Clase2 Cultivos fungicos y respuesta inmunitaria frente a hongos patógenos.

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Cultivos fúngicos y Respuesta inmunitaria frente a Hongos patógenos.

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Clase2 Cultivos fungicos y respuesta inmunitaria frente a hongos patógenos.

  1. 1. Universidad Nacional Experimental Francisco de Miranda Área: Ciencias de la Salud Unidad Curricular: Microbiología II Profesor: Licdo. Jesus A. Nuñez P. Biólogo. MSc. Santa Ana de Coro, mayo 2014 E-mail: janp.bio@gmail.com PRACTICA NÚMERO 1: CULTIVOS FÚNGICOS
  2. 2. carbohidratoscarbohidratos ProteínasProteínas LípidosLípidos AminoácidosAminoácidos
  3. 3. Su finalidadSu finalidad Medios deMedios de aislamientoaislamiento MediosMedios selectivosselectivos selectivosselectivos diferencialesdiferenciales Utilizados para elUtilizados para el aislamiento de levaislamiento de lev agotamientoagotamiento Permiten la recuperaciónPermiten la recuperación de un hongo en especificode un hongo en especifico con inhibición de otrocon inhibición de otro Adición de ciloheximidaAdición de ciloheximida inhibe alinhibe al AspergillusAspergillus (hongo contaminante)(hongo contaminante) Son aquellos conSon aquellos con adición de un indicadoradición de un indicador Los medios utilizados en Micología contiene nutrientes suficientes paraLos medios utilizados en Micología contiene nutrientes suficientes para asegurar el desarrollo de hongos .asegurar el desarrollo de hongos . pH ligeramente acido facilita crecimiento de hongos e inhibe a otros M.O.pH ligeramente acido facilita crecimiento de hongos e inhibe a otros M.O.
  4. 4. ENTRE LOS MEDIOS MAS USADOS ENENTRE LOS MEDIOS MAS USADOS EN MICOLOGIA TENEMOS:MICOLOGIA TENEMOS: ENTRE LOS MEDIOS MAS USADOS ENENTRE LOS MEDIOS MAS USADOS EN MICOLOGIA TENEMOS:MICOLOGIA TENEMOS: MEDIOMEDIO SABOURAUDSABOURAUD DEXTROSADEXTROSA MEDIOMEDIO SABOURAUDSABOURAUD DEXTROSADEXTROSA Contiene 2% de glucosaContiene 2% de glucosa Ligeramente acidoLigeramente acido Mantiene una amplia variedad de hongosMantiene una amplia variedad de hongos No es un medio ideal para estudiar laNo es un medio ideal para estudiar la esporulaciónesporulación Indistintamente se utiliza en placas o tubos y seIndistintamente se utiliza en placas o tubos y se les puede incorporar antibióticos (gentamicina yles puede incorporar antibióticos (gentamicina y cloranfenicol)cloranfenicol) Contiene 2% de glucosaContiene 2% de glucosa Ligeramente acidoLigeramente acido Mantiene una amplia variedad de hongosMantiene una amplia variedad de hongos No es un medio ideal para estudiar laNo es un medio ideal para estudiar la esporulaciónesporulación Indistintamente se utiliza en placas o tubos y seIndistintamente se utiliza en placas o tubos y se les puede incorporar antibióticos (gentamicina yles puede incorporar antibióticos (gentamicina y cloranfenicol)cloranfenicol)
  5. 5. AGARAGAR LACTRIMEL DELACTRIMEL DE BORELLIBORELLI  Se emplea para la producción deSe emplea para la producción de pigmentos y la esporulación de lapigmentos y la esporulación de la mayoría de los dermatofitosmayoría de los dermatofitos Contiene: harina de trigo, lecheContiene: harina de trigo, leche descremada en polvo, miel y ATB.descremada en polvo, miel y ATB. Pueden cultivarse en tubos oPueden cultivarse en tubos o placas. Placas mayor superficie peroplacas. Placas mayor superficie pero mayor riesgo de contaminación.mayor riesgo de contaminación.
  6. 6. CONSIDERACIONESCONSIDERACIONES Si la muestra procede de zonas presuntamente contaminadas RECOMENDABLERECOMENDABLE colocar en medios básicos sustancias inhibitorias Manipular los tubos y placas con BIOSEGURIDAD? Crecimiento de hongosCrecimiento de hongos patógenospatógenos Condiciones de incubación Hongos miceliales (Temp. Amb) y Levaduras (2-4 dias)
  7. 7. Características Macroscópicas Características Microscópicas TÉCNICAS DE IDENTIFICACIÓNTÉCNICAS DE IDENTIFICACIÓN COLOR TAMAÑO DE LA COLONIA ASPECTO HONGO FILAMENTOSO / LEVADURIFORME Aterciopelada, algodonosa, pulverulenta /cremosa HIFAS SEPTADAS ASEPTADAS PRODUCCIÓN TAMAÑO DISPOSICIÓN DE LAS CONIDIAS HONGO FILAMENTOSO / LEVADURIFORME OBSERVACIÓN DE BLASTOCONIDIAS, SEUDOHIFAS Y CLAMIDOSPORAS
  8. 8. Preparación en fresco Que se necesita?Que se necesita? Un cultivo con colonia aislada Asa de siembra Azul de Lactofenol Porta y cubreobjetos  Esterilizo el asa de siembra frente al mechero Selecciono la colonia (superficie) Coloco en portaobjetos Coloco cubreobjetos Observo 40X. BLASTOCONIDIAS, SEUDOHIFAS Y CLAMIDOSPORAS
  9. 9. PRUEBAS DIAGNÓSTICAS DE LABORATORIO Citología Cultivo Examen microscópico Pruebas cutáneas
  10. 10. MECANISMOS DE DEFENSA FRENTE A HONGOS PATOGENOS
  11. 11. INMUNIDAD Protección contra enfermedad, específicamente infecciosa. Capacidad del organismo para combatir de forma específica la enfermedad infecciosa. Sustancias extrañas (Ag) M. O. Proteínas Polisacáridos SISTEMA INMUNITARIO Formado por células y moléculas responsables de la inmunidad. RESPUESTA INMUNE Consecuencia fisiológica o patológica.
  12. 12. Barrera cutánea Moco Cilios respiratorios Acido gástrico  Antagonismo bacteriano Lágrimas  Reacción inflamatoria Sistema de complemento  TIPOS DE RESPUESTA INMUNITARIA Acción de los linfocitos T (CD4+) Citoquinas: (IL-1…..10),TNF, IFN Acción de los linfocitos B Anticuerpos (Inmunoglobulinas) INMUNIDAD NATURAL (Inespecífica) INMUNIDAD ADQUIRIDA (Especifica)
  13. 13. MECANISMOS DE RESISTENCIA NATURAL A HONGOS PATÓGENOS Barreras físicas, mecánicas y químicas
  14. 14. Transferrina/Metaloproteina DEFENSA QUÍMICA Histoplasma capsulatum Candida albicansCryptococcus neoformans
  15. 15. Mecanismos de resistencia celular EVASIÓN DE BARRERAS MECÁNICAS, FÍSICAS Y QUÍMICAS Defensas celulares comienzan a actuar Leucocitos polimorfonucleares (PMNL) Macrófagos Monocitos FAGOCÍTICAS PROFESIONALES CÉLULAS EFECTORAS NO FAGOCÍTICAS Asesinas naturales (NK)
  16. 16. TNF, IL2 RESPUESTA INMUNITARIA CD4+ IL-12: IL-4
  17. 17. 1 . Capacidad de Adherencia a los tejidos (adhesinas) 2 . Penetración y multiplicación en los tejidos:  Enzimas Proteolíticas: Proteasas, Lipasas, Fosfolipasas.  Tropismo Celular.  Capacidad de Multiplicarse a 37 ºC (dimorfismo) FACTORES DEPENDIENTES DEL HONGO
  18. 18. Agente Enfermedad Factor de virulencia Efecto Aspergillus sp. Aspergilosis hidrofobinas Inhibición de la fagocitosis Aspergillus sp. Aspergilosis pulmonar Gliotoxina Alteran el movimiento ciliar y lesionan el epitelio de vías respiratorias altas. Dermatofitos Tiñas Queratinasas Destrucción del estrato córneo Dermatofitos Ides Toxinas Hipersensibilidad Cryptococcus Criptococosis Cápsula Inhibición de respuesta inmune (impide migración de células de la inmunidad y propiedades antifagocíticas) Cryptococcus Criptococosis Producción de melanina Anti-oxidante, resistencia a anfotericina B Sporothrix spp. Esporotricosis linfangítica Producción de melanina Inhibe la fagocitosis por macrófagos. Mucorales Mucormicosis Ceto-reductasa Degradan los cuerpos cetónicos presentes en sangre, favoreciendo el crecimiento y diseminación del hongo. Malassezia spp. Pitiriasis versicolor hipocrómica Ácidos dicarboxílicos Inhibición de la tirosinasa y de la producción de melanina conllevando una menor protección contra los rayos UV y el establecimiento de agentes microbianos dañinos. Malassezia spp. Dermatitis seborréica Fosfolipasas Destrucción de los ácidos grasos esenciales en la piel causando sequedad Coccidioides spp. Coccidioidiomicosis Elastasas Destruyen las fibras elásticas de los tejidos. Algunos ejemplos de factores de virulencia estudiados en hongos
  19. 19. INMUNOMODULACIÓN DE LOS MECANISMOS DE DEFENSA DEL HUÉSPED Cápsula Biosíntesis de Melanina Producción de Toxinas Matriz extracelular cementante
  20. 20. FACTORES DEPENDIENTES DEL HUESPED
  21. 21. OTRAS: Carencias nutricionales Quemaduras Traumatismos extensos Irradiaciones Alcoholismo Toxicomanía Uso de prótesis Catéteres Tratamientos con: antibióticos, corticoesteroides, radioterapia, inmunosupresores Edades extremas ENFERMEDADES: oncohematológicas, hepáticas, renales, diabetes, infecciones virales Genéticos Hormonales Alteraciones Metabólicas Transplantes y deficiencias inmunes: HIV FACTORES DE SUSCEPTIBILIDAD DEL HUESPED
  22. 22. Onicomicosis. Micetoma. Queilitis Coccidioidomicosis.
  23. 23. INMUNODIAGNOSTICO DE LAS MICOSIS
  24. 24. Hipersensi. Tipo I Hipersensi. Tipo II Hipersensi. TipoIII Hipersensi. Tipo I Hipersensi. Tipo II Hipersensi. TipoIII RETARDADA Hipersensi. Tipo IV RETARDADA Hipersensi. Tipo IV INMUNODIAGNOSTICO DE LAS MICOSIS IDRIDR
  25. 25. INTRADERMOREACCIÓN Reacción de hipersensibilidad retardada Candidina Esporotriquina Histoplasmina Paracoccidioidina Coccidioidina 0.1 cc de antígenos fúngicos Vía intradermica 48 h INMUNIDAD CELULAR
  26. 26. Estudios Epidemiológicos Orientación Diagnóstica Seguimiento del curso de la enfermedad INMUNIDAD CELULAR
  27. 27. 1 1 2 2 2 3 3 3 4 4 4 5 5 5 666 1 Diagrama para Inmunodifusión Doble con sueros de referencia . 1,4: Suero control positivo para el antígeno a evaluar. 2,3,5 y 6: Suero de paciente. O antígeno a evaluar. INMUNIDAD HUMORAL
  28. 28. Suero P Ag Pb Anti Pb Prueba de inmunodifusión doblePrueba de inmunodifusión doble INMUNIDAD HUMORAL
  29. 29. Suero Problema Suero Control
  30. 30. Interpretación de las Pruebas de Inmunodiagnóstico Micológico
  31. 31. ESTUDIO MICOLÓGICO IDR IDD RESULTADO Directo y cultivo: POSITIVO Positivo: Estuvo en contacto con el hongo Positivo: Presenta anticuerpos precipitantes frente a los antígenos fúngicos Presenta la enfermedad Directo y cultivo: Positivo Negativo: No estuvo en contacto con el hongo o se encuentra en estado anérgico (inmunosuprimido). Positivo: Presenta anticuerpos frente a los antígenos fúngicos Presenta la enfermedad Directo y cultivo: Positivo Positivo: Estuvo en contacto con el hogo Negativo: No presenta anticuerpos frente a los antígenos fúngicos Estuvo expuesto al hongo. Presenta la micosis puesto que se hizo la observación microscópica del hongo y aislamiento del mismo en el medio de cultivo Directo y cultivo: Negativo Positivo: Estuvo en contacto con el hogo Negativo: No presenta anticuerpos frente a los antígenos fúngicos Estuvo expuesto al hongo más no presenta la enfermedad. Directo y cultivo: Negativo Negativo: No estuvo en contacto con el hongo o se encuentra en estado anérgico (inmunosuprimido). Negativo: No presenta anticuerpos frente a los antígenos fúngicos El paciente puede: 1.No presentar enfermedad micótica. 2.Estar inmunosuprimido y presentar enfermedad por otro agente. CORRELACIÓN E INTERPRETACIÓN DE LA IDR E IDD EN EL INMUNODIAGNÓSTICO MICOLÓGICO.
  32. 32. Hasta la próxima clase y no se olviden de revisar el portal web!!!!!

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