Métodos de estudio celular                     Norma Cruz Tapia                     IIIº Electivo Nº 5
Técnicas de estudio de la materia viva
ROBERT HOOKE
LEEUWENHOEK POPULARIZÓ EL USO DEL MICROSCOPIO (1964)
Microscopio óptico
Algunos Conceptos…        Magnificación            Resolución (D)                              Distancia mínima a la cual ...
CARACTERÍSTICAS• AUMENTO: Producto del numero de aumentos de los lentes (ocular y  objetivo)• RESOLUCIÓN: Capacidad para d...
PARTES DEL MICROSCOPIO• SISTEMA MECÁNICO:• PIE O BASE: Tres puntos de apoyo para dar estabilidad al microscopio• BRAZO: Tr...
• SISTEMA ÓPTICO•   OCULAR: Amplia la imagen dada por la lente del objetivo.•   OBJETIVOS: Amplia la imagen de la muestra....
MICROSCOPIO ÓPTICO            FUNCIONAMIENTO•   FUENTE DE LUZ•   LENTE CONDENSADORA•   MUESTRA•   LENTE OBJETIVO•   LENTE ...
OPTICO CAMPO CLARO• USA LA LUZ VISIBLE• MUESTRA MUY FINA• AUMENTO DE 1000X (100X  OBJETIVO, 10X OCULAR)• IMAGEN DENTRO DEL...
ÓPTICO CAMPO OSCURO•   CONDENSADOR QUE REFRACTA LA    LUZ•   LUZ INTESA EN FORMA DE CONO    HUECO•   CAMPO NEGRO•   IMAGEN...
ÓPTICO CONTRASTE DE FASES•   REVELA DETALLES IMPERCEPTIBLES    CON UN MICROSCOPIO    CONVENCIONAL•   CONO DE LUZ ESTRECHO•...
MICROSCOPIA CONTRASTE DE FASES
ÓPTICO DE FLUORESCENCIA• UTILIZA RANGO DE LUZ ULTRAVIOLETA• ABSORVE SELECTIVAMENTE DIFERENTES LONGITUDES DE ONDA DEL  RANG...
MICROSCOPIA CON FLUORESCENCIA
MET
Microscopio Electrónico de Transmisión: METLa MET no explora superficies: el haz de electrones incidente atraviesa la mues...
MEB
Microscopio electrónico de barrido• En el microscopio electrónico de barrido la  muestra es recubierta con una capa de  me...
Comparación microscopios electrónicos
DIFERENCIAS• ÓPTICO              • ELECTRÓNICO•   PORTAOBJETOS      •   REJILLA DE COBRE•   VIDRIO DE LUZ     •   HAZ DE E...
• Definición: Conjunto de técnicas que permite  el mantenimiento de las células “in vitro”,  manteniendo al máximo sus pro...
CLASES DE CULTIVOSPRIMARIOS: Se obtiene directamente de los tejidos animales o vegetales.SECUNDARIOS: Se obtiene de toma...
CÉLULAS COMO MODELO              EXPERIMENTALES• Drosofila melanogaster• La rana Xenopus laevis• El pez cebra
CULTIVO CELULAS VEGETALES• Las células vegetales tienen  una      característica  muy  interesante que es conocida  como  ...
METODO DE LA    MICROMANIPULACION• Se basa en la introducción en células y  tejidos de: microagujas, micropipetas,  microe...
APLICACIONES DEL CULTIVO CELULAR• Actividad intracelular• Flujo intracelular• Ecología celular• Interacciones celularesARE...
VENTAJAS E INCONVENIENTES CON LOS            CULTIVOS CELULARES• El     control     del    medio  fisicoquímico.• Caracter...
Técnicas inmunológicas
ELISA ELISA Para detectar Antígenos  Sensibilización                Bloqueo   Incubación con Suero
ELISA ELISA Para detectar Antígenos        Lavado                   Anticuerpo 2º   Revelado
Cromatografía de intercambio iónico
Electroforesis
Centrifugación• Las centrífugas son instrumentos que permiten someter a las  muestras a intensas fuerzas que producen la s...
Centrifugación: coeficientes de sedimentación• El coeficiente de sedimentación de una partícula o  macromolécula se calcul...
Centrifugación diferencial
Separación por sedimentación en gradiente               de sacarosa
Metodos de estudio celular
Metodos de estudio celular
Metodos de estudio celular
Metodos de estudio celular
Metodos de estudio celular
Metodos de estudio celular
Metodos de estudio celular
Metodos de estudio celular
Metodos de estudio celular
Metodos de estudio celular
Metodos de estudio celular
Metodos de estudio celular
Metodos de estudio celular
Upcoming SlideShare
Loading in...5
×

Metodos de estudio celular

4,296

Published on

Published in: Education
0 Comments
5 Likes
Statistics
Notes
  • Be the first to comment

No Downloads
Views
Total Views
4,296
On Slideshare
0
From Embeds
0
Number of Embeds
0
Actions
Shares
0
Downloads
4
Comments
0
Likes
5
Embeds 0
No embeds

No notes for slide

Metodos de estudio celular

  1. 1. Métodos de estudio celular Norma Cruz Tapia IIIº Electivo Nº 5
  2. 2. Técnicas de estudio de la materia viva
  3. 3. ROBERT HOOKE
  4. 4. LEEUWENHOEK POPULARIZÓ EL USO DEL MICROSCOPIO (1964)
  5. 5. Microscopio óptico
  6. 6. Algunos Conceptos… Magnificación Resolución (D) Distancia mínima a la cual Aumento que logra el el equipo puede mostrar equipo dos puntos como entidades separadas
  7. 7. CARACTERÍSTICAS• AUMENTO: Producto del numero de aumentos de los lentes (ocular y objetivo)• RESOLUCIÓN: Capacidad para distinguir dos o mas puntos que parecen uno.• PROFUNDIZACIÓN: Capacidad para distinguir un plano de otro.• CAMPO VISUAL: Área circular que se distingue al mirar por el microcopio.
  8. 8. PARTES DEL MICROSCOPIO• SISTEMA MECÁNICO:• PIE O BASE: Tres puntos de apoyo para dar estabilidad al microscopio• BRAZO: Transporte del microscopio, sostiene al tubo y la platina.• TUBO: conduce la imagen de la lente del objetivo a la ocular• PLATINA: Lugar donde se deposita el portaobjetos, sujetándolo con dos pinzas.• CARRO: Desplaza la muestra.• TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico: Acerca o aleja el tubo de la platina. Micrométrico: Da claridad a la imagen.
  9. 9. • SISTEMA ÓPTICO• OCULAR: Amplia la imagen dada por la lente del objetivo.• OBJETIVOS: Amplia la imagen de la muestra.• CONDENSADOR: Enfoca la luz en la muestra.• DIAFRAGMA. Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
  10. 10. MICROSCOPIO ÓPTICO FUNCIONAMIENTO• FUENTE DE LUZ• LENTE CONDENSADORA• MUESTRA• LENTE OBJETIVO• LENTE OCULAR• OJO HUMANO
  11. 11. OPTICO CAMPO CLARO• USA LA LUZ VISIBLE• MUESTRA MUY FINA• AUMENTO DE 1000X (100X OBJETIVO, 10X OCULAR)• IMAGEN DENTRO DEL CAMPO MICROSCOPICO• EL SISTEMA MECANICO SOSTIENE EL SISTEMA OPTICO Y LA MUESTRA.
  12. 12. ÓPTICO CAMPO OSCURO• CONDENSADOR QUE REFRACTA LA LUZ• LUZ INTESA EN FORMA DE CONO HUECO• CAMPO NEGRO• IMAGEN LUZ BRILLANTE SOBRE EL FONDO• SÓLO BORDES DESTACADOS DE LAS MUESTRAS• DIFICIL ACCESO.• PREPARACION SIN COLOREAR
  13. 13. ÓPTICO CONTRASTE DE FASES• REVELA DETALLES IMPERCEPTIBLES CON UN MICROSCOPIO CONVENCIONAL• CONO DE LUZ ESTRECHO• CÉLULAS VIVAS• DETALLAR ESTRUCTURAS INTERNAS• NO ES NECESARIO TEÑIR
  14. 14. MICROSCOPIA CONTRASTE DE FASES
  15. 15. ÓPTICO DE FLUORESCENCIA• UTILIZA RANGO DE LUZ ULTRAVIOLETA• ABSORVE SELECTIVAMENTE DIFERENTES LONGITUDES DE ONDA DEL RANGO ULTRAVIOLETA• ELEMENTOS ÓPTICOS HECHOS CON CUARZO O SITEMAS DE ESPEJOS ALUMINIZADOS• IMAGEN CON FOSFORESCENCIA• FONDO OSCURO• LAMPARA DE MERCURIO (FUENTE DE LUZ)• AUMENTO DE RESOLUCION CON LONGITUD DE ONDA CORTA
  16. 16. MICROSCOPIA CON FLUORESCENCIA
  17. 17. MET
  18. 18. Microscopio Electrónico de Transmisión: METLa MET no explora superficies: el haz de electrones incidente atraviesa la muestray genera una sombra de la ultraestructura que es capturada en una pantallafosforescente , ubicada en la parte inferior de la columna. • Cañón de electrones, que emite los electrones que chocan contra el espécimen, creando una imagen aumentada. • Lentes magnéticas para crear campos que dirigen y enfocan el haz de electrones, ya que las lentes convencionales utilizadas en los microscopios ópticos no funcionan con los electrones. • Sistema de vacío es una parte muy importante del microscopio electrónico. Debido a que los electrones pueden ser desviados por las moléculas del aire, se debe hacer un vacío casi total en el interior de un microscopio de estas características. • Placa fotográfica o pantalla fluorescente que se coloca detrás del objeto a visualizar para registrar la imagen aumentada. • Sistema de registro que muestra la imagen que producen los electrones, que suele ser una computadora.
  19. 19. MEB
  20. 20. Microscopio electrónico de barrido• En el microscopio electrónico de barrido la muestra es recubierta con una capa de metal delgado, y es barrida con electrones enviados desde un cañón. Un detector mide la cantidad de electrones enviados que arroja la intensidad de la zona de muestra, siendo capaz de mostrar figuras en tres dimensiones, proyectados en una imagen de TV.
  21. 21. Comparación microscopios electrónicos
  22. 22. DIFERENCIAS• ÓPTICO • ELECTRÓNICO• PORTAOBJETOS • REJILLA DE COBRE• VIDRIO DE LUZ • HAZ DE ELECTRONES• OCULAR • LENTES ELECTROMAGNETICOS DEL PROYECTOR• OBJETIVOS • LENTES ELECTROMAGNETICOS DEL OBJETIVO• CONDENSADOR • LENTES ELECTOMAGNETICOS DEL CONDENSADOR
  23. 23. • Definición: Conjunto de técnicas que permite el mantenimiento de las células “in vitro”, manteniendo al máximo sus propiedades fisiológicas, bioquímicas y genéticas.• Ventajas de realizar un cultivo celular• Cultivo en microorganismos, cultivo en animales, cultivo en vegetales.
  24. 24. CLASES DE CULTIVOSPRIMARIOS: Se obtiene directamente de los tejidos animales o vegetales.SECUNDARIOS: Se obtiene de tomar una muestra de los primarios y su nuevo cultivo en otra cápsula de petri.DE LINEAS ESTABLECIDAS: son los que derivan de tumores
  25. 25. CÉLULAS COMO MODELO EXPERIMENTALES• Drosofila melanogaster• La rana Xenopus laevis• El pez cebra
  26. 26. CULTIVO CELULAS VEGETALES• Las células vegetales tienen una característica muy interesante que es conocida como totipotencia o pluriopotencia. Lo cual ayuda que en cultivo se puedan generar otros tejidos.• Células como modelo experimental: Arabidopsis thaliana
  27. 27. METODO DE LA MICROMANIPULACION• Se basa en la introducción en células y tejidos de: microagujas, micropipetas, microelectrodos; por medio de aparatos especiales que permiten el movimiento controlado de estos instrumentos bajo el microscopio.
  28. 28. APLICACIONES DEL CULTIVO CELULAR• Actividad intracelular• Flujo intracelular• Ecología celular• Interacciones celularesAREAS DE INVESTIGACION: virología, investigación del cáncer, inmunología, ingeniería de proteínas.
  29. 29. VENTAJAS E INCONVENIENTES CON LOS CULTIVOS CELULARES• El control del medio fisicoquímico.• Caracterización y homogeneidad de la muestra.• Técnica sensible• Los costos de producir células en cultivo son diez veces mas que el uso de tejido animal.
  30. 30. Técnicas inmunológicas
  31. 31. ELISA ELISA Para detectar Antígenos Sensibilización Bloqueo Incubación con Suero
  32. 32. ELISA ELISA Para detectar Antígenos Lavado Anticuerpo 2º Revelado
  33. 33. Cromatografía de intercambio iónico
  34. 34. Electroforesis
  35. 35. Centrifugación• Las centrífugas son instrumentos que permiten someter a las muestras a intensas fuerzas que producen la sedimentación en poco tiempo de las partículas que tienen una densidad mayor que la del medio que las rodea.• Tipo: – centrífugas (de pocas g a aprox. 3000 g) – super-centrífugas (o centrífugas de alta velocidad, rango de 2000 g a 20000 g) – ultracentrífugas (de 15000 g a 600000 g).• En las centrífugas se suele controlar la temperatura de la cámara para evitar sobrecalentamiento de las muestras debido a la fricción. En las ultracentrífugas, la velocidad extrema (más de 100000 rpm), hace que sea necesario hacer un intenso vacío en la cámara de la centrífuga para evitar el calentamiento de rotor y muestra.
  36. 36. Centrifugación: coeficientes de sedimentación• El coeficiente de sedimentación de una partícula o macromolécula se calcula dividiendo su velocidad constante de sedimentación (en m/s) por la aceleración aplicada (en m/s2).• El resultado tiene dimensiones de tiempo y se expresa habitualmente en svedbergs (S).• Los valores de coeficientes de sedimentación no son aditivos, debido a que dependen tanto de la masa, como de la forma que tenga la molécula. Una partícula formada por la unión de dos partículas 5 S no tiene un coeficiente de sedimentación de 10 S. Por ejemplo, los ribosomas eucarióticos están formados por dos subunidades, una 60 S y otra 40 S. Sin embargo, el valor final del conjunto del ribosoma no es 100 S, sino 80.
  37. 37. Centrifugación diferencial
  38. 38. Separación por sedimentación en gradiente de sacarosa

×