Dilución bacteriana, Número más Probable, Cultivo puro

1. CENTRO BACHILLERATO TECNOLÓGICO, INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS No. 128
Práctica No. 4 Dilución bacteriana, número más probable y cultivo puro.
Sub-modulo 3: Ejecuta técnicas de identificación de microorganismos con base en las
normas.
Integrantes: Quistián García Hylary Estefanía, Ramírez Arellanos Génesis, Ramírez
Hernández Jessica, Ramos Franco Michelle Valeria, Ramos Juárez Mario Antonio, Rangel
Osorio Hugo Cesar, Rascón Castrejón Lizeth Guadalupe, Reyes Marcial Luis Diego, Ríos Palacios Selene.
Facilitadora: Ing. Jessica Alicia Acosta Bezada
Fecha: se inició el 20 de octubre del 2014 y se terminó el 28 de octubre del 2014.
Introducción
El conteo bacteriano señala la magnitud de la
población total bacteriana. En ese sentido se puede
determinar por diversas técnicas que se basan en
algunos de los siguientes tipos de medida: cuenta
celular (directamente al microscopio o mediante un
contador electrónico de partículas o indirectamente
con la cuenta de colonias), masa celular (en forma
directa pesando el contenido celular del nitrógeno o
indirectamente por turbidimetría, proporcional al
número de células) y actividad celular
(indirectamente relacionando el grado de actividad
bioquímica al tamaño de la población bacteriana).
Existen muchos medios diferenciales, en la práctica
utilizaremos el de dilución bacteriana.
Para empezar esta práctica 4 debemos definir
primero el concepto de dilución y se puede decir que
es la “es la reducción de la concentración de una
sustancia química en una disolución. La dilución
consiste en rebajar la cantidad de soluto por unidad
de volumen de disolución. Se logra adicionando más
diluyente a la misma cantidad de soluto: se toma
una poca porción de una solución alícuota y
después esta misma se introduce en más
disolvente.”
Una vez definido lo que es dilución podremos decir
que dilución bacteriana consiste en inocular una
serie de frascos tipo antibiótico que contienen 9 ml
del medio de cultivo apropiado según el tipo de
bacteria que se quiera evaluar además. El método
de dilución para el caso de bacterias ofrece mayor
sencillez y menor cantidad de contaminantes y es
uno de las maneras más comunes en el aislamiento
de este tipo de microorganismos. En esta práctica
les explicaremos como es que se realiza la dilución
bacteriana junto con sus técnicas.
Resumen
En esta práctica se realizaron tres métodos para la
identificación de microorganismos incluyendo su
conteo aproximado, estos fueron: dilución
bacteriana, número más probable y cultivo puro.
En la primera se pudieron evaluar diferentes grupos
bacterianos según el medio de cultivo (nutritivo) con
la muestra que se inoculó, en este caso agua del
grifo. En el segundo se realizó una estrategia
eficiente para estimar las densidades de población
ya que una evaluación cuantitativa de elementos
individuales no fue factible. En un cultivo puro se
obtuvieron colonias aisladas visiblemente.
En la serie de pruebas bioquímicas caldo nutritivo se
observó la turbidez de los tubos con el fin de
obtener resultados correctos puesto que si en el
último tubo a analizar la turbidez era mayor que el
primero indicaba que el procedimiento se realizó de
manera incorrecta.
De esta manera se pudieron observar las colonias
presentes en las cajas Petri con el medio de cultivo
nutritivo y en los tubos de ensaye con caldo nutritivo
obteniendo el número de poblaciones aproximadas.
Abstract

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Bacterial dilution, the most probable number and
pure culture: in practice three methods for identifying
microorganisms including approximate counting,
they were performed.
The first could be evaluated according to different
bacterial groups culture medium (nutrient) with the
sample to be inoculated, in this case tap water. In
the second efficient to estimate population densities
strategy was performed as a quantitative
assessment of individual items was not feasible. In
pure culture visibly isolated colonies were obtained.
In the series of biochemical tests are nutrient broth
was observing the turbidity of the tubes in order to
obtain correct results because if the last tube to
analyze the turbidity was higher than the first
indicating that the procedure was performed
incorrectly.
Thus were visible bacteria in Petri dishes with
nutrient culture medium and test tubes with nutrient
broth obtaining the approximate number of
populations.
Materiales y métodos
ETAPA 1: Preparación del medio de cultivo y
esterilización de material
Material
Matraz Erlenmeyer 500 ml
Espátula
Mechero
Vidrio de reloj
9 cajas Petri
28 tubos de ensaye
Reactivos
Agua destilada
Caldo nutritivo
Procedimiento
1) A cada equipo se le asignó un medio de
cultivo para preparar, en este caso fue el
Caldo nutritivo.
2) Para esto se pesó 2.8 gr del polvo para
preparar el caldo nutritivo.
3) Se disolvió los 2.8 gr en 350 ml de agua
destilada o potable (se tuvo en cuenta el
margen de error).
4) Se calentó esta solución hasta que el medio
se disolvió por completo.
5) Posteriormente se dejó enfriar.
6) Se vació en cada tubo de ensaye 10 ml
(aproximadamente) del caldo preparado.
7) Se cubrió todos los tubos con un pedazo de
algodón y un “gorro” de papel canela.
8) Se procedió a su esterilización.
9) Se envolvió las cajas Petri con papel canela,
y se procedió a su esterilización.
ETAPA 2: Dilución e Inoculación
Material
7 tubos de ensaye
Asa de inoculación
Jeringa o pipeta
Gradilla
Mecheros bunsen
Reactivos
7 medios de cultivo
14 tubos de ensaye con caldo nutritivo
Agua destilada o potable
Muestra de agua (Zona sur)
Procedimiento

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Nota: esta etapa se llevó a cabo dentro de un
triángulo de seguridad formado por mecheros
bunsen.
Para la dilución:
1) En cada uno de los 7 tubos de ensaye, se
colocó 9 ml de agua destilada o potable. Se
etiqueto cada tubo con el número
correspondiente a la dilución (-1, -2, -3, -4, -5, -
6, -7).
2) La jeringa o pipeta se “esterilizo” en uno de
los mecheros.
3) Con ayuda de la pipeta se tomó 1 ml del
agua de la muestra y se colocó en el tubo
de ensaye correspondiente a la dilución -1.
4) Se tomó 1 ml del tubo de ensaye al que se
le coloco el mililitro de la muestra y se pasó
al segundo tubo de ensaye.
5) Se repitió el procedimiento con los tubos
restantes, de forma que los primeros 6
tubos quedaron con 9 mililitros y el último
con 10.
Para la inoculación:
1) Se etiqueto cada medio de cultivo con un
número correspondiente a la dilución de uno
de los tubos (1-7)
2) En cada medio de cultivo se inoculo con una
muestra tomada del tubo con la dilución
correspondiente.
3) El estriado se realizó de la siguiente forma:
Se esterilizo el asa con un mechero bunsen, y con
ella se tomó una gota de muestra. Se estrió de
forma vertical en un lado de la caja, se esterilizo
nuevamente el asa. Para el siguiente estriado no se
tomó muestra, sino que se esparció un poco del 1er
estriado de forma horizontal, y se esterilizo el asa.
De la misma forma se realizó un estriado con el
estriado horizontal pero esta vez de nuevo de forma
vertical, para finalizar en el extremo contrario al
estriado horizontal se realizó un pequeño estriado
en “s”. El resultado fue como el que se mira abajo:
4) Para la inoculación en el caldo nutritivo se
realizó el mismo procedimiento que para la
dilución, excepto que en esta ocasión en lo
que se diluyo la muestra fue en el caldo
nutritivo.
ETAPA 3: lectura de colonias en caja y tubo
Material
Marcador
Mecheros Bunsen
Cajas Petri con muestra incubada
anteriormente
Procedimiento
En caja:
1) Se formó un triángulo de seguridad con mecheros
Bunsen y se trabajó dentro de él para evitar la
posible contaminación de bacterias. En ningún
momento se abrió alguna de las cajas Petri.
2) Se procedió a realizar la lectura de colonias. Para
ello primero se identificó los diversos tipos de
colonias que había en cada caja Petri.
3) Se contó el número de cada tipo de colonias que
había en cada caja Petri, para ello se vio la caja a
contra luz para poder ver colonias que no eran muy
claras, con ayuda del marcador se punteaba cada
colonia contada, se tomó notas sobre su:
 Forma
 Borde
 Superficie
 Color
(Véanse los resultados)
En tubo:
1. Se observó el crecimiento bacteriano en
cada tubo y en base a eso se identificó el
tipo de bacterias que crecieron en el tubo
(aerobias estrictas, anaerobias, facultativas,
etc.)

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2. Esto también nos permitió observar la
disminución de bacterias en cada tubo
gracias a la dilución bacteriana.
(Véanse los resultados)
ETAPA 4: Tinción y morfología bacteriana
Material
Portaobjetos
Cubreobjetos
Asa microbiológica
Mecheros Bunsen
Microscopio
Reactivos
Agua destilada o potable
Cristal violeta
Yodo-Lugol
Alcohol-Acetona
Safranina
Aceite de inmersión
Procedimiento
1) Se formó un triángulo de seguridad con mecheros
Bunsen. La toma de muestras se realizó dentro de
él.
2) Para la toma de muestras, se colocó en un
portaobjetos una gota de agua, se colocó una caja
Petri dentro del triángulo de seguridad para evitar
una posible contaminación. Se esterilizó el asa
microbiológica, se abrió la caja y con el asa se tomó
una parte de una de las colonias, esta se disolvió
con movimientos circulares en la gota de agua
previamente puesta en el cubreobjetos. Se volvió a
esterilizar el asa.
3) Se tomó una muestra por cada colonia diferente
en cada agar, cabe destacar que se marcó cada
cubreobjetos con el número de agar y colonia a la
que pertenece la muestra.
4) Se dejó secar las muestras colocadas en los
portaobjetos. Una vez hecho esto se procedió a la
tinción:
-Se pasó el portaobjetos con la muestra por
la llama del mechero 3 veces rápidamente.
-Se le agregó una gota de Cristal violeta y
se dejó actuar durante un minuto. Se enjuagó el
portaobjetos hasta que el colorante dejó de escurrir.
-Se agregó una gota de Yodo-Lugol y se
dejó actuar por un minuto. Se procedió a enjuagar.
-Se agregó una gota de Alcohol-Cetona y se
dejó actuar durante 30 segundos. Se enjuagó.
-Por ultimó se agregó una gota de safranina
y se dejó actuar por 30 segundos, posteriormente se
volvió a enjuagar la muestra.
5) Se le agregó una gota de aceite de inmersión a la
muestra y se le colocó un cubreobjetos.
6) Se procedió a su observación a través del
microscopio y se identificó las distintas bacterias
contenidas en la muestra.
(Véanse los resultados)
Resultados
Dentro de esta práctica número 4 los resultados se
enmarcan principalmente en las diluciones que se
utilizan para el conteo de bacterias, pero de igual
manera se dan los resultados de las morfologías
tanto bacterianas como coloniales. De esta manera
se muestran las siguientes tablas en donde se
observa todo lo anterior.
Me d i o d e c u l t i v o Número de caja petri o tubo Inoculado con
A g a r n u t r i t i v o 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 . Agua del sur oeste de la
Serie 1 caldo nutri tivo 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 . ciudad

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Serie 2 caldo nutri tivo 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 .
Número de caja petri C o l o n i a M o r f o l o g í a d e l a c o l o n i a Número de
colonias
1 1 Forma irregular, borde lobulado, superficie plana, color
blanco.
1
2 1 Forma irregular, borde lobulado, superficie
plana.
1
3 1 Forma circular, borde entero, superficie plana, color
blanc o.
195
4 1 Forma puntiforme, borde entero, superficie
acuminada.
20
2 Forma irregular, borde ondulado, superficie
plana.
2
5 1 Forma puntiforme, borde ondulado, superficie convexa, color
amarillo.
10
2 Forma punti forme, borde entero, superfi cie plana. 11
3 Forma irregular, borde ondulado, superficie plana, con
hemolisis.
9
4 Forma irregular, borde ondulado, superficie plana, color
rosado.
1
6 1 Forma circular, borde entero, superficie convexa, color crema, con
hemolisi s.
5
2 Forma irregular, superficie convexa, color
amarillo.
1
3 Forma puntiforme, borde entero, superficie
convexa.
56
4 Forma circular, borde entero, superficie convexa, color
blanco.
1
7 1 Forma punti forme, borde entero, superfi cie plana. 55
2 Forma irregular, borde filamentoso, superficie
papilada.
10
3 Forma irregular, borde filamentoso, superficie plana, color blanco
opaco.
3
Número de caja petri Colonia Morfología bacteriana
1 1 Cocos, Gram negativos.
2 1 Cocos, Gram negativos.
3 1 Cocos, Gram negativos.
4 1 Bacilos, Gram negativos.
2 Cocos, Gram negativos.
5 1 Bacilos, Gram negativos.
2 Estreptococos, Gram
negativos.
3 Cocos, Gram negativos.
4 Bacilos, Gram negativos.

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6 1 Cocos, Gram negativos.
2 Bacilos, Gram negativos.
3 Bacilos, Gram negativos.
4 Cocos, Gram negativos.
7 1 Estreptococos, Gram
negativos.
2 Bacilos, Gram negativos.
3 Cocos, Gram negativos.
N ú m e r o d e t u b o M o r f o l o g í a d e l c a l d o T i p o d e c r e c i m i e n t o
1 Turbidez, con sedimento. …
2 T u r b i d e z . …
3 T u r b i d e z . 1 x 1 0 - 3 b a c t e r i a s / m l
4 … . . … . …
5 … … … . …
6 P e l í c u l a . …
7 … … … . . …
N ú m e r o d e t u b o M o r f o l o g í a d e l c a l d o T i p o d e c r e c i m i e n t o
1 T u r b i d e z …
2 T u r b i d e z …
3 T u r b i d e z 1 x 1 0 - 3 b a c t e r i a s / m l
4 P e l í c u l a …
5 … … … . . …
6 … … … . . …
7 S e d i m e n t o …
Se muestra en estas dos últimas tablas el tipo de
crecimiento que presenta las series de diluciones, en las
que en las dos series el resultado fue de 1x10-3
bacterias por mililitro de muestra, que con ello se da el
objetivo principal de la práctica.
Conclusión
 Quistián García Hylary: la dilución bacteriana y
el número más probable son técnicas de conteo
bacteriano. La primera consiste en diluir 7 veces
la muestra a analizar, esto se lleva a cabo de la
siguiente forma: se toman siete tubos de ensaye
y en ellos se vierten nueve mililitros de agua
destilada. Se etiquetan los 7 tubos del 1 al 7
según la dilución que van a contener. Se agrega
1 mililitro de la muestra en el 1er tubo, de esta
forma tiene 10 ml. Después se toma 1 ml del 1er
tubo con muestra diluida y se vierte en el
segundo, así el 1er tubo tendrá 9 mililitros y el
2do 10, se repite el procedimiento con los
demás tubos, de esta forma los 1eros 6 tubos
tendrán 9 mililitros y solo el último contendrá 10
ml. De esta forma se irá disminuyendo la
cantidad de bacterias conforme se va
aumentando de tubo (1-7).
La técnica del número más probable se basa en
diluciones seriadas, para ello primero se realiza
la dilución bacteriana y posteriormente se
inocula en medios de cultivo, basándose en el
crecimiento que en ellos se produzca se anotan
los resultados y con ayuda de una tabla se
realiza la estimación de la población bacteriana
presente en la muestra.
Esta práctica se llevó a cabo con el motivo de
observar la contaminación bacteriana presente
en el agua “potable” en las diferentes zonas de
la ciudad.
 Ramírez Arellanos Génesis:
 Ramírez Hernández Jessica: Dilución
bacteriana, número más probable y cultivo puro,
a pesar de ser aparentemente más complejos
en realidad facilitan el trabajo con el conteo de
microorganismos, dilución bacteriana nos
permite contar bacterias estimando el número

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mediante la observación de la turbidez de un
tubo de ensaye con caldo nutritivo, número más
probable al estimar cantidades poblacionales sin
necesidad de contar individualmente ya que no
es un resultado exacto.
El cultivo puro nos sirvió para diferenciar unas
colonias de otras a partir de su aislamiento
inoculando con un mayor número de estrías.
Es decir, estas tres técnicas o métodos nos
permiten una determinación cuantitativa más
fiable y seguro que una empírica.
Aunque son métodos más seguros no
garantizan el resultado correcto en el conteo de
colonias puesto que siempre puede haber
variaciones en el crecimiento de estas, ya sea
por la técnica de siembra o el medio de cultivo
en que se realizó.
 Ramos Franco Michelle: Mi conclusión seria que
el crecimiento en tubo o la morfología es algo
difícil de explicar, esto ya lo habíamos repetido
anteriormente, en esta práctica lo que vimos fue
algo muy interesante, como las bacterias
crecían dentro del tubo de ensaye y como era
para clasificarlos y verlos según su color o su
estructura, no lo podíamos oler o sentir o
saborear pero a simple vista se veían y se
observaban cada uno de ellos, lo cual en
algunos agares fueron contaminados, se
encontraban diferentes bacterias que no eran
comunes en la prueba que agarramos para
observar, es algo impactante y diferente a las
cajas Petri.
 Ramos Juárez Mario:
 Rangel Osorio Hugo: Aprendimos otra forma de
aislar microorganismos en este caso se
aprendió con el método de dilución ya que es
más accesible y con una contaminación menor.
Además la técnica de dilución es precisa y
confiable y se debe de manejar con sumo
cuidado ya que si no es así de podrían obtener
resultados negativos, en lo personal pude
observar que del tubo 1 al tubo 7 si hubo una
disminución de bacterias y el 7 quedo casi sin
bacterias.
 Rascón Castrejón Lizeth: Los medios de cultivo
en un laboratorio de microbiología son de suma
importancia ya que, son instrumentos de
diagnóstico de bacterias patógenas dentro de
los individuos. Los medios de cultivo son un
método fundamental para estudiar las bacterias
es cultivarlas en un medio líquido o en la
superficie de un medio En microbiología se
emplea medios de cultivos por la simple razón
que los organismos a estudiar necesitan una
fuente de energía, para vivir y así desarrollarse,
por tal motivo, la preparación de los medios de
cultivos varían ya que deben de prepararse
según las necesidades nutricionales del
organismo, esto es fundamental para su
estudios. Esto consta en disponibilidad de
nutrientes, presencia (o ausencia) de oxígeno y
distintos gases, condiciones adecuadas de
humedad, luz ambiental, pH, temperatura,
adecuados para el microorganismo. Una vez
cultivados dichos microorganismos no podemos
dejar de lado las técnicas de tinción que muy
importantes para el estudio de microorganismos
inertes. Para las técnicas de tinción se aplica un
colorante simple (un solo colorante) o diferencial
(dos o más colorantes). Esto nos servirá para
una mejor visualización y con ellos un mejor
análisis de los microorganismos deseados.
Las pruebas bioquímicas se emplean para
identificar de forma clara y precisa, la presencia
o ausencia de una enzima, de un grupo de
enzimas, o de una vía metabólica completa en
uno o más microorganismos. Una de las
técnicas rápidas más usadas para la
identificación de bacterias son las galerías API
de bioMerieuxMR, las cuales permiten identificar
levaduras, bacterias entéricas, no entéricas,
especies de Listeria, Staphylococcus,
Streptococcus, Corynebacterium,
Campylobacter, y otras más. En el laboratorio se
emplean frecuentemente dichas pruebas
bioquímicas Kliger, Voges-Proskaver, SIM, LIA,
MIO, Urea. El conteo bacteriano señala la
magnitud de la población total bacteriana. En
ese sentido se puede determinar por diversas
técnicas que se basan en algunos de los
siguientes tipos de medida.
 Reyes Marcial Luis Diego: La práctica trataba de
observar el método por el cual se realiza el
recuento por dilución y con ello comprender un
método más para poder verificar el crecimiento
bacteriano. En esta parte se dio el resultado
final en el que la muestra tomada contaba con
1x10-3 bacterias por cada mililitro, lo cual son
demasiadas células que se reprodujeron en un
tiempo prolongado de aproximadamente 24
horas.
Aparte de la importancia y el objetivo de esta
práctica se pudo observar como resultaron las
diluciones en los diferentes cultivos a los cuales
se les inoculo con ellas, de igual manera se
observo su morfología colonial y después

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desarrollada la tinción de Gram, su morfología
bacteriana.
Con todo esto se observó que en la parte sur
oeste hay una contaminación bacteriana menor
e poco significativa. Esto según lo que el
análisis arrojo, pero en todo caso no hay
evidencia ni comparación con otras pruebas de
diferentes partes de la ciudad.
 Ríos Palacios Selene: El crecimiento de una
población bacteriana puede ser entendido desde
diferentes perspectivas y de acuerdo a éstas se
puede llegar a determinar la medida del
crecimiento mediante diversas metodologías.
Para algunos, el crecimiento es la capacidad
para multiplicarse que tienen las células
individuales, esto es iniciar y completar una
división celular. De esta forma, se considera a
los microorganismos como partículas discretas y
el crecimiento es entendido como un aumento
en el número total de partículas bacterianas.
Existen varias técnica para el conteo de bacteria
el que utilizamos esta vez fue la de “Numero
más Probable” con esta nos pudimos dar
conocimiento más preciso de las bacterias que
se desarrollaron en el tubo de ensayo,
revelándose una turbidez.
Se entiende por turbidez o turbiedad la falta de
transparencia de un líquido debido a la
presencia de partículas en suspensión. Cuantos
más sólidos en suspensión haya en el líquido
(generalmente se hace referencia al agua), más
sucia parecerá ésta y más alta será la turbidez.
La turbidez es considerada una buena medida
de la calidad del agua, cuanto más turbia, menor
será su calidad.
Con esto nos concientizamos de los distintos
organismos que se desarrollaban y crecían en
distintas muestras de agua de varios lugares en
la ciudad.
Discusión
Sembrar es el acto de colocar el material bacteriológico
en el medio de cultivo para promover su crecimiento y
desarrollo, y subsiguiente multiplicación.
El resultado de una siembra se llama: Cultivo
• Las siembras pueden ser:
- Primarias: cuando el material es inoculado en los
medios por primera vez
- Secundarias: cuando el material a inocular procede de
una siembra primaria
En este caso utilizamos la Siembra por dilución se toma
el tubo de ensayo con medio líquido, como el caldo
simple. Se toma el material a diluir y se siembra en el
tubo con el uso del asa cargada con el material
bacteriológico, se agita, con movimientos moderados.
Después del tiempo de incubación, realizamos un
análisis al tubo de crecimiento pendiendo del tipo de
respuesta producida por los microorganismos, la
evaluación del crecimiento (turbidez), cambio de color
del medio de cultivo, dándose a conocer un color
significativo en el tubo.
Utilizamos la técnica de el “Número más probable”
(NMP) También llamada técnica de dilución en tubo,
proporciona una estimación estadística de la densidad
microbiana presente con base a que la probabilidad de
obtener tubos con crecimiento positivo disminuye
conforme es menor el volumen de muestra inoculado.
Obtuvimos tubos con una ligera turbidez. La turbidez se
determina por la densidad óptica (DO) que puede ser
expresada como Absorbancia, % de Transmitancia o
Unidades Klett (UK).
La turbidez producida por el crecimiento microbiano de
microorganismos unicelulares puede ser medida de
acuerdo a la capacidad de absorber la luz. Las muestras
a determinar son generalmente translúcidas cuando no
presentan crecimiento microbiano.
Por lo tanto, las partes espaciadas de la superficie
interior del tubo se fuerzan radialmente con una parte
de la reducción del diámetro de la superficie exterior. La
memoria indica que la técnica es útil para la producción
de bacterias en agar nutritivo similares.
Bibliografía
Lira, Q. L. (2003). Microbitos.files.wordpress.com.
Recuperado el 28 de Octubre de 2014, de
http://microbitos.files.wordpress.com/2010/06
/atlasmicrobiologia1.pdf
Anexos
Técnica de Recuento por Dilución
Las bacterias, son las más pequeñas y numerosos
microorganismos que se encuentran en el suelo, el

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número de bacterias en el suelo pueden o salar desde o
menos a varios millones de estimaciones se realizan en
cultivos o mediante examen microscópico. La técnica de
dilución en placa se usa más frecuentemente.
Mediante el uso de esta técnica de simple ejecución y
fácil interpretación, se pueden evaluar diferentes grupos
bacterianos según el medio de cultivo que contenga el
frasco.
Es aplicable para evaluar bacterias heterotróficas,
aerobias totales (BAT), bacterias reductoras de sulfato
(BRS), anaerobias heterotróficas totales (BAnT), etc.
Esta técnica está recomendada por el Instituto
Americano del Petróleo (API) para evaluar calidad
biológica en aguas de inyección en recuperación
secundaria y también es ampliamente usada en
evaluación de problemas microbiológicos en aguas de
refrigeración.
Procedimiento.
La técnica de dilución por extinción consiste en inocular
una serie de frascos tipo antibiótico que contienen 9 ml
del medio de cultivo apropiado según el tipo de bacteria
que se quiera evaluar.
Se obtiene 1 ml de la muestra usando una jeringa
descartable, estéril, de 1 o 2 ml de capacidad.
Se inocula el primer frasco, sin retirar la aguja se agita el
mismo, se invierte y se retira 1 ml que se inocula en el
2° frasco.
Con una nueva jeringa, se retira 1 ml del frasco N° 2,
previamente agitado, y se inocula el frasco N° 3 y así
sucesivamente, utilizando una nueva jeringa para cada
frasco.
Si no existe información previa sobre cantidad de
bacterias/ml. de la muestra suelen sembrarse 6 frascos.
La manifestación de crecimiento bacteriano se observa
por la turbidez del medio de cultivo que se compara por
transparencia con un frasco sin inocular en el caso de
bacterias aerobias totales y bacterias anaerobias
totales; en el caso de bacterias reductoras de sulfatos
se debe observar un ennegrecimiento del frasco.
Una vez inoculados los frascos y rotulados
convenientemente, se incuban durante 7 días (BAT,
BAT-RF, MFT) o 14 días (BPA) en estufa de cultivo a
±5ºC respecto de la temperatura del agua muestreada,
efectuando lecturas diarias para observar aquellos
frascos que manifiestan desarrollo positivo. Para el caso
de los medios BRS y BRH, el plazo de lectura es de 28
días máximo, realizando también lecturas periódicas.
Cálculos de densidad bacteriana.
Se tienen en cuenta los frascos que manifiesten alguna
modificación como consecuencia del crecimiento
bacteriano; esta modificación puede ser turbidez,
cambio de color, ennegrecimiento, etc. Por ejemplo: si
se usó el medio BAT-RF y se observa turbidez y/o
cambio de color hasta el frasco N° 4 el resultado sería
1000-10000 bact/ml o exponencialmente 103 104
bact/ml. Habitualmente se informa 104 bact/ml.
Problemas comunes en la interpretación del crecimiento
bacteriano cuando se utiliza la técnica de dilución por
extinción.
Hay una variedad de acontecimientos que interfieren
con la interpretación de resultados obtenidos utilizando
las diluciones seriadas. Algunos de los más comunes
son:
Todos los frascos muestran crecimiento.
Si esto sucede, no es posible estimar la población, por
ejemplo si en una serie de 6 frascos inoculados todos se
manifiestan positivos se debe informar: 106 bact/ml.
Para el próximo análisis de esa muestra habría que
considerar el empleo de 8 o 9 frascos.
Un frasco no denota crecimiento y el resto sí.
Algunas veces uno de los frascos permanece sin
cambios mientras que los ubicados anterior y
posteriormente en la serie inoculada muestran
positividad. Es decir, hay un “salto” en los frascos
positivos. Este “salto” debe ser anotado y se informará
la concentración bacteriana correspondiente al frasco de
mayor numeración que resultó positivo. Por ejemplo: El
crecimiento positivo se observa en los frascos 1, 2 y 4
mientras los frascos 3, 5 y 6 permanecen sin
modificaciones, todo después de incubar a la
temperatura y tiempo incubado. Hay varias
explicaciones posibles para esto, incluyendo una
contaminación accidental del frasco 4. Por lo tanto,
nunca se puede saber que ocurrió realmente y hay que

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proceder de la forma más simple ante una situación
dudosa.
En el ejemplo anterior, si se confía razonablemente en
que los frascos fueron rotulados apropiadamente con su
número de orden, el informe será 104 bact/ml. anotando
el frasco que “saltó”.
Frascos que se manifiestan positivos inmediatamente.
Si el primer frasco con un medio de cultivo para BRS se
ennegrece dentro de las 2 horas de haber sido
inoculado con 1 ml. de agua muestra, este
ennegrecimiento no es producto del crecimiento
bacteriano dentro del frasco; el color negro es debido al
SFe proveniente de altos niveles de SH2 en la muestra
de agua que reaccionó con el Fe disuelto en el caldo de
cultivo. En estos casos se pueden seguir dos cursos de
acción:
1) Proceder con las diluciones seriadas. Los frascos 2 a
6 permanecerán generalmente sin cambios y pueden
ser usados para detectar el crecimiento bacteriano
incubándolos a temperatura y tiempo adecuado y
observando ennegrecimiento en los mismos transcurrido
el tiempo de incubación.
2) Colectar por lo menos 50 ml de agua en un frasco
estéril y agregarle una tableta de Alka-Seltzer que
puede despojar la mayoría del SH2 de la muestra.
Cuando la tableta cesa de burbujear, retirar 1 ml de
agua con jeringa estéril y llevar a cabo el procedimiento
habitual de las diluciones seriadas.
Crecimiento bacteriano en tubo
1. Bacterias aerobias estrictas
2. Bacterias anaerobias estrictas
3. Facultativas:
Son bacterias que se acoplan para crecer y
metabolizar tanto en presencia como en
ausencia de oxigeno
4. Microarofilo
Requieren oxigeno en niveles inferiores a los
presentes en la atmosfera
Las bacterias facultativas son bacterias que pueden
adaptarse para crecer y metabolizar tanto en
presencia como en ausencia de oxigeno, por lo
tanto también se les llama anaerobias facultativas
aerobias facultativas.
Pueden desarrollar un metabolismo tanto
respiratorio usando el oxigeno como fermentativo en
ausencia de oxigeno

11. CENTRO BACHILLERATO TECNOLÓGICO, INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS No. 128
Las bacterias anaerobias facultativas pueden
obtener energía en ausencia de oxigeno, pero no es
toxico
Las proteobacteria son unos de los principales
grupos de bacterias son unos de los principales
grupos de bacterias. Incluyen una gran variedad de
patógenos como e-coli, salmonella, vibrio,
helicobacter, etc.
Son Gram- con una pared celular formada en
lipopolissacaridos son morfología es muy variable,
desde bacilos, hasta cocos simples hasta géneros
pros teca
Muchas de estas bacterias se mueven utilizando
flagelos por deslizamiento bacterial. Entre estos se
encuentran los mixobacterias son anaerobias, un
grupo único de bacterias que pueden agruparse
para formar cuerpos fructíferos
Contaminación del agua en Cd. Juárez
Alerta investigador por el deterioro en la calidad del
agua
Enfermedades gastrointestinales, diarreas y otra serie
de complicaciones en la salud son las que se desatan a
consecuencia de la falta de calidad y buen tratamiento
en el agua de la ciudad.
El cambio climático, la sequía, los altos contenidos
naturales de flúor y arsénico, así como los nitratos
originados en los residuos urbanos y líquidos
encontrados en las aguas subterráneas contribuyen a
que la calidad del agua en la ciudad se deteriore poco a
poco generando problemas en la salud de los
consumidores.
Enfermedades gastrointestinales, diarreas y otra serie
de complicaciones en la salud son las que se desatan a
consecuencia de la falta de calidad y buen tratamiento
en el agua de la ciudad.
Jorge Salas Platas, investigador de la UACJ, mencionó
que la problemática del agua y la mala calidad se debe
al crecimiento urbano y a la cantidad de cloruro, sulfatos
y arsénicos diluidas en las aguas, ya que en ocasiones
superan los valores máximos permitidos para ser
considerada como agua potable.
“Las enfermedades de origen hídrico tienen que ver
tanto con problemas epidemiológicos como con
elementos tóxicos de origen industrial por lo que al
momento de que el agua se consume produce
enfermedades gastrointestinales que comienzan con
diarreas y pueden llegar a serias intoxicaciones”,
mencionó Salas Platas.
Actualmente el agua que se consume es extraída por el
acuífero del Hueco del Bolsón, donde el
aprovechamiento subterráneo se encuentra con
condiciones de sobreexplotación desde hace ya varios
años.
Otro de los problemas de la mala calidad del agua es el
sistema de alcantarillado el cual cuenta con colectores,
subcolectores, emisores y dos plantas de tratamiento lo
que contribuye a que dentro del sistema y
procesamiento el agua se contamina más por la basura
y desechos que se cuelan dentro de estos.
En cuanto a la contaminación del agua existen ciertos
puntos que desencadenan a que se genere este tipo de
problemas como las descargas de agua industrial al
drenaje, agua residual a los cuerpos de agua y el uso de
los nutrientes agroquímicos.
Ante esta situación la Junta Municipal de Agua y
Saneamiento recomienda a la comunidad a darle un
buen manejo y cuidado a las aguas ya que diariamente
en cada hogar se llega a desperdiciar más de un litro de
agua lo que genera también otro problema además de la
contaminación y mala calidad en el líquido.
CAUSAS:
• Descargas de agua industrial al drenaje
• Descargas de agua residual a los cuerpos de agua
según origen
• Uso de nutrientes y agroquímicos
• Índice de la Calidad del Agua
• Concentración de nitrógeno, fósforo y pesticidas
• Por ciento de cuotas pagadas por descargas de agua
residual industrial y municipal

12. CENTRO BACHILLERATO TECNOLÓGICO, INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS No. 128
• Inversión de la industria en tecnología para el
tratamiento y pretratamiento de agua residual industrial
• Volumen tratado/volumen producido
• Inversión en plantas de tratamiento de agua residual
municipal
• Inversión en cultura del uso adecuado de
agroquímicos.