca un cubreobjetossobre la suspensión y se presionasuavemente evitando que quedenburbujas.• 3.-Observar inmediatamente almicroscopio.• 4.-Desechar la preparación en unrecipiente con antiséptico.• La cápsula se observa como unagran estructura alrededor de lacélula delimitada por lospequeños fragmentos de carbónde la tinta china.
    • TINCIÓN FLAGELOS• Los flagelos pueden ser teñidos, pero debido a su diámetro tan pequeño, se requieren técnicas especiales.
    • • 1. Hacer un círculo en un portaobjetos perfectamente limpio para lo cual previamente fue sumergido en mezcla crómica durante 24 horas, lavado posteriormente con agua destilada, enjuagado con alcohol y secado con un trozo de tela limpio. Desengrasarlo pasando por una flama varias veces.• 2. Colocar dentro del círculo con pipeta Pasteur, una gotita de la suspensión bacteriana e inclinar el portaobjetos de uno y otro lado para extender la muestra.• 3. Fijar la preparación al aire ya que si esta operación se hace usando la flama del mechero se pueden destruir los flagelos.
    • • 4. Humedecer la preparación con el Colorante de Leifson y dejarla en reposo a temperatura ambiente durante 10 minutos en tiempo caluroso o en la incubadora.• 5. Lavar con agua corriente.• 6. Secar y observar con objetivo de inmersión.• INTERPRETACION:• · Los flagelos se tiñen bien de color rojo en aquellas bacterias que no presentan flagelos extremadamente delicados.
    • Otras técnicas de tinción• Colorante primario. Para-rosa anilina.• Mordiente. Acido tánico• Colorante de contraste. Azul de metileno
    • Vibrio cholerae
    • Proteus sp.