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Flu Terminator Estudio Cytokines

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La homeopatía se destaca como una disciplina experimental, tal como se evidencia en la vasta cantidad de datos homeopáticos acumulados por más de dos siglos. Desde la perspectiva de la medicina …

La homeopatía se destaca como una disciplina experimental, tal como se evidencia en la vasta cantidad de datos homeopáticos acumulados por más de dos siglos. Desde la perspectiva de la medicina occidental, sin embargo, la homeopatía sigue siendo controversial, debido a la aparente inadecuacidad e inconsistencia de los datos que dan soporte al uso de las concentraciones ultra bajas en las que se administran las medicaciones homeopáticas. La actitud que prevalece en consecuencia es la de no considerar a las pequeñas cantidades de los ingredientes empleados en homeopatía como capaces de inducir cambios significativos, de acuerdo a los modelos farmacológicos clásicos.
La investigación homeopática no obstante, ha evolucionado en los pasados 20 años, con el advenimiento de metodologías de investigación bioquímica integrales que hacen los efectos sutiles más susceptibles de ser detectados (P. ej. estudios clínicos, estudios observacionales, evaluaciones estadísticas, programas computadorizados de almacenamiento, y evaluación instrumental o de laboratorio). Se han utilizado además algunos modelos innovadores que contribuyen a enriquecer el debate acerca de la eficacia de las medicaciones homeopáticas,

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  • 1. Investigation de la Expresion de Citoquinas en Cultivos de LeucocitosHumanos con dos Preparaciones HomeopaticasImmunomoduladorasABSTRACTFundamentos: La eficacia de las medicinas homeopáticas en la preservación de la salud humana yen el tratamiento de las enfermedades ha sido ampliamente valorada a través de estudios clínicos.Hay sinembargo una deficiencia de evaluaciones preclínicas a cerca de los efectos de laspreparaciones medicinales homeopáticas sobre las vías de señalización celular, relevantes en laaplicación terapéutica de dichos medicamentos.Material y métodos: En este estudio fueron evaluados en cultivos in vitro de leucocitos humanosde individuos normales, los efectos inmunomoduladores del medicamento Phase 6 ( para laestimulación del sistema de defensa inespecífico) y el FluTerminator (contra la influenza y lasenfermedades virales) (De Be WellHomeopathics Inc. Miami Fl), dos preparaciones homeopáticasdesarrolladas para este propósito.Resultados: Tanto el Phase 6 como el Fluterminator estimularon la producción de citoquinasantiinflamatorias por los leucocitos humanos, aunque a dosis más altas a menudo produjeron unarespuesta más débil que las dosis bajas. El solvente (etanol al 20%) falló en producir cualquier tipode síntesis de citoquinas.Conclusiones: El resultado de los estudios in vitro sugiere que las concentraciones ultra bajas delos componentes del Phase 6 y del FluTerminator tuvieron la capacidad de producir una respuestainmune en el ser humano.
  • 2. INTRODUCCIONLa homeopatía se destaca como una disciplina experimental, tal como se evidencia en la vastacantidad de datos homeopáticos acumulados por más de dos siglos. Desde la perspectiva de lamedicina occidental, sin embargo, la homeopatía sigue siendo controversial, debido a la aparenteinadecuacidad e inconsistencia de los datos que dan soporte al uso de las concentraciones ultrabajasen las que se administran las medicaciones homeopáticas. La actitud que prevalece en consecuenciaes la de no considerar a las pequeñas cantidades de los ingredientes empleados en homeopatía comocapaces de inducir cambios significativos, de acuerdo a los modelos farmacológicos clásicos.La investigación homeopática no obstante, ha evolucionado en los pasados 20 años, con eladvenimiento de metodologías de investigación bioquímica integrales que hacen los efectos sutilesmás susceptibles de ser detectados (P. ej. estudios clínicos, estudios observacionales, evaluacionesestadísticas, programas computadorizados de almacenamiento, y evaluación instrumental o delaboratorio). Se han utilizado además algunos modelos innovadores que contribuyen a enriquecer eldebate acerca de la eficacia de las medicaciones homeopáticas, incluyendo la demostración de laeficacia de las diluciones ultraaltas de IgE en la degranulación de los basófilos, la inhibición de ladegranulación de los basófilos por las diluciones ultraaltas de histamina, y otros modelos queincorporan las mediciones de la viabilidad celular y la inducción de citoquinas; éstas pueden sertécnicas diagnósticas de laboratorio para determinar la potencia inmunológica de diferentespreparaciones homeopáticas y pueden ayudar a clarificar el beneficio clínico de las terapias conestas substancias.En los pasados diez años la investigación homeopática se ha aventurado en la evaluación defórmulas combinadas usadas para tratar una variedad de condiciones clínicas. Este es en muchossentidos un gran reto dada la controversia que rodea a la investigación sobre las preparacioneshomeopáticas unicistas. Sin embargo, concentrándose en metas bien definidas y utilizandometodologías de investigación convencionales, es posible obtener datos significativos de estudiospreclínicos bien diseñados.El campo de la alergia y la inmunología ha sido visto como un puente hacia la homeopatía, dadoque ambas disciplinas comparten el concepto de que las modulaciones en los sistemas biológicosson sensibles a concentraciones muy bajas de substancias naturales o endógenas. Se requieren porconsiguiente, modelos apropiados para la evaluación de preparaciones homeopáticas de multiplescomponentes y para determinar sus efectos sobre la funcionimmune o sobre los mediadores de lainmunidad. Son esenciales.Se ha demostrado que Traumeel S (HeelGmbH, Baden-Baden, Germany), una preparaciónhomeopática comercial extensamente evaluada, la cual cuenta con una extensa combinación deingredientes, modula la secreción de interleuquina (IL)-1Beta, factor de necrosis tumoral (TNF)-alfa e IL-8 en las células inmunes. De esta manera, la modulación de los mediadores de lainmunidad puede representar una oportunidad para evaluar las mezclas homeopáticas apropiadasusando modelos in vitro. En el presente estudio nosotros intentamos continuar validando estahipótesis investigando los efectos de dos fórmulas homeopáticas de múltiples componentes,404
  • 3. FluTerminator y Phase 6, sobre un panel de citoquinas pro y antiinflamatorias en leucocitoshumanos.Tabla 1. Componentes del FluTerminator y de Phase 6Nota: Las substancias de origen vegetal están indicadas en itálica.a) Ambos productos son elaborados según fórmula de y por Be WellHomeopathics Inc. Miami Flb) K, dilución korsakoviana, la cual usa los mismos envases para cada dilusión seriada. Los números de potencia quesiguen los remedios homeopáticos indican el número de diluciones en serie desde la tintura madre originalc) Dilución de diente de león común.FIG 1. Inducción en leucocitos humanos del TNF-alfa por Phase 6 (Fórmula y elaboración por Be WellHomeopathicsInc., Miami FL405
  • 4. MATERIAL Y METODOSPreparaciones y reactivosPhase 6 y FluTerminator son preparaciones homeopáticas que fueron obtenidas del fabricante. Elmedio de cultivo celular Roswell Park Memorial Institute (RPMI), el suero bovino fetal, la soluciónsalina con amortiguación de fosfato y los antibióticos fueron comprados a Invitrogen Inc.Corporation, Carlsbad, CA. Los juegos de reactivos del ensayo enzimático inmunoabsorbente paracitoquinas humanas específicas (IL-1, IL-4, IL-10, e interferón gama [IFN]-gama y TNF-alfa)fueron comprados a BD Biosciences, San Diego, CA. Los ingredientes constitutivos delFluTerminator y Phase 6 se muestran en la tabla 1.Aislamiento de leucocitos humanos e incubación con Phase 6 y FluTerminatorLos leucocitos fueron obtenidos de muestras de sangre humana recogida de voluntarios sanosusando Histopaque gradiente de centrifugación 1066 (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO). Lascélulas fueron lavadas con PBS y fue incubada una cantidad de 10 a la 6 células por cc por 24 horascon dosis variables de Phase 6 o de FluTerminator (0 – 200 pico Litros/mL en medio RPMIsuplementado con FBS al 10% y antibióticos, a 37 grados centígrados en una incubadora con CO2humidificado. Los leucocitos humanos fueron tratados con 0 – 200 picolitros de etanol al 20% (elvehículo) el cual sirvió como control con el fin de determinar los efectos del vehículo de Phase 6 yFluTerminator.Análisis de la síntesis de citoquinasDepués de 24 horas de incubación con los medicamentos, el medio de cultivo fue removido porcentrifugación a 400 G por 10 minutos. Las citoquinas (IL-1, IL-4, IL-10, IFN-gama, y TNF-alfa)sintetizadas y liberadas en el medio por los leucocitos, fueron estimados por ELISA, usando juegosde reactivos de BD Biosciences. En resumen, se usaron 100 picoL del medio para un protocoloELISA multiwell, de acuerdo a las recomendaciones del fabricante, y fue cuantificada la síntesis decitoquinas por parte de los leucocitos (en concentraciones de pg/mL). El experimento fue repetidotres veces para estimar los valores de desviación standard; y los estimados de concentración decitoquinas fueron analizadas estadisticamente por medio de análisis de varianza (ANOVA).406
  • 5. RESULTADOS Y DISCUSIONPhase 6 indujo la producción de TNF-alfa (Fig. 1) e INF-gama (FIG. 2), en dosis de FluTerminatory Phase 6 en el rango de los 10 picoL a los 100 picoL, pero con un decrecimiento en la producción a200 picoL (p < 0.01). IL-1, IL-4, e IL-10 no fueron inducidas por phase 6. Las células tratadas condiluciones ascendentes de etanol al 20% fallaron en mostrar cualquier producción de citoquinas,indicando que el efecto de las dos preparaciones homeopáticas no fue debido al vehículo disolvente.FluTerminator indujo la producción de IL-10 y TNF-alfa (Figs, 3 y 4), aparentemente como unefecto dosis-dependiente (p < 0.01). Sin embargo, el FluTerminator falló en inducir la síntesis deIL-4 e INF-gama. Las células tratadas con diluciones ascendentes de etanol al 20% fallaron enmostrar cualquier producción de citoquinas, indicando que el efecto no fue debido al vehículodisolvente.Aunque un creciente cuerpo de investigación clínica da soporte a los efectos biológicos de lostratamiento homeopáticos, los principios que rigen este tipo de intervenciones siguen siendoelusivos a pesar de la existencia de abundantes teorías. Los principios de la homeopatía no lograránla aceptación del establecimiento médico sin que las preparaciones homeopáticas sean sujetas a unarigurosa investigación basada en la evidencia, usando métodos convencionales. Sin embargo, esigualmente esencial reconocer el sesgo de algunos científicos quienes desestiman rotundamente losefectos de las preparaciones homeopáticas calificandolas como no creíbles o debidos al efectoplacebo, porque consideran que las diluciones son tan grandes que aquí no hay lugar para unenfoque basado en la evidencia, en relación con la eficacia de dichas diluciones .Ambos tanto Phase 6 como FluTerminator son mezclas de extractos y minerales altamente diluídosque están en el rango de potencias desde 1/10 del material crudo o tintura madre hasta altasdiluciones con concentraciones más allá del número de Avogadro (6.23 x 10 a la 23), lo cualcorresponde más o menos a la dilución 24 X. Ambas preparaciones se recomiendan, la primera parala defensa immune general y la segunda para el tratamiento de enfermedades virales, Ellas fueronpor consiguiente preparaciones apropiadas para evaluar los efectos sobre los mediadores de lainmunidad; en el caso de nuestro estudio, las citoquinas pro y antiinflamatorias.Los resultados obtenidos en este trabajo fueron reproducibles y estadisticamente significativos. Sibien no es posible extraer conclusiones específicas diferentes a las de observar la presencia de unefecto biológico, hay varios puntos que son dignos de considerar. En el caso de Phase 6, dosimportantes citoquinas proinflamatorias asociadas con la vía del T-helper 1 mostraron un patrón derespuesta en forma de “U”, y no en la manera típica dosis-respuesta de los agentes farmacológicos.Ninguna de las citoquinas asociadas con la vía de los Th2 que fueron estudiadas se encontraronelevadas. Esta es una observación importante, que sugiere que los efectos de las dos preparacioneshomeopáticas que nosotros estudiamos no son aleatorias. Por el contrario ellos parecen reflejar unefecto selectivo sobre las vías biológicas específicas en la activación de las citoquinasproinflamatorias.407
  • 6. En el caso del FluTerminator, las concentraciones de TNF-alfa, una citoquina proinflamatoria, e IL-10, una citoquina antiinflamatoria, estuvieron ambas igualmente elevadas, también con un patrón derespuesta en forma de “U”. Aunque ello pueda parecer contradictorio, es importante anotar que lasvías Th1 y Th2 de la respuesta immune actúan de manera complementaria en respuesta a diferentesinfecciones, proveyendo así un mecanismo para la inmunomodulación. Los datos en nuestro estudiode ninguna forma se refieren al rítmo de estas respuestas, sino que sugieren que el FluTerminatorpuede jugar un papel en la activación y modulación de la respuesta immune asociada a lasinfecciones.En cualquiera de los dos casos, el escepticismo sobre la posibilidad de que las concentracionesultrabajas de los medicamentos homeopáticos puedan modular la expresión de estas citoquinas, -independientemente del mecanismo teórico por el cual ellas hacen esto, debe ser reconsiderado. Larevisión de los principios de la inmunología puede proporcionar algún soporte a estasobservaciones. Los estudios de los efectos de las concentraciones ultrabajas de diversas substanciashan mostrado claramente resultados biológicos reproducibles tanto in vitro como in vivo.FIG. 2 Inducción de INF-gama en leucocitos humanos (fórmula Phase 6 y elaboración por BeWellHomeopathics Inc., Miami, FL).408
  • 7. FIG. 3 Inducción de IL-10 en leucocitos humanos (formula FluTerminator® y elaboración por BeWellHomeopathics Inc., Miami, FL).FIG. 4 Inducción de TNF-alfa en leucocitos humanos por FluTerminator (Fórmula y elaboraciónpor Be WellHomeopathics Inc., Miami, Fl).Se ha encontrado que las concentraciones de citoquinas requeridas para inducir los efectos in vivoestán en el rango femtomolar (10 a la menos 15 M), es decir, claramente dentro del rango de laspreparaciones homeopáticas. Tales concentraciones están en los límites más bajos de detección porlos estimativos de laboratorio convencionales, y el hecho que estas preparaciones puedan o nodemostrar efectos biológicos de manera inequívoca sin dilucidar una concentración (determinaciónteorética) es por consiguiente algo que todavía no está claro. Sin embargo, hay ejemplos deconcentraciones específicas de citoquinas que demuestran claramente efectos biológicos, los cualesse han determinado en forma indirecta. Estos incluyen la inhibición de la degranulación de basófilospor concentraciones ultrabajas de histamina, con confirmación de especificidad de receptor; y otrosefectos sobre la función inmune in vitro de otros componentes bioactivos a concentraciones
  • 8. ultrabajas. Es también digno de atención que los antígenos que tienen efectos inmunoestimulatoriospueden producir estos efectos en concentraciones femtomolares o incluso subfemtomolares.Claramente, al menos en el caso de la función immune, parece que las células respondennormalmente in vitro a señales asociadas con concentraciones ultrabajas de moléculas bioactivas,prestando así algún soporte a los principios de la homeopatía.CONCLUSIONESEl impacto de Phase 6 y Fluterminator en la expresión de citoquinas en nuestro estudio, da soporteadicional al cuerpo creciente de evidencia de que las diluciones de extractos y minerales afectan lossistemas biológicos. Además, tales estudios también respaldan la posibilidad de que agenteshomeopáticos, tal como en el caso de los productos farmacéuticos, pueden afectar blancosmoleculares específicos, definiendo así potenciales aplicaciones médicas para estas substancias. Lacontroversia sobre la eficacia de las bajas concentraciones de los agentes homeopáticosprobablemente se mantendrá sin embargo hasta que estén a disposición, técnicas más adecuadaspara estimar las interacciones moleculares en tales concentraciones; solamente entonces modelosmás confiables para evaluar los efectos de las diluciones homeopáticas serán establecidos yexpandirán nuestro conocimiento de las bases físicas y biológicas de estas interacciones.REFERENCIAS
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