La vita dal mare

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La vita dal mare

  1. 1. LA VITA DAL MARE<br />Analisi microbiologiche<br />Su alimenti e acque marine<br />PON 2011<br />ITAS ELENA SAVOIA<br />Esperto Prof.ssa LiliaAndriani Tutor Prof. Giacomo Sollecito<br />
  2. 2. Analisi Microbiologiche<br />sulle acque di Balneazione<br />Membrane Filtranti (MF) per concentrazione, mediante filtrazione di aliquote su membrana con pori di 0,22 – 0,44 m. <br />La membrana viene posta successivamente su agar (m-Enterococcus Agar (detto anche Slanetz-Bartley).<br />Il terreno contiene azide come inibente e TTC (TrifenilTetrazolio Cloruro) come differenziale (produzione di precipitato insolubile che conferisce colore rosso-rosa alle colonie).<br />
  3. 3.
  4. 4. LA BALNEAZIONE<br />Requisiti qualità acque di balneazione - anno 2009 (allegato 1 al DPR)<br />Su ogni punto di controllo è prevista la determinazione di parametri fisici, chimici e microbiologici indicatori di contaminazione.<br />D. Lgs. n.116/2008<br />REQUISITI E CRITERI DI VALUTAZIONE DELLA QUALITA’ ACQUE COSTIERE<br />(*) basato sulla valutazione del 95° percentile<br />(**) basato sulla valutazione del 90° percentile<br />
  5. 5. Analisi Microbiologiche<br />su molluschi bivalvi<br />Il D.L.svo 530/92 prevede la ricerca dei metalli mercurio e piombo oltre alla ricerca di coliformi totali o di Escherichia Coli.<br />Reg. CE 2075/05<br />E.coli <230 MPN/100 g<br />Salmonella assenza in 25 g<br />
  6. 6. Analisi microbiologiche<br />Diluizione del campione<br />SOLIDO O LIQUIDO<br />
  7. 7. ANALISI SU MOLLUSCHI BIVALVI<br />I molluschi vengono puliti , lavati con acqua e sciacquati con acqua distillata sterile. <br />Successivamente vengono aperti sterilmente in numero adeguato ad ottenere circa 100 g di polpa e liquido intravalvare.<br />Omogeneizzatore a lame rotanti produce una completa frammentazione e miscelazione del campione <br />
  8. 8. PLATE COUNT AGAR STANDARD (PCA)<br />Substrato per la numerazione dei microrganismi totali negli alimenti<br />Conta microbica totale<br />A 37°<br />
  9. 9. MPN enteroCOCCHI FECALI<br />AZIDE DEXTROSE BROTH<br />Terreno selettivo per la determinazione presuntiva degli streptococchi fecali nelle acque<br />ETHYL VIOLET AZIDE BROTH<br />Terreno liquido selettivo per confermare la presenza degli streptococchi fecali<br />
  10. 10. Determinazione degli Enterococchi con il metodo MPN<br />L'intero procedimento prevede due stadi: <br />il test presuntivo viene effettuato in provette di Brodo Azide destrosio (positive con intorbidamento)<br />la conferma in provette di EVA (EthylViolet Azide Broth): positive con intorbidamento e precipitato violetto.<br />Azide ed etil violetto sono inibenti per i GRAM- e cocchi GRAM+ diversi dagli enterococchi<br />Terreno crescita terreno crescita<br />base base<br />Brodo Azide<br />Brodo EVA<br />
  11. 11. MPN COLIFORMI totali e FECALI<br />BRODO LATTOSATO<br />Terreno liquido per la ricerca presuntiva e la conferma dei coliformi<br />BRILLIANT GREEN AGAR<br />Terreno selettivo per l’isolamento di Salmonella, e coliformi fecali da acqua ed altri prodotti alimentari.<br />
  12. 12. Prova presuntiva per coliformi totali<br /> <br />Brodo lattosio in provette da 9 ml. <br />Inoculare 3 – 5 serie di tubi con le opportune diluizioni del campione<br />Incubare per 24 ore  2 a 35°C 0,5.<br />Lettura: tubi positivi con intorbidamento (crescita) e gas (fermentazione del lattosio);<br />tubi negativi limpidi o senza gas (reincubare per 24 ore) <br />Prova confermativa per coliformi totali<br /> <br />Brodo lattosio verde brillante bilein provette da 9 ml. <br />Trasferire 1 ml da ciascun tubo positivo in un tubo di BLVBB<br />Incubare per 24 ore  2 a 35°C  0,5.<br />Lettura: tubi positivi con intorbidamento (crescita) e gas (fermentazione del lattosio);<br />tubi negativi limpidi o senza gas (reincubare per 24 ore)<br />Prova confermativa per coliformi fecali<br />EC brothoppure brodo lattosio verde brillante bile (BLVBB) tubi da 9 ml<br />Trasferire 1 ml da ciascun tubo positivo di Brodo lauryl-solfato<br />Incubare per 24 ore  2 a 44,5°C.<br />Lettura: tubi positivi con intorbidamento (crescita) e gas (fermentazione del lattosio);<br />tubi negativi limpidi o senza gas (reincubare per 24 ore) <br />E. coli produce indolodaltriptofano a 44°C<br />
  13. 13. TEST DI SCREENING PER GRAM –<br />Il test preliminare è quello della citocromo-ossidasi, per differenziare le Enterobacteriaceae (-) dalle non Enterobacteriaceae (+).<br />Positivo: BLU<br />Vibrionaceaee Pseudomonadaceae<br />Negativo: ROSA<br />Enterobacteriaceae<br /> <br />
  14. 14. LA VITA DAL MARE<br />fine<br />PON 2011<br />ITAS ELENA SAVOIA<br />

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