La microscopía confocal permite estudiar muestras tridimensionales mediante la detección de luz emitida por moléculas fluorescentes en un solo plano. Se usa principalmente para estudiar células, tejidos y embriones vivos a lo largo del tiempo, obteniendo películas que muestran el comportamiento de sistemas biológicos bajo tratamientos. Proporciona imágenes de mejor calidad que otros microscopios al enfocar la luz solo en un plano y eliminar la luz de planos fuera de foco.
2. DEFINICIÓN.
La característica principal
de la microscopía confocal
es que recoge y detecta la
luz emitida por moléculas
flourescentes situadas en
un mismo plano del espacio
tridimensional.
En la imagen se muestra
la figuta de las células
HeLa visto a través de
dicho miscroscopio.
3. USO DE LA MICROSCOPÍA
CONFOCAL.
Para la ciencia supone un gran apoyo
ya que posibilita un estudio
tridimensional de las muestras,
incluyendo su interior, y permitiendo, en
determinados materiales, la obteción
de imágenes de su superficie mediante
la reflexión de la luz.
4. APLICACIÓN DEL
MICROSCOPIO CONFOCAL.
La principal aplicación de dicho elemento es para el estudio de muestras ‘’in vivo’’, como
células, tejidos animales y vegetales, embriones de insectos, algas, etc, a lo largo de una
secuencia temporal. De ésta forma se obtiene una película en la que se monitoriza el
comportamiento de un sistema o estructura biológicos a los que se haya aplicado algún
tratamiento a lo largo del tiempo.
Empleando ésta técnica también se puede determinar si dos moléculas están en una
localización subcelular concreta, mediante una técnica denominada FRET ( Transferencia
resonante entre moléculas flourescentes) , o si difunden de un comportamiento subcelular a otro
( como la técinca denominada FRAP – Recuperación de la flourescencia después de
photobleaching - ).
Además, si el microscopio está equipado con un sistema de detección espectral, también se
puede calcular en qué lugar del espectro de la luz emiten los fluorocromos y minimizar o incluso
eliminar los problemas de cruce de señal entre distintos colorantes que presentan una distinta
emisión muy cercana en el espectro.
5. ¿CÓMO FUNCIONA?
El funcionamiento de tal es similar a uno de
epiflouresciencia. La diferencia entre ambos
radican en que el segundo carece del ‘’diafragma
de detección confocal’’ y utiliza una lámpara de
mercurio como fuente de iluminación. Dicha
lámpara tiene una potencia muy irregular, con
diferentes picos de intensidad, que se podría
definir como una combinación de diversas
radiaciones monocromáticas. Por ello, proporciona
imágenes de peor calidad, que muestran la
información de todos los planos de la muestra,
enfocados o no.
