MUY BONITO

1. HCG
Es una Prueba para la determinación cuantitativa de
Gonadotropina Corionica Humana (HCG) en suero humano
Fundamentos
La HCG (Gonadotropina Corionica Humana) es una hormona
glicoproteíca, secretada por las células trofoblasticas del tejido
placentario .el papel fisiológico principal de esta hormona es
mantener el cuerpo lúteo durante el embarazo .La HCG es el
más importante marcador del embarazo .mientras el nivel de
HCG en mujeres no embarazadas y hombres sanos esta
normalmente bajo 1-2 mU/ml la HCG se eleva rápidamente
después de la concepción y puede alcanzar concentraciones
de:

2. 1 era semana 10-30 mU/ml
2 era semana 30-100 mU/ml
3 era semana 100-1000 mU/ml
4 era semana 1000-10.000 mU/ml
2do a 3er mes 30.000-100.000 mU/ml
2do trimestre 10.000-30.000 mU/ml
3er trimestre 5.000-15.000 mU/ml

3. • Las mujeres durante el primer trimestre
tendrán valores altos, segundo trimestre serán
valores estáticos y en el tercer trimestre
valores bajos.
• Las mediciones cuantitativas de esta hormona
pueden ayudar a determinar la edad exacta
del feto y pueden diagnosticar embarazos
anormales, como los embarazos ectópicos, los
embarazos molares, y abortos espontáneos
potenciales.

4. Significado de los resultados anormales
• Es cuando esta hormona HCG esta
produciendo en forma anormal se va convertir
en un marcador tumoral. Las células
trofoblasticas uterinas y en problemas
neoplásicas en células testiculares esto quiere
decir que el HCG se puede hacer en hombres y
mujeres

5. Los niveles superiores a lo normal pueden indicar:
• Cáncer de mamas
• Carcinoma embrionario
• Tumor trofoblastico
• Embarazo normal
• Más de un feto, por ejemplo, gemelos o trillizos
• Cáncer ovárico
• Cáncer testicular (en los hombres)
Los niveles inferiores a lo normal pueden indicar:
 aborto incompleto
 Micro abortos espontáneos
 Amenaza de aborto espontaneo
 Embarazo ectópico

6. Clínica del embarazo ectópico
 Dolor en la parte baja del vientre
 nauseas vomito
Clínica de Mola hidatiforme:
 Dolor en la parte baja del vientre
 Crecimiento anormal del vientre
 Sangrado vaginal
Clínica de Aborto:
 Dolor hipogastrio
 Sangrado vaginal

7. Clínica en pacientes con tumores
trofoblasticos
Mujer:
 Problemas en la menstruación
 Menstruaciones irregulares
 Menstruación dolorosa (DISPAUREMIA)
 Menstruación 2 veces al mes
Hombre:
 Dolor a nivel de la región testicular
 Edema testicular
 Perdida de peso

8. Técnicas: como es la hormona la EIA y dentro estas la ELISA o
MICROELIZA
PRINCIPIO:
El análisis de HCG ELISA está basada en la clásica técnica ELISA
sándwich haciendo uso del sistema de alta afinidad biotina –
estreptavidina .Se recubren los micropocillos ELISA con estreptavidina
en la primera etapa de incubación, se mezclan muestras, calibradores
o controles y el conjugado enzimático anticuerpo (anticuerpos mono-
polyclonales anti-HCG marcados con peróxidasa o biotinados ) para
formar el complejo de sandwich que se fija a la superficie de los
micropocillos por la interacción de la biotina con la estreptavidina
inmovilizada .al final de la incubación el exceso de conjugado y
antígenos no fijados son eliminados por el lavado .se agrega TMB
(sustrato)etapa 2 se forma un color azul que se trasforma a amarillo
después de parar la reacción . la intensidad de color es directamente
proporcional a la concentración de HCG en la muestra.
La absorbancia de los calibradores y muestra se determina haciendo
uso de un lector de micropocillos ELISA

9. REACTIVOS
• A.- Calibradores de HCG –ml / vial –iconos AF (tapa blanca)
6 viales de referencia para el antígeno De HCG a niveles de 0 (A) 5(B) ,25 (C) 50(D) ,100(E) y 250 (f)
mUl/ml almacenar a 2- 8°C
• B.- Reactivo De Enzima a HCG -13 ml /VIAL –ICONO (tapa blanca)
UN (1) vial que contiene anticuerpo purificado con afinidad a la enzima marcada, IgG de ratón
monoclonal biotinilado en buffer secado y preservado Almacenaje 2- 8 °C
• C.- Microplaca cubierta de estreptovidina -96fuentes -icono
Una microplaca de 96 fuentes cubiertas con estreptavidina y empaquetada en una bolsa de aluminio
con un agente de secado. Almacenaje 2- 8 °C
• D.- concentrado de solución de lavado -20 ml –icono
Un vial que contiene un surfactante en suero salino tamponado un preservante ha sido adicionado
almacenaje 2- 30 °C
• E.- sustrato A-7 ml /vial –icono SA (tapa amarilla)
Una (1) botella que contiene tetrametilbenzidina (TMB) en buffer Almacenaje 2- 8°C
• F.- sustrato B -7 ml /vial –icono (tapa azul)
Una (1) botella que contiene peróxido de hidrogeno (H2O2)en buffer. Almacenaje 2- 8 °C
• G.- solución de paralización -8 ml /vial –icono (tapa roja)
Una (1) botella que contiene u acido fuerte (HCl 1N) Almacenaje 2- 30 °C

10. PRECAUCIONES:
No para el uso interno y externo en humanos o
animales todos los productos que contienen
suero humano se encontraron no reactivos para
el antígeno de superficie de la hepatitis B, VIH
1,2 y anticuerpos. No se ha conocido pruebas
que puedan ofrecer seguridad ,a pesar que los
agentes infecciosos estén ausentes ,todos los
productos séricos de humanos serán manejados
como material infeccioso

11. RECOLECCIÓN DEL ESPÉCIMEN Y
• Muestra de sangre es por la mañana la y el
paciente tiene que estar en ayunas.
• La sangre será recogida en un tubo tapa roja
(sin anticoagulante), la muestra puede ser
refrigerada a 2-8 ºC por u periodo de 5 días y
si no es ensayado en ese tiempo puede ser
refrigerado 20ªC por 30 días.

12. PRERACION DE REACTIVOS
1.- Buffer Para Lavado
Diluir los contenidos de concentrado de lavado a 1000 ml con agua
destilada o desionizada
2.- Solución De Sustrato De Trabajo
Vierta los contenidos de los viales de solución marcada con A-B
mezclar y almacenar a 2-8 °C usar dentro de los 60 días o para los
períodos largos de uso determinar la calidad de reactivo necesario y
preparar para mezclar en iguales proporciones del sustrato A y del
sustrato B en un contenedor adecuado Ejemplo adicionar 1 ml de A y 1
ml de B por dos tiras para 8 pocillos

13. • PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA
• Antes del procedimiento con el ensayo traiga todos los reactivos, las referencias séricas y los con troles a
temperatura ambiente (20-27°C)
• Pipetear 0.025ml (25ul) del suero de referencia apropiada control o espécimen dentro del pocillo asignado.
• Adicionar 0,100ml de reactivo en enzima de HGC a todos los pocillos.
• Revolver el micro placa ligeramente por 20 a 30°seg. Para mezclar y cubrir.
• Encubar a 60min a temperatura ambiente.
• decantación de microplaca secar con papel absorbente.
• Adicionar 300 ul de Buffer de lavado, decantar o aspirar. Repetir dos veces adicionales para un total de 3 lavados.
(evitar las burbujas de aire).
• Adicionar 0.100ml (100ul) de solución de substrato de trabajo a todos los pocillos. Siempre adicione los reactivos
en el mismo orden para mi minimizar las referencias de tiempo de reacción en los pocillos
• Incubar a temperatura ambiente por 15mim
• Adicionar 0.050ml (50ul) de solución de paralización para cada pocillo y mezclar ligeramente por 15-20seg.
• Leer la observancia en cada pocillo de pocillo a 450mn (usando una referencia de 620 630 nm. para minimizar
las referencia del pocillo) en el lector de microplacas- Los resultados serán leídos dentro de los 30 min adicionar
la solución de paralización.

14. LIMITACONES DEL PROCEDIMIENTO
Rendimiento del ensayo
• El pipeteo de las muestras no se extenderá más de 10 minutos para
evitar derivar el pocillo,
• La adición de la solución sustrato inicia una reacción cinética la cual
es terminada por la solución de paralización. Por lo tanto la adición
de los sustratos y la solución de detención serán adicionadas en la
misma secuencia para eliminar cualquier desviación durante la
reacción
• La falta en remover la solución adherente adecuadamente en los
paso de aspiración o lavado por decantación puede resultar una
pobre replicación y resultados falsos.
• Las muestras las cuales son contaminadas no serán utilizadas en el
ensayo, los especímenes lipemicos, o hemolisados no serán
usados.

15. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
• Los resultados falsos positivos pueden ocurrir en
presencia en una amplia variedad de tumores
trofoblásticos y no trofoblásticos que secretan
HCG
• Los microabortos espontáneos y os embarazos
ectópicos van a tener valores las cuales serán
inferiores que lo esperado durante un embarazo,
donde unos valores mayores son frecuentemente
vistos en embarazos múltiples.

16. CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO:
Precisión
• La prueba de HCG ELISA tiene una sensibilidad
analítica aproximadamente 0.8mUl/ml de
concentración de HCG
• Las muestras con concentraciones sobre los 250
mUl/ml puede diluir con suero normal masculino
y ser realizadas para obtener la concentración de
estas muestras se multiplica el resultado por el
factor de dilución.

17. NORMAS DE BIOSEGURIDAD
• Utilizar todas las medidas de bioseguridad, Utilizar mandil guantes y mascarilla.
• En el momento de la toma de muestra tener cuidado de no pincharse.
• Verificar que las agujas no estén caducadas.
• No ingerir los reactivos, todas las muestras del paciente y CAL deberían ser
manipulados como agentes infecciosos.
• Todos los materiales contaminados con muestras o Cal deben inactivarse
(autoclave, o tratamiento químico).
• Tener cuidado con el ESTOP porque irrita ojos, membrana mucosa y si está en
contacto lavar con abundante agua y jabón.
CONTROL DE CALIDAD
Cada laboratorio ensayara los controles a niveles de inferior, medio y mayor nivel
para el monitoreo del rendimiento de ensayo. Estos controles serán tratados como
desconocidos y los valores determinados en cada procedimiento de prueba realizada.
La desviación significante de rendimiento establecido puede indicar cambio no
notificado en condiciones experimentales o degradación de reactivos el kit