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BIOLOGIA MOLECULAR PARA
PROFESIONALES DE LA SALUD II
Luz Esmeralda Murcia Urrego
Bacterióloga Esp. Administración en salud
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Estructura celular, organelos y funciones.
Estructura del ADN y ARN.
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Pendientes
• Telómeros. Telomerasa, ARN.

Diskeratosis congénita, síndromes mielodisplásicos, histiocitosis.
Neuroblastoma...
Pendientes
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Secuencia de ADN contenida en los
cromosomas del núcleolo que
codifica ARN ribosomal, muy...
MUTACIONES MOLECULARES
• Silenciosas
• Neutra
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missense (cancer
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Programas para biomodelos
• Jmol, Chime, RasMol.
• http://www.biorom.uma.es/contenido/bi
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- Vector (plásmido)
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Variaciones de la PCR RT-PCR
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Variaciones de la PCR
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VISUALIZACION DEL AMPLIFICADO
VISUALIZACION DEL AMPLIFICADO
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Amplificación isotérmica
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Detección por bioluminiscencia
OTRAS
• NASBA (Nucleic Acid Sequence Based
Amplification) 3SR.
SECUENCIACION DE ACIDOS
NUCLEICOS
SECUENCIACION
• Determinación de la
secuencia de nucleótidos
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SECUENCIACION
• Di-deoxi-nucleótidos
• http://www.youtube.com/watch?v=fNIG
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• Pirosecuenciación
• http://www.youtub...
REFERENCIAS ADICIONALES
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http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/PCR/Aplicaciones-PCRAmplificacion%20de%20acidos%20nu...
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Continuación de la primera parte. Métodos de amplificación de ácidos nucleicos, detección, visualización,

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  1. 1. BIOLOGIA MOLECULAR PARA PROFESIONALES DE LA SALUD II Luz Esmeralda Murcia Urrego Bacterióloga Esp. Administración en salud
  2. 2. Retomando… • • • • • • • Estructura celular, organelos y funciones. Estructura del ADN y ARN. Replicación . Transcripción. Traducción. Postraducción. Técnicas: electroforésis y PCR.
  3. 3. Pendientes • Telómeros. Telomerasa, ARN. Diskeratosis congénita, síndromes mielodisplásicos, histiocitosis. Neuroblastoma.
  4. 4. Pendientes • ADN ribosomal ADNr. Secuencia de ADN contenida en los cromosomas del núcleolo que codifica ARN ribosomal, muy utilizado en estudios filogenéticos por su bajo porlimorfismo genético.
  5. 5. MUTACIONES MOLECULARES • Silenciosas • Neutra • Cambio de sentido o missense (cancer colorectal) • Sin sentido o non sense (Talasemia) • Adición deleción o frame shift (Fibrosis quistica) • AGG x CGG (Arg) • AAA x AGA (Lys – Arg) • UCA x UUA (Ser – Leu) • AGA x STOP • AGA TCT AGG GAA • AGA TCC TAG GGA AT… • AGA TTA GGG AAT
  6. 6. Programas para biomodelos • Jmol, Chime, RasMol. • http://www.biorom.uma.es/contenido/bi omodel/model1j/dna/inicio.htm
  7. 7. AMPLIFICACION DE ACIDOS NUCLEICOS
  8. 8. Clonado ADN • • - - ADN - Vector (plásmido) Ligación (ADN ligasa) Inserción (Transformación o transfección). - Propagación (selección, miniprep) - Purificación
  9. 9. AMPLIFICACION DE ACIDOS NUCLEICOS IN VITRO • Amplificación del ADN diana. Reacción en cadena de la polimerasa (PCR), la autorreplicación de la secuencia (3SR) y la amplificación por desplazamiento de la hebra (SDA). • Amplificación de la sonda, que incluye la replicasa Qß o la reacción en cadena de la ligasa (LCR). • Amplificación de la señal, en los cuales la señal generada por cada sonda es aumentada.
  10. 10. Variaciones de la PCR RT-PCR • RT-PCR http://www.biorom.uma.es/contenido/U IB/pcresp/index.html • Q-PCR http://www.youtube.com/watch?v=e74Y YdSHraY
  11. 11. Variaciones de la PCR PCR DESCRIPCCION PCR anidada A partir de un amplicón se aplican nuevos primes. Aumenta la sensibilidad. PCR de extensión solapada Cambios de secuencia introducidos dentro de fragmentos (clonados) de ADN. 4 primers con productos de ADN mutado solapados. PCR in situ En portaobjetos sobre tejido o células. Se hace amplificación del ADN e hibridación in situ. PCR múltiple Amplificación simultánea de más de una secuencia. RT-PCR ARN es el molde inicial y la enzima es transcriptasa inversa que forma cADN. Q -PCR Cuantifica ADN o ARN en tiempo real. Se detecta basándose en fluorocromos o sondas. Otras e-PCR, AFLP, Colonia, Asimétrica, Específica de alelo, Hot start, ISSR, Touchdown, Tail, MLPA, Inversa.
  12. 12. VISUALIZACION DEL AMPLIFICADO
  13. 13. VISUALIZACION DEL AMPLIFICADO • Electroforésis de agarosa. • Southern blot
  14. 14. VISUALIZACION DEL AMPLIFICADO • Hibridación en micro placas de ELISA.
  15. 15. Amplificación isotérmica de ácidos nucleicos LAMP “Sistema que utiliza una polimerasa con alta actividad de desplazamiento de cadena (Bst) y un sistema de dos cebadores internos y dos cebadores externos para reconocer un total de seis secuencias distintas en el ADN blanco” -producción material inicial -Ciclos de amplificación y elongación. -Reciclaje.
  16. 16. LAMP
  17. 17. Detección por bioluminiscencia
  18. 18. OTRAS • NASBA (Nucleic Acid Sequence Based Amplification) 3SR.
  19. 19. SECUENCIACION DE ACIDOS NUCLEICOS
  20. 20. SECUENCIACION • Determinación de la secuencia de nucleótidos de una molécula específica. • -Método químico • -Método enzimático • Detección de mutaciones, aplicaciones forenses, ADN fósiles, diagnóstico de enfermedades.
  21. 21. SECUENCIACION • Di-deoxi-nucleótidos • http://www.youtube.com/watch?v=fNIG 2KROxYA • Pirosecuenciación • http://www.youtube.com/watch?v=a0qB RjwGAbE
  22. 22. REFERENCIAS ADICIONALES • http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/PCR/Aplicaciones-PCRAmplificacion%20de%20acidos%20nucleicos%20in%20vitro.pdf • http://www.fiiaiafp.com/neo_2012/pdf/presentaciones/Sesion%20Paralela%208%20Los %20peligros%20en%20alimentacion/Deteccion%20Molecular%20de%20p atogenos%20por%20amplificacion%20isotermica%20Alejandro%20Rojas. pdf • http://www.scielo.cl/scielo.php?pid=S071610182002000100003&script=sci_arttext
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