Espectofotometria Dr. Ramon A

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  • Integrity of DNA is said to correspond to a relation 260/280 absorbencies of 1'6. Why? Thanks.
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  • 1. Espectrofotometría
    Karla Vianey Juárez Gray
    Grecia Carmin Rodríguez Acosta
    Estefany Valle Rodríguez
    Siew-Ying WongCajigas
    Santiago Zendejas Ramírez
  • 2. Energia radiante (luz)
    Es la energía transmitida en forma de radiación electromagnética. Puede ser emitida por sustancias bajo condiciones de excitación o por descargas eléctricas.
    Muestran doble caracteristica. En difraccion y refracciontienenn propiedades de onda aunque no nesesiten un medio fisico para su prolongacion. En fenomenos de emision y absorcion, la radiacionelectromagnetica tiene tambien propiedades de las particulas llamadas fotones.
  • 3. Características de las ondas
    Longitud de onda. (l)
    Amplitud de onda. (A)
    Frecuencia. (n)
    Velocidad. (v)
  • 4. Escala de la luz
  • 5. Laespectrofotometría
    Es un método analítico que utiliza los efectos de la interacción de las radiaciones electromagnéticas con la materia (átomos y moléculas) para medir la absorción o la transmisión de luz por las sustancias.
    La espectrofotometría se refiere a los métodos, cuantitativos, de análisis químico que utilizan la luz para medir la concentración de las sustancias químicas. Se conocen como métodos espectrofotométricos y, según sea la radiación utilizada, como espectrofotometría de absorción visible (colorimetría), ultravioleta, infrarroja.
  • 6. ASPECTOS TEÓRICOS
    Medicion de luz
    La fotometría
    La espectrofotometría
    Luz monocromática
    La colorimetría
    Leyes de Lambert y Beer
  • 7. Lambert y Beer
    relacionan
    Observando
    La medida de la absorción
    El espesor de la sustancia absorbente
    La cantidad de sustancia que absorbe
    Crecimiento exponencial de la absorción de radiación
    En Función de
    Espesor de la región absorbente
    La cantidad de esa especie
  • 8. Ley de Beer:
    Sustancia absorvente
    Intensidad trans.
    IO
         I = I0 × 10 -K'.C log =  K' × C
    I
    I  = intensidad de luz transmitida     I0 = intensidad de luz incidente
    C = concentración de la sustancia absorbenteK  = coeficiente de extinción 
    K se refiere a las sustancias en general, sin estar en disolución.
  • 9. Ley de Lambert:
    Medio absorvente
    Intensidad transm.
    IO
    IO
         I = I0 × 10 -K.L log =  K × L
    I
    I  = intensidad de luz transmitida     I0 = intensidad de luz incidente
    K  = coeficiente de extinción     L  = espesor de capa
    K se refiere a las sustancias en general, sin estar en disolución.
  • 10. Estas dos leyes se combinan en la ley de Lambert-Beer:
    IO
          I = I0 × 10-e×C×L log =  e × c × L I
    e = coeficiente de extinción molar    
    e es el coeficiente de extinción cuando la solución contiene un mol por litro.
  • 11.                           I0
    La expresión  log     se conoce como absorbancia (A) o
                           I
    densidad óptica (DO)
                            I0
    A = D.O. =  log    =  e × c × L  ;  para L=1,  A = e×c
                          I
    T y A quedan relacionados de la forma
    A = - log T = 2 - log %T
  • 12. ESPECTOFOTOMETRO:
    La absorbancia y la transmitancia de una sustancia en disolución se miden con un aparato denominado espectrofotómetro, el cual consta básicamente de los siguientes componentes:
    Fuente de luz: Lámpara que emite una mezcla de longitudes de onda.
    Colimador: Conjunto de lentes que enfocan la luz convirtiéndola en un haz de rayos paralelos.
    Monocromador: Dispositivo que selecciona luz de una única longitud de onda.
    Detector fotoeléctrico: Transductor de luz en electricidad. La luz provoca el desplazamiento de electrones en el metal del detector, produciendo una corriente eléctrica que es proporcional a la intensidad de la luz recibida.
    Registrador: Mide la señal del detector, la compara y genera una medida en una escala determinada. 
     
  • 13. INTERPRETACIO DE RESULTADOS
    Curva de Calibración
    Denominamos espectro de una sustancia a la representación de absorbancia (A) en función de
    longitud de onda (λ),este gráfico presenta ondulaciones con máximos y mínimos.
    Para hacer las determinaciones cuantitativas se elige, en general, la longitud de onda
    correspondiente a un máximo, pues el error de medición es mínimo y la sensibilidad máxima.
    Para verificar el cumplimiento de la ley de Beer, se debe realizar la curva de calibración;
    absorbancia (A) en función de concentración (c), para lo cual se preparan soluciones de la sustancia
    de concentraciones conocidas y se mide la absorbancia a la longitud de onda elegida.
    Si
  • 14.
  • 15. Aplicaciones de la ley de Lambert-Beer
    • Industrias de pinturas
    • 16. Industria farmacéutica
    • 17. Industrias que tengan que ver con la medida de luz de sustancias coloreadas o incoloras.
    • 18. Distintos métodos de la espectrofotometría para química analítica.
    • 19. En bioquímica se utiliza por ejemplo para:
    Identificar compuestos por su espectro de absorción.
    Conocer la concentración de un compuesto en una disolución.
    Determinar la glucosa en sangre en un laboratorio de análisis químico.
    4. Seguir el curso de reacciones químicas y enzimáticas.
    • El espectrofotómetro es de gran utilidad en análisis cuantitativo de proteínas
    • 20. , en la determinación de ácidos nucleicos incluyendo ADN / ARN, enzimas.