INMUNODIFUSIÓN
INMUNOLOGIA APLICADA
CARLOS ALBERTO
VIZCARRA PARRA 4-03
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La reacción antígeno-anticuerpo (Ag-Ab)
es una unión molecular entre el epitope
(antígeno) y la región hipervariable de...
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Puentes de hidrógeno
Fuerzas iónicas
Fuerzas de van der Waals.

Estas fuerzas sólo se convierten en agentes
de unió...
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La asociación Ag-Ab está determinada por
la ley de acción de masas, es reversible y
está definida por una constante de
...
La afinidad se refiere a la fuerza de unión entre el

anticuerpo y un epitope.
La avidez se refiere a la fuerza de unión...
 Reacción primaria
 Reacción secundaria
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La reacción primaria es la formación del
complejo Ag-Ab y la reacción secunda...
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La precipitación ocurre con la mayoría de
los antígenos, debido a que éstos tienden
a ser multivalente, es decir, tiene...
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Cuando el Ag y el Ab difunden uno hacia a otro
en agar, formando una banda o halo de
precipitación visible.
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Esta técnica se realiza en placas de agar en
donde se practican pocillos, en uno de estos
pozos se coloca el suero o mu...
Cuando difunden, ambos sistemas se
encontrarán y se formará en la zona de
equivalencia
el
complejo
Ag-Ab
correspondiente ...
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En una preparación que contenga varios
antígenos, se obtendrán múltiples líneas de
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La técnica de Oucht...
 La inmunodifusión

radial (IDR) es una
técnica que puede
determinar
cuantitativamente
la concentración de

un antígeno.
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Un anticuerpo es incorporado en agarosa
fundida, la cual es vertida dentro de una
caja de Petri la cual se deja solidif...
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Las muestras desconocidas se colocan
dentro de los pozos.

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Los antígenos en solución difundirán hacia
fuera del pozo...
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En esta línea es donde está presente el
mayor número de complejos, ya que en
ese punto el antígeno y el anticuerpo está...
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De las concentraciones conocidas estándar, se
traza una curva de calibración, colocando en
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  1. 1. INMUNODIFUSIÓN INMUNOLOGIA APLICADA CARLOS ALBERTO VIZCARRA PARRA 4-03
  2. 2.  La reacción antígeno-anticuerpo (Ag-Ab) es una unión molecular entre el epitope (antígeno) y la región hipervariable del anticuerpo, mediante interacciones no covalentes o secundarias.
  3. 3.    Puentes de hidrógeno Fuerzas iónicas Fuerzas de van der Waals. Estas fuerzas sólo se convierten en agentes de unión efectivos cuando ocurren a distancias muy cercanas.  Las interacciones hidrofóbicas intervienen también y constituyen el 50% de la fuerza total.
  4. 4.  La asociación Ag-Ab está determinada por la ley de acción de masas, es reversible y está definida por una constante de equilibrio. Ag + Ab Ag—Ab
  5. 5. La afinidad se refiere a la fuerza de unión entre el anticuerpo y un epitope. La avidez se refiere a la fuerza de unión mostrada por los anticuerpos a un antígeno complejo. La reacción entre un anticuerpo determinado y el antígeno que ha dado lugar a su producción se conoce como interacción específica.
  6. 6.  Reacción primaria  Reacción secundaria  La reacción primaria es la formación del complejo Ag-Ab y la reacción secundaria es la evidencia de esos complejos mediante la observación de un fenómeno, el cual depende de la naturaleza del antígeno, las propiedades de los anticuerpos y la presencia de otros factores en el medio de reacción.
  7. 7.  La precipitación ocurre con la mayoría de los antígenos, debido a que éstos tienden a ser multivalente, es decir, tienen varios determinantes antigénicos por molécula, al que los anticuerpos pueden enlazarse.  Cada anticuerpo, a su vez, tiene por lo menos dos sitios de unión para los antígenos, de modo que se entrecruzan formando una gran matriz de agregados antígeno:anticuerpo.
  8. 8.  Cuando el Ag y el Ab difunden uno hacia a otro en agar, formando una banda o halo de precipitación visible.
  9. 9.  Esta técnica se realiza en placas de agar en donde se practican pocillos, en uno de estos pozos se coloca el suero o muestras a investigar y en el resto se coloca el anticuerpo preparado frente a la sustancia que se quiere identificar.
  10. 10. Cuando difunden, ambos sistemas se encontrarán y se formará en la zona de equivalencia el complejo Ag-Ab correspondiente que se hace visible en forma de una línea de precipitación.
  11. 11.  En una preparación que contenga varios antígenos, se obtendrán múltiples líneas de precipitado.  La técnica de Ouchterlony permite identificar sustancias según la forma de unirse las líneas de precipitación de dos o varios sistemas.
  12. 12.  La inmunodifusión radial (IDR) es una técnica que puede determinar cuantitativamente la concentración de un antígeno. Es una técnica sensible que es usada clínicamente para detectar niveles de proteínas plasmáticas. 
  13. 13.  Un anticuerpo es incorporado en agarosa fundida, la cual es vertida dentro de una caja de Petri la cual se deja solidificar.  Se cortan pequeños pozos dentro de la agarosa y estos son llenados con concentraciones conocidas de antígeno correspondientes al anticuerpo, con el objeto de construir una curva de calibración.
  14. 14.  Las muestras desconocidas se colocan dentro de los pozos.  Los antígenos en solución difundirán hacia fuera del pozo en un patrón circular rodeando al pozo.  El anticuerpo está presente en exceso y la difusión del antígeno continuará hasta que se forme un precipitado antígenoanticuerpo en forma de anillo estable.
  15. 15.  En esta línea es donde está presente el mayor número de complejos, ya que en ese punto el antígeno y el anticuerpo están en proporciones iguales. Esta es conocida como la zona de equivalencia.  Generalmente toma de 24 a 48 horas para que ocurra la difusión óptima y la precipitación se haga evidente. Para cada antígeno, se formará una precipitación final en anillo de cierto diámetro.
  16. 16.  De las concentraciones conocidas estándar, se traza una curva de calibración, colocando en los ejes: concentración de antígeno vs mediciones de diámetro cuadrado de los anillos. A partir de esta curva de calibración lineal, la presencia y cantidad de antígeno en las muestras desconocidas pueden ser determinadas.
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