Inmunoterapia

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  • La naturaleza de la respuesta depende del tipo de antígeno: la proteína (y glicoproteína) induce usualmente tanto respuesta humoral como de memoria (células T-cooperadoras) después de múltiples dosis, evidenciada por una respuesta más rápida e intensa con enfrentamientos antigénicos repetidos. Puede por conjugación de polisacáridos acarreadores proteicos inducir una respuesta inmune más fuerte en niños más jóvenes, así como también memoria inmunológica
  • Las dosis vacunales deben ajustarse antes de su aplicación para asegurar un alto nivel de respuesta con una dosis más baja de antígeno inactivado. La ruta de administración: intradérmica, subcutánea, intramuscular, o mucosa, puede determinar la fuerza y naturaleza de la respuesta inmune. La administración en mucosas (intranasal u oral) estimula niveles más elevados de inmunidad (anticuerpo IgA), que pueden inhibir la transmisión de la enfermedad con mayor efectividad que la administración parenteral, que induce una respuesta limitada o nula. La inyección intramuscular debe administrarse en la parte anterior del muslo (infantes), o deltoides (niños mayores y adultos); la inyección en los glúteos produce una baja respuesta, probablemente debido a la liberación de la vacuna al tejido adiposo. El tiempo de administración de la dosis de vacuna es importante: un intervalo mínimo de un mes entre las primeras dosis. Los factores intrínsecos que afectan la respuesta inmune incluyen factores genéticos (polimorfismo del MHC ), edad, estado nutricional o de enfermedad (inmunodeficiencia o compromiso inmune), sexo, embarazo y tabaquismo. La edad es un factor importante en la respuesta a la inmunización. Con vacunas muertas, los recién nacidos generalmente no desarrollan una respuesta fuerte como los niños mayores, y con ciertas vacunas, la inmunización temprana puede resultar en respuesta más pobre o desarrollo de tolerancia. Para las vacunas vivas (y algunas muertas), la inhibición de la respuesta por anticuerpos maternos determina el tiempo óptimo para la vacunación en la niñez temprana. La respuesta a todas las vacunas disminuye según aumenta la edad.
  • Antes de la autorización para su uso, las vacunas son estudiadas primero en animales y subsecuentemente en un pequeño número de humanos para determinar la seguridad, inmunogenicidad, dosis y esquemas óptimos (ensayos de fase I y II). Los ensayos de fase III examinan la seguridad y eficacia en un número mayor de sujetos (1000 a 10000)(Cuadro 4). Los estudios de fase IV post-aprobación incluyen grandes números de vacunados y define mejor la frecuencia de eventos adversos infrecuentes.

Transcript

  • 1. INMUNOTERAPIAINMUNOTERAPIA Luz Esmeralda Murcia Urrego Bacterióloga Alexandra Galeano Gallego Bioquímica PROGRAMA DE ESPECIALIZACION EN MICROBIOLOGIA MEDICA PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
  • 2. INMUNOTERAPIA Es el tratamiento y cura de enfermedades mediante la manipulación, activación o estimulación del sistema inmune. Incluye todos los tratamientos dirigidos a potenciar la inmunidad frente a una enfermedad
  • 3. INMUNIZACIÓNLa inmunización es el proceso de inducir artificialmentela inmunidad o proporcionar protección de laenfermedad.•Inmunización activa: es el proceso de estimular alorganismo a producir anticuerpos y otras respuestasinmunes a través de la administración de una vacuna otoxoide.•Inmunización Pasiva: Transmisión rápida de resistenciasin esperar a que se ponga en marcha la respuestainmune activa.
  • 4. INMUNIZACION ESPECIFICA  VACUNACION  Administración de antígenos.  ANTICUERPOS MONOCLONALES CONJUGADOS  Administración de proteínas recombinantes con capacidad de unión al antígeno, usualmente unidas a fármacos, quimioterápicos, radioisótopos, etc. pero su uso aún no es estándar.
  • 5. INMUNOTERAPIA ESPECÍFICAEn el tratamiento de las enfermedadesalérgicas.Mediante pautas establecidas de exposición aconcentraciones crecientes de alérgenoConduce a una insensibilidad de los linfocitos Tespecíficos de alérgeno.Dichas células progresivamente dejan deproducir IL-4, IL-5 e IL-13 y pasan a producirelevados niveles de IL-10 IgE
  • 6. INMUNOTERAPIA ESPECÍFICA
  • 7. La alergia al veneno de abeja Veneno Fosfolipasa A2 (PLA2)Células T Péptidos Células B tolerancia al alérgeno
  • 8. INMUNOTERAPIA INESPECIFICA  BCG*: Produce una estimulación inespecífica del sistema retículo endotelial. Carcinomas de vejiga.  Citoquinas: disponibles en la actualidad por tecnología recombinante.  IFNα Leucemia mieloide crónica, leucemias de bajo grado, mielomas, melanomas etc.  IL-2: Hipernefromas.  NK Linfocitos del propio paciente estimulados in-vitro y re-infundidos. Melanomas. *Bacilo de Calmette-Guerin
  • 9. INMUNOTERAPIA ADOPTIVA Celular: Administración de células inmunitarias obtenidas del paciente o de un donante más o menos específicas frente a tumores.  NK Linfocitos del propio paciente estimulados in- vitro y re-infundidos. Melanomas.  LIT Linfocitos de tumor resecado  Transplante alogénico.Ingerto contra leucemia. Humoral: Administración de sueros o inmunoglobulinas de pacientes o animales inmunizados frente a un tumor
  • 10. COMPOSICION DE LAS VACUNAS  Microorganismos vivos atenuados o inactivados, o fracciones del mismo.  Líquido de suspensión, que pueden ser líquidos salinos o complejos que contienen constituyentes derivados de sistemas biológicos.  Preservadores, estabilizadores y antibióticos, usados para inhibir el crecimiento bacteriano en cultivos virales o el producto final o para estabilizar antígenos.   Adyuvantes, que aumentan la respuesta a los antígenos inactivados (aluminio, hidróxido o fosfato).
  • 11. VACUNAS  Inactivadas: Organismos completos inactivados por calor, formalina, u otros agentes. BCG, Polio  Antígenos purificados: Proteína purificada, antígenos polisacáridos de organismos completos y toxoides. Difteria  Producidos por organismos genéticamente alterados. Hepatitis B  Antígenos sintéticos: modificados químicamente, conjugados a proteínas acarreadoras. Péptidos
  • 12. VACUNASADN: logran que sea el propio huésped el quedesarrolle el antígeno contra el germen inyectado,ofreciendo así una protección eficazmente superiorfrente al patógeno que invade el organismo.Toxoides: Son toxinas bacterianas modificadasproducidas en cultivo bacteriano que han perdido sutoxicidad pero retienen habilidad para estimular laformación de antitoxina. Difteria TetanosCélulas muertas: La proteína que expresa suantigenicidad se encuentra inactiva, pero expresa laproteína que activa el anticuerpo. Tifoidea
  • 13. No. DE VIA Y SITIO DE ENFERMEDAD VACUNA DOSIS EDAD INTERVALO REFUERZO DOSIS APLICACION 0.05 a 0.1 Intradérmica ml. según Menores de un región Tuberculosis Antituberculosa BCG casa 1 No tiene No tiene año supraescapular productor izquierda a Recién nacido Cuatro 18 meses y 5 Poliomielitis Antipoliomielítica VOP 2 gotas 4 Oral 2,4,6 meses semanas años Intramuscular Recién nacido 2 Mínimo 4 región Hepatitis tipo b Antihepatitis B 1 ml. 3 No tiene y 6 meses semanas anterolateral del muslo 0.5 a 1 ml. según IntramuscularDifteria, Tosferina Mínimo 4 18 meses y 5 DPT casa 3 2, 4 y 6 meses profunda glúteo y Tétanos semanas años productor o muslo a Sarampión, 10 años, MEF Subcutánearubéola, paperas y Triple Viral (SRP) 0.5 ml. 1 Un Año No tiene en Post-parto brazorubéola congénita y Post-aborto 1a. dosis Inicial. 2a. dosis a las 4 semanas de la 1a.Tétanos neonatal Toxoide tetánico/diftérico MEF (10 A 49 3a. dosis a Intramuscular Una al 0.5 ml. 5 y difteria TT o Td años) los 6 meses brazo/glúteo Embarazo de la 2a. 4a. dosis al año de la 3a. 5a. dosis al año de la 4a. Neunonías y Meningitis por Contra Haemophilus mínimo 4 Intramuscular 0.5 ml. 3 2, 4 y 6 meses No requiere Haemophilus Influenzae Tipo B Hib semanas glúteoInfluenzae tipo b Mayores de 1 año, toda la población en áreas de alto y mediano riesgo. Subcutanea Fiebre Amarilla Antiamarílica 0.5 ml. 1 En áreas no Dosis Unica Cada 10 años brazo endémicas deben vacunarse los que van a a salir fuera del país
  • 14. VACUNAS DISPONIBLES PARA ENFERMEDADES INFECCIOSAS DE HUMANOSENFERMEDAD TIPO DE VACUNA EMPLEADAENFERMEDADES BACTERIANASDIFTERIA TOXOIDETETANOS TOXOIDETOSFERINA BACTERIAS MUERTAS (BORDETELLA PERTUSIS)FIEBRE TIFOIDEA BACTERIAS MUERTAS (SALMONELLA TYPHI)FIEBRE PARATIFOIDEA BACTERIAS MUERTAS (SALMONELLA PARATYPHI)COLERA CELULAS MUERTAS O EXTRACTOS DE CELULAS (VIBIRO CHOLERAE)PESTE CELULAS MUERTAS O EXTRACTOS DE CELULAS (YERSINIA PESTIS)TUBERCULOSIS CEPA ATENUADA DE MYCOBACTERIUM TUBERCULOSSIS (BCG)MENINGITIS POLISACARIDO PURIFICADO DE NEISSERIA MENINGITIDITISNEUMONIA BACTERIANA POLISACARIDO PURIFICADO DE STREPTOCOCCUS PNEUMONIAEFIEBRE TIFUS BACTERIAS MUERTAS (RTICKETTSIA PROWAZEKII)ENFERMEDADES VIRALESVIRUELA CEPA ATENUADA (VACCIMIA)FIEBRE AMARILLA CEPA ATENUADASARAMPION CEPA ATENUADAPAROTIDITIS CEPA ATENUADARUBEOLA CEPA ATENUADAPOLIO CEPA ATENUADA (SABIN) O VIRUS INACTIVO (SALK)INFLUENZA VIRUS INACTIVADORABIA VIRUS INACTIVADO (HUMANO) O VIRUS ATENUADO (PERROS Y OTROS ANIMALES)
  • 15. ENFERMEDAD VACUNA Existe actualmente una vacuna oral de bacterias vivas, atenuada por ingeniería genética, derivada del serotipo Inaba 569B.Cólera Tiene una eficacia del 67-100%. Debe administrarse con al menos una hora de ayuno previo y posterior a la vacunación.
  • 16. ENFERMEDAD VACUNA La aparición de la vacuna bacteriana a células enteras en la década del 50, combinada con las de difteria y tétanos, disminuyó en formaCoqueluche (tos espectacular la incidencia de laconvulsa) coqueluche. Actualmente, además de ésta, se ha desarrollado otra con menos efectos c
  • 17. ENFERMEDAD VACUNA El agente inmunizante es un toxoide diftérico obtenido de cultivos de Corynebacterium diphteriae productor de toxina, e inactivado con formol Difteria (asociado siempre con toxoide tetánico). Su eficacia es del 95% y es el único método de control de la infección
  • 18. ENFERMEDAD VACUNA A virus vivos atenuados, provoca una seroconversión del 95% entre los 7 y 21 días, lo que la convierte en una deFiebre amarilla las vacunas más eficaces. Se refuerza, si es necesario, cada 10 años (los certificados de vacunación internacionales, tienen esta validez).
  • 19. ENFERMEDAD VACUNA La vacuna a células enteras muertas, ya no se utiliza por sus efectos colaterales. Actualmente existen dos: una conFiebre tifoidea polisacáridos capsulares purificados (antígeno Vi), de administración parenteral; y Otra oral, que contiene una cepa mutante atenuada de S.typhi (Ty21a) En abril del 2001, se conoció el desarrollo de una vacuna conformada por un polisacárido capsular de la Salmonella typhi Vi, unido a la exotoxina A de otra bacteria, la Pseudomona aeruginosa recombinante no tóxica (denominada rEPA).
  • 20. ENFERMEDAD VACUNA La Organizacion Mundial de la Salud ha implementado una red de monitoreo de los virus gripales, en más de 80 países en todoGripe o el mundo; esto le permite indicar las cepasInfluenza de los virus en circulación para la preparación de las vacunas antigripales de la siguiente temporada, siendo asi más efectivas.
  • 21. ENFERMEDAD VACUNA Las primeras vacunas fueron elaboradas solamente con el polisacárido capsular purificado. estas no protegían adecuadamente a los menores de 2 años (los más susceptibles).Haemophilusinfluenzae b Las vacunas actuales utilizan este polisacárido (PRP) de la cápsula del bacilo, conjugado con una proteína transportadora ("carrier": toxoide tetánico, diftérico o de la membrana del meningococo). Se aplica en forma intramuscular.
  • 22. ENFERMEDAD VACUNA En 1976 fue aislada en Australia, una cepa del virus de hepatitis A, que condujo a la vacuna. En 1988, comenzaron los ensayosHepatitis A clínicos y su uso formal, se inició en 1991. Es una vacuna que contiene virus inactivados.
  • 23. ENFERMEDAD VACUNA Las vacunas actuales, logradas por Ingeniería Genética, son lo más efectivo como prevención: utilizan el antígeno de superficie del virus B (HBsAg) y seHepatitis B producen con ADN recombinante. El gen es insertado en una levadura que se reproduce conteniendo el HBsAg. Su cultivo y posterior purificación determina una vacuna altamente efectiva.
  • 24. VACUNA CONTRA LA HEPATITISB
  • 25. ENFERMEDAD VACUNA Las vacunas están constituidas por polisacáridos. Desde 1981 se dispone de una vacuna combinada para los serogrupos A, C, Y y W-135.A Meningococo No se aconseja su aplicación en forma masiva, a menos que existan riesgos ciertos de epidemia. Los títulos de anticuerpos obtenidos luego de la vacunación descienden rápidamente y debiera hacerse una revacunación al cabo de algunos años.
  • 26. ENFERMEDAD VACUNA Esta vacuna polivalente fue elaborada con antígenos polisacáridos purificados de la cápsula de 23 serotipos, responsables del 85 a 90% de las infecciones neumocóccicas. Provee además,A Neumococo protección cruzada con otros serotipos. Existe desde hace poco tiempo, una nueva presentación pediátrica, conteniendo siete serotipos, que puede usarse por debajo de los dos años.
  • 27. ENFERMEDAD VACUNA A virus vivos atenuados. En 1948 se produjo la primer vacuna a virus muertos, que luego de algunos años fuePaperas o desestimada porque generaba cortaParotiditis inmunidad. En 1967 se licenció en EE.UU.urliana la vacuna usada actualmente, conteniendo la cepa Jeryl Lynn, cultivada en embrión de pollo.
  • 28. ENFERMEDAD VACUNA PVO (Poliovirus Oral): a virus vivos atenuados de tipo I, II y III, cultivados en células de riñón de mono. Es conocida como Sabin oral, haciendo honor al apellido de quién la desarrolló, el Dr.Poliomielitis Albert Sabin. PVI (Poliovirus Inactivados): también incluye 3 tipos, pero los PV son cultivados en células diploides humanas o Vero, e inactivados con formalina.
  • 29. ENFERMEDAD VACUNA A virus vivos atenuados, se presenta en forma aislada o combinada con antiparotiditis y antisarampionosa. Ver (Triple viral).Rubeola Se comenzó a usar en 1969, con otras cepas distintas a la actual. La utilizada desde 1979 a la fecha, contiene la cepa RA 27/3, obtenida del cultivo de células diploides humanas.
  • 30. ENFERMEDAD VACUNA Es una vacuna a virus vivos atenuados. Se presenta sola o combinada con antirrubeólica y antiparotiditis (Triple viral). La presentación combinada sólo con antirrubeólica se denomina Doble viral.Sarampión Aplicada antes de las 72 horas posteriores a la exposición, previene la enfermedad. En la actualidad se está trabajando en una vacuna en aerosol.
  • 31. ENFERMEDAD VACUNA Agente inmunizante: está compuesta por toxoide tetánico inactivado con formol.Tétanos Esta vacuna, luego de su administración según calendario en la infancia, mantiene efecto protector durante 10 años.
  • 32. ENFERMEDAD VACUNA Es un liofilizado de bacterias vivas atenuadas, obtenidas de cultivo y atenuación de bacilos bovinos (Mycobacterium bovis), cuyo resultado final es la llamada BCG, por las primerasTuberculosis letras que identifican al Bacilo de Calmette-Guérin. En la actualidad hay varias líneas de trabajo en nuevas vacunas. Algunas derivadas de la BCG o combinadas; y otras aprovechando el descubrimiento del genoma del bacilo.
  • 33. ENFERMEDAD VACUNA A virus vivos atenuados, elaborada con una cepa atenuada (OKA) y cultivada en células humanas MRC-5.Varicela La vacuna se presenta liofilizada. Una vez diluida, debe ser aplicada dentro de los 30 minutos posteriores.
  • 34. VACUNAS DE NUEVA GENERACIÓNSe basa en la identificación de la proteína oproteínas de un agente infeccioso capaces deinducir una respuesta inmune protectiva deforma semejante a la que induciría el agenteinfeccioso completoMediante técnicas de ingeniería genética, sepueden seleccionar los genes correspondientesclonarlos y expresarlos en diferentes vectoreso eliminarlos mediante una delección selectiva.
  • 35. VACUNAS DE NUEVA GENERACIÓN
  • 36. PROTEÍNAS INACTIVADAS.Las técnicas moleculares más utilizadas para laobtención de grandes cantidades de proteínasantigénicas en la actualidad son:•La técnica de ADNrecombinante: Vacuna desubunidades.•La producción de proteínassintéticas: Vacunassintéticas.
  • 37. LA TÉCNICA DE ADN RECOMBINANTEUna vez conocida elfragmento de ADN y susecuencia, la proteína deinterés inmunológico, seaísla el fragmento de ADN(1), y se inserta en unplásmido (2). Este plásmidose introduce en un vectorde expresión (E. coli,Baculovirus) (3). Algunosaceptarán el gen yproducirán elrecombinante (4). Otros, lamayoría, no (5).
  • 38. MECANISMOS DE ACCION DE VACUNASVacunas vivas atenuadas Producen una respuesta inmunológica compleja simulando la infección natural. Variedad de antígenos. Es de larga duración, posiblemente de por vida. Puede ser inhibida por anticuerpos pasivos, ya sea por la adquisición transplacentaria de la madre o por recibir productos sanguíneos que contengan inmunoglobulinas
  • 39. MECANISMOS DE ACCION DE VACUNASVacunas de antígenos inactivados o purificados Inducen respuesta únicamente a aquellos componentes presentes en la vacuna. Generalmente, son necesarias dosis múltiples, usualmente tres o más, para inducir niveles de anticuerpos satisfactorios que persistan por periodos largos. Las dosis de refuerzo a intervalos más amplios (diez o más años) son necesarias para asegurar una protección duradera.
  • 40. VACUNAS ATENUADAS VACUNAS INACTIVADASEstimulación CD 4+ y CD 8+ Fundamentalmente CD 4+CITOCINAS (Interferón) Menos CITOCINASMENOR ANTÍGENO MAYOR ANTÍGENOMENOR ESTABILIDAD MAYOR ESTABILIDADALMACENAMIENTO ALMACENAMIENTOMENOS SEGURAS MÁS SEGURASADYUVANTES NO CRÍTICOS ADYUVANTES SON CRÍTICOS
  • 41. DETERMINANTES DE LA RESPUESTALos determinantes de la inmunogenicidad y respuesta a la vacuna, incluyen las características de la vacuna y del hospedero. Las dosis vacunales deben ajustarse antes de su aplicación. La ruta de administración. El tiempo de administración de la dosis de vacuna. Los factores intrínsecos genéticos (polimorfismo del MHC), edad, debilidad extrema, inmunosupresión, y algunas enfermedades crónicas, etc.
  • 42. Anticuerpos contra Tumores C.A Janeway et al. ImmunoBiology (1999)
  • 43. VACUNAS ETAPAS PRE CLINICA  Síntesis y estudios acelulares y celulares.  Propiedades físico-químicas.  Efectos sobre sistemas acelulares y celulares.  Toxicidad aguda  Dosis incrementadas.  DL50  DE50  Toxicidad subaguda y crónica  Efectos a largo plazo (Teratogénicos,mutagénicos, carcinogénicos)
  • 44. ENSAYO PRE-CLINICODE INMUNOGENICIDAD Ratones BALB/c Hembras 6-7 semanas 100 ratones
  • 45. INMUNIZACION Ag Inmunización primaria Inmunización secundaria Inmunización in vitro
  • 46. GRUPOS DE TRABAJONº Animales Freund Microesferas Montanide Control DDC 10 10 10 10 50ug 250ug 10 10 10 10 Polímero 10 10 10 10 50ug 250ug 10 10 10 10 SPf66 10 10 10 10 50ug 250ug 10 10 10 10
  • 47. ENSAYO Dormir con éter 5 minutos ENSAYOS CELULARESCriopreservación Sangría por punción ocular ELISPOTdel 80% en DMSO Pipeta Pasteur o capilares ENSAYOS HUMORALESCriopreservacióndel 10% en Trizol Disección y perfusión del bazo Citoquinas Citometría de Flujo Obtención de 108 Montaje de Esplenocitos aprox. RT-PCRensayos celulares con 10% Esplenocitos Linfoproliferación Citoquinas por ELISA
  • 48. ENSAYO PRE-CLINICO DE TOXICIDAD Nacimientos 1ºDosis 2º Dosis 1ºSacrificio 3º Dosis 2ºSacrificio Semanas 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 Meses 1 2 3 4 5 Pep1 Pep2 Pep3 control Animales: Ratones exogénicos ICR, 50%H / 50%M, 21 días de edad,1 Adyuvante A 20 20 20 20 8-12 grs de peso. - Cantidad necesaria : 40 (20H /2 Adyuvante B 20 20 20 20 20M) - Exclusión máxima : 10%3 AlOH 20 20 20 20 - Origen: I.N.S.4 ACF 20 20 20 20
  • 49. VACUNAS ETAPA CLINICAEvaluación del primer contacto del inmunoterápico en humanos.  Fase I: Reclutamiento de voluntarios sanos.  Dosis: DMT.  Toxicidad: TL.  Farmacocinética.  Fase II: Estimación de la actividad clínica de la droga.  Actividad.  Efectos sin comparativos.
  • 50. VACUNAS Fase III: Ensayo clínico comparativo.  Mejor o peor?  Aprobación. Fase IV: Evaluación de nuevas aplicaciones.  Dosis en ancianos, pacientes con falla renal  Farmacovigilancia.
  • 51. PROCESO, DESARROLLO Y APROBACIÓN DE NUEVAS VACUNAS ESTUDIOS CONTROL PRECLÍNICOS FASES DE LA INVESTIGACIÓN CLÍNICA NACIONAL DE APROBADO DE SALUD LABORATORIO PRODUCTO Y EN ANIMALES FASE I FASE II FASE IIINUMERO DE VIGILANCIA DE 10-100 100-300 300-3000INDIVIDUOS INOCUIDAD ENINOCUIDAD EL CAMPO REVELA REVELA REVELA EVENTOS DE EVENTOS DE EVENTOS DE REVISIÓN DE FABRICACION REACCIONES ALTA FRECUENCIA BAJA LOS ESTUDIOS INFORME DEL INFORME DEL EN GRANINDESEABLES EVALUAR FRECUENCIA MODERADA FRECUENCIA PRODUCTOR DEL PRODUCTOR ESCALA INOCUIDAD Y PRODUCTO Y A LA A LA ACTIVIDAD LÍMITES DE LIMITES DE DE LA AUTORIDAD AUTORIDAD POTENCIA BIOLÓGICA EN CONFIANZA CONFIANZA DOCUMENTACI DISTRIBUCION NACIONAL DE NACIONAL DE ANIMALES DE AMPLIOS ESTRECHOS ÓN SALUD CORRELA- SALUD LABORATORIO PRESENTADA----------- ------------ ----------- CIONES PARA EL POTENCIA - REGISTRO PROPORCIONA EFICACIA EDUCACION DE PROPORCIONA LA MAYORIA DE AUTORIDAD USUARIOS EFICACIA DATOS LOS DATOS MÍNIMOS CRÍTICOS
  • 52. INMUNIZACION ESPECIFICA  VACUNACION  Administración de antígenos.  ANTICUERPOS MONOCLONALES CONJUGADOS  Administración de proteínas recombinantes con capacidad de unión al antígeno, usualmente unidas a fármacos, quimioterápicos, radioisótopos, etc. pero su uso aún no es estándar.
  • 53. ANTICUERPOSMONOCLONALESCultivo continuo de células fusionadassecretoras de anticuerpos con especificidadpredefinida. Köhler, G. Milstein,C. Nature 256 :1 495-7. 1975
  • 54. APLICACIONES MOLECULAS ASOCIADAS A SUPERFICIE  Diagnostico de infecciones.  Diagnóstico e inmunolocalización de tumores.  Determinación de tipos celulares. MOLECULAS SOLUBLES  Determinación y/o cuantificación de proteínas, hormonas, enzimas medicamentos y drogas entre otros.
  • 55. Ingeniería de Anticuerpos♦ Antecedentes♦ Expresión y Presentación de Anticuerpos♦ Clonación del Repertorio de Anticuerpos♦ Ingeniería de Anticuerpos♦ Perspectivas
  • 56. ADN RECOMBINANTERestrictasas Aislamiento de Genes Clonados S. Linn, W. Arber. PNAS 59: 1300-1306 (1968)
  • 57. Ciclo de vida del Fago λ F.R. Blattner et al. Gene, 2: 95-113 (1977) H. Lodish et al. Molecular Cell Biology, W.H. Feeman Ed. (1999)
  • 58. GENES QUE CODIFICAN LAMOLECULA DE Ac
  • 59. ANTICUERPOS QUIMERICOS
  • 60. ANTICUERPOS HUMANIZADOS
  • 61. Humanización de AnticuerposG.L. Boulianne et al. Nature 312: 643-646 (1984)P.T. Jones et al. Nature 321: 522-525 (1986)
  • 62. CONSTRUCTOS DE ANTICUERPOS RECOMBINANTES
  • 63. Constructos de Anticuerpos Recombinantes
  • 64. Expresión y Presentación de Anticuerpos Expresión de Anticuerpos Sistemas de Presentación
  • 65. Expresión enE. coliExpresión de Fragmentos Fab VH - CH -S-S- CL - VLExpresión de Fragmentos scFV VH (Gly4Ser)3 VL M. Better, et al. Science 240: 1041-1043 (1988) A. Skerra, A. Pluckthun. Science 240: 1038-1041 (1988)
  • 66. SISTEMAS DE EXPRESIONExpresión en HongosExpresión en Levaduras Expresión en Células COSExpresión en Células CHOExpresión en Animales transgénicos
  • 67. Expresión en PlantasProducción a bajo costoProducción a gran escalaCorrecto ensamblajeSeguridadMenor costo de capitalización R.T. Fraley et al. PNAS 80: 4803-4807 (1983) J.W. Larrick et al. Res. Immunol. 149: 603-608 (1998)
  • 68. PLANTIBODIES A. Hiatt et al. Nature 342: 76-78 (1989)
  • 69. Expresión y Presentación de Anticuerpos Expresión de Anticuerpos Sistemas de Presentación
  • 70. Presentación en Fagos G.P. Smith, Science 228: 1315-1317 (1985) J. McCafferty et al. Nature 348: 552-554 (1990)
  • 71. Plasmid with DNA insert
  • 72. Presentación en Fagos H. de Haard et al. Advance Drug Delivery Reviews 31: 5-31 (1998)
  • 73. Imitando al Sistema Inmune !
  • 74. RESUMIENDOLos genes de anticuerpos se pueden clonar y expresar en diferentes sistemasPresentación en Fagos: sistema efectivo para obtención de Fragmentos de Anticuerpos
  • 75. Para recordar…..Anticuerpos Monoclonales MurinosAnticuerpos QuiméricosAnticuerpos HumanizadosAnticuerpos de Librerías de FagosAnticuerpos Transgénicos
  • 76. Perspectivas
  • 77. AcMo anti - β tubulina
  • 78. AcMo anti-FNTα
  • 79. INTRABODIES
  • 80. GRACIAS